17/11/2009

EXPRESSÃO GÊNICA
Definição: Definição: - Processo que inclui a transcrição e a eventual tradução do RNA em proteína; proteína; - Envolve proteínas, que reagem a sinais ambientais, aumentando ou diminuindo as taxas de expressão de genes específicos; específicos; - Envolve também sistemas complexos que garantem a expressão de genes na época e nas quantidades apropriadas; apropriadas; - Interação entre as seqüências gênicas denominadas de elementos reguladores. reguladores. e outras seqüências

CONTROLE DA EXPRESSÃO GÊNICA:
- PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

EXPRESSÃO GÊNICA
Níveis de Controle: Controle: 1) Modificações no DNA ou em sua compactação 2) Transcrição 3) Pós-Transcrição Pós4) Tradução 5) Pós-Tradução PósGenes Estruturais: codificam proteínas que Estruturais: são usadas no metabolismo e na biossíntese, ou que têm um papel estrutural na célula; célula; Genes Reguladores: são genes que cujo Reguladores: produto, seja um RNA ou uma proteína, interagem com outras seqüências e afetam sua transcrição ou tradução; tradução; Elementos Regulatórios: seqüências de DNA Regulatórios: que regulam a expressão de outras seqüências. seqüências.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Organização Gênica: Gênica:

Ex.: Ex.: E. coli, bactéria que reside no intestino grosso humano. Os humano. nossos hábitos alimentares determinam os nutrientes disponíveis para essa bactéria. bactéria. Mecanismo de compensação da sua inabilidade em alterar o meio externo sendo internamente flexível. Ex.: Se a glicose está presente, flexível. Ex.: ela a usa para gerar ATP; se não houver glicose, ela usa lactose, ATP; maltose ou qualquer outro dentre vários açucares. açucares.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Genes de procariotos responsáveis por funções vitais, como os que codificam para RNAr, RNAt, enzimas de vias glicolíticas, subunidades de DNA Pol, RNA Pol e proteínas ribossomais, são constantes); expressos constitutivamente (velocidade e quantidades constantes); Outros genes só são expressos quando seus produtos são necessários, sua expressão é induzida, como são os genes codificantes de enzimas induzida, envolvidas em vias catabólicas; catabólicas; - Ex.: a presença de uma fonte de carbono no ambiente provoca a Ex.: expressão de genes que codificam enzimas que captam e metabolizam essa fonte de carbono. Quando esta fonte desaparece, os carbono. genes que codificam estas enzimas são desligados. desligados.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
O processo inverso ao mecanismo de indução é o de repressão; Ex.: repressão; Ex.: Em E. coli, a via metabólica (enzimas) de síntese de um aminoácido coli, qualquer pode ser desligada se ao meio em que ela se encontra for adicionado o aminoácido em questão. questão. Repressão Catabólica: As bactérias metabolizam glicose Catabólica: preferencialmente na presença d l t f i l t de lactose ou outros açúcares. A t açúcares. ú quebra da glicose (glicólise) requer menos energia. Quando a glicose glicólise) energia. está disponível, os genes que participam do metabolismo de outros açúcares ficam reprimidos. reprimidos.

