UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTONOMA DE MEXICO

 MICROBIOLOGIA GENERAL II
 FACTOR X y V, Haemophilus.
El género Haemophilus comprende un grupo de pequeños
Bacilos pleomórficos, gramnegativos, con requerimientos
nutricionales especiales, además de ser inmóviles.

El H. Influenza, como todos los miembros del género, es de

aspecto pleomórfico; los m.o son predominantemente
cocobacilares y de forma uniforme, midiendo 0.2 a 0.3 por
0.5 a 0.5 µm.
 Para el crecimiento de diversas especies de Haemophilus
en medios de cultivos artificiales, son necesarios factor
X (hemina) y factor V (NAD), solos o en combinación.
En el mercado se dispone de tiras o discos de papel filtro
impregnados con factor X o V.

 Los factores X y V, al ser hidrosolubles, se difunden en

medios de cultivo con agar. Las tiras o discos de papel
filtro impregnados con estos factores se colocan en la
superficie de un medio deficiente de factores X y V,
como BHI o AST, que se han inoculado con el m.o en
estudio.
 El agar chocolate se prepara agregando sangre de
carnero (7.5-10%) a una base que se encuentra a
(80°C) como para lisar los hematíes y liberar factor
X y V. Debe evitarse el calentamiento prolongado
para no inactivar el factor V.
 La desventaja de utilizar agar chocolate para el aislamiento
primario de Haemophilus es que el medio no permite
determinar las propiedades hemolíticas, que ayudan a
diferenciar H. Haemolyticus y H. Parahaemolyticus de H.
Influenzae. Debe usarse agar chocolate para el
primoaislamiento de Haemophilus ya que asegura que
cualquier especie se desarrollara en el.
ESPECIES PARA HUMANOS ESPECIES PARA ANIMALES
H. influenzae H. parasuis (ganado porcino)
H. para influenzae H. paragallinarum (aves de corral
H. parahemolyticus H. paracuniculus (conejos)
H. aphrophilus H. haemoglobinophilus
H. paraphrophilus H. felis (gatos)
H. paraphrohaemoliticus
H. segnis
H. ducreyi
 MATERIAL Y METODOS

 Tiras o discos de papel filtro impregnados con factores X y

V.
 Un medio agar deficiente de factores X y V. El agar
tripticasa-soja o el agar infusión de cerebro-corazón.
 Agar sangre de carnero
 Cepa de Staphylococcus aureus

CONTROL DE CALIDAD
 Haemophilus parainfluenzae: requiere solamente factor V

 Haemophilus influenzae: requiere tanto de factor X y V

 PROCEDIMIENTO

1. Sembrar el m.o en cuestión sobre la superficie del agar

deficiente de factores (BHI – STA)
2. Colocar una tira de factor X y factor V sobre la superficie del
agar, con una separación aproximada de 1cm.
3. Incubar la placa en CO2 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24 hrs.

1. Sembrar Haemophilus en el agar BHI y en el agar sangre.

2. Colocar una estría de Staphylococcus aureus en cada agar.
3. Incubar la placa en CO2 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24
hrs.
X V
X V X V X V
 V

Agar sangre BHI

 X

Agar sangre BHI

 XyV

Agar sangre BHI

CUADRO PARA LA DIFERENCIASIÓN DE ESPECIES DEL GENERO HAEMOPHILUS.

ESPECIE FACTOR X FACTOR V HEMOLISIS REQUIERE CATALASA

CO2
H. inflenzae + + - + +/-

H. parainfluenzae - + - - +

H. ducreyi + - + + +

H. aegyptius + + - + +/-

H. parasuis - + - - +/-
Genero/especie Enfermedad

H. influenzae Respiratoria alta (sinusitis, faringitis,

epiglotitis, otitis media), bacteremia,
meningitis.

H. parainfluenzae Respiratoria alta, comensal.

H. ducreyi Chancro blando, transmisión sexual.

H. aegyptius Conjuntivitis.

H. parasuis Inf. En cerdos

 GENERO HAEMOPHILUS
PERTENECE A LA FAMILIA : Pasteurellaceae
Haemophilus
Actinobacillus
Pasteurella

CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS: Cocobacilos Gram-,

no esporulados, dificiles de crecer en medios sinteticos, requieren
de factores de crecimiento ( X y V) hemina y NAD respectivamente
ambos factores se encuentran en la sangre.

Hi (Haemophilus influenzae) requiere ambos, se proporcionan en

Agar chocolate al 10% por su incapacidad para lisar los GR..

Hi tiene 6 serotipos capsulares (a, b, c, d, e y f) puede expresar uno

o ninguno. < 5% de las cepas aisladas del tracto respiratorio poseen
capsula.
Biotipo indol ureasa Ornitina Reduccion de
descarboxilasa nitritos
I + + + +

II + + - +

III - + - +

IV - + + +

V + - + +
En exudados nasofaringeos humanos más del 80% de individuos están
colonizados por Hi no tipificables.

Como resultado del contacto intimo con aerosoles o por contacto

directo con secreciones.

La exposición inicia después del nacimiento, continuando por la

infancia y el adulto.

El estado de acarreador persiste por días y meses.

273/100 000, incidencia de infección invasiva con un 30% (81.9) de

mortalidad.
DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD

1. Polisacarido capsular.
2. Lipopolisacarido
3. Pili y fimbria
4. Proteínas de membrana externa
5. Proteasa para IgA
6. Adquisición de fierro
7. Variación de fase e identificación de
genes involucrados en la patogenicidad.

Hi puede expresar uno o ninguno de los

seis antigenos capsulares
 PATOGENESIS
1. Hi coloniza eficientemente el tracto respiratorio superior y la
nasofaringe de ahí se disemina a sitios alejados, esta mediada por la
proteína P2 y P5 de ME y el ácido sialico conteniendo oligosacáridos
de mucina.

2. Enfermedad localizada, Hi no tipificable causa bronquitis, sinusitis,

conjuntivitis y otitis media con infección inicial en la nasofaringe.
La otitis media Vía de la trompa de Eustaquio.

3. Bacteriemia, se ha usado el modelo de la rata infante, en la cual se

observan los cambios patológicos en meninges virtualmente
indistinguibles que en el niño afectado. La cápsula es el componente
más involucrado en el proceso de bacteriemia.

4. Localización, la meningitis es la más devastadora consecuencia de la

invasión por Hi, el modelo de la rata infante a proporcionado
información al estudio de la patogénesis, Bacteriemia con > 105/ml
dará un cuadro de meningitis. <103/ml no da meningitis.
 BIBLIOGRAFIA
 M.RBREACH. MANUAL DE TÉCNICA
BACTERIOLOGICA; EDITORIAL ACRIBA; 2da
EDICIÓN; ZARAGOZA ESPAÑA; PÁG.
 KONEMAN, ELMER W.DIAGNOSTICO
MICROBIOLOGICO, EDITORIAL PANAMERICANA;
5TA EDICIÓN; BUENOS AIRES, ARGENTINA 2003.
PAG.357-386.
 MAcFADDIN, JEAN F. PRUEBAS BIOQUIMICAS
PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS DE
IMPORTANCIA CLÍNIC; EDITORIAL
PANAMERICANA; 3RA EDICIÓN.BUENOS AIRES
ARGENTINA 2003, 422-424.