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QUÍMICAS/UNACH / CAMPUS IV
BIOQUIMICA CLINICA II
UNIDAD 2
ENZIMAS CELULARES DEL SUERO
INDICE
INTRODUCCION . . . . . . . . 3
DEFINICION Y CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS
CARACTERISTICAS . . . . . . . 4
ESTRUCTURA Y CLASIFICACION . . . . .
4
UNIDADES DE ACTIVIDAD ENZIMATICA . . .
8
CLASIFICACION Y DISTRIBUCION . . . . 9
DESTINO DE LAS ENZIMAS . . . . . .
10
METODOLOGIA ENZIMATICA . . . . . 11
PRINCIPALES ENZIMAS DE INTERES DIAGNOSTICO
TRANSAMINASAS . . . . . . . .
14
FOSFATASAS . . . . . . . . .
16
COLINESTERASA . . . . . . . .
17
M.C. CONSUELO CHANG RUEDA 18
FAC. DE C. QUÍMICAS/UNACH / CAMPUS IV
GAMMAGLUTAMILTRANSFERASA . . . . 18
LIPASA SERICA . . . . . . . . 19
AMILASA . . . . . . . . . .
20
DESHIDROGENASA LACTICA. . . . . . 20
CREATIN FOSFOQUINASA. . . . . . 22
TROPONINAS . . . . . . . . .
23
BIBLIOGRAFIA . . . . . . . . 24
INTRODUCCION:
Las enzimas son proteínas con propiedades catalíticas que nos ayudan a regular la gran mayoría
de las funciones metabólicas del organismo, por lo cual en esta unidad nos enfocaremos como
además nos pueden servir de marcadores bioquímicos para la detección de enfermedades en base
a su aumento o disminución en la sangre, es por ello que mediante estos apuntes el alumno le
permitirá comprender los siguientes objetivos como son:
Objetivos Específicos:
2.2 Características.
Se conocen hasta unas 2000 enzimas, de las que mas de 100 se han podido cristalizar. Los
pesos moleculares oscilan entre 12,700 (ribonucleasa) y 1,000,000 (glutamato-deshidrogenasa).
ESTRUCTURA Y CLASIFICACION.
H O O H R4
I II II I I
N C C N C
C C N C C N
II I I I II I
O R1 H R2 O H
Se distinguen:
Las proteínas son electrolitos multivalentes que contienen grupos ionizables. El grado de
ionización influye en la actividad de una enzima y depende del pH.
LAS ENZIMAS desde el punto de vista clínico son proteínas , o sea sustancias orgánicas,
producidas por la célula vía. La vida va unida a complejas transformaciones materiales que están
acopladas energéticamente unas con otras y que transcurren a temperatura constante,
relativamente baja.- Esta peculiaridad esta posibilitada por la acción de las enzimas, que pueden
designarse como catalizadores biológicos. La mayoría de ellas catalizan específicamente una
reacción química determinada; la sustancia transformada se denomina SUSTRATO, y la
substancia resultante de la reacción se denomina PRODUCTO.
Otras obran menos específicamente y aceleran diversas reacciones, por lo general
análogas. En muchos casos, la misma reacción puede estar catalizada por enzimas diversas que se
producen en células distintas. La mayoría de la enzimas pueden definirse además como
CATALIZADORES QUIMICOS: Aceleran las reacción en ambos sentidos, es decir tanto
adelante como hacia atrás, sin consumirse en ella.
IN VIVO: En la célula viva, la actividad catalítica de las enzimas esta gobernada por la
regulación biológica.
+ + +
Una enzima es activa porque posee un sitio especifico que tiene afinidad por el substrato.
A este sitio se le llama CENTRO O SITIO ACTIVO DE LA ENZIMA. Es el responsable de la
actividad de la enzima, cada enzima puede tener varios centros o sitios activos, dependiendo de la
naturaleza de la misma. El sitio activo puede ser de naturaleza proteica, constituyendo parte de la
molécula misma de la enzima, o bien pueda ser de naturaleza no proteica, llamándosele
COENZIMA y por si mismo no es activo. El resto de la molécula proteica (APOENZIMA) no es
activa y solo se convierten enzima activa (HALOENZIMA) al combinarse con su coenzima.
