Tanaman adaptasi tercemar logam lingkungan-fisiologis, morfologis, dan wawasan

evolusi dari Biscutella laevigata

ABSTRAK
tanah tercemar mempromosikan adaptasi tanaman yang cepat untuk konsentrasi
tinggi elemen logam. Biscutella laevigata adalah pseudometallophyte diselidiki kecil
yang muncul menjanjikan untuk mempelajari proses evolusi dan muka pemahaman
melampaui spesies model yang ada, tapi toleransi logam yang kurang dipahami.
Kami menentukan tingkat toleransi seng dan berbagai respon tanaman untuk
konsentrasi seng lingkungan yang relevan dalam sepuluh populasi B. laevigata
metallicolous dan non-metallicolous dari Polandia selatan. Dalam dua-tahap
percobaan hidroponik, kami mencetak beberapa ciri morfologi dan fisiologis
(misalnya biomassa, gejala stres terlihat, konten elemen di dedaunan) dan
variabilitas fenotipik dinilai dalam pabrik \ keluarga. Struktur sifat-sifat kuantitatif
dibandingkan dengan penanda molekuler netral untuk menguji, apakah seleksi alam
menyebabkan populasi diferensiasi dalam toleransi seng. Sedangkan toleransi seng
adalah spesies-lebar (yaitu ditingkatkan di semua genotipe dibandingkan dengan
spesies referensi seng sensitif), kami menemukan tren kongruen terhadap toleransi
yang lebih tinggi di metallicolous dibandingkan dengan tanaman non-metallicolous.
Parameter yang paling indikatif untuk perbedaan ini biomassa kering tunas,
biomassa akar kering, dan sangat efektif hasil fotosistem II. Kami menemukan
bahwa peningkatan toleransi zinc pada populasi metallicolous didorong oleh pilihan
yang berbeda dalam menanggapi kontaminasi logam. Selain itu, analisis interaksi
genotip x lingkungan menunjukkan bahwa diferensiasi ini diwariskan. Temuan ini
mempromosikan aksesi diploid dari B. laevigata seng toleran tetapi nonhyperaccumulating organisme untuk mempelajari adaptasi tanaman untuk
lingkungan yang terkontaminasi. Hebatnya, perbedaan toleransi antar jenis edafis
muncul sudah pada konsentrasi seng lingkungan yang relevan dari 150 mM. Hal ini
akan membuka perspektif yang tidak biasa pada adaptasi tanaman yang harus diuji
di specie non-hyperaccumulating lainnya
pengantar

kegiatan industri dan oleh-produk mereka telah menyebabkan kontaminasi tanah

dengan elemen logam (selanjutnya disebut "logam") yang mengancam ekosistem di
banyak bagian dunia. Berbagai macam respon tanaman untuk konsentrasi logam
yang berlebihan telah diamati dan intens belajar selama lebih dari setengah
abad(Hanikenne dan Nouet, 2011). Meskipun sebagian besar spesies sensitif logam
dan telah pertumbuhannya terhambat di lokasi yang terkontaminasi, beberapa
taksa yang toleran dan berkembang dalam lingkungan metalpolluted (Antonovics et
al., 1971). Spesies ini diklasifikasikan sebagai metallophytes mutlak (terjadi hanya

pada tanah metalliferous) atau pseudometallophytes (hadir di situs baik

metalliferous dan non-metalliferous; Lambinon dan Auquier, 1964). Yang terakhir
memberikan kesempatan untuk penelitian fisiologis, ekologi, genetik, dan evolusi
pada sifat kompleks yang dipilih secara alami (Baker et al, 1994;. Assuno et al,
2003;. Cambroll et al, 2013.) Karena kondisi lingkungan yang ekstrim
mempromosikan
diferensiasi cepat antara metallicolous (M) populasi di tanah metalliferous dan nonmetallicolous populasi (NM) di tanah non-metalliferous (Dechamps et al., 2007).
Sejak adaptasi genetik Silene dioica untuk tembaga (Cu) Surplus pertama kali
diakui oleh Prat (1934), adaptasi terhadap berbagai logam telah ditemukan pada
spesies yang berbeda (Schat et al., 2000). Mayoritas penelitian telah dilakukan pada
Arabidopsis halleri (syn. Cardaminopsis halleri) dan caerulescens Noccaea
(sebelumnya Thlaspi caerulescens). Dalam kedua spesies model, seng (Zn) toleransi
konstitutif (yaitu spesies-lebar), tetapi beberapa percobaan fenotip telah
melaporkan lebih tinggi berarti tingkat toleransi di M dibandingkan dengan populasi
NM (Assuno et al, 2003;.. Meyer et al, 2010) menunjukkan bahwa berbagai
kapasitas toleransi setidaknya sebagian di bawah kontrol genetik. fenotipik tersebut
dan perbedaan genetik antara populasi alami dapat berupa adaptif dalam
menanggapi tekanan selektif atau non-adaptif dan dengan demikian disebabkan
pasukan netral (Wright, 1949). Beberapa studi telah menyelidiki hal ini dengan
membandingkan diferensiasi sifat kuantitatif (diperkirakan oleh QST) dengan variasi
genetik dari penanda molekuler netral (diperkirakan oleh FST). Menariknya, pilihan
yang berbeda ditunjukkan untuk membentuk perbedaan fenotipik antara M dan NM
ekotipe (QST> FST) di kedua A. halleri (Meyer et al., 2010) dan caerulescens N.
(Jimenez-Ambriz et al., 2007). Kedua logam Model toleran spesies juga diketahui
konstitutif hyperaccumulate beberapa logam di bagian udara mereka (Baker et al,
1994;. Bert et al, 2000.). Sementara kombinasi langka ini dari karakteristik telah
membuat mereka menarik benda studi, mereka tidak dapat dianggap mewakili flora
calamine yang telah berkembang dalam menanggapi tekanan selektif yang
disebabkan oleh konsentrasi logam yang tinggi. Sebaliknya, fenotip divergensi juga
harus diuji di pseudometallophytes non-hyperaccumulating (Pauwels et al., 2006).
Spesies calamine diselidiki ini sedikit membawa potensi besar untuk memajukan
pemahaman kita tentang mekanisme toleransi logam. Misalnya, penelitian terbaru
dari Colzi et al. (2015) pada toleransi dan akumulasi logam yang berbeda dalam
logam excluder S. paradoxa menunjukkan peningkatan toleransi di M dibandingkan
dengan populasi NM dan konsentrasi logam yang lebih tinggi di akar dari tunas.
Tergantung pada logam diselidiki, mekanisme toleransi termasuk menghindari
logam, hambatan pada tingkat sel, atau kombinasi keduanya (Colzi et al., 2011,
2015). Tinggi intra-spesifik variabilitas dalam tingkat toleransi logam, bersamasama dengan akumulasi logam di akar dan translokasi terbatas tunas juga baik
dikenal di pseudometallophyte kapiler Agrostis untuk Cu, timbal (Pb), kadmium (Cd,
Dahmani-Muller et al., 2000) dan arsen (As) eksposur (Austruy et al., 2013)? tetapi

tidak untuk Zn (Dahmani-Muller et al., 2000). Meskipun ini dan upaya lain,
mekanisme genetik dan fisiologis yang mendasari toleransi logam jauh dari
sepenuhnya dipahami. Oleh karena itu, penelitian lebih lanjut tentang excluders
logam diperlukan untuk menentukan, apakah sifat toleransi mereka adalah spesieslebar atau populasi tertentu dan didorong oleh adaptif atau non-adaptifmekanisme.
Biscutella laevigata L. (Brassicaceae) adalah khas tetapi sedikit dipelajari
pseudometallophyte dengan distribusi luas di seluruh Tengah, Barat, dan sebagian
Eropa Timur (Jalas et al., 1996). Tumbuh terutama di situs non-metalliferous tetapi
juga terjadi di tailing cekungan yang mengandung bahan limbah dari tungku,
singkapan serpentine, dan tumpukan sampah calamine tercemar oleh
pertambangan dan / atau emisi smelter (Lombini et al, 1998;. Wenzel dan Jockwer,
1999; Babst -Kostecka et al., 2014). Beberapa laporan yang ada pada logam
hiperakumulasi di B. laevigata bertentangan. Berdasarkan analisis kimia konsentrasi
logam dalam tanaman dari populasi alami, beberapa penelitian dijelaskan spesies
ini sebagai hiperakumulator dari thallium (Tl; Escarr et al, 2011.), Zn dan Pb
(Wenzel dan Jockwer, 1999), sedangkan yang lain tidak mengamati kapasitas ini
dalam setidaknya beberapa populasi diselidiki (Wierzbicka et al, 2004;.??. POS ci c
et al, 2015). Percobaan dalam kondisi yang terkendali menggunakan sejumlah
populasi M dan NM (1 vs 3) menegaskan hiperakumulasi logam dalam kasus Tl (POS
ci c et al, 2013??.) - Tetapi tidak untuk Zn, Pb atau Cd (Wasowicz et al, 2014) -. dan
menunjukkan bahwa sifat ini adalah populasi tertentu daripada konstitutif. Mirip
dengan hiperakumulasi, kapasitas toleransi logam B. laevigata (Zn, Pb, Cd:
Wierzbicka et al, 2004; Wierzbicka dan Pielichowska, 2004; Tl:.??. POS ci c et al,
2013) dipelajari menggunakan populasi dengan kontras asal edafis. Menariknya,
kecenderungan umum ke arah toleransi yang lebih tinggi di M dibandingkan dengan
tanaman NM ditunjukkan untuk semua logam diselidiki. Namun, perbandingan
dengan metallophytes toleran dan non-toleran lain dan pseudometallophytes hilang
dan lebih banyak bukti yang diperlukan untuk memperjelas akumulasi logam dan
pola toleransi dalam B. laevigata.
Hasil yang berbeda mengenai akumulasi logam dan toleransi di B. laevigata
menunjukkan cukup variabilitas fenotipik intraspecific dan menyarankan bahwa
populasi M dapat mengalami adaptasi lokal paparan logam. Selain itu, baru-baru ini
studi tentang perbedaan genetik antara populasi M dan NM berdasarkan penanda
molekuler netral menunjukkan bahwa populasi dari asal edafis kontras secara
genetik berbeda (BabstKostecka et al, 2014;. Wasowicz et al, 2014;. POS ci c et al,
2015??. ). Keragaman genetik netral lebih rendah di M dibandingkan dengan
populasi NM disebabkan seleksi, pendiri, dan efek hambatan selama acara adaptasi
baru-baru ini (Babst-Kostecka et al., 2014). Oleh karena itu, B. laevigata adalah
spesies yang menarik untuk belajar adaptasi tanaman untuk lingkungan tercemar
dan mengevaluasi perubahan pilihan-driven fenotipik dan variabilitas genetik.
Di sini, kami mempelajari sepuluh M dan NM populasi B. laevigata yang telah
diidentifikasi sebagai diploid (2n = 18) dalam studi caryological dan molekuler (Skali

nska, 1950;?. Babst-Kostecka et al, 2014). Situs yang terletak di tepi distribusi timur
laut spesies dan termasuk sangat tercemar wilayah Bolesaw-Olkusz (selanjutnya
disebut "Olkusz") di Polandia selatan, di mana bijih kaya dalam metalliferous
dolomit bedrock telah ditambang dan diproses di pabrik smelter selama berabadabad (Kabbalah et al., 2004). kegiatan ini telah menciptakan sebuah "laboratorium
udara terbuka" untuk menyelidiki adaptasi tanaman untuk tekanan seleksi
lingkungan dari konsentrasi logam yang tinggi di tanah. Tujuan utama kami adalah
untuk i) menguji apakah toleransi Zn adalah konstitutif dalam B. laevigata, ii)
menilai polimorfisme menanggapi Zn paparan pada populasi M dan NM, dan iii)
menentukan apakah respon yang berbeda antara populasi hasil dari proses adaptif
atau non-adaptif . Untuk menjawab pertanyaan ini, kita menyelidiki toleransi
populasi M dan NM dengan cara eksperimen terkontrol dua fase dalam larutan
hidroponik. Dalam fase pertama kami mengidentifikasi tingkat toleransi Zn dengan
terus meningkatnya konsentrasi Zn yang diterapkan dari waktu ke waktu. Fase ini
melibatkan B. laevigata dan kedua toleran dan spesies referensi non-toleran. Tahap
dua dioperasikan dengan konsentrasi Zn konstan (sebagaimana ditentukan dalam
fase satu) dan kami mengukur ciri fenotipe termasuk biomassa, spidol logamtoksisitas, serta perubahan dalam isi elemen di tingkat dedaunan dalam keluarga
tanaman. Mengakui peran penting dari proses shootbased toleransi logam
(Guimaraes et al., 2009), sebagian besar kriteria toksisitas yang digunakan disebut
tunas. Selain penilaian fenotip ini, kita diuji untuk seleksi alam potensial yang
menyebabkan diferensiasi populasi di toleransi Zn dengan membandingkan struktur
sifat kuantitatif dengan yang penanda molekuler netral (QST? FST perbandingan).
percobaan ini memungkinkan untuk penilaian yang mendalam dari evolusi
kapasitas toleransi Zn B. laevigata di lingkungan antropogenik ekstrim
Tabel 1
Lokasi situs, pH tanah dan jumlah Zn, Pb, konsentrasi Cd (mean? SD). Akronim
berikut digunakan: ns? jumlah sampel tanah yang diambil untuk analisis kimia; ? Nf
jumlah keluarga termasuk dalam percobaan toleransi seng; Bertemu? situs
mengandung logam (usia deposit tumpukan terbaru di tahun); NMet? situs nonmengandung logam; na? tidak tersedia
ni adalah satu-satunya habitat metalliferous diketahui dijajah oleh B. laevigata di
tepi spesies 'timur laut distribusi, di mana distribusi spesies adalah disjungtif
(Babst-Kostecka et al., 2014). Situs non-metalliferous yang terletak di padang
rumput (PL8, PL11) atau di lereng berkapur dan tebing (PL14, PL16) dari Barat
Pegunungan Tatra, kecuali untuk satu situs dataran rendah di padang rumput
xerothermic di Zagrzyce (PL10). Total Zn dan konsentrasi tanah Pb di PL16 sedikit
melebihi ambang batas tersebut.
Pada setiap situs, benih dari sepuluh tanaman B. laevigata ibu (= 10 keluarga) yang
sampel secara terpisah pada jarak minimal 3 m untuk menghindari klonal
pengulangan (Manton, 1934). Lima sampai tujuh sampel tanah rizosfer per situs

