Examen coproparasitologico

• Características generales de las Enteroparasitosis

• Principales protozoosis y helmintiasis intestinales
• Ciclos biológicos tipo: a) Entamoeba histolytica
b) Taenia saginata
c) Enterobius vermicularis
d) Anquilostómidos
• Principios y utilidad de las técnicas de estudio
parasitológico de heces. El examen coproparasitario

• Elementos no parasitarios de las heces

• El método de Graham
ENTEROPARASITOSIS. Características generales

• Tracto digest humano  Numerosos parásitos:

• Protozoos COMENSALES
• Helmintos PATOGENOS

• Infestación

• Vía digestiva (mayoría de casos)

• Vía cutánea

• Formas infestantes

• QUISTES / OOQUISTES  Protozoos

ENTEROPARASITOSIS. Características generales

Mecanismos transmisión

• Infestación por FECALISMO

• Infestación por CARNIVORISMO

• Infestación s/ ciclo ANO-MANO-BOCA

• Infestación CUTANEA

Mecanismos transmisión  Relación con ciclo biológico

 INFESTACION POR FECALISMO
• Característico de parásitos de ciclo biológico MONOXENO

PROTOZOOS

a) PARASITOS b) COMENSALES
• Entamoeba histolytica • Entamoeba coli
• Giardia lamblia • Endolimax nana
• Isospora belli • Iodamoeba butschlii
• Cryptosporidium spp. • Chilomastix mesnili
• Balantidium coli • Blsatocystis hominis
• Entamoeba polecki
• Enterocytozoon spp.

HELMINTOS

• Asacaris lumbricoides
• Trichuris trichiura
• Hymenolepis nana
 INFESTACION POR FECALISMO

Medio Externo
Contam suelo
Formas
infestantes Ingestión
Quistes
Ooquistes
Huevos
Larvas

Hosp Infestado (=) Hosp Susceptible

www./dpd.cdc.gov/dpdx
INFESTACION POR CARNIVORISMO

• En parásitos con ciclos biológicos complejos, con uno o

varios Hosp. Intermediarios ( Ciclos HETEROXENOS)

• Entre los hospedadores existe una relación PREDADOR -

PRESA

• El PREDADOR soporta al parásito en su intest, donde se

realiza la f sexuada (Se comporta como Hosp DEFINITIVO)

• La Presa se infesta por fecalismo, a partir de las formas

que elimina el H D con las heces (hosp intermediario)

• En el caso del hombre la infestación se adquiere por

ingestión de carnes y pescados crudos, o insuficientemente
cocinados
 INFESTACION por la piel

Contacto con
• Algunas especies de helmintos intestinales H. Definitivo
(s/t nematodos)

• Eliminación de:
• larvas
Penetración piel
• huevos muy desarrollados

• Se transforman en LARVAS INFESTANTES

(larvas filariformes)
Migr viscerales
• Ancylostoma duodenale
• Necator americanus
• Strongyloides stercoralis Local definitiva
en intestino
Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis

Consideraciones generales:

• Numerosas técnicas de examen coproparasitario

• Finalidad diferente

• Aplicación
• General
•  Selectiva o específica

• Utilidad en función de su capacidad para:

• Concentrar elementos parasitarios

• Cuantificar la carga parasitaria
• Evidenciar difs estadíos evolutivos
• Preparar extensiones permanentes
Diagnóstico de laboratorio de las Enteroparasitosis (2)

• IMPORTANTE:

• 1) Selección técnica(s) s/ casos

• Grupo o especies de parásitos
• Fase evolutiva

• 2) Examen de varias muestras (3) por paciente

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

• Evidenciación de parásitos que:

• Viven en el tracto digestivo
• Realizan su tránsito al m ext a través del mismo

• I) No todas las técnicas son adecuadas para todos los parásitos:

• Importante conocer ciertos datos:

• Procedencia geográfica del enfermo
• Resumen HC
• Resultados otras pruebas/análisis
• Información relativa a trattos recientes

• II) Un ex aislado con result negativo no tiene ningún valor

eliminatorio

• III) La muestra debe ser examinada rápidamente

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

Para descartar una parasitosis intestinal:

• Realizar al menos 3 exámenes coproparasitarios seriados

(a dias alternos)

• Tras una adecuada preparación del paciente

• Remitiendo las muestras lo mas rápidamente posible al lab

ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

El examen PARASITOLOGICO DE HECES forma parte del

ESTUDIO COPROLOGICO, mas general, que informa sobre:

• Aspecto macroscópico de las heces

• Consistencia / agua / Veloc tránsito.....
• Color (calidad/cantidad flujo biliar)
• Presencia de sangre, mucus ......

