Extracao de DNA usando MasterPure da EPICENTRE

Whole Blood Samples (with RBC lysis)

1. Transfira 200 l de sangue para tubos de microcentrifuga.

2. Adicione 600 l de Red Blood Cell Lysis Solution. Inverta 3 vezes para misturar e ento
agite o fundo do tubo para resuspender qualquer material remanescente.
3. Incube a temperature ambiente por 5 minutos.
4.1 Vortex o tubo rapidamente.
4.2 Incube a temperatura ambiente por mais 5 minutos.
4.3 Vortex o tubo rapidamente.
5. Centrifugue a amostra por 25 segundos na velocidade mxima da centrifuga para formar
o Pellet de clulas Brancas do sangue.
5.1Remova a maioria do supernatante, deixando aproximadamente 25 l do liquid.( cuidado
para no descartar o Pellet.)
5.1 Vortex o tubo rapidamente.
6. Resuspenda o as Celulas Brancas do sangue em 300 l da soluo Tissue and Cell Lysis,
pipetando a amostra para cima e para baixo varias vezes.
7. Adicione 1 de RNase A e misture completamente.
8. Incubate at 37C for 30 minutes.
9. Coloeque as Amostras no gelo por 3 a 5 minutos e ento prossiga com a precipitao do
DNA.
PRECIPITACO do DNA
Precipitation of Total Nucleic Acids (for all biological samples)

1. Adicione 175 l de MPC Protein Precipitation Reagent no tubo contendo as amostras

que sofreram lise cellular e vortex por 10 segundos vigorosamente.
2. Transfira o supernatante para um tubo de microcentrifuga limpo e descarte o pellet.
4. Add 500 l of isopropanol no tubo contendo o supernadante recuperado. Inverta bastante
de 30-40 vezes.
5. Pellet o DNA centrifugando a 4 at 4C por 10 minutos na centrifuga
6. Cuidadosamente derrame o isopropanol, Cuidado para no desgrudar e remover o Pellet
de DNA.
7 . Rinse twice with 70% ethanol, being careful to not dislodge the pellet. Centrifuge briefly if
the pellet is dislodged. Remove all of the residual ethanol with a pipet.
Lavar duas vezes com etanol a 70%, tendo o cuidado para no deslocar o sedimento.
Centrifugar brevemente se o sedimento desalojado. Remover todo o etanol residual com
uma pipeta.
8. Resuspender o DNA em 35 l of TE Buffer.