dikumpulkan hingga kedalaman 10 cm dengan menggunakan silinder berdiameter 7

cm dan diayak dengan 2 mm mesh. pH tanah diukur dalam 1: 5 (w / v) suspensi
tanah dalam air deionisasi (ISO 10390). Jumlah Zn, Pb, dan Cd diekstraksi oleh
pencernaan basah 0,5 g sampel tanah dasar dengan panas asam perklorat pekat
(HClO4; Foss Tecator Digestor Auto). kandungan logam dalam ekstrak tanah
ditentukan dengan menggunakan metode spektrometri serapan atom (AAS, Varian
280FS) dan hasil dipastikan menggunakan bahan tanah referensi CRM048-050. Nilai
pemulihan berkisar antara 97 dan 102%, dengan RSD? 0,5%
2.2. penilaian Zn-toleransi
percobaan hidroponik)

intra

dan

interspesifik

(fase

salah

satu

Dua puluh biji, dipilih secara acak dari masing-masing populasi (Tabel 1), yang
berkecambah pada perlite-vermiculite substrat campuran. Perkecambahan dan
tanaman budaya dilakukan dalam ruang pertumbuhan yang dikendalikan dengan
ketentuan sebagai berikut: penyinaran: 13 h hari dan 11 jam malam, suhu: hari 20C
dan 15 C malam, kelembaban relatif: 65%, dan radiasi pada tingkat pabrik: 300
mmol foton m? 2 s? 1. Dua bibit berumur seminggu dipindahkan ke dalam pot
polietilen 1 L (empat tanaman per pot). Setiap pot diisi dengan larutan yang sedikit
dimodifikasi setengah-kekuatan Hoagland ini hara (Hoagland dan Broyer, 1936)
dengan 20 mM
FeEDDHA, 500 mM MgSO4, 1 mM NH4H2PO4, 0,1 mM (NH4) 6Mo7O24, 0,1 mM
CuSO4, 25 mM H3BO3, 2 mM MnSO4, 1 mM KCl, 0,1 mM NaCl, 2 mM Ca (NO3) 2, 3
mM KNO3, dan 1 mM Zn - ditambahkan sebagai ZnSO4- dalam 2 mM asam 2morpholinoethanesulphonic (MES) penyangga, diatur untuk pH 5,5 menggunakan
KOH. Solusi ini berubah mingguan dan pot acak. Setelah dua minggu prakultur,
yang memungkinkan tanaman untuk menyesuaikan diri dengan kondisi hidroponik,
tes toleransi (selanjutnya disebut "tes berurutan") yang terdiri dari penilaian
kualitatif dari pertumbuhan akar (pertumbuhan vs tidak ada pertumbuhan) saat
terpapar secara berurutan meningkatkan konsentrasi Zn dimulai (Schat dan
Sepuluh Bookum, 1992). Untuk
mengidentifikasi konsentrasi Zn cukup beracun memungkinkan kita untuk
membedakan antara tingkat toleransi populasi M dan NM, konsentrasi 1 mM Zn
dipertahankan selama minggu pertama dan terus meningkat sebesar 50 langkah
mM selama 10 minggu ke depan sampai mencapai 500 mM. Dengan tingkat
pemaparan ini, hanya populasi M dari B. laevigata masih menunjukkan
pertumbuhan akar. Selama dua minggu terakhir pengobatan konsentrasi Zn dalam
larutan dibesarkan oleh 250 langkah mM mencapai 1.000 mM di akhir. Semua
pertumbuhan akar di B. laevigata telah lalu berhenti. Konsentrasi terendah di mana
pertumbuhan akar definitif berhenti itu

ditentukan untuk setiap individu dan ditafsirkan sebagai batas toleransi. Untuk lebih
mencirikan berbagai reaksi di B. laevigata, kinerja toleransi tanaman M dan NM
dibandingkan dengan yang populasi referensi yang diperlakukan secara paralel (10
individu masing-masing). Mereka termasuk salah satu M dan satu populasi NM dari
logam toleran pseudometallophyte (A. halleri) dan satu populasi non-toleran,
spesies non-metallophyte (B. neustriaca). Hasilnya dinyatakan sebagai persentase
dari tanaman di setiap populasi dengan akar-akarnya masih tumbuh dengan setiap
langkah Zn-exposure.
2.3. variabilitas fenotip pada B. laevigata dalam menanggapi Zn paparan
(Fase dua dari percobaan hidroponik)
Sepuluh biji per keluarga dipilih secara acak dan berkecambah pada perlitevermiculite substrat campuran. Dengan beberapa biji menjadi steril, jumlah akhir
dari keluarga laevigata B. dan individu dalam percobaan (selanjutnya disebut
"fenotip percobaan pada konsentrasi tetap") adalah 78 dan 420, masing-masing
(Tabel 1 dan Tabel S1 dalam Lampiran A). Menggunakan kultur hidroponik yang
sama
kondisi seperti pada tes berurutan, bibit dua-minggu-tua ditransfer ke 1 L
polyethylene pot dan selanjutnya dibudidayakan dalam cahaya, suhu dan
kelembaban udara lingkungan yang terkendali. Setelah dua minggu prakultur,
hingga enam homogen (mengenai ukuran roset dan jumlah daun) tanaman per
keluarga dipilih dan setengah dari mereka tetap dipertahankan dalam kondisi nonterkontaminasi (Zn-kontrol, perlakuan kontrol, 1 mM Zn), sedangkan setengah
lainnya terkena 150 mM Zn (Zn +, pengobatan Zn ditinggikan). paparan ini dipilih
berdasarkan tes berurutan dijelaskan dalam Bagian 2.2. Tanaman kemudian
dibudidayakan selama enam minggu, dengan satu tanaman per pot, dan dalam
larutan diangin-anginkan selama 16 jam / hari. Solusi digantikan mingguan sebelum
pot pengacakan. Variabilitas fenotipik dalam menanggapi Zn paparan dinilai dengan
mencetak tujuh ciri di setiap tanaman. Setiap minggu kami menentukan 1)
biomassa total segar (BF), 2) jumlah daun (LNB), 3) relatif laju pertumbuhan (RGR),
4) efektif fotosistem II yield (FPSII), dan 5) persentase daun menunjukkan terlihat
gejala keracunan Zn. Pada akhir percobaan kami tambahan mencetak
kering 6) biomassa pucuk (SB) dan 7) biomassa akar (RB). Tingkat pertumbuhan
relatif dihitung sebagai RGR = (ln FBy-ln FBX) / D, di mana FBX dan FByis biomassa
tanaman segar di kali x dan y, dan D (= 7 hari, karena FB itu mencetak mingguan)
adalah waktu yang telah berlalu antara y dan x (Cambroll et al., 2013). Mengingat
kondisi pertumbuhan standar dan status air tanaman terlepas dari pengobatan, BF
dan pengukuran RGR memberikan perkiraan terpercaya pertumbuhan tanaman.
Perkiraan klorofil fluoresensi terdiri dari tiga rata-rata
pengukuran daun menengah per tanaman menggunakan pulseamplitude PAM-2100
termodulasi fluorometer (Walz, Effeltrich, Jerman) dengan FPSII = (Fm 0? Ft) / Fm 0,

di mana Ft adalah tingkat fluoresensi mapan di bawah cahaya ambient dan Fm 0

adalah tingkat maksimum fluoresensi diukur selama pulsa menjenuhkan (0,8 s,
8500 mmol m? 2 s? 1). Pada akhir percobaan, tanaman dipanen, tunas dan akar
mereka dipisahkan, dua fraksi dicuci dua kali dalam air demineralisasi, dikeringkan
pada 70 C selama 48 jam sebelum menentukan SB dan RB oleh bobot. Tunas kering
digunakan untuk menentukan epigeous Zn, kalsium (Ca), magnesium (Mg), besi
(Fe), mangan (Mn), dan kalium (K) konsentrasi. 0,5 g bahan tanaman kering tanah
dicampur dengan 10 ml asam nitrat (HNO3, 69-70%) dan HClO4 (70-72%) 4: 1, kiri
selama 24 jam, dan mineral pada 290 konsentrasi C. Elemen adalah ditentukan
dengan menggunakan AAS dan hasilnya dipastikan menggunakan bahan tanaman
referensi selama analisis. Fosfor (P) konsentrasi ditentukan dengan metode
vanadium-molibdenum dari Barton menggunakan 0,5 g bahan kering tanah
dilarutkan dalam HClO4, mineralisasi pada 290 C dan dicampur dengan campuran
vanadium-molibdenum dan air. Absorbansi pada 490 nm yang dibaca menggunakan
spektrofotometer Hach-Lange DR3800.
2.4. analisis statistik dari respon fenotipik
Perkembangan tanggapan fenotipik selama percobaan fenotip pada konsentrasi
tetap dan kontras antara populasi dan keluarga dianalisis dengan cara tindakan
berulang ANOVA (umum model linier [GLM] prosedur, "ulang" pernyataan, SAS
Institute 2004). Terlepas dari waktu (dalam faktor efek, 7 tingkat), faktor
diperintahkan dalam desain statistik sebagian hirarkis termasuk faktor-faktor
independen Zn-pengobatan (2 tingkat) dan asal edafis (2 tingkat), dan tertanam
penduduk faktor (bersarang dalam edafis asal, 10 tingkat) dan keluarga (bersarang
di dalam populasi, 44 tingkat). Zntreatment dan asal edafis dianggap sebagai tetap
dan kependudukan dan keluarga sebagai faktor efek acak. Karena data tidak
memenuhi asumsi kebulatan, koreksi Huynh-Feldt-Lecoutre Epsilon diterapkan.
Sebelum tindakan berulang ANOVA, variabel yang log-transformasi (log [X + 1]
untuk RGR karena nilai-nilai negatif setelah kalah daun nekrotik pada akhir
percobaan). Untuk setiap minggu, perbedaan antara NM-control, Mcontrol, NM-Zn +,
M-Zn + kelompok sarana diuji melalui tes Tukey HSD (software R, statistik dasar
paket). Gejala stres di dedaunan dari M dan NM tanaman yang dikembangkan di
bawah Zn + paparan dianalisis pada akhir percobaan fenotipik dengan cara ANOVA
bersarang menggunakan prosedur GLM dari SAS (SAS Institute 2004). Populasi
faktor (faktor efek random) yang bersarang di dalam asal edafis (faktor efek tetap).
Sebelum ANOVA, variabel yang arcsin akar kuadrat-berubah sebagai nilai-nilai
berada di kisaran 0-1. indeks toleransi (TIS) dihitung untuk sifat morfologis dan
fisiologis (yaitu BF, SB, RB, LNB, RGR dan FPSII) diukur pada akhir percobaan fenotip
pada konsentrasi tetap untuk menghilangkan sebagian besar variasi yang tidak
terkait dengan perawatan logam. Mengingat lemah variasi dalam-keluarga di bawah
kondisi Zn-control (? 10% dari total varian, data tidak ditampilkan), TIS diperkirakan
dengan membagi nilai sifat di Zn + tanaman individu dengan mean aritmetik dari
nilai sifat yang sama rata-rata lebih dari individu dari keluarga yang sama di Zn-

control (Meyer et al., 2010). Perbedaan antara asal edafis, populasi dan keluarga
dianalisis dengan menggunakan ANOVA bersarang menggunakan prosedur GLM dari
SAS (SAS Institute 2004), dengan populasi faktor bersarang di dalam asal edafis,
dan keluarga bersarang di dalam populasi. Hanya asal edafis dianggap sebagai
faktor efek tetap sedangkan semua orang lain yang dianggap sebagai faktor efek
acak. Dalam asal edafis, kami juga memperkirakan varians parsial dijelaskan oleh
perbedaan antara dan di dalam populasi menggunakan metode REML prosedur
VARCOMP dari SAS (SAS Institute 2004).
2.5. QST- FST perbandingan
Untuk QST? FSTcomparisons, morfologi, fisiologi dan elemen pengukuran pada akhir
Zn-paparan yang dikombinasikan dengan dataset genetik yang ada, termasuk 319
orang dari sepuluh populasi yang diteliti di sini yang genotipe menggunakan
sembilan polimorfik mikrosatelit lokus (B6, B66, B45 , B102, B146, B3, B24, B8, B26;
Babst-Kostecka et al, 2014).. Sebagai dasar untuk menghitung FST memperkirakan
beberapa perkiraan keanekaragaman genetik dihitung. Mereka termasuk i) berarti
alel kekayaan (AS), dihitung dengan menggunakan fstat 2.9.3 (Goudet, 2001), ii)
diharapkan (HE) dan mengamati (HO) heterozigositas, dan iii) Wright koefisien
inbreeding (FIS) di setiap lokasi; ii) dan iii) yang dihitung dengan menggunakan
Genetix 4.05 (Belkhir et al., 2004). Fenotipe dan genotipe dataset diwakili genotipe
yang berbeda. Data (1,2% dari alel dan 11,7% dari set fenotipe data) yang
diinterpolasi menggunakan pendekatan sembarang Forest diimplementasikan
dalam paket missForest di R Hilang (Stekhoven dan Buhlmann, 2012). metode
regresi nonparametrik ini cocok untuk campuran-tipe data dengan efek interaktif
dan nonlinear antara variabel. Dengan asumsi diferensiasi netral penanda, kami
melakukan alel dan fenotip interpolasi secara terpisah. Alel pada setiap lokus, asal
edafis, populasi, keluarga dan individu diperlakukan sebagai variabel kategoris
sedangkan semua fenotipe dianggap sebagai variabel kontinu. Wright FSTanalogue
(u B) diperkirakan menggunakan metode Bayesian hirarkis diterapkan di HICKORY
v1.1 (Holsinger dan Lewis, 2007). Kami berlari dua model terpisah: model penuh di
mana u B dan koefisien inbreeding f tidak diketahui dan f = 0 model di mana u B
tidak diketahui dan inbreeding diatur ke nol. The DIC
Kriteria kemudian digunakan untuk mengidentifikasi model dengan cocok dengan
data (Holsinger dan Wallace, 2004). Distribusi posterior dari u B diperoleh dengan
menggunakan Monte Carlo (MCMC) Metode Markov Chain dengan burn-in 5000
iterasi dan sampling lari dari 50.000 iterasi. Setiap sampel kelima dipertahankan
untuk perhitungan posterior dan interval kredibel (CI) diperkirakan dari cakupan
95% dari distribusi posterior. Menggunakan morfologi, pengamatan fisiologis dan
elemen pada akhir percobaan fenotip pada konsentrasi tetap (yaitu BF, SB, RB, LNB,
RGR, FPSII, Zn, Ca, Mg, Fe, Mn, P, K), perkiraan QST berasal dari komponen varians
model pas terbaik menggunakan versi modifikasi dari pendekatan Bayesian
dijelaskan dalam Waldmann et al. (2005). The QST statistik dihitung untuk masingmasing sifat fenotipik sebagai Vp / (Vp + 2cVf), dengan Vp menjadi antara populasi

