Universidad veracruzana

Facultad de Bioanálisis
Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 1
“Espectrofotometría”

Fundamento:
La espectroscopia o espectrofotometría en física y química es el estudio
de los espectros. La espectroscopia se basa en que cada elemento
químico tiene su espectro característico.

Los espectrómetros son instrumentos que generan, analizan y

registran espectros. Aquí se ilustra el uso de un espectrómetro de
absorción para determinar el espectro creado por una sustancia
desconocida. Las lentes del instrumento enfocan la luz, mientras que
un prisma central la divide en el espectro de los colores que la
constituyen. Los colores que aparecen en la pantalla representan las
longitudes de onda no absorbidas por la muestra.

El espectrofotómetro se usa para medir la intensidad de un espectro

determinado en comparación con la intensidad de luz procedente de una
fuente patrón. Esta comparación permite determinar la concentración de la
sustancia que ha producido ese espectro. Los espectrofotómetros también
son útiles para estudiar espectros en las zonas no visibles porque sus
elementos de detección son bolómetros o células fotoeléctricas. Los
primeros se aplican especialmente al análisis de espectros de infrarrojos, y
los segundos al de espectros ultravioletas. Las redes de difracción pueden
emplearse, igual que los prismas, tanto en los espectrógrafos como en los
espectrofotómetros.
El color es la sensación resultante de la estimilacion de la retina por la luz
en longitudes de onda comprendidas dentro del espectro visible. Los rayos
de luz de diferentes longitudes de onda excitan a los mecanismos
receptores del ojo en grados diferentes produciendo colores especificos, la
longitud de onda en el rango visible para el ojo esta entre los 380 – 700
nm. Las longitudes de onda comprendidas a los extremos de éste rango no
son detectados por el ojo humano.
La radiación electromagnética esta compuesta por paquetes discretos de
energia llamados fotones y recorren un camino ondulante, describiendo en
su trayectoria crestas y valles.

APLICACIONES DEL ANÁLISIS ESPECTRAL

Análisis químico El espectro de un elemento determinado es
absolutamente característico de ese elemento. Sin embargo, elementos
distintos producen en ocasiones líneas que están muy juntas, lo que lleva a
posibles errores. Por ejemplo, la línea G de Fraunhofer, situada
aproximadamente en 430,8 nm, corresponde a dos líneas diferentes, una
debida al calcio, con una longitud de onda de 430,7749 nm, y la otra
causada por el hierro, con una longitud de onda de 430,7914 nm. Líneas
de Fraunhofer). Con un espectroscopio ordinario sería difícil distinguir
estas dos líneas. Las otras líneas del calcio, sin embargo, son muy distintas
de las otras líneas del hierro. Por tanto, la comparación del espectro
completo de un elemento con un espectro conocido simplifica su
identificación. Cuando se excita una sustancia desconocida mediante una
llama, un arco voltaico, una chispa u otro método apropiado, un análisis
rápido con un espectrógrafo suele bastar para determinar la presencia o
ausencia de un elemento determinado. Los espectros de absorción son
muchas veces útiles para identificar compuestos químicos.
Técnica:

T1 T2 T3 T4 T5 T6

Fotocolorímetro
ABSORBANCIA
.5
.4 .6

.3 50 40 .7
60
70 30
TRASMITANCIA .8
.2
80 20
.1 .9
90 10
0 100 0 1.0

Tabulacion:

Fotocolorímetro
Tubos Absorbancia Trasmitancia
1 0 100 Blanco
2 .800 15
3 .700 20
4 .530 29
5 .351 44
6 .215 61
.660 22 Tubo Problema

Graficación:

Universidad veracruzana
Facultad de Bioanálisis
Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 2
“Método de Dacie y Lewis”

Fundamento:
Eritrocitos
Los glóbulos rojos, o células rojas de la sangre, tienen forma de discos
redondeados, bicóncavos y con un Los
diámetro aproximado de 7,5 micras. En
eritrocitos, o glóbulos rojos de la
el ser humano y la mayoría de los sangre,mamíferos los eritrocitos
son los transportadores primarios maduros
del oxígeno de las células y de los tejidos
carecen de núcleo. En algunos vertebrados son ovales y nucleados. La
corporales. La forma bicóncava del
hemoglobina, una proteína de las células
eritrocito rojas
es una de la sangre,
adaptación que haceesqueel pigmento
el área superficial, a través de la que
sanguíneo especial más importante y su función es el transporte de
intercambia el oxígeno por dióxido de
carbono, sea la máxima posible. Su forma
y la membrana plasmática flexible del
eritrocito, le permite penetrar en los
capilares más pequeños.
oxígeno desde los pulmones a las células del organismo, donde capta
dióxido de carbono que conduce a los pulmones para ser eliminado hacia
el exterior, su periodo de vida es de 120 dias.

