17/11/2009

EXPRESSÃO GÊNICA
Definição: Definição: - Processo que inclui a transcrição e a eventual tradução do RNA em proteína; proteína; - Envolve proteínas, que reagem a sinais ambientais, aumentando ou diminuindo as taxas de expressão de genes específicos; específicos; - Envolve também sistemas complexos que garantem a expressão de genes na época e nas quantidades apropriadas; apropriadas; - Interação entre as seqüências gênicas denominadas de elementos reguladores. reguladores. e outras seqüências

CONTROLE DA EXPRESSÃO GÊNICA:
- PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

EXPRESSÃO GÊNICA
Níveis de Controle: Controle: 1) Modificações no DNA ou em sua compactação 2) Transcrição 3) Pós-Transcrição Pós4) Tradução 5) Pós-Tradução PósGenes Estruturais: codificam proteínas que Estruturais: são usadas no metabolismo e na biossíntese, ou que têm um papel estrutural na célula; célula; Genes Reguladores: são genes que cujo Reguladores: produto, seja um RNA ou uma proteína, interagem com outras seqüências e afetam sua transcrição ou tradução; tradução; Elementos Regulatórios: seqüências de DNA Regulatórios: que regulam a expressão de outras seqüências. seqüências.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Organização Gênica: Gênica:

Ex.: Ex.: E. coli, bactéria que reside no intestino grosso humano. Os humano. nossos hábitos alimentares determinam os nutrientes disponíveis para essa bactéria. bactéria. Mecanismo de compensação da sua inabilidade em alterar o meio externo sendo internamente flexível. Ex.: Se a glicose está presente, flexível. Ex.: ela a usa para gerar ATP; se não houver glicose, ela usa lactose, ATP; maltose ou qualquer outro dentre vários açucares. açucares.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Genes de procariotos responsáveis por funções vitais, como os que codificam para RNAr, RNAt, enzimas de vias glicolíticas, subunidades de DNA Pol, RNA Pol e proteínas ribossomais, são constantes); expressos constitutivamente (velocidade e quantidades constantes); Outros genes só são expressos quando seus produtos são necessários, sua expressão é induzida, como são os genes codificantes de enzimas induzida, envolvidas em vias catabólicas; catabólicas; - Ex.: a presença de uma fonte de carbono no ambiente provoca a Ex.: expressão de genes que codificam enzimas que captam e metabolizam essa fonte de carbono. Quando esta fonte desaparece, os carbono. genes que codificam estas enzimas são desligados. desligados.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
O processo inverso ao mecanismo de indução é o de repressão; Ex.: repressão; Ex.: Em E. coli, a via metabólica (enzimas) de síntese de um aminoácido coli, qualquer pode ser desligada se ao meio em que ela se encontra for adicionado o aminoácido em questão. questão. Repressão Catabólica: As bactérias metabolizam glicose Catabólica: preferencialmente na presença d l t f i l t de lactose ou outros açúcares. A t açúcares. ú quebra da glicose (glicólise) requer menos energia. Quando a glicose glicólise) energia. está disponível, os genes que participam do metabolismo de outros açúcares ficam reprimidos. reprimidos.