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subtilis. Estes 34. operadores). ligandoligando-se ao DNA e inibindo a transcrição. transcrição. t de de ã tardia tardia. tardia.Controle Positivo: Uma proteína regulatória atua como ativador. Imediata Intermediária RNA pol Tardia EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . intermediária e genes: imediata. favorecendo a transcrição.Os ativadores unem-se a sítios adjacentes ao promotor. Existem 3 categorias de genes: expressão imediata. pois este tem o seu próprio promotor. 2 . existentes na célula. Ele é promotor. diz-se que o dizcontrole é negativo indutível.Quando em quantidade suficiente. coli).Quando o repressor. diz-se que o dizcontrole é negativo repressível. que normalmente está inativo. A ligação da molécula promove a dissociação transcrição. impedindo a transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O modelo do Operon: Operon: . Ex. Negativo: repressor. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS -Após a infecção do fago. σ28. . estimulando a transcrição. É formado pelos genes estruturais. que normalmente está ativo. . transcrição. Esta ligação é regulada por uma molécula que se une ao repressor mudando sua conformação e sua afinidade pelo operador. responsável pela identificação de promotores d genes d expressão t di . tardia. gp33 fatores formam um complexo σgp33 /34. transcrição. indutível.: SPO1 subtilis. .: Bacteriófago SPO1 que infecta e se multiplica em B. indutível ti d r une molécula formando um complexo que então se une ao DNA. mas não é considerado parte dele. etc. estruturais.) etc. pol.Um gene regulador afeta o funcionamento do operon. promotora. . um promotor e um operador. Ex. Um destes genes é o gp28 28 cujo produto é o fator σgp28. A ligação do repressor no operador impede a ligação e a movimentação da RNA pol.Ex. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: .: . é ativado pela molécula bloqueando a ação da RNA pol e a transcrição. favorecendo a transcrição.N controle positivo indutível. transcrição. do ativador. os genes imediatos são transcritos sob o coli) controle do fator σA de B.Controle Negativo: Uma proteína regulatória atua como repressor. célula. operador.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O controle transcricional exercido por cascatas de fatores σ: -A especificidade da ligação da RNApol nos diferentes promotores é dada pela interação com as várias espécies de fatores σ (σ70.Quando o repressor. o ativador se une ao DNA repressível. aumentando a unemafinidade da RNA pol por ele e favorecendo a transcrição. . o ativador se un à m lé ul f rm nd No ntr l positi o indutí el. operador. Positivo: ativador. esse fator permite a expressão dos gp33 gp34 genes intermediários 33 e 34. subtilis (= σ70 em E. que estão localizados próximos ou sobrepostos à região promotora. promotor.Operon: grupo de genes estruturais que são transcritos juntos sob o Operon: controle de um único promotor. transcrição. Ex.: Operon Lac. . Os repressores unem-se a sítios específicos no DNA (sítios unemoperadores). transcrição. Operon Trp operador. σ34. é inativado pela molécula permitindo a ação da RNA pol e a transcrição.A disponibilidade desses fatores σ para início da transcrição pode ser uma forma de controle da expressão gênica em nível de transcrição. traduzido em uma pequena proteína reguladora que se liga ao sítio operador. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . .No controle positivo repressível. repressível. que codificam os fatores σgp33 e σgp34.

a taxa ausente. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Trp (Operon do Triptofano): Triptofano): . -Lactose: dissacarídeo de difícil difusão através da membrana celular Lactose: p p devendo ser transportada ativamente para o interior da célula com o auxílio de uma enzima permease. -A repressão catabólica resulta do controle positivo em resposta à glicose. trpB e trpA) que trpA) produzem componentes de 3 enzimas que convertem corismato em triptofano. O baixo nível de p g glicose. trpD. . DNA. coli deve quebrá-la em quebráglicose e galactose. Lac. permease. quanto a ausência de glicose. de síntese de todas as 3 enzimas aumenta cerca de mil vezes dentro de 2 ou 3 min. glicose aumenta a produção do AMPc levando à transcrição dos genes do Operon Lac.Entretanto. permease. mesmo que o repressor Lac esteja dissociado do operador. produzida. . a permease pelo gene lacZ. .Modelo de controle da biossíntese de Triptofano.A repressão é feita pela ligação do próprio triptofano ao repressor. galactose. . repressor. reação catalisada pela enzima β-galactosidase. enzima. -A β-galactosidase é codificada pelo gene lacZ. . I) que tem seu próprio promotor e atua como repressor. como o complexo AMPc + proteína ativadora do catabolismo (CAP). a menos que CAP esteja ligada ao DNA. transcrição. . 3 . O repressor ativo liga-se ao operador e impede que a RNApol ativo. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac e a Repressão Catabólica: Catabólica: -A indução do Operon Lac requer tanto a presença da alolactose (indutor) para inativar o repressor. Antecedendo o promotor há um gene regulador (lac juntos.O Operon Trp contém 5 genes estruturais (trpE. desconhecida. RNApol.Quando a lactose está ausente no meio na qual a bactéria cresce. min. alolactose. função no metabolismo da lactose é desconhecida. lacY e a transacetilase pelo gene lacA. glicose. também é produzida. trpC. g estruturais. a E.A ativação do CAP é ineficaz nesse sistema se o repressor Lac estiver bloqueando a transcrição. Triptofano. a transcrição não atinge níveis máximos. lacA. Esta enzima também converte a lactose em alolactose. β-galactosidase e a transacetilase são codificadas por genes estruturais no Operon Lac de E. o que torna o repressor ativo. a transacetilase. que se CAP). coli. coli.No Operon Lac os 3 genes tem um promotor único (P) e são transcritos juntos. são produzidas apenas algumas moléculas de cada enzima. ligatranscreva os genes estruturais. coli descrito em 1961 por François Jacob e Jacques Monod.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac (Operon da Lactose): Lactose): -Modelo para o controle genético do metabolismo de lactose em E. mas sua transacetilase. O controle positivo requer um fator de ativação. quando a lactose é adicionada ao meio e a glicose está ausente.Para usar a lactose como fonte de energia.Os níveis de AMPc são controlados pela glicose. . . liga a um sítio perto do promotor e estimula a ligação da RNApol. Monod.Uma terceira enzima. galactosidase. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS . Entretanto. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac: Lac: -As três enzimas. glicose. triptofano.