varians, koefisien ca hubungan antar individu dalam keluarga (dalam kasus

setengah-saudara kandung, sebagaimana diasumsikan dalam penelitian ini, c = 4)
dan Vf di antara keluarga varians. BF, SB, RB, Fe, dan Mn yang log-berubah untuk
mencapai normalitas. Probabilitas QST menjadi lebih besar dari FST dihitung dengan
membagi jumlah iterasi mana QST> FST dengan jumlah total iterasi.
HASIL
3.1. penilaian Zn-toleransi intra dan interspesifik
Terlepas dari asal edafis mereka, semua populasi laevigata B. menunjukkan
pertumbuhan akar terus menerus untuk konsentrasi Zn? 150 mM. Di atas batas ini,
pertumbuhan akar berhenti untuk konsentrasi Zn antara 200 dan 450 mM Zn di NM
dan 350-1000 mM Zn pada tanaman M (Gambar. 1). Sebaliknya, pertumbuhan akar
sudah berhenti pada 100 mM Zn dalam logam-sensitif B. neustriaca tetapi tidak
sampai 400 1000 mM Zn dalam logam-toleran A. halleri. Hal ini menunjukkan
toleransi Zn specieswide di B. laevigata. Mengingat pertumbuhan akar tanpa
hambatan, namun kejadian pertama gejala stres di dedaunan tanaman laevigata B.
diuji (data tidak ditampilkan), konsentrasi Zn dari 150 mM diidentifikasi sebagai
ambang batas toleransi keseluruhan. tingkat pemaparan ini dipilih untuk
pengobatan Zn + dalam percobaan fenotip berikutnya pada konsentrasi tetap.
3.2. tanggapan perkembangan tanaman dan tanaman dalam eksperimen fenotip
pada konsentrasi tetap
Selama percobaan fenotip pada konsentrasi tetap, populasi M dan NM
dikembangkan kontras tanggapan untuk Zn paparan (Gambar 2;. Tabel 2).
Pertumbuhan populasi M sedikit (BF) atau tidak (LNB) dipengaruhi oleh Zn +
pengobatan, sedangkan parameter yang sama turun secara signifikan pada
tanaman NM bawah Zn + dibandingkan dengan Zn-kontrol pengobatan sudah
dalam pertama (BF) dan ketiga (LNB) minggu percobaan. Menariknya, perbedaan
antara NM dan tanaman M (di bawah kedua Zn-kontrol dan Zn +) yang signifikan
dari awal percobaan dan meningkat terus sampai akhir. Dengan demikian, NM
tanaman dalam kondisi Zn-kontrol menunjukkan tingkat pertumbuhan yang lebih
tinggi (yaitu BF, LNB) dari semua kelompok lainnya. The RGR menurun secara
eksponensial, terlepas dari pengobatan dan \ asal edafis. Penurunan terbesar
diamati pada tanaman NM bawah Zn + selama tiga minggu pertama. Selanjutnya,
perbedaan antara kelompok tetap kecil, meskipun kadang-kadang yang signifikan
dalam kasus tanaman NM di Zn + vs Zn-control. tanaman FPSIIin M menunjukkan
toleransi terhadap Zn paparan + karena tetap tidak terpengaruh oleh Zn + dan
sebanding dengan tanaman NM bawah Zn-control. Sebaliknya, tanaman FPSII di NM
cepat turun secara signifikan tingkat yang lebih rendah daripada yang di kelompok
lain. Secara keseluruhan, respon tanaman terhadap pengobatan muncul pada waktu
yang berbeda untuk sifat yang berbeda, dengan LNB yang paling sensitif terhadap
Zn + (Tabel S2). Terlepas dari sifat fenotipik, perbedaan signifikan yang diamati

tidak hanya antara tanaman dengan kontras asal edafis atau dari populasi yang
berbeda dalam setiap jenis edafis, tetapi juga
antara keluarga dalam populasi (Tabel 2). Dedaunan tanaman M dan NM
mengembangkan beberapa jenis gejala stres di bawah paparan Zn + dengan
berbagai tingkat keparahan. Gejala ini termasuk i) flek nekrotik (Nec), ii)
perubahan warna patch interkostal bawah daun sehingga penampilan bintik di sisi
atas daun (Mot), iii) daun agak homogen klorosis (CHL), dan iv) akumulasi
anthocyans terutama di sepanjang urat daun pada abaxial dan sisi bawah daun
daun ( Ant;. Gambar 3A). Gejala pertama yang terdeteksi setelah satu minggu
pengobatan dan frekuensi mereka meningkat dengan paparan lanjutan. Pada akhir
percobaan, tanaman NM menunjukkan cedera daun jauh lebih bawah Zn +
dibandingkan dengan tanaman M, sedangkan tanaman di Zn-control jarang
menunjukkan gejala apapun (Gambar. 3B). Menariknya, Nec dan Ant sebagian besar
diamati pada tanaman NM, sedangkan Mot dan Chl lebih di mana-mana (Gambar.
3C). Tidak seperti gejala lain, CHL menunjukkan peningkatan sementara selama tiga
minggu pertama pengobatan, tetapi hampir menghilang pada tanaman M
sesudahnya, hidup di sekitar 25% dari tanaman NM pada akhir percobaan. Pada
akhir percobaan, perbedaan yang signifikan dalam tingkat keparahan semua gejala
stres di bawah Zn + terdeteksi antara tanaman dari kontras asal edafis (kecuali
untuk Mot) dan juga untuk populasi dalam asal edafis (kecuali untuk CH1

Gambar 1 dan 2
3.3. variabilitas fenotipik setelah 6 minggu pengobatan Zn
Tidak ada perbedaan antara asal edafis diamati di bawah Zn-kontrol, kecuali BF dan
RB dengan nilai-nilai yang lebih rendah di M vs tanaman NM (efek G negatif; Tabel
4). Sementara pengobatan Zn + memiliki efek negatif pada kedua NM dan tanaman
M (maksudnya TIS <1, Gambar. 4 dan efek E negatif, Tabel 4), toleransi yang lebih
tinggi dari M genotipe menjadi jelas melalui lebih tinggi TIS untuk semua ciri
fenotipe. Dengan demikian, bersarang ANOVA menunjukkan perbedaan yang
signifikan antara i) tanaman dari asal edafis kontras untuk semua ciri fenotipe, ii)
populasi dalam setiap asal edafis untuk semua sifat kecuali FPSII, dan iii) keluarga
dalam populasi dalam kedua edafis
TABEL 2, 3, 4 GAMBAR 3
Ara. 3. Gejala Stres di dedaunan metallicolous (M) dan non-metallicolous tanaman
(NM) B. laevigata terkena 150 mM Zn selama percobaan fenotip pada konsentrasi
tetap. A) gejala Diamati termasuk bintik-bintik nekrotik (Nec), bintik-bintik
interkostal (Mot), daun klorosis (CHL), dan abaxial dan akumulasi adaxial dari
anthocyans terutama di sepanjang urat daun (Ant). pengembangan B) Gejala

selama enam minggu paparan, disajikan sebagai nilai kumulatif dari semua gejala
per pengobatan dan asal edafis. C) Distribusi gejala dengan pengobatan dan asal
edafis
tabel 4
Genotipe (G, asal edafis), lingkungan (E, pengobatan Zn), dan G x efek interaksi E
pada ciri fenotipe. Hanya koefisien untuk parameter yang masuk model dengan
cocok untuk pengukuran masing-masing sifat (lihat 2.7) akan ditampilkan,
sedangkan parameter dibuang tampak kosong. Sebuah ? berarti; Vp, Vf, Ve?
populasi, keluarga dan komponen varians residual. Perhatikan bahwa P dan K dibagi
dengan 1000 dan RGR dikalikan dengan 100 untuk mengkompensasi perbedaan
besar dalam skala. Log transformasi diaplikasikan BF, SB, RB, Fe dan Mn untuk
mencapai normalitas.
asal untuk semua sifat kecuali LNB dan RGR (Tabel 5). Perbedaan antara Zn-kontrol
dan perlakuan Zn + selalu jauh lebih besar di NM dibandingkan dengan tanaman M
(Gambar. S1A). A G signifikan? Interaksi E ditemukan untuk semua ciri-ciri morfologi
dan fisiologis. Ini terlihat sebagai kelengkungan kurang lebih jelas dari norma
pesawat multivariat pada Gambar. S1A.
3.4. Unsur Mineral komposisi setelah 6 minggu pengobatan Zn
Di antara tujuh unsur mineral dievaluasi di pabrik tunas, hanya Ca tidak
menanggapi Zn-pengobatan (tidak berpengaruh E; Tabel S3 dan 5;. Gambar S1B).
Untuk unsur-unsur yang tersisa, baik pengurangan (efek E negatif pada Fe, Mn, dan
P) atau peningkatan (efek E positif pada Zn, Mg, dan K) di bawah Zn +
dibandingkan dengan Zn-kontrol diamati. Dalam hal asal edafis (efek G), nilai-nilai
di M dibandingkan dengan tanaman NM secara signifikan lebih rendah untuk Mn
dan P di bawah kedua Zn-kontrol dan Zn +, dan untuk K bawah Zn-control.
Sebaliknya, mereka secara signifikan lebih tinggi untuk Ca bawah Zn-kontrol dan Zn
+, serta untuk K dan Zn di bawah Zn +. Perbedaannya tidak signifikan untuk Zn
bawah Zn-control, serta Mg dan Fe bawah kedua Zn-kontrol dan Zn +. konsentrasi
seng dalam tunas dari kedua M dan NM tanaman di bawah Zn + melebihi tingkat
kritis untuk toksisitas Zn
(100-500 mg kg 1 bobot kering;? Kabata-Pendias, 2011).
3.5. Perbandingan fenotip (QST) dan molekul (FST) diferensiasi
Semua diselidiki mikrosatelit lokus nuklir yang sangat polimorfik dan menunjukkan
4-25 alel per lokus. Berarti AS, HO, dan HE secara signifikan lebih rendah di M
dibandingkan dengan populasi NM (Tabel S4). Koefisien inbreeding rendah - seperti
yang diharapkan untuk spesies diri tidak kompatibel - tetapi secara signifikan lebih
tinggi dari nol di semua populasi, menyarankan inbreeding dua induk lokal. Seperti
ditunjukkan dalam

Babst-Kostecka et al. (2014) menggunakan analisis pengelompokan Bayesian,

populasi M dan NM secara genetik berbeda. Memilih model penuh berdasarkan
kriteria DIC, rata-rata keseluruhan FSTreached 0.055 (95% CI: 0,045-0,066). The
QST memperkirakan sebagian besar berbeda antara sifat-sifat tapi berarti mereka
selalu melampaui dari FSTand probabilitas QST> FSTwas setidaknya 0,71 (Gambar.
5). Meskipun CI besar beberapa posteriors, hasil ini sangat menyarankan bahwa
perbedaan diamati pada nilai-nilai sifat antara populasi M dan NM dihasilkan dari
pilihan yang berbeda.
4. Diskusi
4.1. toleransi Zn spesies-luas dalam B. laevigata
Semua populasi M dan NM dari B. laevigata menunjukkan toleransi Zn lebih besar
dari logam-sensitif spesies referensi B. neustriaca, menunjukkan toleransi spesieslebar untuk kelebihan Zn (Wojcik et al., 2013). Seperti "background" toleransi dan
frekuensi yang relatif tinggi genotipe toleran pada populasi NM memfasilitasi invasi
situs beracun dan adaptasi terhadap tanah metalliferous (Baker dan Proctor, 1990).
Fenomena langka ini hanya ditemukan di sejumlah kecil - sebagian besar
hyperaccumulating - (. Bert et al, 2002) spesies model, seperti A. halleri dan N.
caerulescens
(Meerts
dan
van
Isacker,
1997).
Dalam
kebanyakan
pseudometallophytes lain (mis Agrostis capillaris, Plantago lanceolata, Mimulus
guttatus, atau Silene vulgaris), toleransi logam telah dianggap populasi tertentu
(lihat Pollard et al., 2002 untuk review). Namun, toleransi logam pada akhirnya
konsep kuantitatif dan perbandingan dengan spesies referensi logam sensitif
muncul sangat penting untuk penokohan tersebut. Misalnya, toleransi Zn di NM
populasi A. halleri adalah 4-6 kali lebih tinggi dibandingkan dengan nonmetallophyte kerabat A. lyrata dan A. thaliana (Pauwels et al., 2006). Dalam
penilaian kami dari B. laevigata dan B. neustriaca, rasio ini adalah 2: 1 dan dengan
demikian sebanding dengan nilai yang diperoleh dari caerulescens spesies model
hyperaccumulating N. lain dan non-metallophyte relatif T. arvense (Assuno et al,
2003. ). Konsentrasi Zn yang kita dianggap sebagai batas toleransi di M dan NM
populasi B. laevigata yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan A. halleri (untuk
keduanya, M dan NM populasi; Pauwels et al, 2006.) Atau caerulescens N. (untuk
populasi M , Assuno et al., 2003). Hal ini mungkin disebabkan perbedaan Zn
karakteristik akumulasi antara spesies ini, seperti hiperakumulasi logam melibatkan
tingkat yang sangat tinggi toleransi logam (Krmer, 2010). Selain itu, set tertentu
dari populasi, jenis organ atau sifat-sifat, dan konsentrasi logam diterapkan dalam
sebuah studi yang diberikan dapat sangat mempengaruhi tingkat toleransi yang
diamati (Pollard et al., 2014). Hasil kami menawarkan perspektif yang tidak biasa
dalam hal ini tetapi mereka dibatasi untuk batas distribusi timur laut B. laevigata
mana semua populasi dikenal adalah diploid (Babst-Kostecka et al., 2014). Dengan
demikian, untuk sepenuhnya membangun B. laevigata sebagai Zn spesies model
toleran, verifikasi dibutuhkan di bagian lain dari spesies rentang menggunakan
tanaman dari situs tercemar dan non-tercemar, serta