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é inativado pela molécula permitindo a ação da RNA pol e a transcrição. coli). tardia.: . A ligação da molécula promove a dissociação transcrição.Controle Negativo: Uma proteína regulatória atua como repressor. que normalmente está ativo. subtilis (= σ70 em E. Esta ligação é regulada por uma molécula que se une ao repressor mudando sua conformação e sua afinidade pelo operador. promotora. célula. σ34. que codificam os fatores σgp33 e σgp34.Os ativadores unem-se a sítios adjacentes ao promotor. gp33 fatores formam um complexo σgp33 /34. favorecendo a transcrição. subtilis.) etc. é ativado pela molécula bloqueando a ação da RNA pol e a transcrição. Os repressores unem-se a sítios específicos no DNA (sítios unemoperadores). que estão localizados próximos ou sobrepostos à região promotora. operador. .Um gene regulador afeta o funcionamento do operon.: SPO1 subtilis. Negativo: repressor.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O controle transcricional exercido por cascatas de fatores σ: -A especificidade da ligação da RNApol nos diferentes promotores é dada pela interação com as várias espécies de fatores σ (σ70. ligandoligando-se ao DNA e inibindo a transcrição. A ligação do repressor no operador impede a ligação e a movimentação da RNA pol. . EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS -Após a infecção do fago. transcrição.: Operon Lac. promotor. traduzido em uma pequena proteína reguladora que se liga ao sítio operador. pois este tem o seu próprio promotor.Ex. mas não é considerado parte dele. operadores). impedindo a transcrição. intermediária e genes: imediata. . transcrição.Operon: grupo de genes estruturais que são transcritos juntos sob o Operon: controle de um único promotor. aumentando a unemafinidade da RNA pol por ele e favorecendo a transcrição. Imediata Intermediária RNA pol Tardia EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . diz-se que o dizcontrole é negativo indutível. 2 . . estimulando a transcrição. . É formado pelos genes estruturais. Ex. que normalmente está inativo. pol. responsável pela identificação de promotores d genes d expressão t di .Quando em quantidade suficiente. os genes imediatos são transcritos sob o coli) controle do fator σA de B. transcrição. t de de ã tardia tardia. Ex.Controle Positivo: Uma proteína regulatória atua como ativador. tardia. Existem 3 categorias de genes: expressão imediata. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . . um promotor e um operador.: Bacteriófago SPO1 que infecta e se multiplica em B. o ativador se une ao DNA repressível. indutível ti d r une molécula formando um complexo que então se une ao DNA.No controle positivo repressível. indutível. transcrição. favorecendo a transcrição. operador. .Quando o repressor. existentes na célula. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O modelo do Operon: Operon: . transcrição.Quando o repressor. o ativador se un à m lé ul f rm nd No ntr l positi o indutí el. transcrição. σ28. diz-se que o dizcontrole é negativo repressível. Ex.N controle positivo indutível. Um destes genes é o gp28 28 cujo produto é o fator σgp28. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . etc. Ele é promotor.A disponibilidade desses fatores σ para início da transcrição pode ser uma forma de controle da expressão gênica em nível de transcrição. repressível. Positivo: ativador. Operon Trp operador. Estes 34. esse fator permite a expressão dos gp33 gp34 genes intermediários 33 e 34. estruturais. do ativador.

coli. . a transcrição não atinge níveis máximos. glicose.Os níveis de AMPc são controlados pela glicose.No Operon Lac os 3 genes tem um promotor único (P) e são transcritos juntos. ligatranscreva os genes estruturais.Entretanto.Para usar a lactose como fonte de energia.Quando a lactose está ausente no meio na qual a bactéria cresce. . O controle positivo requer um fator de ativação. mesmo que o repressor Lac esteja dissociado do operador. coli. lacA. alolactose. desconhecida. . de síntese de todas as 3 enzimas aumenta cerca de mil vezes dentro de 2 ou 3 min.O Operon Trp contém 5 genes estruturais (trpE. Esta enzima também converte a lactose em alolactose. 3 .Uma terceira enzima. . triptofano. a taxa ausente. g estruturais. min. quando a lactose é adicionada ao meio e a glicose está ausente. Entretanto. galactose.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac (Operon da Lactose): Lactose): -Modelo para o controle genético do metabolismo de lactose em E. produzida. a transacetilase. Monod. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac: Lac: -As três enzimas. O repressor ativo liga-se ao operador e impede que a RNApol ativo. . também é produzida. permease. trpB e trpA) que trpA) produzem componentes de 3 enzimas que convertem corismato em triptofano. coli descrito em 1961 por François Jacob e Jacques Monod. glicose aumenta a produção do AMPc levando à transcrição dos genes do Operon Lac. a E. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac e a Repressão Catabólica: Catabólica: -A indução do Operon Lac requer tanto a presença da alolactose (indutor) para inativar o repressor.A ativação do CAP é ineficaz nesse sistema se o repressor Lac estiver bloqueando a transcrição. coli deve quebrá-la em quebráglicose e galactose.Modelo de controle da biossíntese de Triptofano. quanto a ausência de glicose. RNApol. Triptofano. a permease pelo gene lacZ. -Lactose: dissacarídeo de difícil difusão através da membrana celular Lactose: p p devendo ser transportada ativamente para o interior da célula com o auxílio de uma enzima permease. -A β-galactosidase é codificada pelo gene lacZ. lacY e a transacetilase pelo gene lacA. liga a um sítio perto do promotor e estimula a ligação da RNApol. transcrição. que se CAP). DNA. I) que tem seu próprio promotor e atua como repressor. reação catalisada pela enzima β-galactosidase. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS . como o complexo AMPc + proteína ativadora do catabolismo (CAP). Lac. permease. mas sua transacetilase. repressor. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Trp (Operon do Triptofano): Triptofano): . são produzidas apenas algumas moléculas de cada enzima. O baixo nível de p g glicose. trpC. glicose. a menos que CAP esteja ligada ao DNA. -A repressão catabólica resulta do controle positivo em resposta à glicose. enzima. função no metabolismo da lactose é desconhecida. trpD. . . o que torna o repressor ativo. β-galactosidase e a transacetilase são codificadas por genes estruturais no Operon Lac de E. galactosidase. Antecedendo o promotor há um gene regulador (lac juntos.A repressão é feita pela ligação do próprio triptofano ao repressor. .

