17/11/2009

EXPRESSÃO GÊNICA
Definição: Definição: - Processo que inclui a transcrição e a eventual tradução do RNA em proteína; proteína; - Envolve proteínas, que reagem a sinais ambientais, aumentando ou diminuindo as taxas de expressão de genes específicos; específicos; - Envolve também sistemas complexos que garantem a expressão de genes na época e nas quantidades apropriadas; apropriadas; - Interação entre as seqüências gênicas denominadas de elementos reguladores. reguladores. e outras seqüências

CONTROLE DA EXPRESSÃO GÊNICA:
- PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

EXPRESSÃO GÊNICA
Níveis de Controle: Controle: 1) Modificações no DNA ou em sua compactação 2) Transcrição 3) Pós-Transcrição Pós4) Tradução 5) Pós-Tradução PósGenes Estruturais: codificam proteínas que Estruturais: são usadas no metabolismo e na biossíntese, ou que têm um papel estrutural na célula; célula; Genes Reguladores: são genes que cujo Reguladores: produto, seja um RNA ou uma proteína, interagem com outras seqüências e afetam sua transcrição ou tradução; tradução; Elementos Regulatórios: seqüências de DNA Regulatórios: que regulam a expressão de outras seqüências. seqüências.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Organização Gênica: Gênica:

Ex.: Ex.: E. coli, bactéria que reside no intestino grosso humano. Os humano. nossos hábitos alimentares determinam os nutrientes disponíveis para essa bactéria. bactéria. Mecanismo de compensação da sua inabilidade em alterar o meio externo sendo internamente flexível. Ex.: Se a glicose está presente, flexível. Ex.: ela a usa para gerar ATP; se não houver glicose, ela usa lactose, ATP; maltose ou qualquer outro dentre vários açucares. açucares.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Genes de procariotos responsáveis por funções vitais, como os que codificam para RNAr, RNAt, enzimas de vias glicolíticas, subunidades de DNA Pol, RNA Pol e proteínas ribossomais, são constantes); expressos constitutivamente (velocidade e quantidades constantes); Outros genes só são expressos quando seus produtos são necessários, sua expressão é induzida, como são os genes codificantes de enzimas induzida, envolvidas em vias catabólicas; catabólicas; - Ex.: a presença de uma fonte de carbono no ambiente provoca a Ex.: expressão de genes que codificam enzimas que captam e metabolizam essa fonte de carbono. Quando esta fonte desaparece, os carbono. genes que codificam estas enzimas são desligados. desligados.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
O processo inverso ao mecanismo de indução é o de repressão; Ex.: repressão; Ex.: Em E. coli, a via metabólica (enzimas) de síntese de um aminoácido coli, qualquer pode ser desligada se ao meio em que ela se encontra for adicionado o aminoácido em questão. questão. Repressão Catabólica: As bactérias metabolizam glicose Catabólica: preferencialmente na presença d l t f i l t de lactose ou outros açúcares. A t açúcares. ú quebra da glicose (glicólise) requer menos energia. Quando a glicose glicólise) energia. está disponível, os genes que participam do metabolismo de outros açúcares ficam reprimidos. reprimidos.