dari populasi diploid dan tetraploid. Variabilitas di tingkat ploid dalam spesies
(Tremetsberger et al., 2002) berpotensi dapat mempengaruhi toleransi Zn. Analisis
aksesi dari unit phylogeographic vicariant harus dilakukan untuk memverifikasi
kemungkinan i) nenek moyang gen adaptif pada populasi fenotip yang sama dari
unit phylogeographic yang berbeda, atau ii) acara pemilihan independen terhadap
nilai-nilai sifat ekologi yang serupa dari kolam gen dibedakan. Yang terakhir ini
dilaporkan dalam aseries studi baru pada A. halleri, di mana penulis menyarankan
bahwa populasi M telah didirikan secara terpisah dari populasi NM yang berbeda
(Pauwels et al., 2005) dan bahwa evolusi menuju peningkatan toleransi independen
terjadi beberapa kali di berbeda unit phylogeographic (Pauwels et al., 2006, 2012).
Studi kami sehingga merupakan tonggak pertama menuju deskripsi spesies-macam
toleransi diferensiasi logam dalam B. laevigata.
4.2. ciri morfologis dan fisiologis sebagai bioindications Zn
toleransi
Beberapa ciri morfologi dan fisiologis mengungkapkan tren kongruen terhadap
toleransi Zn lebih tinggi di M dibandingkan dengan tanaman NM, dengan perbedaan
yang signifikan antara populasi dan keluarga. kecenderungan serupa ditemukan
untuk A. halleri dan N. caerulescens, setelah paparan konsentrasi Zn lebih tinggi
(Meerts dan van Isacker, 1997;. Pauwels et al, 2006). Dalam kasus BF, LNB dan
RGR, yang sering digunakan sebagai indikator toksisitas Zn (Kohl, 1997; Paschke et
al, 2000;.. Yang et al, 2014), perbedaan yang signifikan dalam kondisi Zn-kontrol
menunjukkan bahwa pasukan selektif selain stres logam berkontribusi perbedaan
genetik pada populasi dengan asal edafis yang berbeda. Dengan demikian kita
pertimbangkan SB, RB dan FPSIIto lebih tepat untuk mengevaluasi Zn
toleransi dalam B. laevigata, karena mereka menunjukkan perbedaan diabaikan
dalam kondisi Zn-control. Dengan demikian, FPSIIappears paling relevan, karena
satu-satunya sifat fenotip dengan nilai-nilai yang konsisten di seluruh percobaan
selama tiga kelompok tanaman (NM dan M di Zn-control; M di bawah Zn +)
sedangkan hanya NM bawah Zn + menunjukkan reaksi negatif yang kuat untuk Zn
paparan . Potensi penjelasan yang i) sensitivitas tinggi dari aparat fotosintesis
toksisitas logam (saya? Sliwa-Kurdziel et al., 2004), ii) penghambatan PSII dan
menurunkan yield fotosintesis oleh kelebihan Zn (Krupa dan Baszy? Nski, 1995), dan
iii) akumulasi kelebihan Zn dalam kloroplas (Vollenweider et al., 2011). Sebagai
indikator fotosintesis fungsional (Kupper et al., 2007), sifat ini juga terbukti toleransi
Zn paling informatif tentang di hiperakumulator A. halleri (Meyer et al., 2010).
Dalam excluders logam, bagaimanapun, peningkatan toleransi logam pada tingkat
fotosintesis belum tentu
diharapkan, karena tanaman ini dapat membatasi logam transfer ke tunas. Namun,
mirip dengan temuan kami pada B. laevigata, perubahan diinduksi logam-dalam

mesin fotosintesis antara populasi toleran dan sensitif telah baru-baru dilaporkan
selama logam excluder S. paradoxa (Bazihizina et al., 2015).
4.3. unsur kimia dan interaksi antara kelebihan Zn dan nutrisi
Di antara unsur-unsur kimia yang diukur dalam dedaunan, hanya konsentrasi Fe, Mg
dan Zn menunjukkan tidak ada perbedaan antara asal edafis sementara
terpengaruh oleh perlakuan Zn +. Mengenai nutrisi lainnya, perbedaan yang
muncul dalam kondisi kontrol mungkin sebagian besar mencerminkan adaptasi
populasi spesifik untuk faktor tanah selain Zn berlebih itu sendiri. Ini baru-baru ini
disarankan untuk S. paradoxa, di mana populasi M dan NM yang ditandai dengan
profil unsur yang berbeda baik dalam kondisi kontrol dan Cu-pengobatan (Pignattelli
et al., 2013). logam beracun dan mikro secara berlebihan, seperti Zn, dapat
mengurangi penyerapan paling nutrisi, mengganggu berbagai proses fisiologis dan
menyebabkan gejala stres (Chaney, 1993). Di bawah Zn +, Fe dan Mn
Kekurangan - seperti yang diamati di pucuk B. laevigata untuk kedua asal edafis dapat dikaitkan dengan kelebihan Zn dan mungkin hasil dari penyerapan yang lebih
rendah dan / atau imobilisasi dalam akar (Ebbs dan Kochian, 1997). Penjelasan lain
untuk penurunan Fe dan Mn translokasi berkaitan dengan persaingan untuk
transporter, seperti yang dilaporkan untuk S. paradoxa bawah Cu-exposure
(Pignattelli et al., 2013). Memang, Fe, Mn dan Zn semua diangkut dengan ZIP /
transporter IRT-seperti (Pilon et al., 2009) dan surplus Zn cenderung mengarah
untuk mengurangi kapasitas untuk mengangkut nutrisi lainnya. Akhirnya, akumulasi
Zn adalah sebanding pada tanaman M dan NM, menunjukkan bahwa toleransi Zn
tidak diberikan untuk populasi M oleh berkurangnya translokasi ke bagian tanah
atas, tetapi dengan mekanisme yang lain. Subselular penyerapan - (. Van
Steveninck et al, 1994) setelah mengikat agen pengkelat seperti ligan asam fitat - (.
Vollenweider et al, 2006) atau alokasi untuk jaringan atau kompartemen sel yang
aktivitas metabolik kurang sensitif terhadap akumulasi logam, mungkin
berkontribusi mekanisme toleransi tersebut.
4.4. gejala stres terlihat di dedaunan
B. tanaman laevigata memperlakukan mengembangkan gejala stres terlihat dalam
menanggapi Zn paparan, morfologi dan keparahan yang menunjukkan perbedaan
yang jelas antara populasi M dan NM. Sebagian besar gejala ini (yaitu Nec, Mot, Chl)
telah dilaporkan sebelumnya dalam menanggapi Zn akumulasi di dedaunan (Andr
et al, 2006;. Hermle et al, 2007.). Menariknya, Ant telah jarang
terkait dengan kontaminasi logam meskipun kelimpahan sebagai respon terhadap
cekaman biotik atau abiotik (Vollenweider dan GnthardtGoerg, 2005;. Menzies et
al, 2016). seperti keragaman gejala dalam satu spesies yang tidak biasa dan bisa
berhubungan dengan diferensiasi genetik canggih antara populasi M dan NM.
Semua luka mengindikasikan stres berat dan lebih atau kurang luas kematian sel,
terutama terjadi pada mesofil (Fink, 1999). Mereka mungkin hasil dari alokasi

jumlah yang cukup besar kelebihan Zn untuk kloroplas, seperti sebelumnya diamati
untuk gejala stres sebanding (Andr et al, 2006;. Vollenweider et al, 2011.). Alokasi
Zn ke organel ini dan situs sensitif lainnya di sitoplasma sel menyebabkan
peningkatan stres oksidatif (OS), yang merupakan konsekuensi khas logam - dan
terutama Zn - akumulasi dalam tanaman (Grato et al., 2005). Kelebihan
pertahanan terhadap OS dapat menyebabkan peningkatan stres foto-oksidatif,
dipercepat penuaan sel dan respon-seperti mekanisme (HR-seperti) hipersensitif.
Proses ini diindikasikan biasanya dengan gejala yang terlihat seperti Ant, Chl dan
Mot, masing-masing (Gnthardt-Goerg dan Vollenweider, 2007). kematian sel HRseperti terutama dikenal sebagai mekanisme pertahanan terhadap patogen (Fritig
et al., 2007) tetapi juga dipicu oleh beberapa faktor stres abiotik (Foyer dan Noctor,
2005). dominasi The
gejala Mot pada populasi M di bawah perawatan Zn + bersama-sama dengan baik
klorofil fluoresensi dipertahankan menunjukkan efek perlindungan potensial dengan
mekanisme HR-seperti terisolasi melalui sinyal dan peningkatan dalam denda mis
pertahanan sel antioksidan (Sharma dan Dietz, 2009). Namun, kesimpulan di atas
didasarkan pada gejala stres terlihat dan akan perlu diverifikasi mis dengan teknik
mikroskop analitis atau biomarker analisis (seperti aktivitas enzim yang
berhubungan dengan stres oksidatif) untuk mendapatkan wawasan yang lebih
dalam mekanisme toleransi fisiologis B. laevigata.
4.5. Asal dan evolusi dinamika toleransi Zn di B. laevigata
Pola polimorfisme kuantitatif (Pauwels et al., 2006) untuk toleransi Zn diidentifikasi
di M dan NM populasi B. laevigata dari Polandia selatan, dengan tingkat toleransi
yang lebih tinggi diamati pada M genotipe. Sebagai mekanisme ini secara langsung
berkaitan dengan menanam kebugaran dan ditemukan pada semua aksesi belajar,
kita bisa berasumsi bahwa itu berevolusi sekunder selama kolonisasi tanah yang
sangat terkontaminasi. Memang, dengan konsentrasi tanah Zn, Pb dan Cd sering
melebihi 10.000, 3000 dan 150 kg mg 1, masing-masing (Lis dan Pasieczna, 1999;
Kostecka, 2009)?, Olkusz adalah contoh di mana kontaminasi logam tinggi
menyebabkan tekanan selektif yang ekstrim untuk meningkatkan toleransi logam
(Krmer, 2010). Bersama dengan bukti perbedaan genetik antara populasi M dan
NM yang sama (Babst-Kostecka et al., 2014), hasil kami menunjukkan bahwa pilihan
yang berbeda telah memainkan peran utama dalam proses adaptasi populasi
laevigata B. kondisi lingkungan yang ekstrim . Diversifikasi pilihan adalah
mekanisme adaptasi kunci dalam spesies tanaman, sehingga populasi untuk
menjajah disperse dan ekologis variabel habitat (Linhart dan Grant, 1996). Seperti
yang ditunjukkan oleh QST konsisten lebih tinggi dari perkiraan FST, toleransi yang
lebih tinggi dari populasi M di situs ini dapat dikaitkan dengan pilihan yang berbeda
seperti, mirip dengan temuan sebelumnya di A. halleri (Meyer et al., 2010) dan
caerulescens N. (Jimenez- Ambriz et al., 2007). indikasi lebih lanjut dari pilihan yang
berbeda dan adaptasi lokal di situs M mencakup i) pengurangan keragaman genetik
di M dibandingkan dengan populasi NM (Babst-Kostecka et al., 2014),