. . ACETILAÇÃO 4 . tornando-o EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: -A expressão gênica em eucariotos é regulada no tempo e no espaço. . ali.O término da transcrição é marcado por uma estrutura em forma de grampo.RNAs anti-senso: Pequenas moléculas de RNA complementares a seqüências particulares nos RNAm que se ligam a estes e inibem a tradução. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: . celular. desenvolvimento. operons.Mesmo que a transcrição do Operon Trp tenha sido iniciada (↓ [ ] de triptofano). grampo. destas. permitindo que o DNA se separe destas. embora tanto estes quanto os repressores estejam presentes também em células procarióticas. tecido. Os (HAT).Disponibilidade de proteínas ribossômicas. Outros genes são expressos em um padrão temporal específico durante o d n l im nt . grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo.O sítio de atenuação está localizado a 162nt após o sítio de início da 162nt transcrição.Os ativadores parecem ser mais comuns em células eucarióticas. a maior parte da transcrição termina ali. mas apenas um subgrupo de genes é expresso em cada tipo celular. espaço. continue.O DNA deve se desenrolar das proteínas histonas para que ocorra a transcrição através: através: -Acetilação das histonas: A adição de grupos acetil (CH3CO) às histonas: proteínas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT). Evita E ita ligação ao ribossomo ribossomo. Caso o triptofano seja abundante. sítios. gênica. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Estrutura da Cromatina X Regulação Gênica: Gênica: . por neutralizar as cargas positivas das histonas. Desestabiliza o mRNA susceptível a endonucleases.Resposta limitada às mudanças nutricionais e ambientais.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS A Atenuação da Transcrição: Transcrição: - A Atenuação da Transcrição: Transcrição: . .Mecanismo adicional de regulação da expressão gênica que controla a capacidade da RNApol em continuar o alongamento além de determinados sítios. Alguns genes são expressos de maneira específica para cada tecido. desenvolvimento -Todas as células de um organismo levam a mesma informação genética. procarióticas. término. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS RNAs Regulatórios: . . -A estrutura da cromatina afeta a expressão gênica.Quando necessário que a tradução ainda ocorra.Os genes eucarióticos não estão organizados em operons. Regulação Traducional: .os próprios p g p p q ribossomos impedem a formação do grampo permitindo que a transcrição continue. transcrição. Mimetiza um terminador. . ambientais. essa pode não prosseguir até o sítio de término.

