TEMA DE REVISION

LA APOPTOSIS EN BIOLOGIA Y PATOLOGIA.

Dr. Rolando Calderon Velasco*

INTRODUCCION

En 1972,Jhon Kerr,Andrew Wyllie y Alistar Currie, publicaron en el British Journal of Cancertl) un articulo pionero escribiendo una forma de muerte celular a la que denominaron apoptosis, nombre tornado del griego que significa la caida de los petalos de una flor, que es hoy dia uno de los topicos mas estudiados en biologia. Los autores escribieron sabre una forma de muerte celular, un suicidio celular programado que es diferen1e del conocido proceso de muerte celular denominado necrosis. La necrosis se produce cuando una celula recibe una injuria aguda y se rornpe, produciendo inflamacion de los tejidos circundantes y dejando restos celulares que son limpiados par celulas que acuden a la lesion.

La muerte celular programada, par el contrario, es lirnpia y rapida y causa cambios estructurales que hacen que la celula se encoja y sea rapidamente digerida par las celulas vecinas. Este aspecto ha sido revisado recientemente(2). Las celulas que van a morir despliegan senales que atraen a los macr6fagos. Una de esas seriales es [a fosfatldil serina (FS), un fosfolipido normalmente limitado a la parte interna de la membrana celular, que, enesta oportunidad, es desplegad 0 en la parte externa. Un receptor en los macr6fagos reconoce la FS y orquesta la desaparici6n de la celula «suicidada».

Por mucho tiempo se ha entendido que este suicidio celular juega un rol importante en esculpir los tejidos en el ernbrion en desarrollo(3l, par ejemplo, la Icrmacion de los dedos de las manos y de los pies en el feto requiere la remoci6n par apoptosis de la membrana que los une. r ZI apoptosis juega un papel amplio en los procesos de la vida normal y su falla contribuye a una variedad de enfermedades, como veremos mas adelante, incluyendo entre elias al cancer, las enfermedades neurodegenerativas y la autoinmunidad.

(*): Profesor Emerita de la Universidad Cayetano Heredia.

Acadsrnlco de Nurnero de la Academia Nacional de Medicina.

ANTECEDENTES HISTORICOS.

La muerte celular cornenzo a cansiderarse como un fen6meno fisiol6gico importante dentro del desarrollo del organismo poco despues del descubrimiento, a mediados del siglo XIX, de que los organismos estan compuestos par celulas,

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Figura 1.

1. Presencia de ligandos que inducen /a muerte a receptores en la superficie de la cetuk:

2. Estres celular par expasici6n 0 lu radiocion.

3. Sustancias qufmicas 0 infecciones uirales.

4, Inducci6n de la apoptosis par iinfocitos citotoxicos a troves de fa granzima.

5. Seiiaies intrfnsecas inician /a apoplosis Q troves de las mitocondrias.

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LA APOPTOSIS EN BIOLOGiA Y PATOlOGiA

Las prlmeras observaciones de muerte ceJuiar tisioloqica fueron desarrolladas por Vogt en 1842.

EI concepto de muerte celular program ada fue acufiado por Lockshin y Williams en 1964 y describia la muerte de las celulas que ocurria en momentos y Jugares determinados como eventos programados dentro del plan de desarrollo del organisrno.

En 1972, Kerr, Wyllie y Currie (1 ) establecieron las diferencias entre los dos tipos de muerte celular: necrosis y apoptosis, Seglin estos autores, 1a muerte par apoptosis respondia a un proqrama de muerte intracelular que podia ser activado 0 lnhibido por una variedad de estfmulos tanto fisiol6gicos como patoloqicos,

En 1982 se publicaron los estudios geneticos en el nematode caenorhabditis elegans en los que se describieron los genes encargados del control y la ejecuci6n de l~ apoptosls en este organismo. Gracias a la homologfa existente con organismos superiores, La apoptosis en este nematode ha sido tomada como referencia del proceso en otros organismos (4).

Veamos ahora, en forma resumida algunos aspectos del proceso de apoptosis.

CARACTERISTICAS HISTOLOGICAS.

Las caracteristicas histol6gicas de la apoptosis son: el citoplesrna comienza a encogerse, hay condensacion nuclear y en algunos casos, el nucleo toma la forma de «herradura». Todos estes cambios preparan a las celulas para la faqocitosis por los macr6fagos(2}. Con el fin de promover este fen6meno las celulas apopt6picas efectuan cambios en la membrana celular.

Estos carnbios en la membrana se obsarvan histoloqicamente como ampollas ("blebs" en la literatura inglesa).

RECEPTORES DE MUERTE

Los receptoras de muerte son receptores de 1a superficie celular que transmiten sefiales de apoptosis iniciadas por ligand os especfficos. Activan la cascade de la apoptos.is segundos despues de haberse ligado, Estes re:ceptores pertenecen a la familia de genes del Factor de Necrosis tumoral alfa. Producido por las celulas T y los macr6fagos activados en respuesta a la infecci6n. EllNF -puede tener varios efectos, En algunas celulas !leva a la activacl6n del factor nuclear que induce genes proinflarnatorios e inmunomoduladorcs. Puede inducir apoptosis. Se asocia dentro de la celula con molecules adaptadoras, 10 que lleva a la recolecci6n y division de la procaspasa 8. Tambien puede influlr sobre la caspasa 2.