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favorecendo a transcrição.: Bacteriófago SPO1 que infecta e se multiplica em B.) etc.Quando o repressor. . diz-se que o dizcontrole é negativo indutível. estruturais.Quando em quantidade suficiente. Ex. é ativado pela molécula bloqueando a ação da RNA pol e a transcrição. um promotor e um operador. do ativador. transcrição. diz-se que o dizcontrole é negativo repressível.No controle positivo repressível.Controle Positivo: Uma proteína regulatória atua como ativador. pois este tem o seu próprio promotor.Quando o repressor. que normalmente está ativo. célula.Controle Negativo: Uma proteína regulatória atua como repressor. . A ligação do repressor no operador impede a ligação e a movimentação da RNA pol. intermediária e genes: imediata. coli).A disponibilidade desses fatores σ para início da transcrição pode ser uma forma de controle da expressão gênica em nível de transcrição. responsável pela identificação de promotores d genes d expressão t di . . estimulando a transcrição. σ34. É formado pelos genes estruturais. A ligação da molécula promove a dissociação transcrição. operador. Ex. subtilis (= σ70 em E. indutível ti d r une molécula formando um complexo que então se une ao DNA. tardia. transcrição. .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O controle transcricional exercido por cascatas de fatores σ: -A especificidade da ligação da RNApol nos diferentes promotores é dada pela interação com as várias espécies de fatores σ (σ70. indutível. repressível. Operon Trp operador. os genes imediatos são transcritos sob o coli) controle do fator σA de B. Ex. . gp33 fatores formam um complexo σgp33 /34. . Negativo: repressor. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS -Após a infecção do fago. o ativador se une ao DNA repressível. etc.Um gene regulador afeta o funcionamento do operon. transcrição.: SPO1 subtilis.: . 2 . Positivo: ativador. é inativado pela molécula permitindo a ação da RNA pol e a transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O modelo do Operon: Operon: . que codificam os fatores σgp33 e σgp34.Operon: grupo de genes estruturais que são transcritos juntos sob o Operon: controle de um único promotor. impedindo a transcrição. favorecendo a transcrição. mas não é considerado parte dele. t de de ã tardia tardia. Ele é promotor.Ex. ligandoligando-se ao DNA e inibindo a transcrição. . existentes na célula. operador.: Operon Lac. que normalmente está inativo. σ28. Um destes genes é o gp28 28 cujo produto é o fator σgp28. transcrição.N controle positivo indutível. Os repressores unem-se a sítios específicos no DNA (sítios unemoperadores). traduzido em uma pequena proteína reguladora que se liga ao sítio operador. Esta ligação é regulada por uma molécula que se une ao repressor mudando sua conformação e sua afinidade pelo operador. Existem 3 categorias de genes: expressão imediata. aumentando a unemafinidade da RNA pol por ele e favorecendo a transcrição. transcrição. tardia. Estes 34. o ativador se un à m lé ul f rm nd No ntr l positi o indutí el. esse fator permite a expressão dos gp33 gp34 genes intermediários 33 e 34. operadores). Imediata Intermediária RNA pol Tardia EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . subtilis. promotor. promotora. que estão localizados próximos ou sobrepostos à região promotora.Os ativadores unem-se a sítios adjacentes ao promotor. pol. transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: .

reação catalisada pela enzima β-galactosidase. a transcrição não atinge níveis máximos. que se CAP).Entretanto. transcrição. . repressor. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS . desconhecida. DNA. glicose aumenta a produção do AMPc levando à transcrição dos genes do Operon Lac. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Trp (Operon do Triptofano): Triptofano): . β-galactosidase e a transacetilase são codificadas por genes estruturais no Operon Lac de E. Antecedendo o promotor há um gene regulador (lac juntos. glicose. g estruturais.A repressão é feita pela ligação do próprio triptofano ao repressor. RNApol. min. a transacetilase.Modelo de controle da biossíntese de Triptofano. alolactose. como o complexo AMPc + proteína ativadora do catabolismo (CAP). galactosidase.A ativação do CAP é ineficaz nesse sistema se o repressor Lac estiver bloqueando a transcrição. . permease. mesmo que o repressor Lac esteja dissociado do operador. liga a um sítio perto do promotor e estimula a ligação da RNApol. lacA. glicose. a menos que CAP esteja ligada ao DNA. Triptofano. Entretanto.Uma terceira enzima. -Lactose: dissacarídeo de difícil difusão através da membrana celular Lactose: p p devendo ser transportada ativamente para o interior da célula com o auxílio de uma enzima permease. de síntese de todas as 3 enzimas aumenta cerca de mil vezes dentro de 2 ou 3 min. quando a lactose é adicionada ao meio e a glicose está ausente. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac e a Repressão Catabólica: Catabólica: -A indução do Operon Lac requer tanto a presença da alolactose (indutor) para inativar o repressor. função no metabolismo da lactose é desconhecida. o que torna o repressor ativo. trpD. coli. coli deve quebrá-la em quebráglicose e galactose. coli. a E. .Quando a lactose está ausente no meio na qual a bactéria cresce. Monod.Para usar a lactose como fonte de energia. enzima. triptofano. permease. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac: Lac: -As três enzimas. também é produzida. I) que tem seu próprio promotor e atua como repressor. . . . a taxa ausente. Lac. a permease pelo gene lacZ. Esta enzima também converte a lactose em alolactose. O repressor ativo liga-se ao operador e impede que a RNApol ativo.Os níveis de AMPc são controlados pela glicose. 3 . trpC. produzida. são produzidas apenas algumas moléculas de cada enzima. -A repressão catabólica resulta do controle positivo em resposta à glicose. ligatranscreva os genes estruturais.O Operon Trp contém 5 genes estruturais (trpE. O controle positivo requer um fator de ativação. -A β-galactosidase é codificada pelo gene lacZ. lacY e a transacetilase pelo gene lacA. . O baixo nível de p g glicose. galactose.No Operon Lac os 3 genes tem um promotor único (P) e são transcritos juntos. trpB e trpA) que trpA) produzem componentes de 3 enzimas que convertem corismato em triptofano.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac (Operon da Lactose): Lactose): -Modelo para o controle genético do metabolismo de lactose em E. quanto a ausência de glicose. . coli descrito em 1961 por François Jacob e Jacques Monod. mas sua transacetilase.

