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REGULAÇÂO DA EXPRESSÃO GÊNICA PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

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17/11/2009

EXPRESSÃO GÊNICA
Definição: Definição: - Processo que inclui a transcrição e a eventual tradução do RNA em proteína; proteína; - Envolve proteínas, que reagem a sinais ambientais, aumentando ou diminuindo as taxas de expressão de genes específicos; específicos; - Envolve também sistemas complexos que garantem a expressão de genes na época e nas quantidades apropriadas; apropriadas; - Interação entre as seqüências gênicas denominadas de elementos reguladores. reguladores. e outras seqüências

CONTROLE DA EXPRESSÃO GÊNICA:
- PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

EXPRESSÃO GÊNICA
Níveis de Controle: Controle: 1) Modificações no DNA ou em sua compactação 2) Transcrição 3) Pós-Transcrição Pós4) Tradução 5) Pós-Tradução PósGenes Estruturais: codificam proteínas que Estruturais: são usadas no metabolismo e na biossíntese, ou que têm um papel estrutural na célula; célula; Genes Reguladores: são genes que cujo Reguladores: produto, seja um RNA ou uma proteína, interagem com outras seqüências e afetam sua transcrição ou tradução; tradução; Elementos Regulatórios: seqüências de DNA Regulatórios: que regulam a expressão de outras seqüências. seqüências.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Organização Gênica: Gênica:

Ex.: Ex.: E. coli, bactéria que reside no intestino grosso humano. Os humano. nossos hábitos alimentares determinam os nutrientes disponíveis para essa bactéria. bactéria. Mecanismo de compensação da sua inabilidade em alterar o meio externo sendo internamente flexível. Ex.: Se a glicose está presente, flexível. Ex.: ela a usa para gerar ATP; se não houver glicose, ela usa lactose, ATP; maltose ou qualquer outro dentre vários açucares. açucares.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Genes de procariotos responsáveis por funções vitais, como os que codificam para RNAr, RNAt, enzimas de vias glicolíticas, subunidades de DNA Pol, RNA Pol e proteínas ribossomais, são constantes); expressos constitutivamente (velocidade e quantidades constantes); Outros genes só são expressos quando seus produtos são necessários, sua expressão é induzida, como são os genes codificantes de enzimas induzida, envolvidas em vias catabólicas; catabólicas; - Ex.: a presença de uma fonte de carbono no ambiente provoca a Ex.: expressão de genes que codificam enzimas que captam e metabolizam essa fonte de carbono. Quando esta fonte desaparece, os carbono. genes que codificam estas enzimas são desligados. desligados.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
O processo inverso ao mecanismo de indução é o de repressão; Ex.: repressão; Ex.: Em E. coli, a via metabólica (enzimas) de síntese de um aminoácido coli, qualquer pode ser desligada se ao meio em que ela se encontra for adicionado o aminoácido em questão. questão. Repressão Catabólica: As bactérias metabolizam glicose Catabólica: preferencialmente na presença d l t f i l t de lactose ou outros açúcares. A t açúcares. ú quebra da glicose (glicólise) requer menos energia. Quando a glicose glicólise) energia. está disponível, os genes que participam do metabolismo de outros açúcares ficam reprimidos. reprimidos.

