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DESARROLLO SEGUNDA PARTE

1. De acuerdo al captulo de crecimiento microbiano, del mdulo. Cul es la


diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k) de un
organismo y su tiempo de generacin (g)
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del nmero de
microorganismos a lo largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al
crecimiento de un nico microorganismo (ciclo celular) sino al demogrfico de
una poblacin.
Se denomina crecimiento equilibrado a aqul en el que toda la biomasa,
nmero de clulas, cantidad de protenas, de ADN, etc., evolucionan en
paralelo. El crecimiento equilibrado probablemente ocurra en muy contadas
ocasiones en condiciones naturales. Por tanto, es principalmente un concepto
de aplicacin en el laboratorio. Sin embargo, es til porque permite estudiar el
crecimiento microorganismos.
Las bacterias crecen siguiendo una progresin geomtrica en la que el nmero
de individuos se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo
de generacin (g). De esta forma, podemos calcular el nmero de bacterias (N)
al cabo de un nmero de generaciones (n) usando la ecuacin siguiente:
N = N0 2n
Siendo N0 el nmero de clulas en el momento actual. El nmero de
generaciones se puede calcular de la siguiente forma:
n=t/g
Donde t es el tiempo transcurrido.
Concluyendo y dado dos significados ms precisos y cortos para entender el
tema podemos decir que la velocidad de crecimiento es el cambio en el nmero
de clulas por unidad de tiempo y el tiempo requerido para que a partir de una
clula se forme dos clulas o el tiempo requerido para duplicar una poblacin
de clulas se llama tiempo de generacin o tiempo de duplicacin. En una sola
generacin se duplica el nmero de clulas o masa celular, en minutos en
ocasiones en horas o das.
2. De acuerdo al modelo matemtico de crecimiento microbiano. Calcule el
valor de g y de k en un experimento de crecimiento en el que se inocul
un medio con 5 x 106 clulas/ml de Escherichia colli y que despus de un
perodo de latencia de 1 hora, creci exponencialmente durante 5 horas
alcanzando una poblacin de 5,4 x 109 clulas/ml.
Debido a que el crecimiento bacteriano es una progresin geomtrica, existe
una relacin directa entre el nmero de clulas presente en el momento inicial
y el habido en un momento determinado del crecimiento especial, de modo
que:
N = N0 2n
n= (Log N- Log N0)/ Log 2
n= Log (5,4 x 109)- Log (5 x 106) / Log 2
n= (9,732) - (6,698) / 0,301
n=10,07 generaciones

g= t / n
g= 5 / 10,07
g= 0,49 horas

k= In 2 / g
k= 0,6931 / 0,49
k= 1,414

3. De acuerdo al captulo sobre metabolismo microbiano. Compare las rutas


metablicas utilizadas por los microorganismos, diferencie de acuerdo al
sustrato utilizado, mecanismo de obtencin de energa y productos
obtenidos.
El metabolismo es la suma de transformaciones de la materia que ocurre en el
interior de la clula y que da lugar a la sntesis de material celular a partir
desustancias nutritivas.
Los dos procesos de produccin de energa son la fermentacin y la
respiracin.
FERMENTACIN

RESPIRACIN

Sustrato utilizado

Molculas orgnicas.
sustratos
fermentables
simple (como azcar, por
ejemplo)

Mecanismo de obtencin de
energa

El sustrato da lugar a una


serie de compuestos, unos
ms oxidados y otros ms
reducidos; en el proceso
fermentativo mantiene un
estricto balance O-R. El
nivel
de
oxidacin
promedio de los productos
finales es muy cercano al
del sustrato. De ah que la
generacin
de
ATP
asociada a la fermentacin
se denomina fosforilacin
a nivel de sustrato
El proceso ocurre en
ausencia de oxigeno

Electrones
tanto
de
compuestos
orgnicos
como
inorgnicos
(oxidndose).
oxigeno molecular
Los
electrones
son
transferidos a travs de
una cadena transportadora
de electrones al final de la
cual existe un aceptor
exgeno oxidado (A), que
se reduce. Si el aceptor
final es el O2, hablamos de
respiracin aerobia; Si el
aceptor final es distinto del
O2 (nitrato, sulfato, etc.),
respiracin anaerobia.
la transferencia se da
ordenadamente,
en
la
direccin
de
mayor
potencial redox positivo,

Productos obtenidos

Lactato
Etanol, CO2
Succinato,
formiato, H2
Butilenglicol
Acetona
Butirato
Butanol

acetato,

energa libre que se va a


traducir en un potencial
electroqumico
de
protones, cuya disipacin a
travs de ATP-asas de
membrana origina ATP,
conocindose este proceso
como
fosforilacin
oxidativa

4. Compare y seale las diferencias entre metabolitos secundarios y


primarios, y d un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos

explicaciones de las bases moleculares por las que algunos metabolitos


son secundarios, envs de primarios.