transcrição. Regulação Traducional: . . permitindo que o DNA se separe destas. procarióticas. sítios. mas apenas um subgrupo de genes é expresso em cada tipo celular. Alguns genes são expressos de maneira específica para cada tecido. espaço. embora tanto estes quanto os repressores estejam presentes também em células procarióticas. desenvolvimento. ACETILAÇÃO 4 . . tecido.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS A Atenuação da Transcrição: Transcrição: - A Atenuação da Transcrição: Transcrição: . . ali. operons. destas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: . tornando-o EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: -A expressão gênica em eucariotos é regulada no tempo e no espaço.Resposta limitada às mudanças nutricionais e ambientais. por neutralizar as cargas positivas das histonas.Os genes eucarióticos não estão organizados em operons.os próprios p g p p q ribossomos impedem a formação do grampo permitindo que a transcrição continue. continue. Evita E ita ligação ao ribossomo ribossomo. Desestabiliza o mRNA susceptível a endonucleases. Os (HAT).RNAs anti-senso: Pequenas moléculas de RNA complementares a seqüências particulares nos RNAm que se ligam a estes e inibem a tradução. celular. Mimetiza um terminador. desenvolvimento -Todas as células de um organismo levam a mesma informação genética. . término.Mecanismo adicional de regulação da expressão gênica que controla a capacidade da RNApol em continuar o alongamento além de determinados sítios. ambientais. .Disponibilidade de proteínas ribossômicas.Quando necessário que a tradução ainda ocorra. grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo. a maior parte da transcrição termina ali. gênica. -A estrutura da cromatina afeta a expressão gênica.O sítio de atenuação está localizado a 162nt após o sítio de início da 162nt transcrição. . EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Estrutura da Cromatina X Regulação Gênica: Gênica: . EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS RNAs Regulatórios: . Caso o triptofano seja abundante.O término da transcrição é marcado por uma estrutura em forma de grampo. essa pode não prosseguir até o sítio de término.Os ativadores parecem ser mais comuns em células eucarióticas.O DNA deve se desenrolar das proteínas histonas para que ocorra a transcrição através: através: -Acetilação das histonas: A adição de grupos acetil (CH3CO) às histonas: proteínas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT).Mesmo que a transcrição do Operon Trp tenha sido iniciada (↓ [ ] de triptofano). Outros genes são expressos em um padrão temporal específico durante o d n l im nt . grampo.