• Aspecto microscópico restos alimenticios

• Presencia mucus, hematíes, leucos, céls epiteliales ......

• Presencia de parásitos (trofoz, quistes, huevos, larvas....)

• Elementos micóticos, su relación o proporción con

bacterias
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES

El examen COPROPARASITARIO no resulta de utilidad cuando:

• La eliminación de los parásitos no se realiza por el intestino

• La puesta de huevos no se lleva a cabo en el intestino

• Los parásitos son inmaduros o estériles, y no dan lugar a

formas de diseminación

• Parasitismo por un único individuo (esp dioicas)

• Parasitismo reciente (fase adulta no desarrollada)
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Preparación paciente

Régimen alimenticio estricto desde 72 h antes a la recogida de la

muestra ( UTOPIA ??)

Condiciones mínimas:

• Evitar medicamentos opacos no absorbibles

• Carbón vegetal
• Contrastes radiológicos (papilla baritada)
• Sustancias grasas (s/t supositorios)

• Evitar alimentos con muchos residuos

• Legumbres
• Frutas de cutícula resistente
• Vegetales con céls duras
• Frutos con semillas duras y pequeñas (p ej higos)
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES. Muestras

Considerar adecuadamente las condiciones de :

• Toma de muestra
• Asepsia?
• Momento? / lugar?
• Recipiente ?

• Envío de muestra

• En hospital
• Por correo

• Conservación de las muestras

• Provisional por frio (att trofozoítos amebas)

• Definitiva (soluciones fijadoras)
TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO

• 1) Examen directo de una pequeña porción de heces frescas

• 2) Examen después de aplicar un método de concentración

• 3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes

Examen directo

Observación microscópica minuciosa de toda la preparación

• Objetivo seco débil (10 x)

• Objetivo seco fuerte (25-40 x)
• Habitualmente no se emplea obj de inmersión
• Importante: No diluir demasiado las muestras
TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO

Examen directo

SF Lugol

Movilidad Tinción
(Trofozoítos) Vacuolas
Núcleos
TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO
2) Examen post-concentración

• Reunión en un pequeño vol los elementos parasitarios

inicialmente dispersos en una gran masa de heces
• Numerosos métodos

• Ninguno evidencia todos los tipos de parásitos, (cada uno tiene

sus indicaciones precisas)
Métodos físicos Métodos difásicos

• Por sedimentación

• Por flotación • Empleo de 2 fases no miscibles

Agua // Eter o Acetato etilo
METODOS DE CONCENTRACION
Métodos físicos

• Dilución minuciosa heces en líquido o solución de densidad:

• Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación)

• Superior (Técnicas de flotación)

• Ventajas:
• Realización muy simple
• Precisan poco material

• Inconvenientes:
• Procesos largos
• Exigen mucha manipulación
• No aplicables a series grandes de muestras

En ciertos casos se puede acelerar x centrifugación suave

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mét de sedimentación simple

• Triturar las heces (10-20 g) en agua

de grifo
• Poner la dil en una probeta de 250-500 cc
y rellenar (agua grifo)
• Dejar reposar aprox 1 h
• Deshechar sobrenadante
• Resuspender en agua de grifo
• Dejar sedimentar 45 min
• Deshechar sobrenadante
• Repetir esta op varias veces, hasta que
el sobrenadante quede transparente
• Recoger y examinar el mat sedimentado.
Hacer tres tomas:
• Superficie
• Media altura
• Fondo
TECNICAS DE CONCENTRACION. Mét de flotación

Características a considerar:

Densidad sol empleada > Dens parásitos

Película
 Concentración en superficie superficial

Importante:
• Manipular rápidamente

• Impreg huevos operculados  Sediment Sulfato

de cinz
• Alteración morfol huevos (Identificación)

Sedimento
METODOS DE CONCENTRACION

Métodos físicos. Ejemplos

Técnicas de sedimentación

• Método de sedimentación simple

• Método de Faust e Ingalls
• Sedimentación en columna alta

Técnicas de flotación

• Método de Fulleborn
• Método de Willis (flotación en salmuera)
• Método de Faust (flotación en sulfato de zinc)
METODOS DE CONCENTRACION

Métodos difásicos

• Derivados todos del mét de Telemann (1.908)

• Empleo de dos fases no-miscibles

• Fase acuosa (sol. formaldehido)

• Fase éter o disolv de lípidos (Acetato de etilo)

• Los elementos fecales y los parásitos se localizan en la fase

acuosa o en la interfase agua-éter, en función de una
característica, el balance hidrófilo-lipófilo
 METODOS DE CONCENTRACION

Métodos difásicos

• Realización :
• Dilución de las heces en agua Eter
(o el la fase acuosa)
Restos
• Adición y emulsión con el éter Líp disueltos