ACETILAÇÃO 4 . a maior parte da transcrição termina ali. Alguns genes são expressos de maneira específica para cada tecido.RNAs anti-senso: Pequenas moléculas de RNA complementares a seqüências particulares nos RNAm que se ligam a estes e inibem a tradução. . EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Estrutura da Cromatina X Regulação Gênica: Gênica: .Mecanismo adicional de regulação da expressão gênica que controla a capacidade da RNApol em continuar o alongamento além de determinados sítios. .os próprios p g p p q ribossomos impedem a formação do grampo permitindo que a transcrição continue. ali. operons. embora tanto estes quanto os repressores estejam presentes também em células procarióticas. grampo. tornando-o EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: -A expressão gênica em eucariotos é regulada no tempo e no espaço.Resposta limitada às mudanças nutricionais e ambientais. permitindo que o DNA se separe destas. essa pode não prosseguir até o sítio de término. . . -A estrutura da cromatina afeta a expressão gênica. procarióticas. desenvolvimento. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS RNAs Regulatórios: . continue. grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo.Os ativadores parecem ser mais comuns em células eucarióticas. . Caso o triptofano seja abundante.O término da transcrição é marcado por uma estrutura em forma de grampo.Mesmo que a transcrição do Operon Trp tenha sido iniciada (↓ [ ] de triptofano). Desestabiliza o mRNA susceptível a endonucleases.Disponibilidade de proteínas ribossômicas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: . desenvolvimento -Todas as células de um organismo levam a mesma informação genética.O sítio de atenuação está localizado a 162nt após o sítio de início da 162nt transcrição. mas apenas um subgrupo de genes é expresso em cada tipo celular. celular. tecido. ambientais. transcrição. por neutralizar as cargas positivas das histonas. .Quando necessário que a tradução ainda ocorra. gênica. Regulação Traducional: . Mimetiza um terminador. Outros genes são expressos em um padrão temporal específico durante o d n l im nt .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS A Atenuação da Transcrição: Transcrição: - A Atenuação da Transcrição: Transcrição: .Os genes eucarióticos não estão organizados em operons.O DNA deve se desenrolar das proteínas histonas para que ocorra a transcrição através: através: -Acetilação das histonas: A adição de grupos acetil (CH3CO) às histonas: proteínas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT). término. Evita E ita ligação ao ribossomo ribossomo. destas. sítios. Os (HAT). espaço.