En condiciones normales los eritrocitos se encuentran rodeados de

un líquido extracelular isotónico, el plasma. Sin embargo, si se introducen
en un medio hipotónico o disolvente puro, tienden a tomar agua y
aumentar su volumen, produciéndose el fenómeno de turgencia, que lleva
consigo la destrucción total de la célula a ésta ruptura se le conoce con el
nombre de hemólisis.

Material y equipo:

- Fotocolorímetro corning filtro verde.

- Centrífuga Clínica.
- 7 tubos de ensaye.
- Jeringa.
- Ligadura y torunda de alcohol
- Gradilla.
- Pipetas.
- Dos mililitros de sangre con una gota de EDTA (anticoagulante).
- Soluciones salinas amortiguadoras con fosfatos con un pH de 7.4 de
las siguientes concentraciones: 0.85%, 0.55%, 0.50%, 0.45%, 0.35%
y 10%
Técnica:
Siete tubos
a) Depositar 5ml. De solución salina a cada tubo, con distintas
concentraciones.
1 2 3 4 5 7

5 ml.

0.10% 0.35% 0.40% 0.45% 0.50% 0.55% 0.85%

b) Colocar 0.05 ml. De sangre a cada tubo, agitar y dejar reposar.

Reposar durante 30
Agitar minutos
0.05 ml de sangre a
cada uno

c) Centrifugar y aspirar el sobrenadante.

d) Lectura de absorbancia en el fotocoloríero.

ABSORBANCIA
 .5
.4 .6
.7
.3 50 40
60
70 30
.2 .8
TRASMITANCIA 20
80
.9
.1 10
90
0 1.0
0 100

Tabulación:

Tubos Concentración Absorbancia Trasmitancia

1 0.30% 0.870 13
2 0.35% 0.800 15
3 0.40% 0.710 19
4 0.45% 0.333 47
5 0.50% 0.0 100
6 0.55%
7 0.85% 0.01 98

Resultados:

Tubos Resultados
1 87.0
2 91.6
3 81.6
4 37.0
5 0
6
7 1.14

Gráfica:

Observaciones: Porcentaje normal de hemólisis.

Solución salina % Hemólisis %
0.30% 97 – 100
0.35% 90 – 99
0.40% 50 – 95
0.45% 5 – 45
0.55% 0
Universidad veracruzana
Facultad de Bioanálisis
Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 3
“Escala calorimétrica de pH”

Objetivo: Aplicación de la ecuación de Henderson Hasselbalch e

interpretar el mecanismo de acción de las soluciones amortiguadoras en
presencia de ácidos y álcalis.

Fundamento:

pH, término que indica la concentración de iones hidrógeno en una

disolución. Se trata de una medida de la acidez de la disolución. El término
(del francés pouvoir hydrogène, 'poder del hidrógeno') se define como el
logaritmo de la concentración de iones H+ (protones) cambiado de signo:
pH = -log [H+], donde [H+] es la concentración de iones H+ en moles por
litro. Debido a que los iones H+ se asocian con las moléculas de agua para
formar iones hidronio, (H3O+), el pH también se expresa a menudo en
términos de concentración de iones hidronio.
En agua pura a 22 °C de temperatura, existen cantidades iguales de iones
H3O+ y de iones hidroxilos (OH-); la concentración de cada uno es 10-7
moles / litro. Por lo tanto, el pH del agua pura es -log (0.107), que equivale
a 7. Sin embargo, al añadirle un ácido al agua, se forma un exceso de iones
H3O+ en consecuencia, su concentración puede variar entre 10-6 y 10-1
moles / litro, dependiendo de la fuerza y de la cantidad de ácido. Así, las
disoluciones ácidas tienen un pH que varía desde 6 (ácido débil) hasta 1
(ácido fuerte). En cambio, una disolución básica tiene una concentración
baja de iones H3O+ y un exceso de iones OH- y el pH varía desde 8 (base
débil) hasta 14 (base fuerte).
La concentración molar del agua se obtiene dividiendo el número de
gramos de agua contenidos en un litro entre el peso molecular gramo, o
sea, 1000 / 18 = 55.5 molar. Dado que la disolución iónica del agua es:

Constante de ionizacion del agua:

Kw es el producto de las concentraciones molares de los iones H y OH- a

una temperatura en particular.

