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ACCION BACTERIOSTATICA SELECTIVA DEL CRISTAL VIOLETA

1. OBJETIVOS
Conocer la accin bacteriosttica selectiva del cristal violeta con

bacterias Gram (+) y Gram (-).


Observar los crecimientos en las diferentes concentraciones del cristal
violeta.

2. FUNDAMENTO TEORICO
Conceptos generales
Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las
bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:

bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;

bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.

En general, no slo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de


microorganismos,

hablamos

respectivamente

de

agentes microbiostticos y microbicidas. Ahora bien, para una misma


sustancia qumica, la lnea de demarcacin entre un efecto microbiosttico y
otro microbicida depende muchas veces de la concentracin de dicha
sustancia y del tiempo durante el que acta.
Cmo podemos saber que un microorganismo est "muerto". El nico
criterio vlido es la prdida irreversible de la capacidad de divisin celular,
es decir, de la prdida de viabilidad, y se suele comprobar empleando
tcnicas con placas de Petri (es decir, confirmando que no crecen en
medios slidos adecuados). (Pero ni siquiera esto es garanta de que una
bacteria "no viable" est "muerta": hay bacterias viables pero no cultivables.
Como se ve, demostrar que una bacteria est "muerta" es algo bastante
complicado).

Antes de proceder al estudio de las diversas molculas que pueden afectar


el crecimiento y/o la viabilidad de los microorganismos, veamos unas
cuantas definiciones bsicas.

Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivacin total


de todas las formas de vida microbiana (o sea, su "muerte" o prdida
irreversible de su viabilidad). (Tambin existen agentes fsicos
esterilizantes, como ya vimos en los dos captulos anteriores).

Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo


qumicos) antimicrobianos capaces de matar los microorganismos
patgenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos
suelen) presentar efectos txicos sobre tejidos vivos, por lo que se
suelen emplear slo sobre materiales inertes.

Agentes antispticos son sustancias qumicas antimicrobianas que se


oponen a la sepsis o putrefaccin de materiales vivos. Se trata de
desinfectantes con baja actividad txica hacia los tejidos vivos donde se
aplican.

Quimioterpicos son compuestos qumicos con actividad microbicida o


microbiosttica, con una toxicidad suficientemente baja como para
permitir su administracin a un organismo superior, en cuyos fluidos
corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a
concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos
dentro del organismo.
VIOLETA GENCIANA
Formula Molecular: C25H30ClN3
Datos Fsico-Qumicos: Polvo cristalino verde oscuro brillante,
higroscpico. Bastante soluble en agua, fcilmente soluble en etanol al
96%, y en cloruro de metileno.
Propiedades y usos: Colorante derivado del trifenilmetano con accin
bactericida frente a numerosas bacterias (sobretodo gram+ del grupo de

los estafilococos), antifngico, y contra algunas levaduras (como


Candida). Suele ser una mezcla de los cloruros de tetra-, penta-, y
hexametilpararosanilina. Su actividad se incrementa con el pH alcalino.
Se utiliza en la prevencin y tratamiento de las infecciones de lceras
crnicas, lceras varicosas, y heridas, dermatitis irritativas crnicas,
flebitis y tromboflebitis, eczemas hmedos, sabaones, forunculosis,
dermatomicosis, imptigo, quemaduras, leucorrea, vaginitis, candidiasis
oral y vaginal, y angina de Vincent.

3.

PROCEDIMIENTO

Preparar 3 tubos de prueba con 9 ml de agua destilada cada uno.


Tener preparada una dilucin de cristal violeta a una concentracin de

1:1000 en un matraz a vaso de precipitado.


Transferir 1 ml de la solucin acuosa de cristal violeta de 1: 1000 a uno
de los tubos con 9 ml de agua destilada, esto nos da una dilucin de

cristal violeta en 1:10 000.


Transferir 1 ml de la dilucin de cristal violeta 1:10 000 a un segundo
tubo con 9 ml agua destilada, esto nos da una dilucin de cristal violeta

en 1:100 000.
Finalmente, transferir 1 ml de la dilucin de 1:100 000 a un tercer tubo

con 9 ml de agua, esto nos da una dilucin de 1:1000 000.


Verter al agar fundido en las tres placas de Petri y mezclar bien el
colorante con el agar rotando suavemente la placa para obtener una

distribucin uniforme de colorante.


Verter el contenido del tubo de agar en la placa de Petri sin colorante

para que sirva de control.


Cuando ha solidificado el agar, invertir las placas y dividir cada una en
dos partes iguales con un lpiz de cera.

Marcar cada mitad con el nombre del organismo con el que se va a

sembrar por el mtodo de estras.


Rayar en estras la mitad de una placa de Petri con una gotita, tomada
con el asa del inoculador de cultivo de Bacillus Subtilis y la otra mitad

igualmente con una gotita del cultivo de Escherichia coli.


Proceder en igual forma con las dems placas de Petri.
Invertir las placas o incubarlas a 37C por 48 horas.
Anotar los resultados obtenidos en el cuadro que sigue a continuacin.
Indicar la presencia y la ausencia de crecimiento por los signos (+) y (-).