120 Revista Peruana de Cardiologia Vol. XXXI N° 2

Figura 2. Seiializaci6n pot eI Factor de Necrosis Tumoral- 1. Alligarse tlene varios efectos. En algunos celulas activo el factor nuclear Kappa beta que lIerm ala indurci6n de gene.s pro-inf/amatorios e inmunomoduladores. En algunos celulas induce la apoptosis.

CD951Fas.

Elligando para el CD 95 es un trimero que en asoclacion con el receptor forma dominios de muerte (death domains) que a su vez se liga a la procaspasa 8 que es cortada para producir caspasa 8 que a su vez actrva la caspasa 9 que €s una de las llamadas cespasas de ejecud6n.

A

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FADO

Figura 3. Seiia/izaci6n par celuios I Elligando es un trimero que permite que se asocien dominios de muerte, 10 que permite 10 Jorroacion de la proteina adoptodora (FADD), La FADD, contiene un factor que permite la asociadon can /a caspasa 8 /a que activa las caspasas de ejecuci6n como la caspasa 9.

TRAIL·TRAIL (TNF-related apoptosis inducing ligand) es similar el CD95. Sus receptorcs son el DR4 y eI DRS, dado que estos receptores son contitutivos en muchos tejidos, S8 ha sugerido que hay mecanismos de proteccion en las cehilas contra la apoptosls, uno de los posibles mecanismos es la presencia de receptores falsos (decoy) que compiten con el DR4 y DrS por ligarse al TRAil (5).

LAS PROTEINAS Bcl-2.

Son una familia de proteinas reladonadas en la respuesta a la apoptosis, Algunas de elias (bc1-2 y bel-XL) son anti epoptoticas rnientras que otras (Bad y Bax) son pro apopt6ticas. La sensibilidad de las celulas a la apoptosis depends del balance entre estas protemas. De eso depcnden tambien la mayor 0 rnenor sensibilidad de las celulas a la epoptosis,

Las proteinas pro apoptoticas se encuentran en el ot0501, donde actdan como sensores del dana celular a del estres, Si hay estres celular se trasladan a [a membrana de la mitocondrta, como explicaremos en la seccl6n sabre la mitocondria y su papel en la apoptosis (6).

ROL DE LA MITOCONDRIA.

La mitocondriajuega un irnportante rol en la regulaci6n de la muerte celular. Los miembros anti apoptoticos de la familia de proteinas Bcl-2 y Bel-Xl estan localizados en la parte exterior de [a membrana de la mitocondria, Muchos de los miembros pro-apoptoticos de Ia familia BCl·2 como Bad y Bax tambien realizan sus efectos a traves de la mitocondria, sea interactuando con el Bel- 2 y 81 Bel Xl 0 par acci6n directa sabre 10 membrana de la rnitocondria. (7)

Las mitocondrias tienen la habilidad de promover la apoptosis, dejando salir el citccromo C que junto con Apf-l (apoptotic proteases activating factor-l) y e1 ATP forman un complejo (apoptosoma (8) que Ileva a 1a activaci6n de la caspasa 9 y de la cascada de las caspasas], Se ha sugerido que el Bax forma un poro a traves de la membrana que neva a la salida del citocromoC y del AIF (apoptosis inducing factor).

LA PROTEiNA P53.

La protefna P53 es la que ordena la ejecuci6n de la apoptosis en respuesta a los agentes que darien el DNA Se ha dernostrado que la P53 requiere del concurso de las protefnas P63 y P73 para realizer 5U accion. Estas proteinas actuarian en conjunto 0 en forma paralela a la P53 para lnducir 1a apoptosis. Estudios gem>ticos en animales deficientes en estas proteinas asi 10 han confirmado (9).

Recientemente 5e ha sugerido (10) (I 1) que drogas que en realidad son pequerias molecules pueden ser

DR. ROLANDO CALDERON V.

dlsefiadas para activar la P53 impidiendo le union a un regulador negativo llamado Mdm 2.

La protefna Mdm 2 se Jiga a un amino terminal de la P53 en una relad6n protejna-proteina que bloquea la actMdad de la P53.

Normalmente la protefna P53 aetna como un factor de lrasCrlpclon, determinando la expresion de una baterfa de genes que detienen el cido celular 0 inidan el proceso apopt6tico.

Se trataria de conseguir tratamientos altamente selectivos para el cancer, sin los inconvenientes de 1a quimioterapia tradicional.

CASPASAS.

Las caspasas son una familia de protefnas que son los principales efectores de la apoptosis. Las caspasas son un grupo de cisteina-aspartato proteasas que existen en la celula en forma inactiva Hamada zimogeno,

La induccion de la apoptosis por la via de los «receptores de muerte» ya mendonados resulta en la activaci6n de una caspasa inicial como la 8 0 la 10. Estas caspasas activan otras caspasas en cascada. La cascada eventualmente Jleva a la activaclon de las caspesas efectoras como la 3 y la 6. Estas caspasas son responsables por el corte de importantes protefnas celulares que llevan a los cambios celulares obsarvados en la apoptosis. Aparte de la union con los receptores de muerte hay otros mecanismos a traves de los cuales la cascade de las caspasas puede ser activada. Asf la Granzima B puede ser entregada a las celulas por linfocitos cititoxicos T y es capez de activar las caspases 3,7,8 y 10.