Para ejercer su efecto, muchas requieren en grupo prostético de bajo peso molecular
llamadas coenzimas. Cuando se trata de un ión inorgánico se habla de un ACTIVADOR O
COFACTOR. Si esta substancia esencial es un componente orgánico complejo, hidrosoluble de
naturaleza no proteica se llama COENZIMA.
Las enzimas son muy lábiles, de tal forma que pueden alterarse presentándose 2
fenómenos principalmente la INACTIVACION Y LA DESNATURALIZACION. La
inactivación es un proceso reversible que puede reestablecerse al desaparecer el agente causante
de la misma, pero la desnaturalización es un proceso irreversible, prácticamente una vez que se
ha desnaturalizado una enzima no es posible que esta recupere su actividad, especialmente
cuando esta desnaturalización ha sido muy profunda al grado de romper los enlaces peptídicos de
las proteínas.
En los organismos vivos, las enzimas son degradadas rápidamente y el organismo repone
su suministro de enzimas por nuevas síntesis.
Las enzimas se producen intracelularmente y van a parar al plasma y a los fluidos del
organismo, no se sabe con certeza porque se encuentran en la sangre. Algunas actúan en ella,
pero la presencia de la mayoría probablemente abscede a la constante destrucción celular.
1.- ACTIVIDAD.
3.- SENSIBILIDAD. A la influencia del pH, temperatura, concentración del substrato y tiempo
de exposición de la enzima sobre el substrato, que son los factores que gobiernan la velocidad de
reacción enzimática.
actualidad se pugna por el empleo de u “UNIDAD INTERNACIONAL” (UI) para expresar los
valores de actividad enzimática.
La actividad enzimática deberá indicarse como mU/ml, o bien como U/l. La unidad
enzimática no es una medida de la concentración de la enzima, sino un dato de la actividad de la
misma, en un volumen determinado, por ello debe indicarse como unidad volumen.
Es necesario tomar en cuenta que aun cuando los resultados de una determinación
enzimática se expresan en UI, solo se podrán obtener resultados similares en los diferentes
laboratorios si las determinaciones se hacen siguiendo el mismo método y condiciones es decir
empleando el mismo substrato, tampón, temperatura, pH optimo, etc.
CLASIFICACION Y DISTRIBUCION:
Las enzimas de metabolismo celular están situadas en el interior de las células tisulares y
en ellas están presentes en concentraciones muy altas. Algunas existen libres en el liquido celular
y otras están contenidas en estructuras celulares como mitocondrias y lisosomas. Cuando las
enzimas se localizan exclusivamente en un solo sitio, se llaman enzimas uniloculares, como GTP
y GLDH en citoplasma y GLDH en mitocondria. Cuando pueden estar localizadas en 2 o mas
sitios diferentes se les llama biloculares, como GOT y MDH en citoplasma y mitocondria.
Si una enzima está presente en concentraciones apreciables solo en un órgano, un
aumento en el nivel de la enzima apuntaría a la fuente de la enzima y de este modo identificaría la
enfermedad o el órgano afectado. Estas enzimas reciben el nombre de ENZIMAS-ORGANO-
ESPECIFICAS. Ejemplo de ella se tienen la Fosfatasa ácida presente en glándula prostática.
Debe considerarse que las enzimas celulares o enzimas órgano especificas serán
eliminadas de su lugar de origen en una proporción mayor a lo normal, solo cuando se presente
daño celular o una alteración de la permeabilidad celular. Además es importante considerar que el
aumento de los niveles enzimáticos no siempre debe asociarse a una necrosis celular, ya que
existen también daños reversibles o que permiten la elevación de los niveles enzimáticos
temporal, por ejemplo en hepatitis aguda, existe una relación directa entre el incremento de la
actividad enzimática del suero y la gravedad de una lesión ocurrida. Lo que constituye la base
fundamental del diagnostico enzimático.