H2O⇒H + OH
Kw = [H] [OH] = 1.0X10-14

H2O H+ + OH-

La importancia del conocimiento del pH radica en que determina varias de

las características de la estructura y actividad de las macromoléculas
biológicas, y por lo mismo determina la conducta de las diferentes células.
Así en nuestro organismo, el pH del plasma sanguíneo y del liquido
intersticial debe mantenerse entre 7.3 y 7.4 para que se conserve normal
la actividad celular. Los líquidos intracelulares del músculo, por ejemplo,
tienen un pH de 6.1 y los del hígado de 6.9; las secreciones del estómago
tienen un pH de 1.2 a 3.0 y las del páncreas de 7.8 a 8.0 (Esquema 1).
Para mantener estos valores constantes el organismo utiliza las llamadas
soluciones buffer.

Esquema 1:

Escala de pH

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
ácida neutra alcalina

pH

Solución

Sangre
L. intracelulares del músculo
Hígado
Estómago
páncreas
Ecuación de Henderson – Hasselbalch

La cual nos permite calcular la modificación del pH que puede producir el

par amortiguador, cuya formula es:
[sal]_
pH = pK + [ácido]
log

Material y equipo:

- Tubos de ensaye de 13 X 100.

- Pipetas graduadas de 1.2 y 5ml.

- Gradilla metálica.

- Colorímetro.

Técnica:

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 2 3 4 5 6 7 8 9 Naranja de metilo.
9 8 7 6 5 4 3 2 1
HCl
1 gota a todos.
1 gota a todos. NaOH (ml)
H2O (destilada)
10 ml. A todos.
Resultados:

Ecuación de Henderson – Hasselbalch

La cual nos permite calcular la modificación del pH que puede producir el

par amortiguador, cuya formula es:
[sal]_
pH = pK + log
[ácido]

Serie de tubos

Tubo 1:
[1]_
[9]
pH = 3.7 + log = 2.7

Tubo 2:
[2]_
pH = 3.7 +[8]
log = 3.09

Tubo 3:
[3]_
pH = 3.7 +[7]
log = 3.3

Tubo 4:
[4]_
pH = 3.7 +[6]
log = 3.5

Tubo 5:
[5]_
pH = 3.7 +[5]
log = 3.7

Tubo 6:
[6]_
pH = 3.7 +[4]
log = 3.8

Tubo 7:
[7]_
[3]
pH = 3.7 + log = 4.0

Tubo 8:
[8]_
[2]
pH = 3.7 + log = 4.3

Tubo 9:
[9]_
[1]
pH = 3.7 + log = 4.6

Propiedades físicas:
En la serie de tubos con HCl se observó que el color disminuyó de
intensidad del tubo 1 al 9 y en la serie de NaOH, el color se intensifico del
tubo 1 al 9.

Tabulación:

Tubos pH Absorbancia
1 2.7
2 3.09
3 3.3
4 3.5
5 3.7
6 3.8
7 4.0
8 4.3
9 4.6

Gráfica:

Universidad Veracruzana
Facultad de Bioanálisis
Bioquímica (laboratorio)

Práctica: No.4
“Determinación de glucosa”

Fundamento:

Glucosa, azúcar monosacárido, de fórmula C6H12O6. Se encuentra en la

miel y en el jugo de numerosas frutas. El nombre alternativo azúcar de uva
proviene de la presencia de glucosa en las uvas. Se produce en la hidrólisis
de numerosos glucósidos naturales. La glucosa está presente en la sangre
de los animales.
Es un sólido cristalino de color blanco, algo menos dulce que el azúcar
destinado al consumo. Las disoluciones de glucosa giran el plano de
polarización de la luz a la derecha; de ahí el otro nombre alternativo
dextrosa (del latín dexter, 'derecha'). La glucosa cristaliza en tres formas
diferentes y cada una de ellas gira el plano de polarización de la luz en
distinto grado.
Es un cuerpo de sabor dulce, muy soluble en agua, pero poco soluble en
los disolventes orgánicos, y no es volátil. Cristaliza con una molécula de
agua en forma de prismas monoclínicos o bien anhidra en cristales
rómbicos (p. f., 146,5° C). Presenta birrotación.
Es reductora y se oxida con gran facilidad. Es fermentada por las zimasas
segregadas por la levadura de la cerveza.
La glucosa se forma en la hidrólisis de numerosos hidratos de carbono,
como la sacarosa, maltosa, celulosa, almidón y glucógenos. La
fermentación de la glucosa por la acción de levaduras produce alcohol
etílico y dióxido de carbono. Industrialmente, la glucosa se obtiene en la
hidrólisis del almidón bajo la acción de ácido diluido, o más
frecuentemente, de enzimas. Su aplicación más importante es como
agente edulcorante en la elaboración de alimentos. También se emplea en
curtidos y tintes, y en medicina para el tratamiento de la deshidratación y
alimentación intravenosa.