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Figura 4. Rol de las mitocondrias. Inducen la apoptosis a traves de Ill. salida de citocromo C que junto con el Ap!)f -1 (Factor inductor de Ill. apoptosis 1:, y el ATP forman el apoptosoma que active Ill. caspasa 9 y la cascada de las caspeses,

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LA APOPTOSIS EN BIOLOGiA Y PATOLOGiA

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R(l(:lutamiento d. f 1& PfOI:aSpasa

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Figura 5. Formaciol1 del apoptosoma.

'EI citocrorno C que sale de las rnitocolIJrias, se liga a la 'protefna dtoso/ica Apaf ·1 que estabilizada por su union a ; ATP les permita csociorse entre elias. Esio resulta en fa ; formaci6n de una estrud(1ra similar a una rueda conocida como apoptosomo que permita rec/utar siete moleculas de -pro-ccspcsc 9.

'La salida de! citocromo C de las rnitocondrias !leva ala ; activacion de la caspasa 9 y luego a la activaclon de la 'caspasa 3.

lEI efecto es mediado a traves de la formacion del 'epoptosome, un complejo multiproteico formado por el 'citocromo C, el APf 1 (apoptotic protease activating 'factor 1) la procaspasa 9 y el ATP

El apoptosorna permlte la union con la procaspasa 9. ~Se unen dos apoptosornas y act ivan la caspasa 9 (8) (12) (13) (14).

EFECTOS NUCLEARES DE LA APOPTOSIS

Uno de los efectos mas significativos de la apoptosis es la division del DNA de los cromosomas en pequeiias unidades. La enzima poly ADP ribosa polimerasa 0 PARP fue la primera protefna identificada como subtrato para las caspasas. La PARP esta comprometida en la reparaci6n del DNA y sus funciones. Esta habilidad de reparar el DNA es irnpedida despues que la caspasa 3 rompe el PARP.

Otro mecanisme es la activacion de la enzima topoisomerasa II que es esencial para la replicacion y reparaci6n del DNA Las caspasas inactivan esta COlima.

122 Revista Peruana de Cardiologia Vol. XXXI N~ 2

Las "lamins» son proteinas intranudeares que mantienen Ia forma del nucleo y median las interacciones entre la cromatina y 10 membrana nuclear.

La degradaci6n de la cromatina por la caspasa 6 resulta en la condensacion de la cromatina y la fraqrnentacion nuclear que se observa en la apoptosis.

La fraomentacion del Dl\'A es causada par una enzima Hamada CAD (caspase activated DNase} que existe normalmente en una forma inadiva (lCAD).En la apoptosis el ICAD es roto par las caspasas y e! CAD queda libre, (15)

ROL DEL 6XIDO NITRICO

El Oxido Nitrico es una importante molecule de senalizacion que actua en muchos tejldos para regular diversos procesos que lncluyen la vasodilatad6n, la fund6n neuronal, la mflernacion y la funcion inmune. Se ha demostrado que el6xido mtrico esta envuelto en la regulaci6n de 10 apoptosis. Se ha demostrado que puede inducir 0 proteger contra la apoptosis en diferentes clases de celulas, Se ha demostrado que inhibe la apoptosis en: leucocitos, hepatocitos, celulas del trofoblasto y en las celulas endoteliales. La haria a traves de diferentes mecanismos como la nitrosilacl6n de diferentes caspasas, incluyendo las caspasas 3, 1 y 8. Otro mecanismo serta activando la protefna p53, regulando hacia arriba la "Heat shock protein» 70 y consecuentemente bloqueando la aproximacion de la caspasa 9 al apoptosoma, regulando hacia arriba las proteinas Bel 2 y BCI X con la consecuente inhibicion de la salida del cirrocromo C de la mitocondria. (16)

LA ENZIMA PKC (PROTEiNA KINASA C) EN LA APOPTOSIS

La enzima PKC es una enzima encargada de fosforilar, Se he afirmado que la apoptosis depende de la actlvaci6n de la PKC, ya que hay muchas formas de apoptosis en que la enzima se desplaza y se active. Sin embargo, hay otro tipo de celulas que pueden entrar en apoptosis sin modiflcaciones de la PKC.

EI CMAP (ADENOSIN MONOFOSFATO CICLICO EN LA APOPTOSIS)

Es una molecule mensajera que cuando Uegan ciertas senales a los receptores de membrana, informa a otras enzimas y producen diversos fenomenos intracelulares. Se ha observado variaciones del CMAP clclico en momentos en que se produce la apoptosis. Sin embargo, el fenomeno no se observa en todas las celulas (17).

DR. ROlANDO CALDERON V.

EL CALCIO Y EL PROTON

Las molecules, sabre todo las macromolecules como el ADN el ARN y las protefnas mantienen una distnbucion de cargas eieciricas muy cornplejas que son las responsables de que adopten la confiquracion especial deterrninada. Cuanda se les acerca un ian, se altere la distribucion de 105 campos clectriccs de las macromolecules que acioptan una configuraci6n distinta, con 10 que exponen a dejan de exponer los sitios en los que se comblnan oon otras molecules para lIevar a cabo una reaccion quimicaa.