Los vegetales, igual que otros organismos mediante sus procesos


metablicos sintetizan dos categoras de metabolitos: primarios y
secundarios, aunque esta distincin resulta totalmente arbitraria pues
no hay una divisin precisa entre metabolismo primario y secundario.
Los metabolitos primarios, muy abundantes en la naturaleza, son
indispensables para el desarrollo fisiolgico de la planta; se encuentran
presentes en grandes cantidades, son de fcil
extraccin y su
explotacin es relativamente barata y conducen a la sntesis de los
metabolitos secundarios. Entre ellos se encuentran aminocidos
proteicos, protenas, carbohidratos, lpidos, cidos grasos, algunos
cidos carboxlicos, etc.
Los metabolitos secundarios son derivados de los primeros, pero su
distribucin en el reino vegetal es ms limitada y para determinados
compuestos queda restringida a ciertas especies e incluso a algunos
grupos dentro de una misma especie, por lo tanto es improbable que
desarrollen un papel fundamental en el metabolismo primario. Sin
embargo, existen excepciones, entre estas estn las clorofilas y los
reguladores del crecimiento (hormonas vegetales), de los que sus
funciones bioqumicas y fisiolgicas han sido ampliamente reconocidas;
adems, recientemente se estableci que los flavonoides son factores
que inducen la germinacin del polen y la elongacin del tubo polnico

Metabolitos primarios

Metabolitos secundarios

Productos del metabolismo general


Ampliamente distribu dos en plantas y
microorganismos
Indispensables para la vida

Productos del metabolismo especial


Biosintetizados a partir del metabolismo
primario
Distribucin restringida a ciertas plantas,
microorganismos
Distribucin taxonmica restringida (a veces
caracterstico de un gnero dado o de una
especie)
No indispensables para la vida
Alcaloides, terpenos, flavonoides,
esteroides, cumarinas, etc.

Aminocidos de protenas, monosacridos,


lpidos, cidos derivados del ciclo de los
cidos tricarboxlicos, glcosidos, etc

5. De acuerdo al mdulo identifique la diferencia entre el trmino


fermentacin en Bioqumica y el trmino fermentacin en la
Biotecnologa.
La biotecnologa microbiana o como se llamaba anteriormente microbiologa
industrial se refiere a los procesos donde participan los microorganismos para
la obtencin de productos o metabolitos de inters humano. La microbiologa
industrial comenz con los procesos de fermentacin alcohlica por ej. La

fermentacin del vino y de la cerveza. Ms tarde se desarrollaron los procesos


microbianos para la produccin de agentes farmacuticos como los
antibiticos, la produccin de aditivos alimentarios como los aminos cidos,
para la produccin de enzimas y sustancias qumicas industriales como el
butanol, el cido ctrico, entre otros.
La fermentacin es el mecanismo ms simple y quizs el ms antiguo desde el
punto de vista evolutivo, de los procesos de obtencin de energa. Se suponen
que en las condiciones del mundo primitivo, donde no exista oxgeno libre, ni
los rayos del sol llegaban a su superficie, los primero organismos solo podan
obtener la energa a partir de la contenida en los compuestos orgnicos. Se
puede definir entonces, la fermentacin como el proceso metablico de
generacin de ATP.
Desde un punto de vista bioqumico las fermentaciones se caracterizan por ser
una suma de reacciones, al final de las cuales los productos poseen un
contenido energtico menor que el inicial. Si analizamos la fermentacin a
travs de la energa de enlace, tendremos que en ella se producen
reordenamientos moleculares en los que se pasa de funciones de mayor
contenido a funciones de menor contenido energtico. As, en la mayora de las
fermentaciones se pasa de grupos carbonilo e hidroxilo a grupos carboxilo de
menor contenido energtico.
6. Estudie la ova sobre fermentacin, que se encuentra en el entorno de
conocimiento de la unidad uno y describa los problemas que se
presentan en el escalado desde el punto de vista de la aireacin, la
esterilizacin y el control del proceso de fermentacin. Por qu estn
importante la estabilidad en un fermentador industrial?
El mantenimiento de un ambiente asptico y unas condiciones aerbicas son,
probablemente, los dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar.
Los fermentadores ms ampliamente utilizados a nivel industrial estn
provistos de mecanismos de agitacin, dispersin y aireacin as como de
sistemas para el control de la temperatura, pH y formacin de espuma.
En los reactores de tipo "air lift, el mismo aire inyectado promueve la agitacin.
Bsicamente consiste en dos cilindros concntricos y por la base de uno de
ellos, por ejemplo el interior, se inyecta aire. De este modo se genera una
circulacin de lquido ascendente en el compartimento interno y descendiente
en el externo, lo que favorece el mezclado.
Factores fisicoqumicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones
industriales
1.- Oxgeno
2.-Temperatura
3.- pH
Una adecuada agitacin de un cultivo microbiano es esencial para la
fermentacin ya que produce los siguientes efectos en las tres fases
a. Incrementar la velocidad de transferencia de oxgeno desde las
burbujas de aire al medio lquido; los microorganismos no pueden