Molécula de glucosa:
(representación lineal)

Reactivos:
- Filtrado de Folin.
- Sol. Cuproalcalina.
- Sol. Fosfomolibdica.
- Sol. Patron de glucosa equivalente a 200 mg. / 100m.

Técnica:

1 2 3 4 5 6 7

Agregar patron glucosa

1 2 3 4 5 6 7 1 2 3

0 0.25 0.5 1 0 0 0 Solución cuproalcalina

1 ml. Mezclar y ebullir 5
min.

1 2 3 4 5 6 7

1 0.25 0.5 0 0 0 0

Tabulación:
Tubos Patron de glucosa Agua destilada Filtrado de Folin
1 0 1 -
2 0.25 0.25 -
3 0.5 0.5 -
4 1 0 -
5 0 0 1
6 0 0 1
7 0 0 1

Tubos Absorbancia
1 0
2 0.03
3 0.05
4 0.08
5 0.07
6 -
7 -

Gráfica:
Universidad Veracruzana
Facultad de Bioanálisis
Bioquímica (laboratorio)

Práctica: No.5
“Medición de la presión parcial simulada de CO2 pulmonar alveolar”

Objetivo: Establecer la importancia del mecanismo respiratorio en el ajuste

de la ventilación para mantener la presión de CO2 alveolar constante.

Fundamento:
La regulación respiratoria del equilibrio acido – base constituye un sistema
de amortiguación de tipo físico de importancia casi igual a los sistemas
amortiguadores. A pesar de la amortiguación de la sangre, se produce
cierta desviación del pH normal cuando existen factores que aumentan y
disminuyen la ventilación pulmonar. En primer lugar, el centro respiratorio
es estimulado debido a un aumento en la presión de CO2 en sangre y de
acuerdo con la ecuación de Henderson está conduciría a un pH más bajo y
a una acidosis. Esta estimulación acelera y profundiza los movimientos
respiratorios para eliminar el exceso de acido y CO2. En el caso contrario se
daria lugar a una alcalosis, induciendo a una respiración lenta y superficial.
En general, la tensión de oxigeno altera la tasa de ventilación, sólo cuando
la tensión de CO2 es anormalmente baja o excesivamente alta.

Material y equipo:
- Matraz Erlenmeyer 125 ml.
- Pipetas de 1,2,3 y 5 ml.
- Perillas de caucho.
- Manguera de caucho.
- Colorímetro.
- Tiras de pH.

Reactivos:
- NaHCO3 58 mg. / 500 ml.______0.50M.
- Rojo de fenol.

Técnica:
Soplar con la perilla
Pipetear 5 ml de de caucho, medir pH
NaHCO3 y 200 mM y absorbancia.
y un ml de rojo de
fenol y agua hasta
un volumen de 10 Después soplar con
ml la boca, medir pH y
absorbancia.
Tabulación:

Matraz pH Absorbancia
Caso 1 (perilla) 7 0.28
Caso 2 (boca) 9 0.13

Conclusión:

Nos pudimos dar cuenta que la solución bajó en su concentración y

aumento en su pH, dando lugar a una alcalosis respiratoria simulada.

Graficación:
 UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA

Practica No. 9
Preparación de extracto de lípidos totales

Objetivo:
 Obtención de extracto de lípidos a partir de tejidos animales.
 Establecer los procedimientos más comunes para la hidrólisis
de las grasas.
 Identificar los productos de la saponificación de las grasas y su
aplicación en la actualidad.
 Hacer la correlación bioquímica de la importancia del análisis
de los lípidos con relación al cuerpo humano.