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transcrição. transcrição.) etc. 2 . etc.Quando em quantidade suficiente. pois este tem o seu próprio promotor. promotora. operadores). σ28. É formado pelos genes estruturais.N controle positivo indutível. transcrição. . gp33 fatores formam um complexo σgp33 /34.Os ativadores unem-se a sítios adjacentes ao promotor. um promotor e um operador.Controle Positivo: Uma proteína regulatória atua como ativador. mas não é considerado parte dele. t de de ã tardia tardia. aumentando a unemafinidade da RNA pol por ele e favorecendo a transcrição. diz-se que o dizcontrole é negativo repressível. indutível ti d r une molécula formando um complexo que então se une ao DNA. Ex. . .Operon: grupo de genes estruturais que são transcritos juntos sob o Operon: controle de um único promotor. ligandoligando-se ao DNA e inibindo a transcrição. que normalmente está inativo.: SPO1 subtilis. que estão localizados próximos ou sobrepostos à região promotora. traduzido em uma pequena proteína reguladora que se liga ao sítio operador. Operon Trp operador. estimulando a transcrição. existentes na célula. σ34.Ex. é ativado pela molécula bloqueando a ação da RNA pol e a transcrição.Quando o repressor. do ativador. Os repressores unem-se a sítios específicos no DNA (sítios unemoperadores). Imediata Intermediária RNA pol Tardia EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . esse fator permite a expressão dos gp33 gp34 genes intermediários 33 e 34. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O modelo do Operon: Operon: . diz-se que o dizcontrole é negativo indutível. intermediária e genes: imediata. . favorecendo a transcrição. indutível. pol. . célula. que codificam os fatores σgp33 e σgp34. o ativador se une ao DNA repressível. Esta ligação é regulada por uma molécula que se une ao repressor mudando sua conformação e sua afinidade pelo operador. transcrição. Positivo: ativador. Ele é promotor. A ligação da molécula promove a dissociação transcrição. transcrição. subtilis. é inativado pela molécula permitindo a ação da RNA pol e a transcrição. subtilis (= σ70 em E. impedindo a transcrição. o ativador se un à m lé ul f rm nd No ntr l positi o indutí el. operador. . Ex.: . que normalmente está ativo. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: .: Bacteriófago SPO1 que infecta e se multiplica em B.Um gene regulador afeta o funcionamento do operon. Negativo: repressor.: Operon Lac. Ex. tardia.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O controle transcricional exercido por cascatas de fatores σ: -A especificidade da ligação da RNApol nos diferentes promotores é dada pela interação com as várias espécies de fatores σ (σ70. repressível. . favorecendo a transcrição. A ligação do repressor no operador impede a ligação e a movimentação da RNA pol.No controle positivo repressível. Estes 34.Quando o repressor. Existem 3 categorias de genes: expressão imediata. transcrição. Um destes genes é o gp28 28 cujo produto é o fator σgp28. promotor. tardia. responsável pela identificação de promotores d genes d expressão t di . operador. estruturais. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS -Após a infecção do fago.A disponibilidade desses fatores σ para início da transcrição pode ser uma forma de controle da expressão gênica em nível de transcrição.Controle Negativo: Uma proteína regulatória atua como repressor. os genes imediatos são transcritos sob o coli) controle do fator σA de B. coli).

repressor. mas sua transacetilase. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS .O Operon Trp contém 5 genes estruturais (trpE. a permease pelo gene lacZ. coli descrito em 1961 por François Jacob e Jacques Monod. β-galactosidase e a transacetilase são codificadas por genes estruturais no Operon Lac de E. O baixo nível de p g glicose. . glicose aumenta a produção do AMPc levando à transcrição dos genes do Operon Lac. trpB e trpA) que trpA) produzem componentes de 3 enzimas que convertem corismato em triptofano. permease. O controle positivo requer um fator de ativação.A repressão é feita pela ligação do próprio triptofano ao repressor. O repressor ativo liga-se ao operador e impede que a RNApol ativo. são produzidas apenas algumas moléculas de cada enzima. como o complexo AMPc + proteína ativadora do catabolismo (CAP).Para usar a lactose como fonte de energia. mesmo que o repressor Lac esteja dissociado do operador. a E. 3 . quando a lactose é adicionada ao meio e a glicose está ausente. galactose. . Triptofano. enzima. -A repressão catabólica resulta do controle positivo em resposta à glicose.A ativação do CAP é ineficaz nesse sistema se o repressor Lac estiver bloqueando a transcrição. .Uma terceira enzima. min. Lac. desconhecida. lacY e a transacetilase pelo gene lacA. a transacetilase.No Operon Lac os 3 genes tem um promotor único (P) e são transcritos juntos. coli. coli deve quebrá-la em quebráglicose e galactose. lacA. I) que tem seu próprio promotor e atua como repressor. reação catalisada pela enzima β-galactosidase. . glicose. galactosidase. . que se CAP). função no metabolismo da lactose é desconhecida. g estruturais. transcrição. Antecedendo o promotor há um gene regulador (lac juntos. a taxa ausente. glicose. ligatranscreva os genes estruturais. coli.Modelo de controle da biossíntese de Triptofano. Esta enzima também converte a lactose em alolactose.Entretanto. .Quando a lactose está ausente no meio na qual a bactéria cresce. produzida. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Trp (Operon do Triptofano): Triptofano): . . trpC. -Lactose: dissacarídeo de difícil difusão através da membrana celular Lactose: p p devendo ser transportada ativamente para o interior da célula com o auxílio de uma enzima permease.Os níveis de AMPc são controlados pela glicose. a menos que CAP esteja ligada ao DNA. também é produzida. triptofano. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac: Lac: -As três enzimas. permease. Entretanto. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac e a Repressão Catabólica: Catabólica: -A indução do Operon Lac requer tanto a presença da alolactose (indutor) para inativar o repressor. alolactose. . o que torna o repressor ativo. RNApol. trpD. de síntese de todas as 3 enzimas aumenta cerca de mil vezes dentro de 2 ou 3 min. Monod. liga a um sítio perto do promotor e estimula a ligação da RNApol. a transcrição não atinge níveis máximos. -A β-galactosidase é codificada pelo gene lacZ. quanto a ausência de glicose.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac (Operon da Lactose): Lactose): -Modelo para o controle genético do metabolismo de lactose em E. DNA.