5 . são CpG. reprimindo a transcrição. .Este processo é mais comum nas bases citosinas ligadas covalentemente à guanina. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . gênica. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . removem o grupamento acetil estabilizando a estrutura do nucleossomo reprimindo assim. processo associado à repressão da expressão gênica. ligada ao grau de metilações anormais em alguns tumores. reforçadores. a expressão gênica. hipermetilação) EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . . A metilação parece atrair as HDAC. Os Insuladores ou Isoladores são seqüências de DNA que bloqueiam a propagação da influência dos reforçadores. Estas ilhas CpG estão freqüentemente localizadas na metilação.Metilação de DNA é o mecanismo que permite que determinados genes (e não outros) se manifestem dentro de células normais especializadas. Os silenciadores servem para diminuir o nível de transcrição basal. impróprias. metiltransferase.Mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor são inativados por 10% metilação. -Metilação do DNA: Fenômeno epigenético* que ocorre pela DNA: epigenético* transferência de um grupamento metil (CH3) ao carbono 5 da citosina. .*Fenômeno epigenético pode ser definido como mudança no material genético que altera a regulação da expressão gênica de maneira que esta é passada para as células filhas dentro das células somáticas.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . -O que as diferencia é a manifestação de um ou de outro gene durante o desenvolvimento d n l im nt e em t d a sua vida p r desativar g n m toda u id para d ti r genes desnecessários. Podem estar localizados muito basal. . DNA. -As alterações de metilação do DNA em células tumorais incluem a perda da metilação em seqüências normalmente metiladas (hipometilação) e o ganho de seqüências metiladas em locais geralmente hipometilação) não metilados (hipermetilação). chamadas ilhas CpG. pois não mutação. distantes do gene que eles regulam. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS -Desacetilação das histonas: Outras enzimas denominadas desacetilases histonas: (HDAC) removem estes grupamentos acetil e restauram a estrutura compactada da cromatina. metilação. (“silencers”). porém não é caracterizada como mutação. promotores. basal. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: -Via seqüências de DNA localizada 5’ upstream: Reforçadores upstream: (“enhancers”) e Silenciadores (“silencers”). denominados dinucleotídeos CpG. A resistência à quimioterapia está. pequenas porções de DNA. na maioria dos casos. correspondente. comparativamente ricas em nucleotídeos CpG e quase sempre estão livres de metilação.Em contraste. envolve mudança na seqüência de DNA. integrais dos promotores. gênica. É um CpG. catalisada por uma enzima DNA metiltransferase. tumores. genética. Alguns podem ser componentes regulam. desnecessários. transcrição. região promotora dos genes humanos e a metilação dentro das ilhas está associada à inativação da transcrição do gene correspondente. que histonas. transcrição.Células cancerígenas: metilação anormal de DNA desativa genes que cancerígenas: normalmente evitariam divisões celulares impróprias.Evidências sugerem que a metilação do DNA esteja associada à desacetilação das histonas.Complexos de Remodelagem da Cromatina: Alguns fatores de Cromatina: transcrição e outras proteínas regulatórias ligam-se diretamente a sítios ligamparticulares no DNA sem acetilar as proteínas histonas promovendo o início da transcrição. visto que todas as células do corpo trazem a mesma carga genética. Os reforçadores são elementos reguladores positivos que servem para aumentar o nível de transcrição basal.

exerce globina: (LCR). .Estes fatores apresentam domínios funcionais de ligação ao DNA e de ativação da transcrição. locus. globina. Co-ativadores e CoCoCorepressores): repressores): responsáveis pela expressão de proteínas célulacélulaespecíficas. Presentes em células eucarióticas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Proteínas de Ligação ao DNA: DNA: Proteínas que se ligam a seqüências de DNA e que influenciam sua expressão. EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS Em eucariotos muitos genes estão organizados em locus multigênicos. (Ex.Alça de aa com Zinco na base que se ligam ao sulco maior do DNA. controle na expressão destes genes visto que: que: 1) Seqüências reguladoras presentes em promotores e reforçadores não são suficientes para controlar a expressão. Motivo Zíper de Leucina . em que os mesmos são coordenadamente regulados durante a diferenciação e desenvolvimento. Repressores. duas leucinas interdigitadas. . sendo este um bom parâmetro na identificação de genes ativos. estando presentes em todas as células (Ex. 6 .Hélices de Leucinas e um braço básico. * Regiões transcricionalmente ativas (cromatina frouxa) são mais sensíveis à degradação pela DNase.Descoberto no fator TFIIIA envolvido na transcrição do RNAr 5S pela RNA pol III. Ex. Dentro dos DNA. DNA.: TFIID).Duas hélices alfa que se ligam ao sulco maior do DNA.: Genes de globina: a região de controle do locus (LCR).17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição e Regulação Gênica: Gênica: .Via fatores de transcrição: proteínas especiais ou seqüências transcrição: reguladoras presentes nos reforçadores e nos promotores. TFIIB.: TFIIA. básico. 3) Presença de sítios hipersensíveis à DNase* na região 5’upstream do gene da β-globina. DNA.Apresentam partes funcionais denominadas de domínios. Dividempromotores. expressão. 2) Deleções na região 5’upstream do gene da β-globina inativam a expressão do locus. açúcarDNA. Em geral formam pontes de hidrogênio com as bases do DNA ou interagem com o arcabouço açúcar-fosfato do DNA. TFIID). eucarióticas. motivos. eucarióticas. Presentes em células procarióticas e eucarióticas. que se ligam a dois sulcos maiores do DNA. desenvolvimento. domínios existem estruturas características denominadas motivos. 2) Fatores Específicos (Ativadores. ativos. compostos domínios. expressão. específicas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Motivo Zinc Finger . Presentes em células eucarióticas.: Ex. eucarióticas. . III. DNA. por 60 a 90 aa que são responsáveis pela ligação ao DNA. Dividemse em duas classes: classes: 1) Fatores Basais de Transcrição: necessários para a expressão de todos Transcrição: g p p p os genes transcritos pela RNApol II. transcrição. Motivo Hélice-Giro-Hélice Hélice-Giro.