Por el contrario las enzimas inespecíficas del plasma son diseminadas y difundidas en el
plasma inespecíficamente, inmediatamente después de su salida se producen modificaciones de la
actividad catalítica de las enzimas, la que puede disminuir o aumentar y así mismo sufrir
modificaciones en su camino. Cuando existen condiciones patológicas (enfermedades,
intoxicaciones), la membrana puede ser lesionada de forma reversible o irreversible. Tras la
lesión irreversible de la membrana celular aparece rápidamente la muerte celular. Las células
necróticas colaboran, si es que lo hacen en muy escasa medida al aumento de las enzimas en
suero; la parte principal procede de células todavía vivas. Normalmente se encuentra en el plasma
un nivel de enzimas muy constante, con las oscilaciones que dependen por ejemplo de la edad,
peso, etc. La concentración de las enzimas celulares se mantienen la desintegración normal de las
células, es decir la destrucción celular fisiológica.
Todas las proteínas están sometidas a transformación constante. Así también las enzimas
del organismo vivo se neo forman y transforman continuamente ( por ejemplo la activación del
tripsinogeno a tripsina) y finalmente se inactivan y descomponen. Al igual que las restantes
proteínas del plasma sanguíneo, se supone que muchas enzimas se desintegran hasta el grado de
aminoácido y después se vuelven a utilizar.
METODOLOGIA ENZIMATICA:
En esta exposición vamos a describir la teoría que forma base de la ejecución eficaz y
óptima de los test enzimáticos en el laboratorio clinico-quimico.
En el suero y plasma, las actividades de las enzimas varían sólo en límites relativamente
estrechos, incluso en los individuos sanos.
En muchas enfermedades aumenta la cesión enzimática desde las células del órgano
enfermo, sea debido a la permeabilidad elevada de la membrana celular, sea por la
descomposición más o menos completa de la estructura celular. Alteraciones de las actividades
enzimáticas en el plasma (suero) no solo son indicativos de trastornos sino que constituyen
además ayudas muy valiosas en el diagnostico diferencial, pronostico y valoración de la eficacia
de la terapéutica.
Todos los participantes en la reacción son incubados con el suero conteniendo las
enzimas, durante un periodo fijo, al cabo del cual se interrumpe la reacción enzimática
midiéndose, ya sea la cantidad de substrato no transformado para el primer caso, en el cual el
substrato debe tener una concentración alta, y solo una pequeña parte de este deberá consumirse
durante el tiempo de medición.
Para el segundo caso sea la medición del producto formado, y esto va asar posible solo
después de una segunda transformación química del producto o substrato a una compuesto
coloreado.
Por ejemplo la determinación de la acidad de GOT tenemos que GOT cataliza la reacción.
GOT
Aspar tato + alfacetoglutarato ----------------> Glutamato + oxalacetato
Para dicha determinación de la actividad con el test óptico, se añaden NADH y un exceso
de MDH a la solución reactiva y la reacción prosigue de la manera siguiente:
MD
Oxalacetato + NADH + H ---------------- malato + NDH
Aunque se han podido identificar más de 50 enzimas en la sangre, algunas no tienen valor
clínico o solo lo poseen en casos especiales, como la ceruloplasmina (degeneración
hepatolenticular de Wilson). Las que tienen mayor aplicación y que se determinan rutinariamente
en el laboratorio común son las siguientes: Transaminasas, Fosfatasas acida y alcalina,
Deshidrogenasa lácticas, Creatinfosfoquinasa, lipasa y amilasa. Generalmente se prefieren las
determinaciones hechas en los sueros a las realizadas en plasma, ya que algunos anticoagulantes
usados para obtención del plasma interfieren en la actividad enzimática.
MARCADORES HEPATICOS:
TRANSAMINASAS
Desde el punto de vista catabólico los aminoácidos (a.a.) constan de dos fracciones : el grupo
amino y el resto de la molécula.
La perdida del grupo amino se efectúa por : 1) transaminación, 2) desaminación.
1) El fosfato de piridoxal con el grupo aldehído se une al radical amino del ala con perdida de
una molécula de agua y formación de doble enlace.
3) Finalmente por la introducción de una molécula de agua se separa el grupo amino y se forma
un grupo cetona.,el piridoxal queda como piridoxamina.
En la segunda fase de reacción el fosfato de piridoxamina se une a un cetoácido cediendo una
molécula de agua, se reacomoda el doble enlace con la introducción de una molécula de agua,
el radical amino queda en el ácido y se reconstruye el fosfato de piridoxal.