15 min esperar a que se solidifq


Invertir las placas e incubarlas a 37C por 48 horas.

4. RESULTADOS
Disoluciones

Grupo N1

Grupo N2

Grupo N3

Grupo N4

Grupo N5

Cultiv
oA

Cultiv
oB

Cultiv
oA

Cultiv
oB

Cultiv
oA

Cultiv
oB

Cultiv
oA

Cultiv
oB

Cultiv
oA

Cultiv
B

1: 10,000

1: 100,000

1: 1000,000

S/colorantes

(+) Hay crecimiento.


(-) No hay crecimiento.
Colorantes

Cristal violeta

control

Concentracin

E. Coli

B.
Subtillis

1: 10,000

1: 100,000

1: 1000,000

S/colorantes

Grupo

Colonia A

Colonia B

N 1

Gram (+)
Estafilococos

Gram (-)
Estreptococos

N 2

Gram (-)
Diplococos

Gram (-)
Estreptococos

N 3

Gram (-)
Estreptococos

Gram (-)
Estafilococos

N 4

Gram (-)
Estafilococos

Gram (-)
Diplococos

N 5

Gram (-)
bacilo

Gram (-)
Estafilococos

5. CONCLUSIONES

Al analizar los cinco grupos no ha habido conformidad, porque segn la


teora por ejemplo que en 1:10 000 no bamos a notar ninguna de las
dos bacterias (Escherichia Coli y Bacillus Subtillis), en cambio que en
1:100 000 bamos a notar solo el crecimiento de la Escherichia Coli y
que en 1:1000 000 iba a ver crecimiento de ambos. Sin embargo en el
laboratorio se observ crecimiento donde no debera haber.

Se tiene que repetir el proceso del experimento porque no hay una


confianza con los resultados.
CUESTIONARIO
Qu es un agente bacteriosttico?
Es aqul que tiene la propiedad de inhibir la multiplicacin bacteriana,
inhiben la tincin de las bacterias, la misma que se reanuda cuando se
retira el agente. Algunos agentes tienen finalidad particular por medio de
genes o los lesionan especficamente.
- Su toxicidad selectica es baja, acta sobre las enzimas que actan en
el proceso.
Mecanismos de accin:
a). Por bloqueo de la transcripcin:- Impide que actu la ARN polimerasa
bacteriana que es la que sintetiza el ARN. - Rifampicina.
b). Por bloqueo de la duplicacin del ADN:- Actan inhibiendo la accin
de las enzimas que enrollan y desenrollan la cadena de ADN, estos
antibiticos impiden que la cadena se desenrolle. - Quinolonas:
Oflozacino, cinoxacino, norfloxacino. - Novobiocina: Benzamida.
c) Por interferencia en la sntesis de bases nitrogenadas:- Impiden la
sntesis de bases nitrogenadas, Adenina, timina, etc. (mtodo exclusivo
de las bacterias). - Sulfamidas - Diaminopirimidinas.
Alteran las funciones de la membrana plasmtica: La alteracin es la
rotura de la membrana plasmtica.
Qu quiere decir una accin bacteriosttica selectiva?
La accin bacteriosttica es un conjunto de procesos en el cual altera la
reproduccin de ciertas bacterias por eso se dice que es selectiva. Lo
que conlleva a que se vuelva lento el proceso de la multiplicacin de los
grmenes patgenos, con lo que se tornan ms vulnerables ante los
procesos defensivos humorales y celulares del organismo. La actividad
bacteriosttica se explora mediante el mtodo de difusin sobre.
Indique algunas aplicaciones prcticas de este fenmeno.

Evitar el deterioro de los alimentos y evitar la contaminacin tanto en


procesos industriales que requieran cultivos puros, como en laboratorios
de diagnstico o investigacin. Adems se ha difundido mucho el uso de
agentes bacteriostticos en la industria farmacutica para la produccin
de antibitico.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS


1. OBJETIVOS

Demostrar el efecto del metal (en nuestro caso el latn) sobre el


crecimiento del Escherichia Coli.

2. FUNDAMENTO TEORICO

Metales pesados
Ciertos metales pesados. Su accin se denomina oligodinmica, es decir son
activos en muy bajas concentraciones (ppm). Inactiva especficamente enzimas
claves al reaccionar con grupos SH. Son muy txicos y su actividad disminuye
con la existencia de fluidos biolgicos.
Plata: Nitrato de plata. Antisptico. Lavan los ojos de recin nacidos, en casos
concretos, para evitar la ceguera, se usa cuando la madre est infectada de
Neisseria gonorrea.
Mercurio: Cloruro de mercurio. ste elemento es altamente txico y es
inefectivo con materia orgnica, pero afecta a muchos microorganismos. El
mercurocromo es menos txico pero menos efectivo con materia org- nica.
Cobre: Sulfato de cobre. Se usa como alguicida en piscinas. Se adiciona a
pinturas para evitar hongos.
Zinc: Cloruro de zinc en colutorios bucales. El oxido de zinc es antifngico en
pinturas. En general ocasionan problemas medioambientales.
Accin oleodinmica.