desnecessários. promotores. DNA. distantes do gene que eles regulam.Em contraste. porém não é caracterizada como mutação. visto que todas as células do corpo trazem a mesma carga genética. Os reforçadores são elementos reguladores positivos que servem para aumentar o nível de transcrição basal. . basal. Os Insuladores ou Isoladores são seqüências de DNA que bloqueiam a propagação da influência dos reforçadores.Células cancerígenas: metilação anormal de DNA desativa genes que cancerígenas: normalmente evitariam divisões celulares impróprias. .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . denominados dinucleotídeos CpG. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: -Via seqüências de DNA localizada 5’ upstream: Reforçadores upstream: (“enhancers”) e Silenciadores (“silencers”). A metilação parece atrair as HDAC. hipermetilação) EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . reforçadores.*Fenômeno epigenético pode ser definido como mudança no material genético que altera a regulação da expressão gênica de maneira que esta é passada para as células filhas dentro das células somáticas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . impróprias. tumores. 5 .Evidências sugerem que a metilação do DNA esteja associada à desacetilação das histonas.Mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor são inativados por 10% metilação. -Metilação do DNA: Fenômeno epigenético* que ocorre pela DNA: epigenético* transferência de um grupamento metil (CH3) ao carbono 5 da citosina. . metilação. . região promotora dos genes humanos e a metilação dentro das ilhas está associada à inativação da transcrição do gene correspondente.Este processo é mais comum nas bases citosinas ligadas covalentemente à guanina. Os silenciadores servem para diminuir o nível de transcrição basal. metiltransferase.Complexos de Remodelagem da Cromatina: Alguns fatores de Cromatina: transcrição e outras proteínas regulatórias ligam-se diretamente a sítios ligamparticulares no DNA sem acetilar as proteínas histonas promovendo o início da transcrição. (“silencers”). comparativamente ricas em nucleotídeos CpG e quase sempre estão livres de metilação. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS -Desacetilação das histonas: Outras enzimas denominadas desacetilases histonas: (HDAC) removem estes grupamentos acetil e restauram a estrutura compactada da cromatina. genética. gênica. gênica. integrais dos promotores. catalisada por uma enzima DNA metiltransferase. Podem estar localizados muito basal. são CpG. -As alterações de metilação do DNA em células tumorais incluem a perda da metilação em seqüências normalmente metiladas (hipometilação) e o ganho de seqüências metiladas em locais geralmente hipometilação) não metilados (hipermetilação). ligada ao grau de metilações anormais em alguns tumores. chamadas ilhas CpG. Estas ilhas CpG estão freqüentemente localizadas na metilação. envolve mudança na seqüência de DNA. -O que as diferencia é a manifestação de um ou de outro gene durante o desenvolvimento d n l im nt e em t d a sua vida p r desativar g n m toda u id para d ti r genes desnecessários. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . na maioria dos casos. correspondente. pequenas porções de DNA. É um CpG. transcrição. transcrição. A resistência à quimioterapia está. a expressão gênica. pois não mutação. removem o grupamento acetil estabilizando a estrutura do nucleossomo reprimindo assim. processo associado à repressão da expressão gênica. reprimindo a transcrição. Alguns podem ser componentes regulam.Metilação de DNA é o mecanismo que permite que determinados genes (e não outros) se manifestem dentro de células normais especializadas. que histonas.

em que os mesmos são coordenadamente regulados durante a diferenciação e desenvolvimento. * Regiões transcricionalmente ativas (cromatina frouxa) são mais sensíveis à degradação pela DNase. 2) Fatores Específicos (Ativadores. Dividemse em duas classes: classes: 1) Fatores Basais de Transcrição: necessários para a expressão de todos Transcrição: g p p p os genes transcritos pela RNApol II. expressão. 6 . Presentes em células procarióticas e eucarióticas. III.Hélices de Leucinas e um braço básico. eucarióticas.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição e Regulação Gênica: Gênica: . domínios existem estruturas características denominadas motivos. Dentro dos DNA.Estes fatores apresentam domínios funcionais de ligação ao DNA e de ativação da transcrição. açúcarDNA. Motivo Zíper de Leucina .: TFIID). locus. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Proteínas de Ligação ao DNA: DNA: Proteínas que se ligam a seqüências de DNA e que influenciam sua expressão. compostos domínios. TFIIB. que se ligam a dois sulcos maiores do DNA. Dividempromotores. DNA. expressão.Via fatores de transcrição: proteínas especiais ou seqüências transcrição: reguladoras presentes nos reforçadores e nos promotores. DNA. .: TFIIA. 3) Presença de sítios hipersensíveis à DNase* na região 5’upstream do gene da β-globina. Presentes em células eucarióticas. Repressores. específicas. transcrição. . (Ex. controle na expressão destes genes visto que: que: 1) Seqüências reguladoras presentes em promotores e reforçadores não são suficientes para controlar a expressão. EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS Em eucariotos muitos genes estão organizados em locus multigênicos. Motivo Hélice-Giro-Hélice Hélice-Giro. 2) Deleções na região 5’upstream do gene da β-globina inativam a expressão do locus.: Genes de globina: a região de controle do locus (LCR). sendo este um bom parâmetro na identificação de genes ativos. duas leucinas interdigitadas. básico. eucarióticas. eucarióticas. TFIID). motivos. Ex. Co-ativadores e CoCoCorepressores): repressores): responsáveis pela expressão de proteínas célulacélulaespecíficas.Apresentam partes funcionais denominadas de domínios.: Ex. Em geral formam pontes de hidrogênio com as bases do DNA ou interagem com o arcabouço açúcar-fosfato do DNA. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Motivo Zinc Finger . exerce globina: (LCR).Duas hélices alfa que se ligam ao sulco maior do DNA. Presentes em células eucarióticas. . por 60 a 90 aa que são responsáveis pela ligação ao DNA. ativos. globina.Descoberto no fator TFIIIA envolvido na transcrição do RNAr 5S pela RNA pol III. DNA.Alça de aa com Zinco na base que se ligam ao sulco maior do DNA. estando presentes em todas as células (Ex. desenvolvimento.