yang merupakan ciri khas dari pilihan directional (Nielsen, 2005), ii) distribusi
habitat merata di Polandia selatan, sistem self-ketidakcocokan sporophytic dalam
spesies, dan tidak ada kapasitas biologis penyebaran jarak jauh dari biji (Parisod
dan Bonvin, 2008) , yang menyiratkan isolasi geografis dan aliran gen dibatasi
antara ekotipe diselidiki, dan ii) efek G signifikan untuk beberapa ciri morfologi dan
fisiologis yang menunjukkan bahwa perbedaan antara tanaman M dan NM yang
diwariskan. Namun, untuk secara jelas mengidentifikasi seleksi alam, populasi harus
timbal balik ditransplantasikan (Kawecki dan Ebert, 2004). Hanya kemudian apakah
mungkin untuk menguji, apakah kebugaran tanaman asli lebih tinggi daripada
populasi non-pribumi dan dengan demikian membuktikan adaptasi lokal.
Selain itu, percobaan tersebut berkontribusi dan juga sangat menguntungkan dari
informasi genomik (Rellstab et al., 2015), karena mereka cocok untuk memeriksa
keuntungan kebugaran diberikan alel yang terkait dengan lingkungan tertentu.
Fenotip tanaman tidak hanya ditentukan oleh pabrik komposisi genetik (G) dan
faktor lingkungan (E) tetapi juga oleh interaksi mereka (El-Soda et al., 2014). G
signifikan? Interaksi E ditemukan untuk sebagian besar ciri-ciri, menunjukkan bahwa
Zn-exposure memiliki efek yang berbeda pada dua asal edafis. Dalam M dan NM B.
laevigata dari Polandia selatan, plastisitas fenotipik demikian didasari oleh
perbedaan genetik pada tingkat populasi. G? E sering disebabkan oleh perubahan
besarnya efek genetik dalam menanggapi lingkungan, dan berhubungan dengan
faktor genetik beragam dan varian molekul (Des Marais et al., 2013). Dasar genetik
dari G? Efek E sangat diperdebatkan dan beberapa mekanisme interaksi ini telah
diusulkan (mis overdominance, pleiotropy, epistasis, linkage genetik dan
epigenesist) dimana pleiotropy antagonis dan netralitas bersyarat muncul sangat
relevan (El-Soda et al., 2014). Namun, dampaknya terhadap adaptasi lokal dan
perbaikan tanaman tidak dipahami dengan baik dan perlu alamat dalam studi masa
depan.
5. Kesimpulan
toleransi seng hadir dalam semua Polandia B. laevigata dan tambahan ditingkatkan
pada populasi M dalam respon terhadap stres lingkungan dari tanah yang
terkontaminasi. Tren ini didorong oleh pilihan yang berbeda (yaitu QST secara
konsisten melebihi FST) dan dinyatakan oleh ciri-ciri morfologi dan fisiologi,
konsentrasi elemen dalam bagian udara, serta gejala stres terlihat di tingkat
dedaunan. Hebatnya, polimorfisme kuantitatif muncul sudah pada paparan Zn
sedang (150 mM), yang kontras studi sebelumnya pada toleransi logam yang
dilaporkan perbedaan besar antara toleransi Zn populasi M dan NM dibandingkan
dengan hasil kami, tetapi digunakan konsentrasi logam jauh lebih tinggi tanpa
analog alami (van der Ent et al., 2013). Dalam hal ini, dan asalkan B. laevigata tidak
hyperaccumulate Zn di bagian udara, penelitian kami menawarkan perspektif yang
tidak biasa pada strategi adaptasi spesies calamine. Pengujian mekanisme toleransi
dalam spesies non-hyperaccumulating lain di bawah paparan logam moderat

dengan demikian diharapkan untuk memperluas pemahaman kita tentang

mekanisme fisiologis, morfologis, dan evolusi yang memungkinkan tanaman untuk
mengatasi stres abiotik di lingkungan tercemar.
Ucapan Terima Kasih
Kami berterima kasih kepada Flurin Babst dan Terry Menard untuk komentar
editorial, Ute Krmer untuk input membantu dia, Henk Schat untuk mendukung
setup eksperimental, Anglique Bourceaux, El_ zbieta Chrzanowska, Urszula
Korzeniak, Zbigniew Kostecki, Terry Menard, Jonathan Spring, Magorzata Stanek
untuk bantuan teknis , dan Eric Schmitt untuk menyediakan B. benih neustriaca.
Tatra National Park diberikan izin untuk mengumpulkan sampel dalam batas-batas
taman. Kami lebih berterima kasih dana oleh Departemen Polandia Sains dan
Pendidikan Tinggi (NN304370938), Program untuk Ilmuwan Muda dari IB PAS (4604 /
E-37 / M / 2013, 4604 / E-37 / M / 2014), Sciex- NMS ch
-Programme (09.079), dan polonium-Program (8181/2010).
GAMBAR 4, 5 TABEL 5

Bisa
adaptasi
dengan
lingkungan
metalliferous
mempengaruhi respon tanaman cekaman biotik? Insight
dari Silene paradoxa L. dan phytoalexins
abstrak
Pekerjaan ini dilakukan untuk mengevaluasi apakah adaptasi logam dapat
mempengaruhi respon terhadap stres biotik pada tumbuhan tingkat tinggi. Tiga
populasi Silene paradoxa, dari tanah noncontaminated, tanah serpentin dan tanah
tambang tembaga masing-masing, yang dibudidayakan di hadapan / tidak adanya
nikel atau tembaga dan kemudian terkena pola molekul patogen terkait (PAMP).
Secara khusus, non-katalitik jamur protein cerato-platanin, disekresikan oleh parasit
askomiset
Ceratocystis
platani,
digunakan,
karena
kemampuannya
didokumentasikan dengan baik untuk bertindak sebagai PAMP, dan produksi
phytoalexins diuji. Ceratoplatanin eksposisi ditentukan produksi fitoaleksin dengan
cara population- dan pengobatan tergantung. Khususnya, sebuah produksi lebih
dari phytoalexins tercatat untuk populasi tambang tembaga tumbuh di hadapan
tembaga, menunjukkan bahwa, dalam kasus-kasus tertentu, adaptasi dengan
lingkungan metalliferous efektif dapat mempengaruhi respon tanaman terhadap
cekaman biotik. Namun demikian, anggapan ini tidak dapat digeneralisasi untuk
semua jenis lingkungan metalliferous dan logam dipelajari; Namun, pekerjaan ini
bias dianggap sebagai salah satu contoh pertama dari interaksi positif antara
stimuli abiotik dan biotic.

1. Perkenalan
Tanaman yang terkena berbagai kondisi lingkungan yang umumnya mencakup
kombinasi faktor biotik dan abiotik. stres merugikan, seperti patogen atau
herbivora, mengisi hampir setiap jenis lingkungan, karena tanaman tidak hanya
telah memperoleh mekanisme untuk serentak mengatasi stres biotik dan abiotik,
tapi mungkin juga untuk mengeksploitasi keberadaan simultan mereka untuk
keuntungan sendiri mungkin (Aktinson dan Urwin, 2012). Setiap stres memunculkan
respon sistem seluler dan molekuler yang kompleks dilaksanakan oleh tanaman
untuk mencegah kerusakan dan menjamin kelangsungan hidup. Namun, ketika
memeriksa efek dari stres abiotik dengan dampak simultan dari patogen atau
herbivora, interaksi positif dan negatif telah diamati tergantung pada waktu, alam,
dan keparahan masing-masing stres (Aktinson dan Urwin, 2012). Dalam konteks ini,
sebuah sistem model menarik dan sesuai untuk menyelidiki topik menarik seperti
dapat diwakili oleh studi tanggapan dari logam berat disesuaikan tanaman terhadap
serangan patogen. Untuk pengetahuan kita, literatur tentang topik ini masih sangat
langka. Di tanah diperkaya logam, tingginya tingkat kontaminasi logam merupakan
faktor pilihan kuat untuk genotipe lebih tahan tanaman, hewan dan mikroba (Ernst,
2000; Baath et al, 2005;. Vogel-Miku et al., 2005) dan konsekuensi interaksi antara
tanaman dan organisme lain dapat menjadi kompleks. Pengaruh mikoriza dan
rizosfir bakteri pada akumulasi logam tanaman dan toksisitas telah menarik
perhatian yang besar (Whiting et al, 2001;. Idris et al, 2004;. Jual et al, 2005;.
Pongrac et al, 2007;. Sousa et al. 2012; Ma et al, 2013), sedangkan ada informasi
jauh lebih sedikit dari pengaruh logam berat berlebih pada hubungan tanamanpatogen.. Beberapa informasi hadir dalam kasus tanaman disesuaikan non logam,
di mana penurunan tuan kerentanan secara konsisten diamati di sebagian besar
interaksi tanaman-jamur (Poschenrieder et al., 2006). ion Logam dapat memberikan
resistensi patogen ( "fortifikasi diinduksi logam-") memunculkan reaksi pertahanan
(Mithofer et al, 2004;. Walters et al., 2005). Misalnya, dalam gandum protein
diinduksi logam-yang dianggap bertanggung jawab untuk perlawanan kadmiuminduced terhadap infeksi Fusarium (Mittra et al., 2004) dan di Arabidopsis
konsentrasi cadmium dekat dengan ambang toksisitas ditemukan untuk
menginduksi jalur pertahanan sinyal yang mempotensiasi tanggapan tanaman
terhadap infeksi Botrytis (Cabot et al., 2013). Memicu sinyal pertahanan dan
sintesis metabolit sekunder pertahanan terkait malah ditemukan memiliki hubungan
dengan spesies oksigen reaktif yang diinduksi logam-(Walters et al, 2005;.. Jonak et
al, 2002). Beberapa logam diketahui fungistatics, dapat membunuh atau
menghambat pertumbuhan dan perkembangan patogen di dalam tanah atau di
permukaan tanaman, menurut apa yang disebut "efek phytosanitary"
(Poschenrieder et al., 2006). Di antara mereka, contoh terkenal adalah efek
fungistatic tembaga sulfat, banyak digunakan sejak abad ke-19 untuk mencegah
infeksi jamur di kebun-kebun anggur.

Diri pertahanan terhadap cekaman biotik diperkirakan akan meningkat dengan

akumulasi tingkat tinggi logam di pabrik sedangkan jaringan sendiri dan itu disebut
"pertahanan elemental", mungkin jika logam kurang beracun untuk tanaman
daripada parasit (Poschenrieder et al., 2006). hipotesis tersebut awalnya
diformulasikan untuk hyperaccumulators logam, kelompok tanaman disesuaikan
logam yang dapat mengakumulasi logam untuk konsentrasi yang sangat tinggi di
pucuk mereka (Reeves dan Baker, 2000) dan yang mencatat akan kurang dikunyah
oleh serangga
dari nonaccumulating tanaman (Martens dan Boyd, 1994). Mengenai perlindungan
logam efektif terhadap jamur, penyelidikan lebih lanjut melaporkan peran yang
sebenarnya untuk tingkat tinggi Ni, Zn, Cd atau Se konsentrasi, didukung juga oleh
pengamatan bahwa hyperaccumulators, ketika tumbuh pada substrat dengan
tingkat rendah dari logam, sangat sensitif terhadap cekaman biotik. Efek tersebut
dapat seharusnya sangat mustahil, atau setidaknya dari pentingnya rendah, di
sebagian besar diadaptasi logam tanaman, yang cenderung aktif mengecualikan
logam dari jaringan mereka. Seperti tanaman nonaccumulator, atau excluders,
umumnya memiliki akar dan menembak konsentrasi logam lebih tinggi dari spesies
tanaman yang sama ditanam di tanah non terkontaminasi, tapi mungkin tidak
cukup tinggi untuk memicu efek pertahanan elemental.

Pokoknya, juga excluders logam menunjukkan kesulitan umum budidaya di tanah

dengan konsentrasi logam rendah. Misalnya, cuprophytes, tanaman yang
disesuaikan dengan lingkungan yang kaya tembaga, sangat sensitif terhadap
patogen tanah (Paton dan Brooks, 1996;. Chipeng et al, 2010). Tekanan santai jamur
patogen pada tanah yang kaya logam telah dianjurkan sebagai penyebab efek
seperti (Tadros, 1957), tetapi tidak pernah jelas ditunjukkan.

Mengenai respon terhadap serangan patogen, tanaman telah berevolusi setidaknya

dua baris pertahanan aktif. Baris pertama memberikan pertahanan basal terhadap
semua patogen potensial dan didasarkan pada pengakuan patogen dilestarikan
terkait pola molekul (PAMPs), oleh apa yang disebut reseptor pengenalan PAMP
(PRRS) yang mengaktifkan PAMP-dipicu kekebalan (PTI) dan mencegah kolonisasi
lebih lanjut host (De Wit, 2007; Jones dan Dangl, 2006).

Oleh karena itu, mikroba dapat mengeluarkan dalam media kultur atau melokalisasi
pada molekul dinding sel mereka yang dapat prime pertahanan pada tanaman.
Langkah pertama dalam induksi respon pertahanan tanaman utama menuju
cekaman biotik adalah pengakuan molekul tertentu yang diperoleh mikroba
patogen potensial dan dikenal sebagai Elisitor atau MAMPs / PAMPs (mikroba /

patogen terkait pola molekul). Setelah pengakuan PAMP, hilir terjun transduksi
sinyal respon pertahanan primer menjadi aktif yang mengarah ke peristiwa yang
negatif mempengaruhi kolonisasi patogen, seperti perubahan dinding sel, produksi
spesies oksigen reaktif (ROS), sintesis dan aktivasi MAPK (MAPK) cascades, dan
akumulasi protein yang berhubungan dengan pertahanan (Jones dan Dangl, 2006;
De Wit et al, 2009;. Zipfel, 2009;. Thomma et al, 2011).

Beberapa PAMPs dari bakteri telah diidentifikasi, tetapi sedikit yang diketahui
tentang PAMPs jamur. Kitin,? -glucans Dan komponen dinding sel lainnya seperti
galacto-glucomannans telah terbukti memiliki aktivitas PAMP. Baru-baru ini,
beberapa protein non-katalitik disekresi oleh Ascomycetes dan Basidiomycetes
telah diusulkan untuk bertindak sebagai PAMPs, karena mereka terlibat dalam
berbagai aspek khas pertahanan utama.