Os Insuladores ou Isoladores são seqüências de DNA que bloqueiam a propagação da influência dos reforçadores. genética. .Mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor são inativados por 10% metilação. pois não mutação. pequenas porções de DNA. É um CpG. gênica. A metilação parece atrair as HDAC.Células cancerígenas: metilação anormal de DNA desativa genes que cancerígenas: normalmente evitariam divisões celulares impróprias.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . chamadas ilhas CpG. -O que as diferencia é a manifestação de um ou de outro gene durante o desenvolvimento d n l im nt e em t d a sua vida p r desativar g n m toda u id para d ti r genes desnecessários. distantes do gene que eles regulam. 5 . visto que todas as células do corpo trazem a mesma carga genética. hipermetilação) EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . comparativamente ricas em nucleotídeos CpG e quase sempre estão livres de metilação.Evidências sugerem que a metilação do DNA esteja associada à desacetilação das histonas. Estas ilhas CpG estão freqüentemente localizadas na metilação. envolve mudança na seqüência de DNA. metilação. (“silencers”). -As alterações de metilação do DNA em células tumorais incluem a perda da metilação em seqüências normalmente metiladas (hipometilação) e o ganho de seqüências metiladas em locais geralmente hipometilação) não metilados (hipermetilação). removem o grupamento acetil estabilizando a estrutura do nucleossomo reprimindo assim. . . impróprias. -Metilação do DNA: Fenômeno epigenético* que ocorre pela DNA: epigenético* transferência de um grupamento metil (CH3) ao carbono 5 da citosina. basal. desnecessários. correspondente. Os reforçadores são elementos reguladores positivos que servem para aumentar o nível de transcrição basal. integrais dos promotores. na maioria dos casos. região promotora dos genes humanos e a metilação dentro das ilhas está associada à inativação da transcrição do gene correspondente. reforçadores. reprimindo a transcrição. são CpG. gênica.Metilação de DNA é o mecanismo que permite que determinados genes (e não outros) se manifestem dentro de células normais especializadas.Em contraste. Alguns podem ser componentes regulam. Os silenciadores servem para diminuir o nível de transcrição basal. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: -Via seqüências de DNA localizada 5’ upstream: Reforçadores upstream: (“enhancers”) e Silenciadores (“silencers”). denominados dinucleotídeos CpG. a expressão gênica. promotores. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS -Desacetilação das histonas: Outras enzimas denominadas desacetilases histonas: (HDAC) removem estes grupamentos acetil e restauram a estrutura compactada da cromatina. .Complexos de Remodelagem da Cromatina: Alguns fatores de Cromatina: transcrição e outras proteínas regulatórias ligam-se diretamente a sítios ligamparticulares no DNA sem acetilar as proteínas histonas promovendo o início da transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . Podem estar localizados muito basal. tumores. que histonas.Este processo é mais comum nas bases citosinas ligadas covalentemente à guanina.*Fenômeno epigenético pode ser definido como mudança no material genético que altera a regulação da expressão gênica de maneira que esta é passada para as células filhas dentro das células somáticas. A resistência à quimioterapia está. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . porém não é caracterizada como mutação. DNA. catalisada por uma enzima DNA metiltransferase. metiltransferase. processo associado à repressão da expressão gênica. transcrição. ligada ao grau de metilações anormais em alguns tumores. transcrição.

DNA.Apresentam partes funcionais denominadas de domínios.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição e Regulação Gênica: Gênica: . 3) Presença de sítios hipersensíveis à DNase* na região 5’upstream do gene da β-globina.Descoberto no fator TFIIIA envolvido na transcrição do RNAr 5S pela RNA pol III. 2) Fatores Específicos (Ativadores. eucarióticas. DNA. Presentes em células procarióticas e eucarióticas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Proteínas de Ligação ao DNA: DNA: Proteínas que se ligam a seqüências de DNA e que influenciam sua expressão. específicas. . eucarióticas. Presentes em células eucarióticas. em que os mesmos são coordenadamente regulados durante a diferenciação e desenvolvimento. duas leucinas interdigitadas. DNA. . expressão. compostos domínios. (Ex. Repressores.: Ex.Hélices de Leucinas e um braço básico. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Motivo Zinc Finger . por 60 a 90 aa que são responsáveis pela ligação ao DNA.Duas hélices alfa que se ligam ao sulco maior do DNA. desenvolvimento. eucarióticas. motivos. açúcarDNA. expressão. básico. TFIIB. Dividempromotores. ativos. Dividemse em duas classes: classes: 1) Fatores Basais de Transcrição: necessários para a expressão de todos Transcrição: g p p p os genes transcritos pela RNApol II. controle na expressão destes genes visto que: que: 1) Seqüências reguladoras presentes em promotores e reforçadores não são suficientes para controlar a expressão. . estando presentes em todas as células (Ex.Via fatores de transcrição: proteínas especiais ou seqüências transcrição: reguladoras presentes nos reforçadores e nos promotores. Motivo Hélice-Giro-Hélice Hélice-Giro. EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS Em eucariotos muitos genes estão organizados em locus multigênicos. Co-ativadores e CoCoCorepressores): repressores): responsáveis pela expressão de proteínas célulacélulaespecíficas. sendo este um bom parâmetro na identificação de genes ativos. que se ligam a dois sulcos maiores do DNA. exerce globina: (LCR).Estes fatores apresentam domínios funcionais de ligação ao DNA e de ativação da transcrição. * Regiões transcricionalmente ativas (cromatina frouxa) são mais sensíveis à degradação pela DNase.: TFIIA. 6 . locus.Alça de aa com Zinco na base que se ligam ao sulco maior do DNA.: TFIID). TFIID). Presentes em células eucarióticas. III. domínios existem estruturas características denominadas motivos.: Genes de globina: a região de controle do locus (LCR). transcrição. Ex. globina. 2) Deleções na região 5’upstream do gene da β-globina inativam a expressão do locus. Dentro dos DNA. Motivo Zíper de Leucina . Em geral formam pontes de hidrogênio com as bases do DNA ou interagem com o arcabouço açúcar-fosfato do DNA.