utilizar oxgeno gaseoso, sino solamente el que se encuentra en


disolucin.
b. Aumentar la velocidad de transferencia de oxgeno y nutrientes desde el
medio a las clulas. Debido al movimiento se evita que las clulas creen
reas estancadas con bajos niveles de oxgeno y nutrientes.3 Impedir la
formacin de agregados celulares.
c. Aumentar la velocidad de transferencia de productos metablicos de las
clulas al medio.
d. Aumentar la tasa o la eficiencia de la transferencia de calor entre el
medio y las superficies de refrigeracin del fermentador
7. De acuerdo a la ova sobre fermentacin. Determine por medio de un
esquema las etapas de un proceso fermentativo a nivel industrial y
explique cada uno de los pasos.
1) Experimentos en el matraz de laboratorio que son generalmente la primera
indicacin que es posible un proceso de inters industrial.
2) El fermentador de laboratorio, un fermentador a escala pequea,
generalmente de vidrio y de 5 a 10 litros de capacidad. En el fermentador de
laboratorio es posible ensayar variaciones en el medio de crecimiento
temperatura, pH, etc., ya que los costos son bajos tanto en el equipo como en
los medios de cultivo.
3) La etapa en planta piloto, que se suele llevar a cabo en equipos de 300 a
3000 litros. Aqu las condiciones se acercan ms a la escala industrial, pero el
costo no es an un factor de importancia. En el fermentador de una planta
piloto es deseable una cuidadosa instrumentacin y un control con
computadora, de modo que las condiciones que se obtengan sean lo ms
similares a las del fermentador industrial.
8. De acuerdo a la ova sobre fermentacin Realice un cuadro comparativo
donde diferencie los tipos de fermentacin industrial y los mecanismos
de obtencin de productos fermentativo.
En funcin de los flujos de entrada y salida, la operacin de un biorreactor
puede ser de tres modos distintos
BATCH O DISCOTINUA
Sistema cerrado
A lo largo de toda la fermentacin
no se aade nada, excepto oxgeno
(en forma de aire), una gente
antiespumante y cidos o bases
para controlar el pH.
Cuando se ha alcanzado el nivel
deseado de reaccin, se vaca el

ALIMENTADO O FED-BATCH
Una mejora del proceso cerrado
discontinuo es la fermentacin
alimentada
En los procesos alimentados, los
sustratos
se
aaden
escalonadamente a medida que
progresa la fermentacin
a
formacin
de
muchos
metabolitos secundarios est

COTINUO O QUIMIOSTATO
sistema abierto
La solucin nutritiva estril se
aade
continuamente
al
biorreactor
y
una
cantidad
equivalente de solucin utilizada
de los nutrientes, con los
microorganismos
Opera por periodos largos;
tiempos muertos bajos.

reactor, se limpia y el proceso se


repite
En los procesos comerciales la
fermentacin frecuentemente se
interrumpe al final de la fase
logartmica (metabolitos primarios) o
antes de que comience la fase de
muerte (metabolitos secundarios)
Dificultad de controlar la velocidad
de crecimiento, excepto variando la
composicin del medio o las
condiciones de proceso
Alta demanda de oxgeno puede
generar una limitacin debido a una
insuficiente capacidad del reactor
para transferir O2 al medio
Inconvenientes para remover calor.