Son enzimas representadas por proteínas simples, conjugadas y sintetizadas por células de
diferentes tejidos: Hepatocito, Miocardio, Renal, Nervioso y Musculo estriado. Las cantidades de
estas enzimas son pequeñas.
En el suero hay mas TGO que TGP . En el hepatocito la top se encuentra en el citoplasma y la
tugo se encuentra en el citoplasma y mitocondrias.
TGP:Se indica en todo proceso inflamatorio necrótico del hígado principalmente, es empleada
para descartar hepatitis viral activa.
Esta enzima tiene una concentración muy elevada en el hígado mientras que en el corazón,
musculo y riñón estas concentraciones son relativamente vagas.
Es una enzima citoplasmática del hepatocito, que se libera fácilmente cuando existe una
alteración celular. Su elevada manifestación en la ictericia de origen viral. Y su aumento
ligeramente en el infarto del miocardio e intensamente se predomina la estasis hepática por
insuficiencia cardiaca.
TGO: Esta presente en la epidermis de la piel, miocardio, musculo esquelético estriado. páncreas,
riñones, cerebro, hígado, bazo y pulmones. Los G.R. contienen unas diez veces más TGO que en
el suero.
Esta enzima es liberada en la circulación cuando hay lesión o muerte celular. Cualquier
enfermedad que provoque cambios metabólicos, provoca aumento de la TGO.
VALORES NORMALES: Edad.:0 a5 días=35 140 U/L;6 dias-3años:20 a60 U/L;3 a 6 años de 15
a20 U/L; DE 6 A 12 años: 10 a 50 U/L;12 a18 años; de 10 a40 U/L.;Adultos: 5 a40 U/L.
ENFERMEDADES:
*Hiperazohemia.
*Diálisis renal crónica.
*Ligeramente durante el embarazo.
FOSFATASAS:
A las fosfatasas que se activan mejor a un pH de 9- 11 se les llama alcalinas. Los huesos son ricos
en ellos por que abundan en los osteoblastos. Normalmente la fosfatasa alcalina total en suero
consiste de isoenzimas de origen hepático, ósea, y en algunos individuos de intestino.
Elevaciones fisiológicas de fosfatasa alcalina se observan en la infancia y en tercer trimestre del
embarazo. En esta última es a expensas de la isoenzimas placentaria.
Esta enzima cataliza la hidrólisis de monoestéres del ácido. Fosfórico; sus valores
normales por litro en suero son de 15 – 69 unidades internacionales ( U.I ) la cifra de 100
unidades se aceptan como máximo normal del incremento y en la etapa final del embarazo.
FOSFATASA ÁCIDA:-
SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:-
Las fosfatasas ácidas se encuentra presente en casi todos los tejidos del organismo,
siendo particularmente altas las cantidades de estas enzimas en próstata, estomago, hígado,
músculo, bazo, y eritrocitos y plaquetas. Las distintas isoenzimas se diferencian entre si por su
pH óptimo, P.M. , y requerimiento de activadores e inhibidores. La fosfatasa ácida prostática
(FacP ) constituye un valiosos auxiliar en el diagnóstico de cáncer prostático pero en etapas
avanzadas, cuando el tumor ha hecho metástasis, una de las formas neoplásicas de mayor
mortalidad, por lo cual en si no ha sido utilizada con prueba oportuna para dicho diagnóstico. En
este sentido, la determinación cinética de FacP usando x-naftil fosfato como sustrato ha mostrado
sensibilidad y especificidad comparable a las técnicas radioinmunológicas, con semejante poder
discriminatorio y evidente ventajas de orden práctico.
COLINESTERASA
la Colinesterasa se origina en el hígado y cundo existe alteración hepática, su concentración
disminuye en relación directa con los hepatocitos alterados. existen dos tipos : la Colinesterasa
verdadera o acetilcolinesterasa, cuya función es hidrolizar la acetilcolina en la placa motora
principal. se encuentra principalmente dentro de los eritrocitos y en las terminaciones nerviosas
de los nervios colinérgicos. es capaz de producir crisis de apnea postanestésica, cuando hay
deficiencia de esta y metabolismo insuficiente de la succinil colina. frecuencia 1/1500 pacientes .
la otra es la Colinesterasa del suero o plasma , conocida como pseudocolinesterasa que esta
influenciada por los insecticidas especialmente fosforados. su deficiencia inhibe la actividad de
la Colinesterasa del suero y desencadena transitoriamente trastornos visuales con obnubilación
mental, por lo que es de importancia en pilotos fumigadores.