Fundamento:
Lípidos, grupo heterogéneo de sustancias orgánicas que se encuentran en
los organismos vivos. Los lípidos están formados por carbono, hidrógeno y
oxígeno, aunque en proporciones distintas a como estos componentes
aparecen en los azúcares. Las grasas y aceites, también llamados
triglicéridos, son también otro tipo de lípidos. Sirven como depósitos de
reserva de energía en las células animales y vegetales. Cada molécula de
grasa está formada por cadenas de ácidos grasos unidas a un alcohol
llamado glicerol o glicerina. Cuando un organismo recibe energía
asimilable en exceso a partir del alimento o de la fotosíntesis, éste puede
almacenarla en forma de grasas, que podrán ser reutilizadas
posteriormente en la producción de energía, cuando el organismo lo
necesite. A igual peso molecular, las grasas proporcionan el doble de
energía que los hidratos de carbono o las proteínas.
Material y Equipo:

Pipetas graduadas
Matraces Elermeyer
Vaso de precipitado
Probeta graduada
Embudo de vidrio
Tripie
Tela de asbesto
Mechero Bunsen
Papel filtr
Técnica (algoritmo):

Pasarlo a un matraz
de 125 ml Añadir 5 ml
de alcohol.
Ponerlo a
calentar sin
que hierva.

Enfriar con Añadir 5 Reposar

agua de la ml de éter hasta que
llave. etílico. sedimente.

Filtrar, repitiendo el
procedimiento de 3 a 4
veces. Agregando
Evaporar sin cada vez 10 ml de éter.
hervir.

Enfriar y agregar 10 ml
de éter agitando para 5ml del filtrado + 10 ml
disolver los lípidos. de KOH

Titular con HCl 0.1 N, En otro matraz agregar 5

hasta que aparezcan un ml de eter + 10 ml de
color rojo. KOH
RESULTADOS:

Mililitros gastados de HCl mililitros de HCl

gastados
tubo problema tubo
blanco
11 10
=1

1 x .1 = 0.1 0.1 x 255 = 25.5

5ml 25.5 127.5

8grs.
25ml x x
100 %

x = 127.5 x=
1.593

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA

Practica No. 10

Fundamento:

Cuando se hacen variaciones discretas de las concentración de hidrógenos

en medio donde se encuentran actuando las enzimas, la actividad de esta
disminuye de una manera reversible si el cambio de pH no es muy
importante: si la modificación de pH es grande puede provocar la
desnaturalización de la enzima, con perdida irreversible de su actividad.

Material y Equipo:

 Vaso pp 50 ml
 Tripie
  Pinzas para bureta
 Tiras pH reactivas
 Pipetas
 Fenolftaleina
 Alanina 0.1m
 NAOH
 HCL
 Bureta.

Algoritmo:
Titular hasta observar un
En un vaso p.p 50 ml
viraje de color rojo y anotar
colocar 10 ml se alanina
los ml de NAOH gastados.
0.1m y agregar 1 gota de
fenolftaleina.

Al primer viraje pk1 se le mide el pH y se

le agregan 2 gotas de timol hasta que
observe un segundo viraje de color
violeta y anotar los ml de NAOH
gastados midiendo el pH.

Resultados:

Pk1=23.5 Cálculos:
pH=2 PI = pk1+ pk2/2
Pk2=18.5
PI = 23.5 + 18.5/2 = 42.0
pH=9
pH = 5

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA

Practica No. 11
Cromatografía
Objetivos:
Aprender el concepto básico de lo que es la cromatografía.
Comprender que la cromatografía s un método para separar las
sustancias.
Fundamento:
Cromatografía, técnica de análisis químico utilizada para separar
sustancias puras de mezclas complejas. Esta técnica depende del principio
de adsorción selectiva (no confundir con absorción). En la cromatografía en
papel, una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel adsorbente,
sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos.
Otra técnica conocida como cromatografía gas-líquido permite la
separación de mezclas de compuestos gaseosos o de sustancias
susceptibles de vaporizarse por calor. El uso de la cromatografía está
ampliamente extendido en el análisis de alimentos, medicinas, sangre,
productos petrolíferos y de fisión radiactiva.
Material y Equipo:
 Papel filtro
 Capilares
 Pinzas para tubo de ensaye
 Tapon
Algoritmo: En otro papel filtro
En un papel filtro agregar anaranjado de
agregar fenoftaleína metilo y en otro tubo de
y en un tubo de ensaye amoníaco.
ensaye amoníaco.