Banyak dari protein ini milik keluarga cerato-platanin yang anggotanya terlibat
dalam interaksi tuan rumah mikroba bertindak sebagai inducer resistensi diperoleh
sistemik, respon hipersensitif dan induser perlawanan ditingkatkan (Frias et al,
2011;. Vargas et al., 2008; Yang et al., 2009). Cerato-platanin (CP), anggota inti dari
keluarga CP, disekresikan oleh Ceratocystis platani, askomiset yang merupakan
agen penyebab penyakit kanker noda pohon plane (Pazzagli et al, 1999;. Scala et al,
2004. ). CP adalah psi-beta barrel protein ganda yang mampu mengikat kitin dan
serat selulosa yang lemah; menjadi aktivitas terakhir mungkin terkait dengan
perannya sebagai PAMP dalam interaksi host (Oliveira et al, 2011;.. Baccelli et al,
2013). Sebagai PAMP, CP menginduksi mitogen-diaktifkan protein kinase (MAPKs)
fosforilasi, produksi spesies oksigen reaktif dan oksida nitrat, overekspresi gen
pertahanan terkait, sintesis fitoaleksin, pembatasan pertumbuhan konidia dan,
akhirnya, kematian sel diprogram dengan fitur apoptosis dalam berbagai host dan
non-tuan tanaman (Fontana et al, 2008;.. Comparini et al, 2009;. Bernardi et al,
2011;. Lombardi et al, 2013).
Di antara senyawa stres diinduksi biotik yang memungkinkan pertahanan tanaman
terhadap patogen, phytoalexins adalah kelompok heterogen metabolit molekul
rendah massa sekunder dengan aktivitas antimikroba (Ahuja et al., 2012). Kegiatan
tersebut telah diuji secara in vitro pada beberapa jenis bakteri, Oomycetes dan
jamur, tetapi mekanisme yang phytoalexins diberikannya toksisitas mereka masih
belum diketahui dan sampai saat ini hanya gangguan membran mikroba dan
induksi apoptosis-seperti sel mati terprogram jamur telah diusulkan (Ahuja et al.,
2012). Phytoalexins telah ditemukan diinduksi juga oleh cekaman abiotik, seperti
UV-B, UV-C, bahan kimia organik dan ion logam berat (Zhao et al, 1998;. Tierens et
al., 2002). Misalnya, merkuri dan tembaga telah ditemukan untuk menginduksi
produksi fitoaleksin dalam berbagai jenis tumbuhan, namun masih belum ada

penjelasan yang meyakinkan untuk temuan ini (Mithofer et al., 2004), meskipun
peran dalam detoksifikasi logam melalui chelation telah hipotesis (Matsouka et al.,
2011).
Oleh karena itu, untuk menjelaskan topik menarik dan belum tereksplorasi dari
interaksi antara stres logam berat dan stres biotik dalam kasus tanaman
disesuaikan logam, kami menyelidiki produksi fitoaleksin, disebabkan oleh paparan
CP, pada populasi metallicolous metallicolous dan non Silene paradoxa L . tumbuh
di hadapan dan di tidak adanya logam.
Spesies S. paradoxa merupakan pseudometallophyte excluder, umumnya
ditemukan di daerah non-terkontaminasi kering dan kadang-kadang berkembang
logam populasi toleran pada tanah metalliferous (Chiarucci et al., 1995). Karya ini
dilakukan dengan mempelajari tiga populasi spesies tersebut dengan kontras
fenotipe toleransi logam (Gonnelli et al., 2001), salah satu dari tanah berkapur
(logam populasi sensitif), salah satu dari singkapan serpentine (populasi toleran
nikel) dan satu dari dump tambang tembaga (copper populasi toleran). Kami
membandingkan produksi fitoaleksin PAMP-diinduksi dalam populasi ini, hipotesa
respon yang berbeda tergantung pada status logam dari situs asal. Perhatian
khusus ditujukan kepada peran kehadiran logam dalam media kultur dalam
diferensiasi kemungkinan respon dalam populasi yang berbeda.
3.1. Efek dari tembaga dan nikel pada pertumbuhan tanaman
Kedua populasi metallicolous tidak menunjukkan logam diinduksi akar atau
menembak pengurangan biomassa, sedangkan tanaman sensitif dipamerkan
toleransi tembaga dan nikel secara signifikan lebih rendah, sebagai root mereka dan
menembak produksi biomassa secara signifikan dipengaruhi oleh perlakuan logam
(Tabel 1).
3.2. Tembaga dan nikel akumulasi
akumulasi tembaga mengenai, baik di akar dan di tunas populasi tambang tembaga
menunjukkan konsentrasi terendah dan penduduk serpentine tertinggi (Tabel 2).
Adapun akumulasi nikel, semua populasi ditampilkan nilai yang sama di akar dan di
tunas (Tabel 2).
3.3. Fluoresensi cerato-platanin
Spektrum fluoresensi cerato-platanin ditunjukkan pada Gambar. 1 bersama dengan
spektrum salah satu sampel dari percobaan kami. Tidak ada gangguan dari dua
spektrum hadir di 460 nm, yang merupakan nilai emisi umumnya digunakan untuk
mendeteksi keberadaan senyawa fenolik dalam jenis seperti sampel (El Modafar et
al, 1995;. Du dan Solomon, 2013). Nilai fluoresensi terdaftar pada panjang
gelombang tersebut dapat dianggap mewakili kehadiran eksklusif molekul fenolik
yang dihasilkan setelah perlakuan eksperimen dan sekarang mereka akan

umumnya disebut sebagai "phytoalexins" seperti dalam Pazzagli et al. (1999), Scala
et al. (2004), Lombardi et al. (2013).
3.4. Tembaga dan nikel berpengaruh pada produksi fitoaleksin
Daun dari tiga populasi paradoxa S. diuji untuk produksi senyawa fenolik setelah
pengobatan 24 jam dengan ceratoplatanin (Gbr. 2). Ketika daun yang tidak terkena
CP, di populasi tambang tembaga kadar fluoresensi tidak berbeda secara signifikan
antara kontrol dan tanaman diperlakukan logam, sedangkan pada populasi ular
tingkat seperti secara signifikan lebih tinggi pada tanaman diperlakukan logam
sensitif dan dibandingkan dengan tanaman kontrol . Setelah eksposisi untuk CP,
semua sampel menunjukkan nilai signifikan lebih tinggi dari fluoresensi, dari dua
kali lipat peningkatan enam kali lipat dalam kasus yang berbeda. Membandingkan
data tersebut dalam kasus tanaman terkena logam, penduduk tambang tembaga
ditampilkan nilai yang lebih tinggi dari fluoresensi ketika tumbuh di hadapan
tembaga dan lebih rendah ketika tumbuh di hadapan nikel, sedangkan di dua
populasi lain nilai-nilai fluoresensi diperoleh di mana tidak tergantung pada kondisi
pertumbuhan. Membandingkan populasi di antara mereka, satu-satunya perbedaan
yang signifikan mencetak adalah antara tembaga diperlakukan CP terkena tanaman
dalam kasus populasi tambang tembaga dibandingkan dengan sensitif atau satu
serpentine (p <0,05).
3.5. Waktu tergantung-produksi phytoalexins
Pada Gambar. 3 nilai fluoresensi dari sampel terkena untuk waktu yang berbeda
dilaporkan. Dalam semua sampel populasi sensitif, intensitas fluoresensi meningkat
dari waktu ke waktu. Dalam sampel tidak terkena CP kenaikan itu sedikit dan non
signifikan berbeda antara dua perlakuan yang berbeda. Dalam kedua CP terkena
sampel nilai-nilai fluoresensi, tidak berbeda secara signifikan antara mereka, secara
signifikan lebih tinggi daripada di CP non sampel terkena (p <0,05). Dalam sampel
populasi tambang tembaga tidak terkena CP nilai fluoresensi tidak berubah dari
waktu ke waktu, terlepas dari kehadiran tembaga dalam media kultur. Dalam CP
terkena sampel, kenaikan dari nilai yang terjadi dan itu secara signifikan lebih tinggi
pada sampel dari tanaman tembaga-diperlakukan (p <0,05), kecuali untuk 6 jam
eksposisi. Membandingkan populasi antara mereka, satu-satunya perbedaan ini
signifikan adalah antara tembaga diperlakukan-CP tanaman terkena, menjadi nilainilai sampel dari populasi tambang tembaga yang lebih tinggi daripada yang dari
populasi sensitif (p <0,05). Estimasi produksi bersih phytoalexins disebabkan oleh
CP, secara independen dari jumlah molekul seperti yang disebabkan oleh
pengobatan tembaga, dihitung mengurangkan nilai fluoresensi dari CP non sampel
terkena dari mereka yang dari CP terkena sampel relatif. nilai-nilai yang diperoleh
dilaporkan pada Gambar. 4. Dalam semua sampel produksi fitoaleksin bersih
meningkat dari waktu ke waktu, tapi dengan cara population- dan pengobatan
tergantung. Ketika tanaman yang dibudidayakan dalam kondisi kontrol tidak ada
perbedaan yang signifikan antara populasi. Dalam hal nilai-nilai, dengan adanya

tembaga di sampel media kultur dari tanaman sensitif menunjukkan nilai yang lebih
rendah (p <0,05) dan orang-orang yang dari tanaman tambang tembaga
menunjukkan semakin nilai yang lebih tinggi yang menjadi berbeda secara
signifikan pada waktu yang lebih lama dari eksposisi (p <0,01). Dalam hal ini, nilainilai fluoresensi dari sampel populasi tambang tembaga secara signifikan lebih
tinggi daripada mereka yang dari sampel populasi sensitif (p <0,01).
GAMBAR 2,3,4,5

3.6. konsentrasi tembaga tergantung-produksi phytoalexins

Ara. 5 melaporkan nilai fluoresensi dari tanaman budidaya pada konsentrasi
tembaga yang berbeda. Dalam CP non tanaman terkena, tingkat phytoalexins tidak
meningkat secara signifikan di kedua populasi. Tembaga diperlakukan CP terkena
tanaman, nilai-nilai fluoresensi secara signifikan lebih tinggi daripada di tanaman
terkena non (p <0,01), tetapi bervariasi hanya pada populasi tambang tembaga,
meningkatkan
sampai 5? M CuSO4concentration (p <0,05). Fluoresensi sampel dari tanaman
tambang tembaga secara signifikan lebih tinggi daripada satu dari tanaman sensitif
(p <0,05). Dalam tanaman sensitif produksi bersih phytoalexins tidak
bervariasi dengan tembaga dalam media kultur (Gambar. 6). Pada tumbuhan
tambang tembaga jumlah bersih dari phytoalexins dihasilkan meningkat dengan
meningkatnya konsentrasi tembaga dalam media kultur, kecuali pada konsentrasi
yang lebih tinggi digunakan. tanaman tambang tembaga menunjukkan nilai yang
lebih tinggi dari produksi fitoaleksin bersih pada semua CuSO4concentrations
digunakan dibandingkan dengan tanaman sensitif (p <0,05).
3.7. MAP aktivasi kinase
Tingkat ekspresi dua protein kinase diuji menggunakan anti-manusia phosphoERK1 / 2 antibodi karena kinase tanaman menunjukkan tingkat yang cukup
homologi dengan situs fosforilasi kinase mamalia. ERK1 / 2 yang setara dengan
MAPK6 dan MAPK3 dari Arabidopsis yang terlibat dalam respon pertahanan (Galletti
et al., 2011). Tingkat MAPK fosforilasi diukur pada 15 dan 60 menit, sebagai aktivasi
kinase kaskade adalah salah satu peristiwa pertama dalam signaling pertahanan
tanaman (Pitzschke et al., 2009). analisis imunoblot daun CP-diperlakukan
menunjukkan bahwa baik di tambang tembaga dan tanaman sensitif diobati dengan
air aktivasi kinase tidak terdeteksi (Gambar. 7A dan C). Sebaliknya, pengobatan
dengan CP diinduksi peningkatan kinase fosforilasi dan peningkatan tersebut lebih
jelas dalam kedua tanaman tambang sensitif dan tembaga tumbuh di tembaga
yang mengandung media jika dibandingkan dengan tanaman yang sama ditanam di
kontrol media (Gambar. 7B dan D). Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa

aktivasi kinase adalah salah satu sinyal pertama dalam respon pertahanan: di
semua sampel yang diuji sinyal fosforilasi dimulai setelah 15 menit dan itu off
setelah 60 menit inkubasi. Akhirnya, pada populasi tambang tembaga ditanam di 5?
M tembaga tingkat basal aktivasi kinase diamati juga tanpa pengobatan CP
(Gambar. 7D).
4. Diskusi
4.1. kondisi pertumbuhan dan produksi diferensial fitoaleksin
konsentrasi logam yang digunakan dalam percobaan terbukti cukup untuk tujuan
yang diusulkan, baik dari segi efek dikenakan logam pada pertumbuhan tanaman
dan akumulasi logam dalam organ tanaman. Sebenarnya, perawatan logam memicu
perkembangan gangguan dari populasi non-metallicolous (Tabel 1). Efek ini adalah
signifikan, tapi sedikit (pengurangan rata-rata sekitar 30% pertumbuhan akar dan
sekitar 45% di pucuk), sehingga menunjukkan tanaman menjadi masih metabolik
efisien untuk menghasilkan respon stres yang dikenakan lain apapun. Pada
konsentrasi tersebut, pengembangan tanaman metallicolous tidak terpengaruh
(Tabel 1), bahkan jika fitur mereka toleransi tembaga dan nikel dilaporkan menjadi
berbeda. Populasi serpentine itu terbukti nikel toleran tapi tidak tembaga toleran,
sedangkan populasi tambang itu terbukti tembaga toleran dan cotolerant nikel
(Gonnelli et al., 2001). Mungkin, konsentrasi tembaga yang digunakan terlalu
rendah untuk mengungkapkan sensitivitas dari populasi ular untuk logam ini
sehubungan dengan populasi tambang, tetapi meningkatkan ke titik yang dapat
memicu efek pada populasi sensitif sehingga merusak untuk membuat desain
eksperimental tidak cocok untuk tujuan yang diusulkan. Sejauh akumulasi logam
yang bersangkutan (Tabel 2), konsentrasi logam yang serupa di antara populasi di
sebagian besar kasus. Bahkan, satu-satunya perbedaan yang signifikan adalah
konsentrasi tembaga rendah ditunjukkan oleh penduduk tambang Cu dan dihasilkan
oleh perilakunya dikenal sebagai excluder tembaga (Gonnelli et al, 2001;.. Colzi et
al, 2011, 2012). Cerato-platanin digunakan sebagai stimulus biotik untuk
mendeteksi kemampuan populasi metallicolous dan nonmetallicolous S. paradoxa
untuk mengaktifkan respon pertahanan diukur sebagai kemampuan untuk
menginduksi akumulasi fenolik senyawa pada daun (El Modafar et al, 1995;.
Grokinsky et al. 2012; Du dan Solomon, 2013). Emisi spektrum neon diperoleh
(Gbr. 1) dan nilai yang diperoleh pada perlakuan daun dengan air menunjukkan
bahwa fluoresensi diuji adalah karena aktivasi respon pertahanan dan tidak respon
non-spesifik atau ke cerato-platanin sendiri. Setelah cerato-platanin eksposisi,
semua sampel menunjukkan nilai signifikan lebih tinggi dari fluoresensi,
menunjukkan bahwa protein jamur ini PAMP juga ditandai mampu menginduksi
sintesis phytoalexins di pabrik non-inang S. paradoxa (Gbr. 2). Kehadiran tembaga
atau nikel dalam media kultur tidak mempengaruhi produksi molekul tersebut
setelah eksposisi untuk ceratoplatanin, kecuali dalam satu kasus. Menariknya,
ketika tambang populasi toleran ditumbuhkan di hadapan tembaga, itu
menunjukkan tingkat produksi fitoaleksin lebih tinggi daripada di kondisi kontrol dan