( o acet de etilo)
• Centrifugación suave
Formalina

• Algunos ejemplos:
• Método de Telemann
• Método de Rivas
Sedimento
• Método de Ritchie Parásitos
• Método de Blagg, Schloegel,
Mansoer y Khalaf
 Acetato de etilo

Restos fecales y grasa

Formalina

Sedimento (Parásitos) 12
 Examen directo, conc por
flotación y tinción de
hematoxilina-férrica
%
Examen directo y
d conc por flotación
e
t
Examen directo
e
c
t
a
d
o

Número de exámenes

Incremento de la detección de Entamoeba histolytica en relación

al número de muestras fecales examinadas y a las técnicas empleadas
OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS

Técnicas del Examen Coproparasitario. Resumen

1.- Observación macroscópica

2.- Observación microscópica

2.1.- Observación microscópica de preparaciones “en fresco”

(entre porta y cubre)
• Muestras de heces directamente en SF o Lugol

• Muestras de técnicas de concentración

2.2.- Observación microscópica de preparaciones teñidas,

permanentes o no, que permiten la conservación y la
observación cuidadosa y detallada de los parásitos
OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS

TINCIONES ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES

• Utilidad: Demostración de ooquistes de Cryptosporidium spp.

Evidenciación de Cyclospora spp.

• Aplicables a frotis de heces (tb ciertos concentrados)

• Técnicas: Las mas empleadas son la de KINYOUN y una

modificación de la ZIEHL-NEELSEN

TINCION DE HEMATOXILINA-FERRICA

• Utilidad: Observación detallada de quistes, pero s/t de

trofozoítos de protozoos.
Si se realiza montaje, buena colección permanente
Exige una realización cuidadosa,
COLORACIÓN DE KINYOUN (Cryptosporidium // Cyclospora)

• Fijación frotis: Metanol 30 seg

•Tinción : 5 min (frio) con sol de Fuscina básica

• Fusc básica 4g
• Fenol 8g
• Etanol (95%) 90 ml
• A dest 100 ml

• Lavado
• a) Etanol 50%: 3-5 min
• b) Agua corriente

• Decoloración: Acido sulfúrico 1%: 2 min

• Contracoloración: Azul metileno Loeffler: 1-2 min

• Azul de metileno 0,3 g
• Alcohol 95% 30 ml
• KOH 0,01% 100 ml
ESTUDIO PARASITOLOGICO DE HECES.

Elementos no parasitarios de las heces

• Restos alimenticios semi-digeridos

• Células epiteliales (mucosa intestinal)

• Células sanguíneas

• Leucocitos (úlceras intestinales)

• Macrófagos  amebas patógenas
• Hematíes

• Bacterias

• Hongos
Elementos no parasitarios de las heces (2)
RESTOS ALIMENTICIOS
• Tejido conjuntivo
• Fibras musculares estríadas (carne) Att tamaño / ángulos
• Grasas neutras  Glóbulos refringentes tamaño variable
• Acidos grasos  Agujas finas
• Almidón
• Crudo: Granos en capas concéntricas
• Céls reserva amilácea (s/ procedencia)
• Celulosa
• Digerible: Masas celulósicas (céls reserva)
• No digerible: Traqueídas, pelos vegetales, polen etc

CRISTALES
• Origen alimentario (oxalato de calcio)
• Endógeno (Ox calcio, fosfato amónico-magnésico,
Charcott-Leyden)
• Medicamentos
 OTROS EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE
ENTEROPARASITOSIS

1.- Examen directo de líquido duodenal

• Se obtiene por sondaje duodenal o con càpsula entérica o test

del cordón"“Enterotest”

• Observación
• Fresco (directo o tras centrifugación)
• Extensiones (frotis) coloreados (tinc AAR)

• Utilidad / Rendimiento
• Trofozoítos de Giardia lamblia
• Ooquistes de Isospora y Cryptosporidium
• Huevos de Fasciola hepatica
• Larvas de Strongyliodes stercoralis
2.- Técnica de Graham (Mét de la cinta adhesiva o espátula adhesiva)

• Método mas empleado para el diagnóstico de la oxiuriasis

o enterobiasis (Enterobius vermicularis)

• Observación microscópica del material recogido de la zona

perianal, por aplicación de una sup adhesiva (celofán o similar)

• La cinta se dispone sobre un soporte rígido (depresor lengua),

con la sup adhesiva hacia el exterior

• Se aplica varias veces sobre la piel, en los márgenes anales

• Se envia al laboratorio y se observa a microscopio (10X)

IMPORTANTE
• Realizar al menos 3-5 tomas antes de informar un resultado
negativo
• Realizar la toma de muestra a 1ª hora por la mañana, antes
de salir de la cama