Ast, hay protein as que 5610 se combinan con glucosa si previamente se asocial". con el ion sodio,

Entre los iones mas distorsionadores de la configuraci6n de, las protefnas figuran el Ca2 y el H + .

Una de las reacciones que ocurren cuando se activan los genes de muerte es que aumenta 1a concentraci6n de Ca2, que antra en una cantidad inusitada y activa enzimas (endonudeasas) que cortan las molecules de ADN. Hay otras enzimas, las ribonucleasas) que conan elARN (18)

LA APOPTOSIS Y EL SISTEMA CARDIOVASCULAR

En el ventrfculo derecho ocurre una rernodelacion fisjoiogica despues del nacimiento, cuando ya este ventrfculo no tiene que cumplir su funcion hemcdlnamica intrauterine, Una cantidad importante de celulas de ese ventrfculo mueren de manera programada despues del nacimiento. Esto suele durer unos dfas pero en ciertas

. condiciones. se prolonga indefinidamente y ocurre la denominada miocardiopatfa de Uhl, caracterizada par una dilatacion extrema del ventriculo derecho oon la consecuente insuficiencia ventricular derecha,

Otra entidad donde se ha demostrado muerte celular program ada es en la miocardiopatia dilatada, especialmente en su forma idtopatica. Este proceso de apoptosis puede durar mucho tiempo y SI no hay replicacicn celular compensadora, alrededor del cmcuenta por dento de la masa ventricular se perderfa en un ano. En la remodelaci6n post infarto, esta muerte programada de tejido viable se ha demostrado que en tejido vecino contiguo a la necrosis post infarto, hay celulas apoptoticas,

Un buen numero de factores presentes en el corazon insuficiente por ejemplo, las citoquinas infiamatorias, las especies de oxigeno reactive, el Oxido nitrico, la hipoxia, [a reperfusion los factores de crecimiento y e1

estirarniento del tejido esnrnulan la apoptosis en una variedad de celulas entre eUas las del miocardio, (19) El endotelio vascular esta rernodelandose constantemente par apoptosis y replicacion. En la hipenensi6n arterial hay exceso de apoptosis que a su Vel favorece la migracl6n y el crecimiento del rmisculo lisa arteriaL 10 que favorece la aparicion de ateromas.

APOPTOSIS Y ENVEJECIMIENTO

EI estres oxidativo juega un rol primario en la fisiopatologia del proceso de envejecimiento. La teoria de los radicales libres como productores del envejecimiento la Jiga con el dana producido por los radicales super6xido y otros oxidantes generados primariamente en la respiracion mitocondriaL

La apoptosis tarnbien influencia el envejecimiento a traves de la muerte celular programada de las celulas T, los cardiomiocitos, las neuronas y OITO tipo de celulas(20). Celulas T: La apoptosis es una parte fundamental de la maduraci6n y selecci6n de los Jinfocitos T, las celulas que se ligan a antigenos del propio organismo sufren, en 81 timo, 81 proceso de apoptosis. Estudios recientes indican que con el avance de la edad, defectos en la apoptosis de las celulas T pueden relacionarse can el aumento de los desordenes autoinmunes y la susceptibilidad a las infecciones, En otros estudios los linfocitos de sujetos viejos sobreexpresan las molecules relacionadas can la apoptosis.

Cardiomiocitos: La apoptosis puede tener tembien un efecto en la disminuci6n de la fund6n cardiaca que se presenta con la edad. En el proceso de envejecimiento el coraz6n pierde un significativo numero de miocitos. La apoptosis de los cardtorniocitos puede ser prevenida por ciertas drogas y por terapias de intervencion como el ejercicio y el aurnento en la inqestion de antioxidantes. Recientes estudios sugieren que el factor de necrosis tumoral (TNF) causa un rapido aumento en las especias reactivas de oxigeno y por 10 tanto apoptosis en los miocitos y en las celulas endoteliales. Estudios de drogas que se usan para tratar la insufldencia cardtaca, como el carvedilol tienen efcctos antioxidantes y antiapopt6ticos, adem as de su efecto sobre los betareceptores. Otras drogas como el enalapril, en estudios S8 ha demostrado que disminuyen la apoptosis. (21 J

NEURONAS Y APOPTOSIS

Estudios recientes han demostrado que con el envejecimiento hay" una disminucion en el ruimero de neuronas encontrandose las caracterfsticas morfol6gicas

Revista Peruana de Cardiologia Mayo· Agosto 2005 123

LA APOPTOSIS EN BIOLOGiA Y PATOLOGiA

de apoptosis como e1 arrugamiento celular y la condensaci6n de la cromatina,

La apoptosis es un factor notable en enfermedades como la enfermedad de Parkinson 0 la enfermedad de Alzheimer 122,23). En la enfermedad de Parkinson, se ha observado un estado de estrcs oxidative debido a la producci6n de radicales hidroxilo par la mitocondria y coincidentemente se ha encontrado un aumento de la superoxido dismutasa que protege contra el estres oxidative, La apoptosis se ha asociado a la enfermedad de Alzheimer, que se caracteriza por el desarrollo de placas amiloides. Se estima que estas placas se producen por una defectuosa conforrnacion de la proteine precursora del amiloide beta, en esta situacion estarfan envueltos los radicales libres ya que la proteina precursora produce radicales libres. Este estres oxidative llevaria a la perdida de neuronas. (24)

Ademas el efecto neuroprotectivo de los estrogen os seria debido al aumento en la expresi6n de la proteina anti apopt6tica Bcl·XL, 10 que reducirfa la apoptosis.