En otro papel filtro agregar

juntos la fenoftaleína y
naranja de metilo.
Resultados
RF = mm de distancia del origen al centro de la mancha_______
mm de distancia del origen del origen al frente del solvente

FENOFTALEÍNA 8= .8
10

ANARANJADO DE METILO 3= .31

9.5

MEZCLA 3.5 = .38

9

4.5 = .5
9
 UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA
Practica No. 12
Separación de Aminoácidos por Cromatografía de partición de papel

Objetivos:

 Establecer la relación del grupo amino de los AA con el

reactivo de Ninhidrina.

 Identificar el compuesto analizado en base a la posición en el

cromatograma.

Fundamento:
Aminoácidos, importante clase de compuestos orgánicos que contienen un
grupo amino (8NH2) y un grupo carboxilo (8COOH). Veinte de estos
compuestos son los constituyentes de las proteínas. Se los conoce como
alfaaminoácidos (á-aminoácidos) y son los siguientes: alanina, arginina,
asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina,
histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina,
treonina, triptófano, tirosina y valina. Todos ellos responden a la siguiente
fórmula general:
Aparte de los aminoácidos de las proteínas, se han encontrado en la
naturaleza más de 150 tipos diferentes de aminoácidos, incluidos algunos
que contienen los grupos amino y carboxilo ligados a átomos de carbono
separados. Estos aminoácidos de estructura poco usual se encuentran
sobre todo en hongos y plantas superiores.
Material y Equipo:

 Tiras de papel Whatman

 Pipetas Pasteur

 Frasco grande

 Parrilla eléctrica

Algoritmo:

En tres tubos de ensaye agregar

de1 a 1.5 ml de propanol

Marcar con un punto el papel

filtro donde se colocara la
gota
 Colocarlos en los tubos de forma que
no se contaminen

Resultados:

mm de distancia del origen al centro de la mancha

RF =

mm de distancia del origen al frente del solvente

LEUCINA 6 = 0.6

10

ACIDO ASPARTICO 4.5 = 0.47

9.5

ÁCIDO ASPARTICO 6.5 = 0.7

LEUCINA
 UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA

Practica No. 13

Hidrólisis de las proteínas, titulación con formol

Objetivos:

 Describir el fenómeno químico de la hidrólisis de proteínas.

 Describir cuales son los productos de obtención al final de una
reacción de hidrólisis de las proteínas.
 Describir cuales son los grupos químicos funcionales al final de la
hidrólisis en aminoácidos y péptidos.
 Describir los diversos procesos de hidrólisis proteica.

Fundamento:
Las proteínas pueden romperse por hidrólisis en pépticos y aminoácidos. El
tamaño y número de los fragmentos obtenidos ( grado de hidrólisis ),
depende de diversos factores como la temperatura, tiempo de reacción o
la naturaleza del catalizador.
Existen varios tipos de hidrólisis:
Hidrólisis, tipo de reacción química en la que una molécula de agua, con
fórmula HOH, reacciona con una molécula de una sustancia AB, en la que A
y B representan átomos o grupos de átomos.
HIDRÓLISIS ACIDA: Consiste en el tratamiento de las proteínas con ácidos
minerales concentrados en presencia de calor.
HIDRÓLISIS ALCALINA: Consiste en que se obtiene la roptura de los enlaces
peptidicos por la acción de soluciones alcalinas fuertes.
HIDRÓLISIS ENZIMATICA: Este método es el preferido, porque no destruye
los aminoácidos
Material y Equipo:

 Tripie
 Bureta
 Soporte Universal
 Termómetro
 Pipetas
 Mechero Bunsen
 matraz
 Tela de alambre conasbesto
 1 vaso de precipitado
 1 recipiente para Baño María
 NaOH 0.02 N
 Tripsina
 Fenoftaleína
 Gelatina 5%
 Formol neutro
Algoritmo:

50 ml de gelatina + 10
Pipetear 10 ml de la mezcla
ml de tripsina

Enfriar Hervirlo durante 2 min.

Agregar 15ml de formol + 3 Titular con NaOH 0.02

gotas de fenoftaleína N, hasta color rosa
 Todo el tiempo mantener a Tomar muestras
B.M. , la mezcla inicial a 37 o cada 20 min
C

Resultados:

TIEMPO TUBO Ml GASTADOS DE

NaOH
0 min. 1 24.3
20 min 2 28.2
40 min 3 29.6
60 min 2 29.8
 UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA

Practica No. 14
Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de
reacción enzimático

Objetivos:

 Describir el papel que juega la formación del complejo en cinética

enzimática.
 Interpretar los cambios que ocurren en la velocidad de reacción al
aumentar la concentración de enzima.

