Federico Rivadeneira

CAPÍTULO IX
ENVOLTURA NUCLEAR
Las proteínas como las DNA, RNA polimerasas, los factores de transcripción y aquellas que participan
del procesamiento del RNA son sintetizadas en el citosol e importadas en el núcleo. Como sabemos la
membrana nuclear es una doble membrana concéntrica con una red de filamentos intermedios (laminina)
del lado interno que constituye la lámina nuclear de unos 10-20 nm e interrumpida por los poros nucleares y
otra situada en la cara citosólica de la membrana externa. A su vez, el espacio intermembrana es
denominado espacio perinuclear y es continuo con el lumen del ER estando también la membrana externa
asociada a ribosomas. A su vez, la lámina nuclear está anclada a ciertas proteínas transmembrana y una de
sus funciones es determinar la forma
esférica.

POROS NUCLEARES:

El complejo del poro nuclear

está formado por:

 La pared del complejo:

formada por ocho columnas
proteicas que forman un anillo
de ambos lados
 Proteínas transmembrana que
amarra las columnas a la
bicapa de la envoltura.
 Serie de rayos proteicos que se proyectan hacia el interior del poro
 Fibrillas proteicas que se proyectan desde los anillos externos e internos hacia el citosol y
nucleoplasma.

El diámetro total es de unos 100 nm

por un ancho de 30 nm. Sin embargo el canal es
de unos 9 nm por lo que pasan de él, en forma
pasiva iones y moléculas pequeñas. Por eso
mismo, las moléculas más grandes requieren
de ATP y un péptido señal reconocido en la cara
citosólica del complejo.

Por esto mismo, los factores de

transcripción sintetizados en el citosol son
retenidos por proteínas chaperonas de la familia de hsp90 a la espera de una señal que induzca su ingreso.

DNA: ESTRUCTURA Y CONFORMACIONES

DNA SOBRENROLLADO:

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En bacterias, mitocondrias, cloroplastos y algunos virus la molécula de DNA es circular. Esto significa
que los extremos de una doble hebra se unen covalentemente. En la forma de B-DNA tenemos que hay 10,4
residuos por giro lo que nos da un enrollamiento de 3,4 nm por giro. En el caso de que el ángulo entre las
bases sea superior se dice que la cadena esta positivamente sobrenrrollada y en el caso de que el ángulo sea
menor la cadena está negativamente sobrenrrollada. Cada aumento o disminución en el entrecruzamiento
provoca una tensión en la cadena plegándola sobre sí misma. En bacterias el sobrenrollamiento es
generalmente negativo conteniendo 5 giros menos cada 1000 pares de bases y la adición de cada
sobrenrollamiento negativo supone un aumento de unos 9 kcal/mol por lo que está termodinámicamente
favorecido. Además se puede definir una constante para cada DNA cerrado llamada linking number (L).

TOPOISOMERASAS

Las Topoisomerasas cortan los enlaces fosfodiéster de las hebras aliviando la tensión producida por
el sobrenrollamiento. Las Topoisomerasas I cortan solo un enlace de una hebra cambiando el L en uno
mientras que las del tipo II cortan dos enlaces cambiando el L en dos.

 Mecanismo de la Topoisomerasa I (monómero 100.000D): La enzima se une a une hebra

parcialmente desenrollada uniendo una sola hebra a la enzima formando una unión
fosfodiéster entre una Tir del sitio activo y el terminal 5’ de la hebra cortada (Keq ≈ 1).
Entonces, el extremo 3’OH permanece unido (no covalentemente) y se elimina un
sobrenrollamiento para que luego, el 3’OH desplace a la Tir y se una nuevamente al extremo
5’.
 Mecanismo de la Topoisomerasa II (Tetrámero 400.000D): Enzima compuesta por dos
subunidades A y dos B que mediante cada catálisis cambia el L en -2. La unión de la enzima
induce un sobrenrollamiento positivo y debido a que el L es una constante en cada molécula
de DNA cerrada tenemos que induce uno negativo en otro lugar de la molécula. Luego, en
otro paso reproduce lo hecho por la I por lo que actúa en las dos hebras resultando entonces
en un sobrenrollamiento negativo que requiere de ATP.

RENATURALIZACIÓN DEL DNA (ANNEALING):

Los factores que determinan las tasas de renaturalización son:

1. Fuerza iónica de la solución

2. Temperatura
3. Concentración de DNA
4. Período de incubación
5. Tamaño de las moléculas que interactúan

NATURALEZA DEL GEN Y DEL GENOMA

El genoma es la dotación única de cada individuo compuesta por genes que son segmentos de DNA
cuyas características propias son denominadas alelos. El DNA presente en una célula contiene 6 x 109 pares
de bases divididos en 46 segmentos de cromatina.