Estas são denominadas elementos de reforçadores. RNAm. transcrição. após estímulo específico. permite o acesso de proteínas regulatórias possam se ligar e ativar a transcrição dos genes. A presença de metais pesados células. mas também pelo LCR localizado a montante do 1º gene do cluster (ε-globina).Elemento de resposta a ésteres de forbol (TGACTCA) BLEBLE. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: silenciamento do RNA: iniciado por moléculas bifilamentares de RNA RNA: que são cortadas e processadas.O RNAsi podem estimular a metilação d seqüências complementares Os A d l l de l no DNA. metais pesados e os remove das células. Ex.: O gene da metalotioneína.: Ex. Ex.hsp) ajudam a evitar heathsp) danos contra agentes estressantes (calor) são produzidas por 20 genes diferentes que são expressos coordenadamente.Elemento de resposta a metais TRETRE. . (RNAsi). gênica. controle do transporte do RNAm para o citoplasma (translocação).Os genes eucarióticos podem ser regulados por meio do controle do processamento do RNAm: RNAm: sítios alternativos de “splicing” do RNAm (a seleção de sítios splicing” alternativos de corte leva à produção de proteínas diferentes).17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS A expressão dos genes de globina é determinada não somente pelo seus promotores. onde. translocação) controle citoplasmático da estabilidade (degradação por ribonucleases) do RNAm. O pequenos RNA interferentes processadas. resposta. estimula a transcrição. operons. diferentes.: Ex. (idem). marcada por sítios hipersensíveis a DNase. 7 . decomposição. DNA.Elemento de resposta a hormônios glicocorticóide (TGGTACAAAATGTTCT) MREMRE. p ç p diferentes). se ligam as proteínas regulatórias para ativar a transcrição gênica. EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Vários genes eucarióticos podem ser ativados pelo mesmo estímulo. Um único gene pode ser regulado por vários elementos de resposta diferentes. estímulo.: As proteínas de choque térmico (heat-shock . Embrião Fetal Adulto EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Outros elementos de resposta são encontrados antecedendo o gene da metalotioneína e também contribuem para aumentar a transcrição. transcrição. genes. resposta.Elemento de resposta basal Nos elementos de resposta existem seqüências consenso curtas. embora não estejam agrupados como operons. ) sítios alternativos de poliadenilação do RNAm (idem). EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: . globina). A região LCR. GREGRE. que codifica uma proteína que se liga a metalotioneína. ligam-se à seqüências complementares do RNAm causando ligamcorte e decomposição. Os genes de expressão coordenada são capazes de responder ao mesmo estímulo pois têm seqüências regulatórias em comum nos seus promotores e reforçadores.

modificações covalentes (acetilação. metilação) e especificidade de degradação. Disponibilidade de proteínas que se p p q ligam nas pontas 5’ e 3’ do RNAm (CAP binding proteins e PoliA binding proteins) proteins). Após a tradução as proteínas eucarióticas passam por uma seleção alternativa de vias de processamento: processamento: clivagem proteolítica. fatores de iniciação e alongamento. - - 8 . fosforilação. aminoacil RNAt). remoção da seqüência sinal. degradação.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Tradução e Pós-Tradução X Regulação PósGênica: Gênica: Disponibilidade dos componentes necessários à maquinaria da tradução (ribossomos. RNAt).

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