Fundamento:
Las enzimas se clasifican en varias categorías: hidrolíticas, oxidantes y
reductoras, dependiendo del tipo de reacción que controlen. Las enzimas
hidrolíticas aceleran las reacciones en las que una sustancia se rompe en
componentes más simples por reacción con moléculas de agua. Las
enzimas oxidativas, conocidas como oxidasas, aceleran las reacciones de
oxidación, y las reductoras las reacciones de reducción en las que se libera
oxígeno. Otras enzimas catalizan otros tipos de reacciones.
Las enzimas se denominan añadiendo asa al nombre del sustrato con el
cual reaccionan. La enzima que controla la descomposición de la urea
recibe el nombre de ureasa; aquellas que controlan la hidrólisis de
proteínas se denominan proteasas. Algunas enzimas como las proteasas
tripsina y pepsina, conservan los nombres utilizados antes de que se
adoptara esta nomenclatura.
 Material y Equipo.

 Tubos de ensaye
  Matraz Elermeyer
 Soporte Universal
 Bureta
 Pinzas para Soporte Universal
 Pizeta con agua destilada
 Soluciones Buffer
 Urea
 Bicloruro de mercurio
 Ureasa

Algoritmo:

Agregar Urea 0.25 M 7.5 ml a todos Agregar 1gota de

menos el tubo # 1 solución de Buffer pH 7.2
 Agregar 4 gotas de Agregar 2 ml de Agua
bicloruro de mercurio solo Destilada a todos
al uno

Agregar a todos los tubos Incubar 30 min.

0.5 ml de ureasa a todos

Agregar 4 gotas de bicloruro

de mercurio excepto al tubo #
1

Tomar 5 ml de cada tubo y

agregar 2 gotas de rojo de
metilo y titular con HCl

Resultados:

TUBO HCl gastados

1 .1
 2 .7
3 1.0
4 1.5
5 2.0
6 2.0

0.1 .5 = .2 x 50 = 10
1 .5 = .5 x 50 = 25
1.5 .5 = 1 x 50 = 50
2.0 .5 = 1.5 x 50 = 75
2.0 .5 = 1.5 x 50 = 75

250 x .5 = 12.5
10

250 x 1 = 25
10

250 x 2 = 50
10

250 x 50 = 125
10

250 x 7.5 = 187.5

10
 UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANÁLISIS
REGIÓN – XALAPA

Practica No. 15
“ Efecto de la Temperatura en la Velocidad de la Reacción
“Enzimatica”

Objetivos:
 Interpretar el efecto del tiempo de acción enzima sobre la velocidad
de reacción

Fundamento:

En reacción enzimatica se mantienen en condiciones optimas todos los

factores que le afectan y solo se varia en el tiempo de la acción de la
enzima, tendremos que la transformación de sustrato en producto
aumenta en forma directamente proporcional al tiempo de la incubación .
El factor por el cual la velocidad de un proceso biológico aumenta con un
incremento de la temperatura de 10. la velocidad de numerosos procesos
biológicos, como la contracción del corazón de un corazón fuera de la
actividad torácica, casi se duplica con una elevación de 10°c en la
temperatura(Q10=2).

Material y Equipo:
 Tubos de ensaye
 Gradilla metálica
 Ureasa
 Tripie
 Mechero Bunsen
 Tela de asbesto
Algoritmo:
 Agregar Urea 0.25 Agregar 1gota de
M 7.5 ml a todos solución de Buffer pH 7.2
menos el tubo # 1

Agregar 4 gotas Agregar 2 ml de Agua

de bicloruro de Destilada a todos
mercurio solo al
uno

Incubar 30 min,
Agregar a todos los excepto el tubo 0, 18,
tubos 0.5 ml de ureasa 37, 50, y 80 grados
a todos

Tomar 5 ml de
cada tubo y Agregar 4 gotas de
agregar 2 gotas de bicloruro de mercurio
rojo de metilo y excepto al tubo # 1
titular con HCl

Cálculos
Q10 = 80 = 60 = 1.67
70 56

Q10 = 70 = 56 = 1.67
60 52

Q10 = 60 = 52 = 1.15
50 45