USOS
De screen en el preoperatorio de pacientes con sensibilidad a los anestésicos donde la
succinil colina no despolariza los relajantes musculares y origina crisis de apnea . en los pilotos
fumigadores que emplean insecticidas a base de fosforo o carbonato. para valorar el daño del
hepatocito en hepatitis viral y atrofia aguda, donde sus niveles son tanto más bajos cuanta mayor
sea la alteración hepática .
M.C. CONSUELO CHANG RUEDA 33
FAC. DE C. QUÍMICAS/UNACH / CAMPUS IV
RANGOS NORMALES
son variables según el método empleado. con el sistema cinético con butiriltiocolina como
substrato, las cifras normales fluctúan entre 3200 a 9000 unidades internacionales.
INTERPRETACION
las pacientes que toman estrógenos o contraceptivos bajan sus niveles. la Colinesterasa
verdadera es estable en el medio ambiente hasta 80 días, se debe mantener en congelador hasta el
momento de procesarla.
TOMA DE MUESTRA
no es necesario estar en ayunas y se puede emplear el suero o plasma usando anticoagulante edta
VALOR CLINICO
de utilidad en pilotos fumigadores y en anestesia
GAMMA-GLUTAMILTRANSFERASA
con alcoholismo crónico debido a la inducción enzimática por el alcohol y al daño hepático. La
gamma-glutamiltransferasa se eleva más en alcohólicos con enfermedad hepática y existe una
tendencia a que los niveles se mantengan altos después de la abstinencia.
MARCADORES PANCREATICOS:
LIPASA:
ES UNA ENZIMA QUE HIDROLIZA LOS TRIGLICERIDOS EMULSIFICADOS. Las
cadenas de ésteres de los carbonos 1 y 3 del glicerol son preferentemente divididos, liberando dos
moles de cadenas largas de ácidos grasos y 1 mol de 2-acilmonoglicérido por mol de triglicérido.
El páncreas es el principal órgano productor de lipasa la cual es secretada en el jugo pancreático
junto con otras enzimas digestivas. Algunas lipasas se encuentran en mucosa gástrica e intestinal.
Normalmente el suero contiene baja actividad de lipasa sérica se eleva rápidamente en
pancreatitis aguda y permanece elevada por un periodo más largo de tiempo que la amilasa.
ALFA AMILASA.
En el humano la alfa amilasa es una enzima que rompe los enlaces alfa 1-4 glucosídicos presentes
en las cadenas de almidón, rompiéndolo en varias unidades. El producto final es una mezcla de
glucosa, maltosa y dextrinas.
La alfa amilasa es excretada por las glándulas salivales y pancreáticas en sus respectivos jugos
los cuales entran al tracto gastrointestinal. Esta enzima es importante para la digestión e ingestión
del almidón ; pero la amilasa del páncreas juega un papel más importante ya que la amilasa de la
saliva es inactiva en las condiciones ácidas que prevalecen en el estomago.
La alfa amilasa en sangre es excretada por el riñón y depurada renalmente con una estimación de
1-3 mL por minuto.
Los valores normales son generalmente consideradas entre 60 y 150 Unidades Somogy; valores
normales de alfa amilasa en orina son de 35 a 260 unidades por hora.
La elevación de la alfa amilasa en suero ocurre por pancreatitis aguda y otras condiciones
caracterizadas por edema e inflamación del páncreas, por incremento en la presión interna. Otras
condiciones en las que la elevación ha sido reportada incluye trauma cerebral, embarazo
ectópico, ruptura esplénica, carcinoma broncogénico y neumonía.
MARCADORES CARDIACOS
Dentro de los marcadores cardiacos tenemos a las enzimas que principalmente se encuentran en
el musculo cardíaco y por lo cual apuntan hacia dicho órgano como son:
• LD 1 (H4)
• LD2 (H3M1)
• LD3 (H2M2)
• LD4 (HM3)
• LD5 (M4)
Una isoenzima contiene 4 de estas unidades cada una con un PM vecino de 35 000.