Tiempos muertos entre procesos


disminuye la productividad

sometida a represin catablica


(efecto glucosa)
Los elementos crticos de la
solucin de nutrientes se aaden
en pequeas concentraciones al
principio de la fermentacin y
continan
aadindose
a
pequeas dosis durante la fase
de produccin.
til en procesos en los que el
crecimiento
celular
y/o
la
formacin de producto son
sensibles a la concentracin del
sustrato limitante
Se emplea cuando se quieren
evitar fenmenos de inhibicin
por sustrato y se requiere
alcanzar una alta concentracin
de biomasa.
Limitar la demanda de O2 del
cultivo

Obtener altas concentraciones de


sustrato evitando el efecto
osmtico y txico de nutrientes
Maximizar el crecimiento celular
(efectoCrabtree en levaduras)

El medio nutriente es inoculado


con el cultivo microbiano al entrar
al reactor y los organismos llevan
a cabo su actividad a medida que
el lquido fluye a travs del
sistema y salen del sistema junto
con el medio.
Los
organismos
pueden
separarse de la corriente que lleva
al producto y reciclarse para
inocular el lquido de alimentacin
Alto costo por alta calidad de
equipos y accesorios.-Requiere
gran
reservorio
para
almacenamiento de medio o
suministro continuado de sustrato
El cultivo se mantiene con
coeficientes
de
crecimiento
constante,
crecimiento
balanceado, composicin celular
constante.
Generacin de biomasa constante
como productividad y conversin.Volumen de reactor reducido en
comparacin a la productividad
similar en proceso por lotes
Se incrementa el riesgo de
contaminacin debido a la amplia
operacin
Posibilidad
de
mutacin,
incremento de fagos por los
cambios genticos debido a la
presencia
de
plasmidios
e
incremento de estos

9. En la ova sobre fermentacin. Identifique los factores que pueden alterar


la produccin de enzimas de inters econmico a partir de
microorganismos en un proceso industrial, explique a travs de un
ejemplo cada uno de ellos.
Existen varios problemas en el control de la temperatura, de la aireacin y de la
humedad, por ello se prefieren los cultivos sumergidos a los cultivos en
superficie. Los cultivos en medio lquido, profundos, agitados, son mejor
adaptados a los diferentes controles mediante mtodos modernos y reducen
los riesgos de contaminacin. Adems se prestan mejor a las operaciones de
extrapolacin y de optimizacin necesarias para el paso del fermentador piloto
de laboratorio al fermentador industrial.
Los factores que pueden afectar la produccin de enzimas a partir de un
proceso industrial son:

- La baja especificidad: Aunque en la industria las enzimas sean utilizadas para


la hidrlisis de macromolculas complejas en las cuales los sitios de
acoplamiento con, frecuencia se desconocen, el efecto global que se busca
involucra, generalmente, la utilizacin de un tipo preciso de enzima.
- El valor de pH: Este factor tiene una influencia variable segn las enzimas;
algunas de ellas, como la proteasa alcalina an son activas a pH = 10, en tanto
que las enzimas fngicas funcionan an a pH = 3.
- El valor de la temperatura: Generalmente, quienes utilizan enzimas se
interesan en poder disponer de enzimas que soporten temperaturas elevadas,
ya que estas temperaturas conservan en parte la esterilidad del medio de
fermentacin.

SEGUNDA PARTE

Realice una ponencia cientfica: Estudie la Ova sobre enzimas, en dnde adems de
una breve contextualizacin del tema encontrar un problema, en el que se han
planteado tres hiptesis que podran explicar el fenmeno. A partir de esto construya
un texto cientfico. Para ello.

A. Plantee la Hiptesis. De acuerdo a lo ledo escoja una de las tres


hiptesis que se plantean para explicar el fenmeno. (Recuerde que debe
tener en cuenta los datos que se le dan en el problema)
Ecuacin de Michaelis-Menten: La ecuacin de Michaelis-Menten describe la
velocidad de reaccin de muchas reacciones enzimticas. Recibe este nombre
en honor a Leonor Michaelis y Maude Menten. Este modelo slo es vlido
cuando la concentracin del sustrato es mayor que la concentracin de la
enzima, y para condiciones de estado estacionario, es decir, cuando la
concentracin del complejo enzima-sustrato es constante

B. Establezca la garanta: Respalde su hiptesis con la ley o teora cientfica


que corresponda y explique la hiptesis planteada.
La ecuacin de Michaelis-Menten se basa en tres postulados:
1) El complejo que se forma de enzima-sustrato se encuentra en estado
estacionario, significa que la concentracin del complejo es se va a
mantener constante a pesar de que se est produciendo
trasformaciones de sustrato a producto, siendo as la variacin que se
produce en la concentracin del complejo ES con respecto al tiempo es
igual a 0.