APOPTOSIS Y EJERCICIO

EI ejercicio extenuante estimula una variedad de senales, Como el aumento en la secreci6n de glucocortieoides el aumento del calcio intracelular y el aumento de las especies reactivas de oxigeno, todo 10 eual puede inducir la apoptosis.

Sin embargo, S8 propone que 1<1 muerte de las celulas por apoptosis inducida por el ejercicio en tejidos metabolicamente muy activos como el corazon y el musculo esqueletico puede ser un proceso normal para remover celulas dariadas.

La excesiva produccion de energfa por la mitocondria con el consiguiente aumento en la produccion de radicales libres puede contribuir a la apoptosis. Estudios en humanos han demostrado la quiebra de las hebras del DNA en los linfocitos despues del ejercicio. Para contrarrestar este efecto el organismo aumenta la produccion de antioxidantes y enzirnas antioxidantes. La inactividad de los musculos esqueleticos puede indueir la apoptosis como se ha observado en pacientes con insuficiencia cardiaca.

APOPTOSIS EN LA OSTEOPOROSIS

Esta bien establecido que todos los osteoclastos mueren por apoptosis y.que esta puede ser apresurada 0 detenida por una serie de factores. Los estr6genos y los androqenos promueven la apoptosis de los osteoclastos. Inversamente la apoptosis de los osteoclastos se retrasa par la deficiencia de estr6genos.

124 Revista Peruana de Cardiologia Vol. XXXI N° 2

De otro lado la estimulaci6n de la apoptosis de los osteoclastos es el mecanismo de acci6n de los bifosfonatos.

Apoptosis de los osteoblastos: del 40 al 60 % de los osteoblastos, mueren por, apoptosis. EI resto son convertidos en celulas de revestimiento 0 son internalizados como osteocitos. Este proceso es apresurado por el exceso de glucocorticoides.

Los estr6genos y los andr6genos ejercen efectos antiapopt6ticos en los osteoblastos y en los osteocitos.

La apoptosis de los osteoblastos es retrasada par la calcitonina y los bifosfonatos.

La modalidad terapeutica optima para le osteoporosis, especialmente para pacientes que ya han perdido masa osea es un agente anabolico que restaure la masa osea. Hay dos agentes que aumentan la masa Osea. La hormona paratiroidea(25j y la prostaglandina E. que 10 hacen reduciendo la prevalencia de la apoptosis.

E[ remodelamiento del hueso es favorecido par la administraci6n de hormonas tiroideas, tanto [a actividad osteoblastica como la actividad osteoclastica aumentan, pero, si las concentraciones de hormonas tiroideas son elevadas, prevalece [a actividad ostcoclastica, Para algunos autores las dosis supresivas de hormona tiroidea que se usan como tratamiento en el cancer de tiroides no tiene~ efecta significativo sabre la masa osea.

APOPTOSIS EN EL ACCIDENTE CEREBRO-VASCU LAR

Cuando el aporte de sangre a una zona del cerebro esta bloqueedo, como sucede en el accidente cerebra-vascular, las neuronas, en el area mas severamente afectada mueren par isquemia. Pero Gque causa 1a perdida mas gradual de las neuronas en la zona par fuera del centro de la lesion, en la que el aporte de oxfgeno esta reducido pero no eliminado? Parece ser que la isquemia parcial desencadena el proceso de apoptosis. (26) En experimentos en animales se han eneontrado caractertstices de la apoptosis en estas cclulas. Algunos neuroloqos no usan el termino apoptosis, prefieren llamarla "muerte inducida par las caspasas»

Esto ha lIevado a algunos autores a sugerir que los inhibidores de las caspasas deberian estar entre la lista de drogas potenciales para el tratamiento del ACV.

En forma experimental en ratas, se han utilizado inhibidores de la sintesis de las proteinas, como la ciclohexamida, pero algunos la consideran inespecffica. Algunos estudios han demostrado que las caspasas juegan un rol en la muerte de las celulas ya que, usando inhibidores de las caspasas disminuy6 el area del ACV en casi un 50%.

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OR~ ROLANDO CALDERON V~

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Otro tipo de factores a considerar, son las interluquinas .. Asf se ha demostrado que 1a actividad de la interluquina

IBaumenta en el cerebrodespuesdelACV. Cuandose bloquea 1a accion de la interluquina con un antagonista se reduce el dana en un 50%. Basandose en investigaciones en ratas eJ1 que los recien nacidos han sido privados de oxigeno, los cerebros muestran signos de apoptosis. Se ha sugerido explorar la posibilidad de

utilizar inhibidores de las caspasas para prevenir la paralisis cerebral en bebes que han sufrido isquemia en el patio a en aquellos que pesan menos de 1500 gramos que tambien sufren isquemia cerebral debido a inmadurez en su sistema respiratorio,

Se esta experimentando en ratas para tratar de comprobar esta posibilidad ..

Otra posibilidad a conslderar es la actividad pro inflamatoria de las caspasas. (27)

..

protefnas que tienen como tarea cortar proteinas como

la b (protefna precursora del beta arniloide) . (28)

APOPTOSIS Y ESCLEROSIS LATERAL AMIOTROFICA.

