Lei de Beer

A lei de Lambert-Beer o fundamento da espectrofotometria, e dita que a

quantidade de luz absorvida ou transmitida por uma determinada soluo
depende da concentrao do soluto e da espessura da soluo. Esta
representada por A = x c x b, sendo Absortividade molar (L mol -1 cm-1),
b a Espessura da substncia atravessada pela radiao (cm) e c representa
a Concentrao da espcie absorvente (mol/L).
O espectrofotmetro vai, ento, medir a absorvncia (A) da amostra a ser
analisada, que a capacidade intrnseca do composto para absorver a
radiao. Dependendo da concentrao da soluo, a intensidade de
radiao absorvida pelo composto aumenta ou diminui. A absorvncia
representa-se como:

Onde Io a intensidade da radiao incidente e I a intensidade da

radiao transmitida
Analise Espectrofotometrica
Mtodo das solues padro - Para um dado c.d.o., inicialmente
determina-se a absorvncia de solues padro de concentrao conhecida
(composio prxima da soluo a analisar), efectuando-se depois a curva
de calibrao. Finalmente sabendo a absorvncia da soluo analisada
determina-se a concentrao atravs da equao da recta.
Mtodo da adio padro - em amostras complexas (solos, plantas) em
que dificil criar solues padro com composio proxima da amostra,
cada soluo padro ser constituida por um volume fixo de amostra e a
adio de um volume varivel de soluo de concentrao conhecida, sendo
depois a concentrao da amostra obtida pelo valor onde a recta intercepta
o eixo do YYs.
A funo da fase estacionria na coluna separar componentes
diferentes, causando a cada um sada da coluna em um tempo diferente
(tempo de reteno).