COMPLEJIDAD DE LOS GENOMAS EUCARIOTAS

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En virus y la mayoría de bacterias los genes en el DNA se encuentran consecutivamente, por lo que
su renaturalización posee tasas similares. En cambio, en mamíferos las tasas son diferentes lo que indica una
diferencia en la composición y consecución de bases. En el caso de plantas y animales las curvas de
renaturalización muestran tres pasos diferentes lo que indica que la concentración relativa y secuencias de
bases son variables; esto nos determina la existencia de:

1. Fracciones no repetidas: Alrededor del 70% del genoma humano presentan tiempos de
renaturalización altos, o sea, la renaturalización es lenta debido a que las secuencias
complementarias tardan mucho tiempo en encontrarse. Estas secuencias constituyen los
segmentos de DNA que contienen más información en base a su diversidad y reflejan los
patrones de herencia mendeliana.
2. Fracción altamente repetida: Corresponden a las fracciones llamadas DNA satélite, DNA
minisatélite y DNA microsatélite. El satélite comprende secuencias repetidas de 5-100 bases. El
minisatélite comprende secuencias repetidas unas 1000-3000 veces de unos 15 bp. El
microsatélite son secuencias repetidas unas 100 veces de unos 2-5 bp.

MATERIAL CROMOSÓMICO – CROMATINA

Durante la interfase, el DNA se encuentra en forma de cromatina asociado a proteínas histonas (H1,
H2A, H2B, H3 y H4) y en la forma de collar de perlas o fibra de 30 nm. Las histonas presentan una alta
cantidad relativa de lisina y arginina por lo que son básicas y cargadas positivamente a pH celular; debido a
esto se pueden unir a los fosfatos cargados negativamente estabilizando la molécula.

Por esto mismo, las modificaciones a histonas resultan en cambios conformacionales de la molécula.
Por ejemplo, H4 es modificada introduciendo modificaciones covalentes en la región amino terminal, más
específicamente en el grupo OH de la serina que cambia la carga neta de +1 a -1. En esta región tenemos
también cuatro residuos de lisina que son acetilados (provenientes de Acetil-CoA) por la histona acetilasa.
Por lo que la acetilación y fosforilación cambian la carga neta de +5 a -2.

La cromatina presenta una estructura repetida cada 10 nm, hecho demostrado por la hidrólisis
enzimática que produce fragmentos similares y por difracción de Rx.

Cuando es tratada con una solución de baja fuerza iónica se desenrolla dando la estructura de collar
de perlas, cuyas perlas con complejos de DNA e histonas llamados nucleosomas, compuesto por dos copias
de cada histona (H2A, H2B, H3 y H4) con 200 bp y una H1 por fuera del nucleosoma. Las nucleasas escinden
un cuarto de los 200 bp y la H1, dando fragmentos conocidos como octámero de histonas de 146 bp y las
ocho histonas. Debido al empaquetamiento en nucleosomas, la longitud total se disminuye en un factor de
6.

La heterocromatina es la cromatina más condensada y

la eucromatina es la menos condensada.

COMPOSICIÓN DE LOS GENES:

Un gen es una secuencia específica ubicada en cierta

parte del genoma llamada locus y que tiene la información
requerida para fabricar un RNA o macromolécula.

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En el humano, el 10% del DNA corresponde a su 100 % de genes que son unos 100.000. A su vez, el
gen posee secuencias no codificantes (intrones) y secuencias codificantes (exones). El proceso de
transcripción genera un transcripto primario que luego es procesado para dar un mRNA. Además de los
mRNA, rRNA y tRNA existen los snRNA y scRNA, nucleares y citosólicos respectivamente.

ESTRUCTURA DE LOS GENES QUE CODIFICAN mRNA

Las características son una segmento codificador que contiene la secuencia de aa’s, un segmento
regulador y un sitio promotor. Los codificadores posen los exones e intrones; los reguladores o
amplificadores se encuentran antes del extremo 5’ y lejos del promotor que suelen poseer las cajas TATA y
CAAT a una distancia de -25 a -75. Las secuencias de terminación no han sido todavía identificadas pero
podría ser una secuencia como TTATTT que se encuentra generalmente en el extremo 3’ del transcripto
primario.

ESTRUCTURA DE LOS GENES QUE CODIFICAN rRNA

Los ribosomas se clasifican en función de su coeficiente de sedimentación y encontramos así los 28S,
18S, 5,8S y 5S. Los tres primeros proceden de un mismo transcripto primario conocido como rRNA 45S que
codifica para los primeros tres, por lo que existen dos tipos de genes. Existen unas 200 copias que codifican
para el gen rRNA 45S alineadas y separadas que se ubican en las constricciones secundarias de los
cromosomas 13, 14, 15, 2 y 22 en los nucleolos a diferencia del gen del rRNA 5S que no se encuentra en el
mismo.

ESTRUCTURA DE LOS GENES QUE CODIFICAN tRNA

Poseen entre 10-100 copias para cada tRNA que poseen un promotor formado por dos secuencias
separadas internas que se codifican. No se han observado secuencias reguladoras.