Algunos investigadores han encontrado que 105 cerebros de pacientes COl1 Enfermedad de Alzheimer contienen neuronas que rnuestran ciertos slgnos caracleristicos de la apoptosis, como las secciones del ADN~ No hay buenos

rnodelos animales de enfermedad de Alzheimer, ni se ha podido probar s1 los inhibidores de la apoptosis pueden proteger contra la muerte celular en la enfermedad de Alzheimer, 51 esto se llegara a demostrar se podnan descubrir nuevas drogas que, a1 inhibir la apoptosis mejoren ia enfennedad.

Se ha demostrado que el beta amiloide provoca que las celulas en cultivo mueran por apoptosis,

Perc el beta amiloide, no es la unica ralacion de la enferrnedad de Alzheimer con la apoptosis, Se ha serialado que las presenilinas puedcn regular la apoptosis.

Los genes de estas proteinas estan alterados en alqunas formas hereditarias de enfermedad de Alzheimer. Se piensa que las presenilinas mantienen los frenos de la apoptosis y que formes mutadas interfieren COl) esta accion, Se ha encontrado que la protaina p53 que promueve la apoptosis impid€ la produccion de presenilina 1 que es norrnalmente anti apoptotica. Esta misma accion sobre las presenilina se ha demostrado para las caspasas. Estos hallazgos suqleren que si encontrara la forma de evitar el «corte» de las presenilinas se podria evitar la acclon de las caspasas y por ende la apoptosis.

...

Hay dos genes presenilin 1 Y presenilin 2~ localizados,

respectivamente1 en IDS cromosomas 1 Y 14~ Dtsrupciones en estes genes causan una forma muy agresiva de enfermedad de Alzheimer. AmbOS genes codifican para

\.

Entre las enfermedades neurodegenerativas mas

devastadoras esta la Esclerosis Lateral amlotroflca, que acusa una sorprendentemente rapida perdida de neuronas motoras en la corteza, en el troneo cerebral y en la rnedula espinal con la consiguiente paralisis y rnuerte,

Una forma familiar de la enterrnedad, puede ser atribuida a mutaciones en el gen SOD1 que codifica la enzima citosolica antioxidante superoxldo dismutasa.

AJ comienzo se penso que esto disminuia la protecci6n contra el estres oxidative, disminuyendo asi la protsccion a las neuronas motoras. Pero en ratones Que no tienen

~

la superoxido dismutasa no se presenta la enfermedad,

mientras que en ratones transqenicos que sobreexpresan el gen si presentan lao enfermedad,

Se ha presentado evidencia que una mutaci6n del 5001 causa. en ratones. la muerte de la neuronas motoras

~ ~

APOPTOSIS V ENFERMEDAD DE ALZHEIMER.

por apoplosis a traves de las caspases,

En e] mismo sentido la sobreexpresion del BclM2 que es

un inhibidor mitocondrial de la apoptosis protege contra la perdida de neuronas motoras,

Como se ha expresado en otra parte de este articulo, las mttocondnas segregan el citocromo C que actva la caspasa 9 que a su vez activa la caspasa 3 que «ejccutala apoptosls.

Li y col han demostrado que un pequefio peptide que es inhibidor de las caspasas, denominado VAD-fmk bloquea todas las caspasas conocidas y aetna en varies puntos de la cascada de activacion de las caspasas. Tambien disminuye la interluquina 1 B~ 10 qll€ sugiere que fa apoptosis es un proceso que puede ser influenciado pOT agentes inftamatorios como fa citoquma mencionedas. Estos hallazgos abren la posibilidad de encontrar otras drogas que influencien el proceso de apoptosis. (29)

APOPTOSfS Y CANCER~

La relacion entre apoptosis y cancer no se estableci6 hasta 1988 en que se dernostro que el gen bcl-2 bloquea la muerte de las celulas B en el linfoma folicular. Este gen produce una proteina que bloquea la apoptosis.

Se dernostro asi que las celulas tumorales tarnbien pueden desarrollarse irnpidiendo fa muerte celular programada,

, "'tI::I!P"'"

Revista Peruana de CardioloQia Mayo ~ AgOStO 2005 125

lA APOPTOSIS EN BIOlOGiA Y PATOlOGiA

Se establecio tambien que el aumento en la produccion de la proteina bc1-2 se presenta en vatios tipos de cancer: leucemias, linfomas, colon y prostate.

Adernas este aumento causa resistencia a los agentes quimioterapeuticos.

Se determine que la proteina bc1-2 se ubica en la parte extema de la mitocondria e impide la salida del dtocrorno C, como ya ha sido explicado en otra secci6n de este articulo.

Pero hay otras proteinas como la p53 que sirve tambien como un importante supresor de tumores ya que bloquea la division celular de una celula dan ada 0 desencadena la apoptosis a traves de la salida del citocromo C.

En 50 a 70% de los canceres la protefna p53 es deficiente(30). Adualmente hay en desarrollo ensayos cllnicos probando nuevas drogas que inducen la apoptosis. As! ~l Valcade actua sobre el proteosoma (ver seccion anterior) permitiendo la acumulacion de la proteina BX, ya mencionada que promueve la apoptosis bloquean do la protefna bcl-2.