) sítios alternativos de poliadenilação do RNAm (idem). Ex.: Ex. globina). A região LCR.: As proteínas de choque térmico (heat-shock .: O gene da metalotioneína. metais pesados e os remove das células. GREGRE. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: silenciamento do RNA: iniciado por moléculas bifilamentares de RNA RNA: que são cortadas e processadas. gênica. diferentes. O pequenos RNA interferentes processadas. que codifica uma proteína que se liga a metalotioneína. Embrião Fetal Adulto EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Outros elementos de resposta são encontrados antecedendo o gene da metalotioneína e também contribuem para aumentar a transcrição. mas também pelo LCR localizado a montante do 1º gene do cluster (ε-globina). (RNAsi). ligam-se à seqüências complementares do RNAm causando ligamcorte e decomposição. onde. DNA. embora não estejam agrupados como operons. Estas são denominadas elementos de reforçadores.Os genes eucarióticos podem ser regulados por meio do controle do processamento do RNAm: RNAm: sítios alternativos de “splicing” do RNAm (a seleção de sítios splicing” alternativos de corte leva à produção de proteínas diferentes). Os genes de expressão coordenada são capazes de responder ao mesmo estímulo pois têm seqüências regulatórias em comum nos seus promotores e reforçadores. após estímulo específico.hsp) ajudam a evitar heathsp) danos contra agentes estressantes (calor) são produzidas por 20 genes diferentes que são expressos coordenadamente.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS A expressão dos genes de globina é determinada não somente pelo seus promotores. Ex.Elemento de resposta a hormônios glicocorticóide (TGGTACAAAATGTTCT) MREMRE.Elemento de resposta a ésteres de forbol (TGACTCA) BLEBLE. transcrição. resposta. translocação) controle citoplasmático da estabilidade (degradação por ribonucleases) do RNAm. EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Vários genes eucarióticos podem ser ativados pelo mesmo estímulo. operons. A presença de metais pesados células. estímulo. Um único gene pode ser regulado por vários elementos de resposta diferentes. se ligam as proteínas regulatórias para ativar a transcrição gênica. . decomposição.O RNAsi podem estimular a metilação d seqüências complementares Os A d l l de l no DNA. resposta. estimula a transcrição.Elemento de resposta a metais TRETRE. transcrição. p ç p diferentes). (idem).Elemento de resposta basal Nos elementos de resposta existem seqüências consenso curtas. permite o acesso de proteínas regulatórias possam se ligar e ativar a transcrição dos genes. 7 .: Ex. marcada por sítios hipersensíveis a DNase. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: . controle do transporte do RNAm para o citoplasma (translocação). RNAm. genes.

fatores de iniciação e alongamento. aminoacil RNAt). - - 8 . modificações covalentes (acetilação. degradação.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Tradução e Pós-Tradução X Regulação PósGênica: Gênica: Disponibilidade dos componentes necessários à maquinaria da tradução (ribossomos. Disponibilidade de proteínas que se p p q ligam nas pontas 5’ e 3’ do RNAm (CAP binding proteins e PoliA binding proteins) proteins). Após a tradução as proteínas eucarióticas passam por uma seleção alternativa de vias de processamento: processamento: clivagem proteolítica. RNAt). metilação) e especificidade de degradação. remoção da seqüência sinal. fosforilação.

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