continue. mas apenas um subgrupo de genes é expresso em cada tipo celular. Desestabiliza o mRNA susceptível a endonucleases. desenvolvimento -Todas as células de um organismo levam a mesma informação genética.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS A Atenuação da Transcrição: Transcrição: - A Atenuação da Transcrição: Transcrição: .os próprios p g p p q ribossomos impedem a formação do grampo permitindo que a transcrição continue.Mesmo que a transcrição do Operon Trp tenha sido iniciada (↓ [ ] de triptofano). operons. grampo. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: . Evita E ita ligação ao ribossomo ribossomo.Os ativadores parecem ser mais comuns em células eucarióticas. essa pode não prosseguir até o sítio de término. a maior parte da transcrição termina ali. . .RNAs anti-senso: Pequenas moléculas de RNA complementares a seqüências particulares nos RNAm que se ligam a estes e inibem a tradução.Disponibilidade de proteínas ribossômicas. .Os genes eucarióticos não estão organizados em operons. transcrição. procarióticas. Mimetiza um terminador. ambientais. por neutralizar as cargas positivas das histonas. término. tornando-o EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: -A expressão gênica em eucariotos é regulada no tempo e no espaço.O DNA deve se desenrolar das proteínas histonas para que ocorra a transcrição através: através: -Acetilação das histonas: A adição de grupos acetil (CH3CO) às histonas: proteínas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT). gênica. desenvolvimento. Caso o triptofano seja abundante. . espaço. Os (HAT). Outros genes são expressos em um padrão temporal específico durante o d n l im nt . Alguns genes são expressos de maneira específica para cada tecido. sítios.O sítio de atenuação está localizado a 162nt após o sítio de início da 162nt transcrição. . ACETILAÇÃO 4 . grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo.Quando necessário que a tradução ainda ocorra. Regulação Traducional: . destas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Estrutura da Cromatina X Regulação Gênica: Gênica: . permitindo que o DNA se separe destas. tecido. ali. -A estrutura da cromatina afeta a expressão gênica.Resposta limitada às mudanças nutricionais e ambientais. . EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS RNAs Regulatórios: .O término da transcrição é marcado por uma estrutura em forma de grampo.Mecanismo adicional de regulação da expressão gênica que controla a capacidade da RNApol em continuar o alongamento além de determinados sítios. embora tanto estes quanto os repressores estejam presentes também em células procarióticas. celular.