LD1 y LD2 se encuentran en concentraciones elevadas en el músculo cardiaco, los glóbulos
rojos y la corteza renal. LD5 se encuentra en concentraciones máximas en músculo esquelético,
hígado, íleon y piel.
En el infarto agudo de miocardio la elevación de la LDH puede ser hasta 10 veces límite
superior normal, éste se inicia aproximadamente 12-24 hrs tras el inicio del dolor pectoral, y
alcanza un máximo a las 48-72 hrs. La LDH se encuentra en la mayoría de los tejidos, lo que
reduce la utilidad de su medida para el diagnóstico de IM. La medida de las isoenzimas de LDH
puede aumentar la especificidad de las determinaciones de LDH.
Significado Clínico:
Creatinfosfoquinasa (CPK) .
La creatina quinasa (CK) es una enzima intramuscular constituida por una subunidad
M (músculo) y otra subunidad B (cerebro)que sé combinan dando lugar a isoenzimas:
1. CK-MM (MUSCULAR)
2. CK-BB (CEREBRAL)
3. CK-MB (MIOCARDICA)
TROPONINAS
Muchos estudios se han centrado en la utilización de la determinación de troponina T
(TnT) y troponina I(TnI)para el diagnostico de IM. La troponina es un complejo de tres proteínas
que regulan la interacción de la miosina con la actina en el proceso contráctil:1)troponina T (39
Kda),responsablemente de la unión del complejo a la tropomiosina,2)troponina1(26.5Kda) un
inhibidor de la actomiosina ATPasa que bloquea la contracción en ausencia de calcio y 3)
troponina C (18 Kda),que une calcio en el inicio de la contracción La troponina C tiene solo
una forma y se encuentra en los músculos mientras que la Ty la I tiene cada una isoforma de
músculos esquelético y cardiaco.
es del orden de un 0.5 a un 2% . por otra parte , en TnT cardiaca no aumenta o lo hace muy
ligeramente .
De forma similar a la TnT , la TnI se libera durante un periodo de tiempo mayor que la CK-MB y
, por lo tanto, puede utilizarse de forma análoga . estudios recientes muestra que pueden tener
incluso mayor especificad de la TnT cardiaca ya que se ha indicado que es normal , por ejemplo,
la CK total llega a 74000UL y la CK-MB es de 280 µg /L, como ocurre en la Rabdomiolicis, por
lo demás, sus características son similares a las de la TnT . la CK total , la CK-MB y la
mioglobina aumenta mucho en la sangre de los maratonianos tras la carrera , a pesar de no haber
ninguna lesion miocardio ; por el contrario , la concentración de TnI no aumenta , esta prueba
puede resultar muy útil para el diagnostico de un IM en deportistas tras realizar un esfuerzo físico
intenso.
La miosina , otra proteína miofibrilar, interacciona reversiblemente con la actina durante la
contracción muscular , esta constituida por una cadena pesada con dos cadenas ligeras en cada
extremo ,existen dos tipos de cadenas , cadenas ligeras :las cadenas ligeras de tipo 1, que tienen
un peso molecular de 29 Kda y las cadenas ligeras de tipo 2 que tienen un peso molecular relativo
de 24 Kda y las cadenas ligeras de tipo 1 no son detectables en sangre de personas sanas . al
igual que la troponina , las cadenas ligeras de miosina se liberan de forma continua entre las 3 y
las 6 horas siguientes al infarto .La concentración máxima se alcanza entre los días 2 y 4, en
general la concentración de la cadenas pesadas puede aumentar ligeramente tras un esfuerzo
físico intenso. Después de un IM las cadenas pesadas tardan en parecer en la sangre periférica ,
entre 1 y 4 días tras el inicio de los síntomas . El máximo de concentración se alcanza tras unos
6 días . La vuelta a la normalidad no se observa hasta 3-4 semanas después. Uno de los aspectos
positivos de las cadenas de miosina es la relativa insensibilidad de la reperfucion de la zona
infartada en caso de re canalización de la arteria obstruida , por eso , las cadenas ligeras de
miosina pueden ser muy útiles para la determinación de la magnitud del infarto.
BIBLIOGRAFIA