resposta. RNAm. estimula a transcrição. genes. . p ç p diferentes). marcada por sítios hipersensíveis a DNase.: Ex. resposta.: O gene da metalotioneína.: As proteínas de choque térmico (heat-shock . diferentes. metais pesados e os remove das células. A presença de metais pesados células. DNA.O RNAsi podem estimular a metilação d seqüências complementares Os A d l l de l no DNA. transcrição.: Ex. transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: . (idem). Embrião Fetal Adulto EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Outros elementos de resposta são encontrados antecedendo o gene da metalotioneína e também contribuem para aumentar a transcrição.Os genes eucarióticos podem ser regulados por meio do controle do processamento do RNAm: RNAm: sítios alternativos de “splicing” do RNAm (a seleção de sítios splicing” alternativos de corte leva à produção de proteínas diferentes). gênica.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS A expressão dos genes de globina é determinada não somente pelo seus promotores. GREGRE. mas também pelo LCR localizado a montante do 1º gene do cluster (ε-globina). translocação) controle citoplasmático da estabilidade (degradação por ribonucleases) do RNAm. permite o acesso de proteínas regulatórias possam se ligar e ativar a transcrição dos genes. onde. (RNAsi). controle do transporte do RNAm para o citoplasma (translocação). O pequenos RNA interferentes processadas. Os genes de expressão coordenada são capazes de responder ao mesmo estímulo pois têm seqüências regulatórias em comum nos seus promotores e reforçadores. Ex. estímulo. decomposição. EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Vários genes eucarióticos podem ser ativados pelo mesmo estímulo. se ligam as proteínas regulatórias para ativar a transcrição gênica. ligam-se à seqüências complementares do RNAm causando ligamcorte e decomposição. que codifica uma proteína que se liga a metalotioneína. operons. após estímulo específico.Elemento de resposta a ésteres de forbol (TGACTCA) BLEBLE.hsp) ajudam a evitar heathsp) danos contra agentes estressantes (calor) são produzidas por 20 genes diferentes que são expressos coordenadamente. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: silenciamento do RNA: iniciado por moléculas bifilamentares de RNA RNA: que são cortadas e processadas.Elemento de resposta a metais TRETRE.Elemento de resposta basal Nos elementos de resposta existem seqüências consenso curtas.Elemento de resposta a hormônios glicocorticóide (TGGTACAAAATGTTCT) MREMRE. ) sítios alternativos de poliadenilação do RNAm (idem). Um único gene pode ser regulado por vários elementos de resposta diferentes. Estas são denominadas elementos de reforçadores. globina). embora não estejam agrupados como operons. A região LCR. Ex. 7 .

17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Tradução e Pós-Tradução X Regulação PósGênica: Gênica: Disponibilidade dos componentes necessários à maquinaria da tradução (ribossomos. remoção da seqüência sinal. metilação) e especificidade de degradação. fosforilação. - - 8 . modificações covalentes (acetilação. RNAt). Após a tradução as proteínas eucarióticas passam por uma seleção alternativa de vias de processamento: processamento: clivagem proteolítica. aminoacil RNAt). fatores de iniciação e alongamento. Disponibilidade de proteínas que se p p q ligam nas pontas 5’ e 3’ do RNAm (CAP binding proteins e PoliA binding proteins) proteins). degradação.

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