Se Ie ha utilizado en padentes can mieloma multiple. Se Ie va a comparar con la dexarnetasona en el mieloma y se va a pro bar en nuevos tipos de cancer: cancer de sen 0, de pulmon, melanoma, sarcoma, leucemia mieloide cr6nica, linfoma non-Hodgkin y tum ores neuroendocrinos y renales.

Genasense es otro agente inductor de la apoptosis. Bloquea la producci6n de la protefna Bcl-2 y deja a las celulas mas vulnerables a la apoptosis.

Se esta probando en cancer de pulmon y leucemia. Algunos virus asociados can el cancer impiden la apoptosis de las celulas, Asf el papiloma virus humane que esta asociado al cancer de cuello uterino produce una proteina que se liga e inactiva al promotar de apoptosis p53.

EI virus de Epstein-Barr que se ha asociado a algunos linfomas produce una protefna similar al Bcl-2, y produce otra proteina que induce ala celula a aumentar su producd6n de BCI-2, 10 que hace ala celula mas resistente a la apoptosis.

AJgunas leucemias y linfomas expresan altos niveles de Bc1-2 -bloqueando as! las sen ales apopt6ticas que reciben.

EI melanoma evita la apoptosis inhibiendo la expresi6n del gen que codifica el Apaf-l ya mencionado. Algunos canceres, especialmente del pulm6n y del colon segregan elevadas cantidades de una molecule de «engano» (decoy) que se liga al FA5L, que por 10 tanto no puede liqarse al FAS (ver capitulos anteriores) y por 10 tanto las celulas citot6xicas no pueden matar a las celulas cancerosas. (31)

La habilidad para escapar del suicidio (apoptosis) es una de las marcas de fabrica de la mayorfa de las celulas

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cancerosas y a menudo correlaciona con la agresividad del tumory la resistencia a los tradicionales tratamientos con drogas anticancer.

En vista de esto, lab oratorios acadcmicos e industriales se han empefiado en desarrqllar nuevas moleculas que activen la apoptosis en las celulas tumarales a traves de la intervencion en las interacciones entre protefnas que son una caracteristica de casi todos [as procesos biologicos en los organismos vivientes.

Recientemente se han publicado en Science dos articulos (32,33) que muestran dos posibles medios de inducir la apoptosis en los tum ores.

En ambos casos se actua sobre la interacci6n entre proteinas que pertenecen sea a los receptores extrfnsecos o a los receptores intrinsecos dapcndicntcs de las mitocondrias.

Hay mucho interes en explotar peptidos biol6gicamente activos como compuestos farrnaceuticos. Sin embargo, el esfuerzo se limita por su baja biodisponibtltdad, su ineficiencia para atravesar las membranas celulares (debido a su tamario] y su poca estabilidad in vivo.

Se ha recurrido a la generacion en el labaratorio de peptidos sinteticos que contienen arninoacidos no naturales.llamados «peptidomimeficos».

Walensky, y col, han generado un peptide que bloquea la accion de los componentes antiapopt6ticos de 1a familia de las proteinas BCl 2 ya mencionadas. En segundo lugar induce a los miembros proapopt6ticos de la familia, 10 que resulta en la salida del citocromo C, activacion del apoptosoma y la subsecuente inducci6n de la apoptosis.

En el trabajo de Li y col. generaron un compuesto sintetico que imita las interacciones proteina-proteina de un activador de la apoptosis SMAC, Second mitochondria derived activator of caspases, ya mencionado anteriormente.

Como ya se ha mencionado los efectores de la apoptosis son las caspasas que son mantenidas inactivas por proteinas que bloquean la apoptosis. Estas proteinas se sobreexpresan en los tum ores y a su tumo estas protefnas son inhibidas por cuatro residuos del SMA. Los autores han generado un peptide que no permite la accion de las caspasas. EI tratamiento de las celulas de glioblastoma con este compuesto produjo apoptosis en las celulas tumorales. Las celulas norm ales no fueron afectadas. Se ha demostrado adernas Que este compuesto interacnia con el TNF alfa par 10 que tiene propiedades antiinflamatorias y podrfa ser usado en otras enfermedades.

EI campo de los peptidomimeti cos recien este emergiendo.

DR. ROLANDO CALDERON V.

LAAUTOFAGIA: (_UNA NUEVA FORMA DE APOPTOSIS?

La autofagia es la forma en que se degradan organelas enteras, dentro de la celula. En este sistema una estructura de doble 0 multiples membranas, llamada autofagosoma 0 vacuola autofagica se forma para secuestrar parte del citoplasma. Luego esta vacuola se fusiona con ellisosoma y Ie entrega su contenido que es degradado.

La autofagia, a niveles basales, ocurre en la mayorfa de los tejidos y contribuye al recambio de los componentes celulares. Sin embargo, adernas de esta mision este procedimiento se presenta en el desarrollo, la diferenciacion y el remodelado tisular.

La autofagia esta implicada en ciertas enfermedades en el hombre. Paradojicamente la autofagia puede servir para proteger a las celulas pero puede tambien contribuir al dana celular(34). La autofagia esta comprometida en la muerte celular programada (MCP) La autofagia (MCP tipo II) esta implicada en la MCP tipo I, que es la apoptosis. Ya hemos visto en parrafos anteriores las caracterfsticas de la apoptosis. EI tipo II de MCp, la autofagia, se caracteriza por la acumulacion de vesiculas autofaqicas (autofagosomas y autofagolisosomas) se observa cuando los fagocitos no tienen facil acceso a las celulas que van a morir. Una de las caracteristicas que distinguen la autofagia de la apoptosis, es que en la apoptosis se us an las enzimas de las celulas fagocfticas mientras que en la autofagia se utilizan las enzimas de la propia celula.