*Fenômeno epigenético pode ser definido como mudança no material genético que altera a regulação da expressão gênica de maneira que esta é passada para as células filhas dentro das células somáticas. transcrição.Evidências sugerem que a metilação do DNA esteja associada à desacetilação das histonas. gênica. genética. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS -Desacetilação das histonas: Outras enzimas denominadas desacetilases histonas: (HDAC) removem estes grupamentos acetil e restauram a estrutura compactada da cromatina.Complexos de Remodelagem da Cromatina: Alguns fatores de Cromatina: transcrição e outras proteínas regulatórias ligam-se diretamente a sítios ligamparticulares no DNA sem acetilar as proteínas histonas promovendo o início da transcrição. Podem estar localizados muito basal. hipermetilação) EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS .Este processo é mais comum nas bases citosinas ligadas covalentemente à guanina. visto que todas as células do corpo trazem a mesma carga genética. A metilação parece atrair as HDAC. reforçadores. . Os Insuladores ou Isoladores são seqüências de DNA que bloqueiam a propagação da influência dos reforçadores. desnecessários. .Mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor são inativados por 10% metilação. promotores. processo associado à repressão da expressão gênica.Em contraste. Os silenciadores servem para diminuir o nível de transcrição basal. comparativamente ricas em nucleotídeos CpG e quase sempre estão livres de metilação. .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . metiltransferase. que histonas. A resistência à quimioterapia está. região promotora dos genes humanos e a metilação dentro das ilhas está associada à inativação da transcrição do gene correspondente. tumores. -Metilação do DNA: Fenômeno epigenético* que ocorre pela DNA: epigenético* transferência de um grupamento metil (CH3) ao carbono 5 da citosina. -As alterações de metilação do DNA em células tumorais incluem a perda da metilação em seqüências normalmente metiladas (hipometilação) e o ganho de seqüências metiladas em locais geralmente hipometilação) não metilados (hipermetilação). integrais dos promotores. na maioria dos casos. Os reforçadores são elementos reguladores positivos que servem para aumentar o nível de transcrição basal. É um CpG. gênica. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: -Via seqüências de DNA localizada 5’ upstream: Reforçadores upstream: (“enhancers”) e Silenciadores (“silencers”). pois não mutação. basal. metilação. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . -O que as diferencia é a manifestação de um ou de outro gene durante o desenvolvimento d n l im nt e em t d a sua vida p r desativar g n m toda u id para d ti r genes desnecessários. porém não é caracterizada como mutação. chamadas ilhas CpG. denominados dinucleotídeos CpG. pequenas porções de DNA. (“silencers”). correspondente. ligada ao grau de metilações anormais em alguns tumores. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS .Células cancerígenas: metilação anormal de DNA desativa genes que cancerígenas: normalmente evitariam divisões celulares impróprias. transcrição. . removem o grupamento acetil estabilizando a estrutura do nucleossomo reprimindo assim. impróprias. catalisada por uma enzima DNA metiltransferase. Estas ilhas CpG estão freqüentemente localizadas na metilação. DNA. reprimindo a transcrição. a expressão gênica. envolve mudança na seqüência de DNA. são CpG. 5 . distantes do gene que eles regulam. Alguns podem ser componentes regulam.Metilação de DNA é o mecanismo que permite que determinados genes (e não outros) se manifestem dentro de células normais especializadas.

Ex. exerce globina: (LCR). .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição e Regulação Gênica: Gênica: .Duas hélices alfa que se ligam ao sulco maior do DNA. Repressores. Presentes em células eucarióticas. controle na expressão destes genes visto que: que: 1) Seqüências reguladoras presentes em promotores e reforçadores não são suficientes para controlar a expressão. . eucarióticas. EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS Em eucariotos muitos genes estão organizados em locus multigênicos. compostos domínios. específicas. . III. por 60 a 90 aa que são responsáveis pela ligação ao DNA. ativos. expressão. que se ligam a dois sulcos maiores do DNA.: TFIID). 3) Presença de sítios hipersensíveis à DNase* na região 5’upstream do gene da β-globina. transcrição.Alça de aa com Zinco na base que se ligam ao sulco maior do DNA. Motivo Zíper de Leucina . Dividemse em duas classes: classes: 1) Fatores Basais de Transcrição: necessários para a expressão de todos Transcrição: g p p p os genes transcritos pela RNApol II.: Genes de globina: a região de controle do locus (LCR). DNA. 2) Deleções na região 5’upstream do gene da β-globina inativam a expressão do locus. (Ex. Presentes em células procarióticas e eucarióticas. em que os mesmos são coordenadamente regulados durante a diferenciação e desenvolvimento.: Ex. básico. açúcarDNA. eucarióticas. Dentro dos DNA. locus. estando presentes em todas as células (Ex. Co-ativadores e CoCoCorepressores): repressores): responsáveis pela expressão de proteínas célulacélulaespecíficas. duas leucinas interdigitadas. Em geral formam pontes de hidrogênio com as bases do DNA ou interagem com o arcabouço açúcar-fosfato do DNA.Hélices de Leucinas e um braço básico.Descoberto no fator TFIIIA envolvido na transcrição do RNAr 5S pela RNA pol III. 2) Fatores Específicos (Ativadores.Estes fatores apresentam domínios funcionais de ligação ao DNA e de ativação da transcrição. sendo este um bom parâmetro na identificação de genes ativos. globina. TFIID). EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Motivo Zinc Finger . TFIIB.Via fatores de transcrição: proteínas especiais ou seqüências transcrição: reguladoras presentes nos reforçadores e nos promotores. eucarióticas. desenvolvimento. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Proteínas de Ligação ao DNA: DNA: Proteínas que se ligam a seqüências de DNA e que influenciam sua expressão. Presentes em células eucarióticas.Apresentam partes funcionais denominadas de domínios. 6 . expressão. motivos. Dividempromotores. DNA.: TFIIA. * Regiões transcricionalmente ativas (cromatina frouxa) são mais sensíveis à degradação pela DNase. Motivo Hélice-Giro-Hélice Hélice-Giro. domínios existem estruturas características denominadas motivos. DNA.