lebih tinggi dari dua populasi lain. Menariknya, kehadiran nikel tidak menginduksi
respons yang sama. Oleh karena itu, setidaknya untuk populasi yang diteliti,
spesifisitas logam untuk perilaku tertentu tersebut dapat disarankan dan itu adalah
menarik untuk dicatat bahwa itu adalah untuk
logam dikenal sebagai fungisida. Populasi ular uninterestingly menunjukkan nilai
fluoresensi dalam kisaran populasi referensi. Oleh karena itu, perilaku tertentu
sebelumnya tampaknya tergantung juga pada jenis lingkungan metalliferous
tanaman berasal. Untuk alasan itu,
populasi ini dikeluarkan dari penelitian lebih lanjut pada respon dari S. paradoxa
untuk PAMP eksposisi hadir dalam penelitian ini. Namun demikian, hanya populasi
ular menunjukkan produksi metalinduced dari phytoalexins di cerato-platanin tidak
tanaman terkena. Mekanisme ini bisa mewakili respon diinduksi logamkemungkinan eksklusif populasi tersebut, sehingga layak penyelidikan lebih lanjut.
Over-produksi phytoalexins dari tembaga populasi toleran tumbuh di hadapan
logam seperti menyarankan bahwa, dalam kasus-kasus tertentu, adaptasi dengan
lingkungan metalliferous efektif dapat mempengaruhi respon tanaman terhadap
cekaman biotik. Beberapa pertimbangan peran dalam mekanisme pertahanan
tanaman produksi fitoaleksin besar tersebut dapat menggugah rasa ingin tahu
ditarik dan akan layak untuk diverifikasi pada populasi toleran tembaga lainnya.
Menimbang bahwa tanah yang kaya tembaga mungkin memiliki banyak patogen
yang lebih rendah dibandingkan dengan tanah biasa, sehingga santai pilihan untuk
mekanisme perlawanan, lebih-produksi phytoalexins bisa mencerminkan kerentanan
lebih besar dari populasi tersebut untuk serangan patogen. Anehnya, perilaku yang
berbeda ketika Cu penduduk metallicolous ditumbuhkan dalam kondisi kontrol dan
mirip dengan salah satu populasi sensitif. Populasi tambang tampaknya bisa "masuk
akal" kehadiran tembaga di lingkungannya. Mungkin, pada tingkat tembaga normal,
populasi tambang disintesis pertahanan konstitutif terhadap musuh alami pada
tingkat normal. Akibatnya, populasi ini tidak pernah menunjukkan masalah
perkecambahan dan pembentukan dari tidak terkontaminasi tanah (pers. Obs.) Dan
tidak fungisida atau konsentrasi tembaga tinggi yang diperlukan untuk
mengoptimalkan pertumbuhan, seperti misalnya dalam kasus Haumaniastrum
katangense (chipeng et al. 2010). Kondisi ini dapat mengakibatkan respon terhadap
serangan jamur mirip dengan populasi sensitif. Di sisi lain, tembaga dalam media
kultur dapat mensimulasikan lingkungan terkenal karena populasi itu, dengan
tekanan rendah musuh alami. lingkungan tersebut tidak bisa memerlukan investasi
tinggi sumber di pertahanan basal melawan, setidaknya beberapa jenis, patogen.
Oleh karena itu, dalam kasus serangan populasi akan dibatasi untuk produksi yang
lebih tinggi dari pertahanan diinduksi.
4.2. Karakterisasi efek tembaga pada produksi fitoaleksin
Perilaku yang berbeda bahwa tembaga populasi toleran telah menunjukkan ketika
tumbuh di hadapan logam yang dikonfirmasi oleh eksperimen waktu-

ketergantungan (Gambar. 3). The cerato-platanin dikenakan produksi meningkat

dengan waktu paparan dengan cara yang sama untuk tanaman sensitif, terlepas
dari kehadiran tembaga dalam media kultur, dan untuk non memperlakukan
tanaman metallicolous. Semua nilai-nilai sampel sebelumnya yang lebih rendah
dari tembaga yang diperlakukan cerato-platanin terkena sampel metallicolous.
Perilaku ini bahkan lebih jelas ketika produksi bersih phytoalexins dihitung untuk
menghilangkan efek dari produksi fitoaleksin karena perlakuan logam saja. Hasil
perhitungan ini lebih lanjut menegaskan aktivasi yang lebih besar
pertahanan, dengan adanya tembaga, pada populasi toleran dibandingkan dengan
yang sensitif (Gbr. 4). Konsentrasi tembaga tergantung eksperimen perbedaan
antara populasi yang berbeda dan perawatan yang dipelihara dan terbukti
tergantung pada tingkat logam untuk dua konsentrasi pertama digunakan (Gambar.
5 dan 6). Sampai 5? M CuSO4, sebelumnya hipotesis "metal penginderaan" dari
populasi tambang tampaknya meningkatkan efek menyusul konsentrasi tembaga,
semakin logam hadir di lingkungan, semakin phytoalexins perlu diproduksi di bawah
serangan jamur. Pada konsentrasi tembaga tertinggi digunakan, tingkat produksi
fitoaleksin mengejutkan turun untuk mengontrol tingkat. pertumbuhan tanaman
dan akumulasi tembaga dipantau juga dalam jenis percobaan, memberikan hasil
yang diharapkan (tembaga yang lebih tinggi yang dikenakan berpengaruh pada
pertumbuhan tanaman bagi penduduk sensitif, bersama dengan akumulasi
tembaga yang lebih tinggi di akar dan tunas, data tidak ditampilkan) koheren
dengan sudah makalah pada sistem saat belajar (lihat misalnya Colzi et al., 2012).
4.3. MAPKs, keterlibatan mungkin?
Beberapa studi telah menunjukkan bahwa kaskade MAPK memainkan peran penting
dalam respon tanaman untuk cekaman biotik dan abiotik, seperti infeksi patogen,
melukai, suhu rendah, kekeringan, hyperand hipo-osmolaritas, salinitas tinggi, stres
mekanik, logam dan ROS (Mishra et al. 2006; Pitzschke et al, 2009;.. Tena et al,
2011;. Hamel et al, 2012). Hasil yang diperoleh dari fosforilasi yang
tingkat MAPKs di daun S. paradoxa dari non-tercemar dan tanah tambang tembaga,
baik ditanam di ada / tidaknya 5? M CuSO4, menunjukkan bahwa CP diaktifkan
MAPKs di kedua populasi dan bahwa aktivasi seperti itu lebih besar ketika tanaman
ditanam di hadapan tembaga (Gbr. 7). Oleh karena itu, percobaan menegaskan
kemampuan cerato-platanin untuk mengaktifkan MAPKs pada tanaman non-host
(Lombardi et al., 2013) dan menyarankan interaksi positif
antara stimuli biotik dan abiotik dalam menginduksi sinyal upstream pertahanan
pada konsentrasi tembaga di sini digunakan. Biotik dan abiotik hasil sinyal stres
transduksi dari susunan kompleks dari faktor yang mungkin positif atau negatif
berinteraksi berinteraksi (Pedras et al, 2008;. Aktinson dan Urwin, 2012). Dalam
kontes ini, hasil kami dapat menunjukkan bahwa interaksi antara stimulus biotik, di
sini diwakili oleh non-katalitik protein jamur cerato-platanin, dan cekaman abiotik,

seperti kelebihan tembaga, dapat mempengaruhi sistem mesin defensif dari

populasi metallicolous tertentu S. paradoxa, seperti ditegaskan oleh aktivasi MAPKs
serta produksi phytoalexins. Bahkan, masing-masing stres memunculkan respon
sistem seluler dan molekuler yang kompleks dilaksanakan oleh tanaman untuk
mencegah kerusakan dan menjamin kelangsungan hidup baru-baru ini dilaporkan
(Schenke et al, 2011;. Aktinson dan Urwin, 2012; Opdenakker et al, 2012.). Oleh
karena itu, hasil kami dalam perjanjian dengan menyajikan data minim dalam sastra
dan memberikan informasi baru tentang induksi pertahanan disebabkan oleh PAMP
jamur pada tanaman disesuaikan logam.
5. Kesimpulan
Intensitas respon terhadap stres biotik, dalam hal produksi fitoaleksin setelah PAMP
eksposisi, ditunjukkan oleh excluder pseudo-metallophyte S. paradoxa tampaknya
tergantung baik pada jenis populasi disesuaikan logam dan keberadaan logam
tertentu dalam media kultur. Sebenarnya, over-produksi phytoalexins tercatat untuk
populasi tambang tembaga tumbuh di hadapan logam tersebut. Oleh karena itu,
adaptasi dengan lingkungan metalliferous efektif dapat mempengaruhi respon
tanaman terhadap cekaman biotik, tetapi hipotesis menarik ini tidak dapat
digeneralisasi untuk semua jenis lingkungan metalliferous. Namun demikian, tulisan
ini menunjukkan untuk pertama kalinya bahwa
stimulus biotik, seperti jamur PAMP cerato-platanin, dapat memiliki pengaruh yang
berbeda pada induksi pertahanan di tembaga toleran tanaman yang ditanam di
hadapan tembaga. Efek yang mungkin merupakan konsekuensi dari aktivasi kuat
mekanisme pertahanan yang mulai dengan aktivasi MAPKs dan menyimpulkan
dengan sekresi senyawa fenolik neon pada permukaan bawah daun.

tanggapan stres diselidiki; penerapan seng dan panas untuk Terrestrial

Model Ekosistem dari padang rumput tercemar logam berat
ABSTRAK

Penelitian ini menguji hipotesis bahwa tanah dengan keanekaragaman hayati

dirampas karena pencemaran logam kurang stabil daripada tanah non-tercemar,
mengandung sebuah komunitas yang lebih beragam. Untuk ini, tanah yang sampel
dari padang rumput yang ada di Belanda yang mengandung tinggi konsentrasi
logam berat (Cu, Pb dan Zn). Tanah yang menunjukkan perbedaan terbesar dalam
konsentrasi logam diinkubasi di laboratorium menggunakan Terrestrial Model
Ekosistem (tmes). Pendekatan diaktifkan ini pengukuran simultan struktural
(bakteri, nematoda, enchytraeids, cacing tanah) dan parameter fungsional
(pencucian nitrogen, aktivitas makan, CO2production, pertumbuhan tanaman).

Tanah tercemar tertinggi menunjukkan pertumbuhan bakteri yang lebih rendah, dan
penurunan enchytraeid dan nematoda biomassa dan keragaman, maka masyarakat
dirampas. Lebih nitrat tercuci dari tanah tercemar tinggi, sementara semua
endpoint fungsional lainnya tidak berbeda. Aplikasi stres tambahan dari seng dan
panas digunakan untuk menguji stabilitas. pengobatan zinc menyebabkan efek
hanya di tanah tercemar tinggi, diamati pada beberapa saat pada waktunya untuk
enchytraeids, flux CO2 dan pertumbuhan tanaman. stress panas menyebabkan
penurunan besar dalam enchytraeid dan biomassa cacing tanah. Ammonium
pencucian mengalami penurunan sebesar perawatan panas di tanah yang paling
tercemar, sementara CO2was meningkat dengan panas dalam tanah kurang
tercemar. Kebanyakan efek terlihat dalam sistem yang paling tercemar dan
disimpulkan bahwa mereka tampaknya kurang stabil
pengantar
Di sebelah barat Belanda, tanah padang rumput yang tercemar dengan logam
berat; hasil jangka panjang (1600-1950) masukan sampah kota dan pertanian
(Bosveld et al, 2000;.. Kools et al, 2005;. Lexmond et al, 1987). Saat ini, pola
pencemaran tambal sulam ada seng, tembaga dan timah. Timbal meningkat secara
lokal dan melebihi nilai intervensi, ambang Belanda hukum atas keselamatan dalam
tanah (Vegter, 1995). Seng dan tembaga yang hadir dalam konsentrasi yang lebih
rendah, tetapi terjadi bersama-sama dengan satu sama lain dan timbal (Kools et al.,
2005). Dalam laporan evaluasi risiko, dampak pada ekosistem padang rumput
diharapkan (Bosveld dan de Poorte, 1999). Masalahnya adalah bahwa implikasi dari
pencemaran ekosistem hampir tidak dikenal, tetapi perhatian ditarik ke arah aspek
ini (Van Straalen, 2003). Beberapa telah menyelidiki efek dari proses, seperti
kapasitas memurnikan (Kools et al, 2005;.. Vorenhout et al, 2000) dan stabilitas
ekosistem (Griffiths et al, 2000, 2001.). Dalam hal ini, pendekatan eksperimental
untuk menilai efek pada stabilitas ekosistem langka dan sangat berharga untuk
menguji ini. Stabilitas ekosistem terdiri dari perlawanan untuk menahan gangguan
dan ketahanan atau kemampuan untuk pulih setelah gangguan (Pimm, 1984). Oleh
karena itu prediksi efek dari polusi untuk stabilitas ekosistem tidak selalu mudah.
Selain itu, teori ekologi tidak konklusif tentang hubungan antara tingkat yang
berbeda, misalnya bagaimana struktur (spesies misalnya) berkaitan dengan fungsi
(misalnya proses) (Hooper et al, 2005;. McCann, 2000). Hanya beberapa data
penelitian yang tersedia. Penelitian pada tanah dengan apriori perbedaan dalam
keanekaragaman hayati, baik dimanipulasi (Griffiths et al., 2000) atau diambil dari
berbagai bidang (Griffiths, 2001), menunjukkan ekosistem yang (fungsional)
stabilitas terpengaruh. Disarankan bahwa penilaian stabilitas fungsional merupakan
indikator yang baik dari kesehatan tanah. Kami mengadopsi ide ini dan dimanipulasi
ekosistem model tanah, mengandung tanah lapangan di ekosistem Model terestrial
(tmes), mirip dengan sistem yang digunakan byKnacker et al. (2004), maka yang
mengandung komunitas mikroba dan invertebrata. Kami menerapkan dua jenis
stres, aplikasi seng dan stres panas,