Uno de los factores implicados en la apoptosis, el TNF (tumor necrosis factor) que se liga al receptor de muerte TRAIL, ya mencionado, puede inducir tarnbien la autofagia.

Cuando el estfmulo es menor, la autofagia puede representar un intento primario para restablecer la homeostasis, cuando la capacidad autofaqica es superada, la apoptosis se dispara.

En el caso del cancer la autofagia puede jugar un doble rol. Asi la inhibicion de la autofagia puede permitir el crecimiento de celulas precancerosas, pero al mismo tiempo la accion autofaqica puede actuar como un supresor del cancer. Ya en el desarrollo del cancer la autofagia puede servir para limitar el numero de celulas cancerosas y permitirles el mejor uso de los nutrientes y del oxfgeno.

EI Beclin I es un compuesto que se requiere para la formaci on de autofagosomas, este compuesto esta suprimido en un alto porcentaje de canceres al seno, del ovario y de la prostata. Algunas drogas usadas para tratar

el cancer es probable que actuen a traves de la autofagia, por ejemplo, el tamoxifeno, que se usa para tratar el cancer de seno, actuarfa regulando hacia arriba el Beclin I. Otros compuestos que inducen la autofagia, como la rapamicina estan siendo investigados en pacientes con tumores malignos.

La acuniulacion de vesiculas autofaqicas se ha observado en muchos trastornos neurodegenerativos como la enfermedad de Parkinson, de Alzheimer y la esclerosis lateral arniotrofica 0 las enfermedades inducidas por priones que estan asociadas a protefnas mal conformadas que tienden a formar agregados. Sin embargo no se sabe si esto representa un aumento en la autofagia 0 un bloqueo en el consumo de los autofagosomas.

Uno de los roles de autofagia en la defensa celular es la rernocion de los patoqenos que invaden la celula, por endocitosis, son llevados allisosoma para ser degradados ahi, pero, algunos escapan esta defensa bloqueando el fagosoma. Asf la autofagia puede proteger contra la invasion bacteriana. Sin embargo, algunos patoqenos utilizan para multiplicarse, en los autofagosomas (por ejemplo la brucella abortus y la legionella neumofila). La apar icion de estructuras similares a los autofagosomas tambien se observa en ciertas infecciones virales. La infecci6n por virus como el herpes simple induce la autofagia.

Analisis qeneticos recientes, en varios organism os, han identificado genes relacionados con el control de la longevidad. La vfa mas caracterizada es la de la insulina y el factor de crecimiento similar a la insulina I (IGF 1).(35) En nematodes como el Caenorhabditis elegans (ya mencionado) la inhibicion de la cascada que desatan estos factores aumenta su vida en 300% y aumenta la resistencia al calor y al estres oxidativo que puede contribuir a la extension del tiempo de vida (36).

La restriccion calorica que puede inducir autofagia tiene efectos positivos en la extension del tiempo de vida.

La velocidad de la autofagia disminuye con la edad 10 que puede explicar su correlacion con el proceso de envejecimiento.

APOPTOSIS EN LAS CELULAS BETA DEL PANCREAS.

La masa de celulas beta del pancreas esta regulada por, cuando men os, cuatro mecanismos:

1. La replicacion de las celulas beta, es decir, la division mitoqenica de las celulas beta existentes.

2. EI tamario de las celulas beta.

3. La neogenesis de las celulas beta, es decir, a emergencia de nuevas celulas beta procedentes del epitelio de los conductos del pancreas y

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LA APOPTOSIS EN BIOlOGIA Y PATOlOGIA

4. Par la apoptosis celular.

Las celulas apoptoticas, como ya se ha explicado en otra parte de este articulo, son "limpiadas» par los macr6fagos, asi que es diffcil establecer la magnitud de la apoptosis.

En adultos la vida media de las celulas beta se estima en 60 dias. En condiciones normales, mas 0 menos el 0.5% de las celulas beta van a la apoptosis ..

En 19 vejez, la masa de las celulas beta disminuye debido a que la apoptosis predomina sobre la replicacion y la neogenesis.

Esto explica, parcialmente, por que los adultos mayores presentan un aumento en la posibilidad de tener diabetes mellitus tipo 2.

En los seres humanos el aumento en la apoptosis en la diabetes tip a 2 es exacerbada par el deposito de placas amiloide en los islotes.

Muchos mecanismos pueden disparar el aumento de la apoptosis en las celulas beta. Entre ellos, el desarrollo de estres en el reticule endoplasrnatico, la hiperglicemia cr6nica, el estres oxidativo, [a hiperlipidemia y algunas citoquinas (IL-lS), leptina, factor de necrosis tumoral alfa e interluquina 6.

EI conocimiento de las vias que controlan la apoptosis, el proceso de crecimiento y desaparicion de las celulas beta permitira disefiar drogas que impidan la apoptosis de la celula beta y por 10 tanto, permitan su supervivencia (37).

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