Este fenmeno se demuestra fcilmente en el laboratorio poniendo un pedazo


de metal limpio (plata o cobre) sobre una placa de cultivo. Despus de la
incubacin, se ver una zona de inhibicin (sin desarrollo) rodeando al metal.
La cantidad de metal involucrada en el efecto inhibidor se puede expresar en
partes por milln. Se cree que la eficacia de estas pequeas cantidades de
metal se debe a la gran afinidad de que tienen ciertas protenas celulares por
los iones; se acumulan grandes cantidades en las clulas a partir de las
soluciones diluidas. La accin oligodinmica proporcionar un acercamiento
notable para el control de los microorganismos y al parecer se han realizado
muchos diseos y artculos tomando como base este fenmeno.
Composicin de una moneda de 10 cntimos. La moneda de 10 cntimos
del Per est compuesta de Latn:
El latn, es una aleacin de cobre y zinc que se realiza en crisoles o en un
horno de reverbero o de cubilote. Las proporciones de cobre y zinc se pueden
variar para crear una variedad de latones con propiedades diversas. En los
latones industriales el porcentaje de Zn se mantiene siempre inferior al 50%.Su
composicin influye en las caractersticas mecnicas, la fusibilidad y la
capacidad de conformacin por fundicin, forja, troquelado y maquinado. En
fro, los lingotes obtenidos pueden transformarse en lminas de diferentes
espesores, varillas o cortarse en tiras susceptibles de estirarse para fabricar
alambres. Su densidad tambin depende de su composicin. En general, la
densidad del latn ronda entre 8,4 g/cm y 8,7 g/cm. Si bien el bronce es, en
cambio, principalmente una aleacin de cobre con estao, algunos tipos de
latones se denominan 'bronces'. El latn es una aleacin sustituta que se utiliza
para decoracin debido a que su brillo le da un aspecto similar al del oro, para
aplicaciones en que se requiere baja friccin, como cerraduras, vlvulas, etc.
Para fontanera y aplicaciones elctricas.

Cobre:

El cobre forma parte de una cantidad muy elevada de aleaciones que


generalmente presentan mejores propiedades mecnicas, aunque tienen una

conductividad elctrica menor. Las ms importantes son conocidas con el


nombre de bronces y latones. Por otra parte, el cobre es un metal duradero
porque se puede reciclar un nmero casi ilimitado de veces sin que pierda sus
propiedades mecnicas.

Zinc:

El zinc es un metal, a veces clasificado como metal de transicin aunque


estrictamente no lo sea, ya que tanto el metal como su especie dispositiva
presentan el conjunto orbital completo. El metal presenta una gran resistencia a
la deformacin plstica en fro que disminuye en caliente, lo que obliga a
laminarlo por encima de los 100 C. No se puede endurecer por acritud y
presenta el fenmeno de fluencia a temperatura ambiente al contrario que la
mayora de los metales y aleaciones y pequeas cargas el ms importante.
Ionizacin plata cobre y sus efectos en el crecimiento microbiano.
Los metales como cobre y plata pueden utilizarse para la desinfeccin de las
aguas, mediante ionizacin.
3. PROCEDIMIENTO

Limpiar la laminilla (moneda de 10 cntimos) sumergindola


dentro de una solucin al 10% se cido ntrico.

Lavar bien la laminilla con agua para quitarle todo el cido.

Colocar la laminilla en el centro de una placa Petri.

Tomar un tubo con agar nutritivo fundido en bao mara


mantenido a 45C.

Inocular el tubo con agar con una gotita del cultivo de Escherichia
Coli tomada con el asa del inoculador.

Rotar el tubo entre las palmas de las manos para obtener una
distribucin uniforme de los organismos.

Verter el agar inoculado dentro de la placa de Petri que contiene


la laminilla (moneda de 10 cntimos).

Dejar que solidifique el agar.

Invertir la placa e incubarla a 37C por 48 horas.

4.

RESULTAD
O

Zona
oligodinmica
Crecimiento
normal

Zona de
estimulacin

El metal se mezcla con las protenas y no se van a producir


microorganismos.
5. CONCLUSIONES

Se observa la accin oligodinmica del latn, ya que se observa el


crecimiento de microorganismos en un cultivo, es afectado por la
presencia del latn (moneda de 10 cntimos). Se logra diferenciar tres
zonas: la zona oligodinmica, zona de estimulacin y de crecimiento
normal.

La zona oligodinmica (que es una zona despejada donde no aparecen


colonias), zona de estimulacin (zona angosta donde se presenta un
crecimiento abundante) y la zona de crecimiento normal (se presenta en
todo el resto del agar) debido a eso las cantidades diminutas de iones
metlicos estimulan el crecimiento (las enzimas entran en accin).

6. RECOMENDACIONES
La moneda contiene grasa por ello se limpia con cido ntrico
(corrosivo), no se limpia con alcohol porque este es un
desinfectante y sirve por lo general para el cuidado del hombre.
7. BIBLIOGRAFIA
http://dentizta.ccadet.unam.mx/dental/pdfs/definiciones/metalesspe
sados.pdf

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