sebanding dengan penelitian byGriffiths et al. (2001). Terapan seng diwakili keras,
stres terus-menerus, sedangkan panas diwakili keras, stres sementara. Dengan cara
ini, hipotesis diuji bahwa sejarah pencemaran logam berat menyebabkan
peningkatan
kerentanan terhadap faktor stres tambahan. Kita diharapkan variabel struktural
dalam tanah tercemar lebih rendah untuk menjadi lebih sensitif terhadap perawatan
dari dalam tanah tercemar tinggi. Sebaliknya, ecosystemprocesses di tanah
tercemar yang lebih tinggi mungkin lebih sensitif terhadap gangguan. Selain itu,
dua stres yang berbeda dapat menyebabkan respon dan pemulihan pola yang
berbeda, karena kita berharap bahwa ketika pemulihan tidak terjadi
dari perlakuan panas, yang sebelumnya lebih rendah tercemar tanah menunjukkan
kapasitas yang lebih tinggi untuk pulih. Selain itu, adaptasi terhadap seng (karena
paparan sebelumnya) dapat terjadi, membuat paparan seng atas tambahan yang
menarik, menghubungkan ke studi tentang pencemaran yang disebabkan toleransi
masyarakat (PICT; Boivin, 2005)
3. Hasil
3.1. sifat-sifat tanah
konsentrasi logam berat (selain seng) dan karakteristik tanah dari tanah tidak
diubah oleh seng dan panas perawatan. TME dengan polusi yang lebih rendah
(LOW) menunjukkan tinggi pH, kelembaban tanah dan karbon isi dari TME dengan
tingkat polusi tinggi (Tabel 1).
TABEL 1 GAMBAR 1
Semua konsentrasi logam yang lebih tinggi di kelas TINGGI; total tembaga dan
timah konsentrasi dua kali lebih tinggi dan timah dan seng konsentrasi tukar
berbeda lebih dari satu faktor 2 antara kedua kelompok. Selain seng tinggi
konsentrasi total dan tukar seng di tanah. Hal ini mengakibatkan peningkatan yang
lebih besar dalam konsentrasi total Zn di kelas LOW dari kelas tanah TINGGI;
konsentrasi tukar tetap lebih tinggi (Tabel 1).
3.2. karakteristik struktural masyarakat
Rata-rata nilai CFU bakteri menurunkan selama percobaan. Kami ditentukan nilai
CFU bakteri yang lebih tinggi di tanah tercemar LOW daripada di tanah tercemar
tinggi (pb0.01). Demikian pula, biomassa enchytraeid rata dalam kelompok tanah
TINGGI lebih rendah dibanding kelompok LOW (pb0.01) dan keduanya meningkat
dengan waktu (pb0.01; data tidak ditampilkan). Enam berbeda enchytraeid genera,
Achaeta, Cognettia, Enchytraeus, Enchytronia, Fridericia dan Henleawere
diidentifikasi. Keseluruhan keragaman genus (H ') melakukan

tidak berbeda antara kedua kelompok polusi tanah, membandingkan tmes nondiobati (data tidak ditampilkan). Pada pengambilan sampel pertama setelah
pengobatan seng (t = 1 minggu), genus keanekaragaman (H ') mengalami
penurunan di tanah tinggi tercemar (p = 0,037) serta biomassa (p = 0,051), tetapi
efek ini tidak pernah signifikan pada kesempatan pengambilan sampel kemudian.
Semua enchytraeids tewas oleh perlakuan panas di kedua kelas tanah. Di antara
cacing tanah, yang caliginosa speciesAporrectodea, Lumbricus rubellus,
Allolobophora
chloroticaandOctalasium
tyrtaeumwere
diidentifikasi.
Secara
keseluruhan biomassa cacing tanah lebih rendah pada tanah kelompok TINGGI
daripada di LOW (tidak ditampilkan). pengobatan seng tidak mempengaruhi
biomassa cacing tanah atau keanekaragaman. Cacing tanah yang sangat dikurangi
dengan perlakuan panas (pb0.01), dengan tidak ada perbedaan antara kelompok
tanah (Gambar. 1).
3.3. proses ekosistem
Jumlah amonium pencucian dari tmes tidak berbeda secara signifikan antara
kelompok tanah (Gambar. 2). Perlakuan panas menyebabkan peningkatan amonium
sleaching dari grup tanah TINGGI satu minggu setelah aplikasi stres (p = 0,015),
butwas tidak signifikan pada kesempatan pengambilan sampel lainnya. Nitrat
pencucian dari semua tmes meningkat dengan waktu, lebih nitrat kehabisan dari
tanah tercemar tinggi (p = 0,01), tetapi berubah dengan perawatan. The CO2fluxes
meningkat selama percobaan, kelas tanah tidak berbeda (Gambar. 3). Aplikasi seng
menyebabkan tidak berpengaruh pada LOW kelas, sedangkan tanah tercemar tinggi
menunjukkan penurunan yang signifikan, ditentukan pada 12 dan 69 hari setelah
pengobatan (p = 0,024 andp = 0,036, masing-masing).
Perlakuan panas meningkatkan CO2flux 5 hari setelah aplikasi stres di tanah
tercemar rendah (p = 0,009), yang tidak diamati dalam tanah tercemar tinggi. hasil
tanaman meningkat sedikit selama inkubasi; hasil tertinggi ditentukan pada akhir
percobaan (tidak ditampilkan). Hasil pada 18 hari setelah pengobatan seng
mengalami penurunan secara signifikan dalam tanah tercemar tinggi; tidak setelah
perlakuan panas (p = 0,009). Aktivitas makan rata-rata di tmes di kontrol sangat
bervariasi selama percobaan (Gambar. 4) dan tidak berbeda secara signifikan
antara kelas tanah (p = 0,053). Tanggapan untuk seng dan perlakuan panas adalah
serupa di kedua kelas tanah, meskipun efek panas lebih parah (Gbr. 4). Efek panas
yang signifikan (pb0.01), sedangkan data dari 60, 103 dan 175 hari pasca
perawatan tidak signifikan
4. Diskusi
Rancangan percobaan berhasil mengurangi variasi antara tmes individu, yang
memungkinkan perbandingan kualitatif dan kuantitatif antara tmes diperlakukan
dan non-diobati. Karakteristik struktural yang berbeda antara tanah dari kelompok
polusi yang berbeda. Kami ditentukan jumlah bakteri yang lebih rendah dan

enchytraeid lebih rendah dan biomassa cacing tanah di tanah tercemar tinggi.
Sebuah studi paralel menunjukkan bahwa tmes paling tercemar juga mengandung
biomassa nematoda yang lebih rendah (Van der Wurff et al., 2007). Perbedaan yang
ditemukan, bagaimanapun, mungkin juga merupakan hasil dari faktor-faktor lain
selain konsentrasi logam yang tinggi, karena karakteristik tanah yang sangat
variabel lainnya. Memang, perbedaan antara konsentrasi logam berat yang tinggi
dan rendah juga terkait dengan faktor-faktor tanah: isi bahan organik tinggi di tanah
tercemar rendah mungkin disukai nutrisi status dan kelembaban tingkat bermanfaat
bagi bakteri tanah dan invertebrata (Doelman dan Eijsackers, 2004). Analisis
multivariat dalam studi paralel di lokasi yang sama menunjukkan bahwa konsentrasi
logam yang tinggi setidaknya sebagian menjelaskan kelimpahan bakteri, nematoda
dan
enchytraeids di daerah ini (Boivin, 2005; Kools, 2006; Van der Wurff
et al., 2007).
4.1. fungsi ekosistem
Perbedaan dalam proses ekosistem yang tidak jelas. pertumbuhan tanaman tidak
berbeda antara kelompok tanah, jumlah total nitrat tercuci lebih tinggi pada tanah
yang paling tercemar. aktivitas makan fauna lebih rendah pada tanah tercemar
tinggi selama inkubasi. Kegiatan ini paling mungkin mencerminkan biomassa
decomposer rendah di tanah paling tercemar (misalnya enchytraieds dan cacing
tanah). Semakin tinggi pencucian nitrat mungkin hasil dari penurunan penyerapan
(imobilisasi) oleh organisme dan / atau pengurangan denitrifikasi tersebut. Proses
denitrifikasi terjadi di bawah kondisi anaerobik dan dipengaruhi oleh tingkat
kelembaban tanah di tmes (Van Gestel et al., 2004). Pengaruh tingkat kelembaban
tanah jauh lebih kuat di tanah tercemar tinggi (Pearson korelasi 0,78, p = 0,014)
daripada di tanah rendah tercemar (Pearson korelasi 0,22, p = 0,55). potensi
dampak logam konversi nitrogen demikian sulit untuk dipisahkan dari sifat-sifat
tanah tertentu.
4.2. Stres-on-stres pengobatan
Yang menarik adalah respon terhadap stres tambahan, panas dan seng perawatan,
diringkas pada Tabel 2. Nematoda sampel di tmes dari tanah tercemar tinggi
tampaknya lebih dipengaruhi oleh perlakuan panas daripada yang dari tanah
tercemar rendah (Van der Wurff et al. 2007). Bertentangan dengan harapan kita,
aplikasi zinc menyebabkan penurunan lebih menonjol dari biomassa enchytraeid
dan keragaman di kelas tanah TINGGI, langsung setelah perawatan. Kami
diharapkan bahwa tmes ini akan berisi spesies paling sensitif. Namun, keragaman
theapriorigenus tidak berbeda secara signifikan antara TINGGI dan RENDAH. Jumlah
amonium tercuci hanya meningkat di tanah tercemar tinggi, segera setelah aplikasi
panas. Selain itu, tanah yang tercemar tinggi showeda pola respons yang berbeda
di CO2fluxes dibandingkan dengan tanah kurang tercemar. Panas diinduksi CO2flux

setelah pengobatan di tanah kurang tercemar sementara kami ditentukan menurun

flux CO2 pada dua saat setelah perawatan seng hanya di tanah tercemar tinggi.
Yang terakhir mungkin dihasilkan dari efek langsung pada aktivitas mikroba karena
konsentrasi zinc yang tinggi, tetapi tidak tercermin dalam nilai-nilai CFU bakteri.
Kami membandingkan ini dengan data literatur tentang efek seng pada respirasi
basal, tetapi menemukan berbagai konsentrasi efek, dari 0 sampai 5000 mg / kg
(Giller et al., 1998). Tanah yang paling sebanding (pasir humat) memiliki EC50 dari
1.267 mg / kg (Doelman dan Haanstra, 1983), sedikit lebih rendah dari konsentrasi
seng setelah pengobatan dengan seng di kelas polusi rendah yang tidak menurun
(1309 mg Zn / kg DWTable 1). Bakteri yang diharapkan akan terkena paparan 40 C
dalam perlakuan panas. Mereka mungkin telah merespon dan pulih dalam minggu
pertama setelah pengobatan, karena pertumbuhan bakteri umumnya sangat cepat,
jauh lebih cepat daripada pertumbuhan organisme lain. Namun, tingkat masyarakat
profiling fisiologis (CLPP) dari bakteri dalam tmes, juga tidak menunjukkan efek
pengobatan (Boivin, data tidak dipublikasikan) .Dalam Sebaliknya, stres panas
tampaknya terlalu berat untuk membedakan antara respon stres enchytraeids dan
cacing tanah.
5. Kesimpulan
Dalam penelitian kami, tanah dengan konsentrasi logam berat yang lebih tinggi
yang terkandung biomassa berkurang dari enchytraeids dan nematoda. Penerapan
stres tambahan menunjukkan bahwa keragaman nematoda dan proses ekosistem
umumnya dipengaruhi lebih banyak di tanah tercemar lebih tinggi daripada di
tanah tercemar rendah, seperti yang disarankan dalam literatur (Griffiths et al.,
2000). Dalam penelitian ini, aktivitas makan fauna diukur dengan umpan-lamina
tongkat dan berisi satu substrat (selulosa). Parameter ini terkait dengan
karakteristik struktural tertentu, kelimpahan cacing tanah dan enchytraeids.
CO2fluxes diyakini hasil dari sejumlah besar interaksi dari proses-proses ekosistem
lainnya (Van Voris et al., 1980). Indikator yang mengintegrasikan beberapa tingkat
trofik dan / atau kelompok spesies mungkin lebih relevan untuk menyelidiki stres
kerentanan, karena mereka lebih baik mewakili mengintegrasikan kompleksitas
ekosistem yang mendasari.
Ucapan Terima Kasih
Penelitian yang diuraikan dalam makalah ini dilakukan dalam rangka ekotoksikologi
Penelitian Stimulasi Program Sistem berorientasi (sseo) dibiayai oleh Belanda
Organisasi Riset Ilmiah (NWO). Para penulis berterima kasih kepada semua yang
berkontribusi pada diskusi sebelum eksperimen dan orang-orang yang membantu
selama percobaan. Kami secara khusus berterima kasih Kees Verhoef (TME
sampling), Gerdit Greve (analisis tanah), Hanny van Megen (analisis nematoda) dan
Rik Zoomer (analisis gizi). Para penulis mengucapkan terima kasih kepada Negara
Kehutanan (Staatsbosbeheer) dan petani lokal untuk akses ke daerah-daerah.