2) Las condiciones de saturacin cuando el sistema est saturado


(enzima) lo hace en la formacin del complejo ES, cuando existe una
saturacin enzimtica, toda la enzima debe encontrarse en la forma de
ES, es decir en el momento en que se est produciendo la mxima
actividad la concentracin de enzima libre es prcticamente 0 o mnima
porque toda debe encontrarse como complejo ES
3) Cuando toda la enzima se encuentra como complejo ES la velocidad de
la reaccin tiene que ser mxima

E la grfica se puede ver como la formacin del complejo ES se mantiene en


estabilidad hasta que empieza e cierto mometo empieza a disminuir pues
aumenta la concetracion de producto
El aumento de concentracin de producto es inversamente proporcional a la
concentracin de complejo ES.

C. Analice la evidencia. Para ello, realice los laboratorios virtuales 2 y 3, en


ese orden y tome los resultados obtenidos,
lea detenidamente los
documentos, los artculos cientficos relacionados y escoja de ellos los
datos empricos (experimentales) y tericos que le puedan servir como
evidencia.
D. Respalde la Garanta. Una vez analizados los datos de los laboratorios y
los artculos cientficos, relacinelos con la garanta (teora cientfica) y
construya la evidencia cientfica.
Ecuacin de Michaelis-Menten: Cuando la concentracin en substrato cambia
al infimito; la velocidad inicial tiende hacia k3 [Er], o sea hacia la velocidad
mxima V m; toda la enzima se encuentra entonces bajo la forma ES.
La ecuacin es en su forma ms simple:

Esta es la ecuacin de Michaelis-Menten, segn la cual la velocidad de la


reaccin enzimtica es una funcin hiperblica de la concentracin del
substrato.
Los resultados experimentales en el caso de las enzimas michaelianas con un
solo substrato corroboran la validez de esta ecuacin.
Significacin de Km Y de Vm: Vm representa la velocidad mxima que puede
alcanzar la reaccin: toda la enzima se encuentra bajo la forma compleja ES.
Cuando la velocidad de la reaccin alcanza la mitad de la velocidad mxima,
v= 1/2 Vm, Km es entonces igual a (S].
Si kz > k3, Km = kz/k1 que es la hiptesis de Michaelis-Menten : [E] + [S] y [ES]
estn en equilibrio y la formacin del producto representa una ligera fuga. En
este caso, Km puede ser asimilada a la inversa de la afinidad de las enzimas
por el substrato. Mientras ms pequea sea Km, mayor ser la afinidad y
viceversa.
Si kz < k3, la hiptesis de Michaelis-Menten no tiene validez y Km ya no tiene
relacin con la afinidad de la enzima por el substrato. Tambin es preferible
considerar Km como una constante emprica igual a la concentracin del

substrato para la cual la velocidad inicial es igual a V m/2en las condiciones


experimentales definidas.
Reversibilidad y relacin de Haldane: En distintos puntos de la curva las
reacciones enzimticas son reversibles, es de ecir las enzimas pueden
catalizar la reaccin inversa:

E. Encuentre las posibles excepciones, que se puedan presentar sobre la


hiptesis escogida, adelntese a las posibles refutaciones que pueda
recibir sus argumentos.
Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice que
su cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostricos, cuya
grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide. En la cintica
sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una zona crtica (cercana a la
KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

F. Concluya. Ratifique la Hiptesis escogida utilizando un calificador modal.


Aunque es imposible medir exactamente la concentracin de sustrato que da Vmax,
las enzimas pueden caracterizarse mediante la concentracin de sustrato a la cual
la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima.
Para enzimas que exhiben una cintica de Michaelis-Menten simple esta constante
representa la constante de disociacin del complejo enzima-sustrato (ES) (o la

inversa de la afinidad entre enzima y sustrato). Valores bajos indican que el


complejo ES est unido muy fuertemente y raramente se disocia sin que el sustrato
reaccione para dar producto.
En estos casos se obtendr una KM diferente segn el sustrato especfico sobre el
que acte la enzima (como sucede en el caso de enzimas que actan sobre
sustratos anlogos) y segn las condiciones de reaccin en que se realicen las
mediciones.
La derivacin de Michaelis y Menten est descrita por Briggs y Haldane.
Se supone que la reaccin enzimtica es irreversible, y que el producto no se liga
con la enzima despus de la reaccin.