: Ex. decomposição. estimula a transcrição. genes. p ç p diferentes). A região LCR. operons. Um único gene pode ser regulado por vários elementos de resposta diferentes. ) sítios alternativos de poliadenilação do RNAm (idem).Os genes eucarióticos podem ser regulados por meio do controle do processamento do RNAm: RNAm: sítios alternativos de “splicing” do RNAm (a seleção de sítios splicing” alternativos de corte leva à produção de proteínas diferentes). resposta. ligam-se à seqüências complementares do RNAm causando ligamcorte e decomposição. . EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Vários genes eucarióticos podem ser ativados pelo mesmo estímulo. controle do transporte do RNAm para o citoplasma (translocação).Elemento de resposta a ésteres de forbol (TGACTCA) BLEBLE. transcrição. resposta. Os genes de expressão coordenada são capazes de responder ao mesmo estímulo pois têm seqüências regulatórias em comum nos seus promotores e reforçadores.: Ex. DNA. (idem). globina). EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: . 7 . Ex. se ligam as proteínas regulatórias para ativar a transcrição gênica. onde. embora não estejam agrupados como operons. marcada por sítios hipersensíveis a DNase.Elemento de resposta a metais TRETRE. O pequenos RNA interferentes processadas. GREGRE. Ex. que codifica uma proteína que se liga a metalotioneína. (RNAsi). permite o acesso de proteínas regulatórias possam se ligar e ativar a transcrição dos genes.: As proteínas de choque térmico (heat-shock . metais pesados e os remove das células. após estímulo específico. RNAm. gênica. Estas são denominadas elementos de reforçadores.O RNAsi podem estimular a metilação d seqüências complementares Os A d l l de l no DNA.hsp) ajudam a evitar heathsp) danos contra agentes estressantes (calor) são produzidas por 20 genes diferentes que são expressos coordenadamente. estímulo. translocação) controle citoplasmático da estabilidade (degradação por ribonucleases) do RNAm. diferentes. A presença de metais pesados células. transcrição.Elemento de resposta basal Nos elementos de resposta existem seqüências consenso curtas. mas também pelo LCR localizado a montante do 1º gene do cluster (ε-globina).Elemento de resposta a hormônios glicocorticóide (TGGTACAAAATGTTCT) MREMRE.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS A expressão dos genes de globina é determinada não somente pelo seus promotores.: O gene da metalotioneína. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: silenciamento do RNA: iniciado por moléculas bifilamentares de RNA RNA: que são cortadas e processadas. Embrião Fetal Adulto EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Outros elementos de resposta são encontrados antecedendo o gene da metalotioneína e também contribuem para aumentar a transcrição.

Após a tradução as proteínas eucarióticas passam por uma seleção alternativa de vias de processamento: processamento: clivagem proteolítica. RNAt). fosforilação. fatores de iniciação e alongamento. aminoacil RNAt). Disponibilidade de proteínas que se p p q ligam nas pontas 5’ e 3’ do RNAm (CAP binding proteins e PoliA binding proteins) proteins). - - 8 . modificações covalentes (acetilação. metilação) e especificidade de degradação. remoção da seqüência sinal. degradação.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Tradução e Pós-Tradução X Regulação PósGênica: Gênica: Disponibilidade dos componentes necessários à maquinaria da tradução (ribossomos.

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