17/11/2009

EXPRESSÃO GÊNICA
Definição: Definição: - Processo que inclui a transcrição e a eventual tradução do RNA em proteína; proteína; - Envolve proteínas, que reagem a sinais ambientais, aumentando ou diminuindo as taxas de expressão de genes específicos; específicos; - Envolve também sistemas complexos que garantem a expressão de genes na época e nas quantidades apropriadas; apropriadas; - Interação entre as seqüências gênicas denominadas de elementos reguladores. reguladores. e outras seqüências

CONTROLE DA EXPRESSÃO GÊNICA:
- PROCARIOTOS E EUCARIOTOS

EXPRESSÃO GÊNICA
Níveis de Controle: Controle: 1) Modificações no DNA ou em sua compactação 2) Transcrição 3) Pós-Transcrição Pós4) Tradução 5) Pós-Tradução PósGenes Estruturais: codificam proteínas que Estruturais: são usadas no metabolismo e na biossíntese, ou que têm um papel estrutural na célula; célula; Genes Reguladores: são genes que cujo Reguladores: produto, seja um RNA ou uma proteína, interagem com outras seqüências e afetam sua transcrição ou tradução; tradução; Elementos Regulatórios: seqüências de DNA Regulatórios: que regulam a expressão de outras seqüências. seqüências.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Organização Gênica: Gênica:

Ex.: Ex.: E. coli, bactéria que reside no intestino grosso humano. Os humano. nossos hábitos alimentares determinam os nutrientes disponíveis para essa bactéria. bactéria. Mecanismo de compensação da sua inabilidade em alterar o meio externo sendo internamente flexível. Ex.: Se a glicose está presente, flexível. Ex.: ela a usa para gerar ATP; se não houver glicose, ela usa lactose, ATP; maltose ou qualquer outro dentre vários açucares. açucares.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
Genes de procariotos responsáveis por funções vitais, como os que codificam para RNAr, RNAt, enzimas de vias glicolíticas, subunidades de DNA Pol, RNA Pol e proteínas ribossomais, são constantes); expressos constitutivamente (velocidade e quantidades constantes); Outros genes só são expressos quando seus produtos são necessários, sua expressão é induzida, como são os genes codificantes de enzimas induzida, envolvidas em vias catabólicas; catabólicas; - Ex.: a presença de uma fonte de carbono no ambiente provoca a Ex.: expressão de genes que codificam enzimas que captam e metabolizam essa fonte de carbono. Quando esta fonte desaparece, os carbono. genes que codificam estas enzimas são desligados. desligados.

EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS
O processo inverso ao mecanismo de indução é o de repressão; Ex.: repressão; Ex.: Em E. coli, a via metabólica (enzimas) de síntese de um aminoácido coli, qualquer pode ser desligada se ao meio em que ela se encontra for adicionado o aminoácido em questão. questão. Repressão Catabólica: As bactérias metabolizam glicose Catabólica: preferencialmente na presença d l t f i l t de lactose ou outros açúcares. A t açúcares. ú quebra da glicose (glicólise) requer menos energia. Quando a glicose glicólise) energia. está disponível, os genes que participam do metabolismo de outros açúcares ficam reprimidos. reprimidos.

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operadores).Operon: grupo de genes estruturais que são transcritos juntos sob o Operon: controle de um único promotor. promotora. transcrição. ligandoligando-se ao DNA e inibindo a transcrição. existentes na célula.N controle positivo indutível.Um gene regulador afeta o funcionamento do operon. Imediata Intermediária RNA pol Tardia EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . gp33 fatores formam um complexo σgp33 /34. .Quando o repressor. estruturais.Quando em quantidade suficiente. coli). que normalmente está ativo. é ativado pela molécula bloqueando a ação da RNA pol e a transcrição. σ34. Ex.) etc. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS -Após a infecção do fago. . pol. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . repressível. promotor. transcrição. que codificam os fatores σgp33 e σgp34. Ex. diz-se que o dizcontrole é negativo repressível.: Operon Lac. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS Os mecanismos de controle transcricional: transcricional: . do ativador. Os repressores unem-se a sítios específicos no DNA (sítios unemoperadores). pois este tem o seu próprio promotor. Positivo: ativador. Esta ligação é regulada por uma molécula que se une ao repressor mudando sua conformação e sua afinidade pelo operador. transcrição.Ex. etc. esse fator permite a expressão dos gp33 gp34 genes intermediários 33 e 34. A ligação do repressor no operador impede a ligação e a movimentação da RNA pol. Um destes genes é o gp28 28 cujo produto é o fator σgp28. que normalmente está inativo. σ28. Existem 3 categorias de genes: expressão imediata.Os ativadores unem-se a sítios adjacentes ao promotor. estimulando a transcrição. um promotor e um operador. o ativador se un à m lé ul f rm nd No ntr l positi o indutí el. que estão localizados próximos ou sobrepostos à região promotora. operador. Ex. traduzido em uma pequena proteína reguladora que se liga ao sítio operador. é inativado pela molécula permitindo a ação da RNA pol e a transcrição. .Controle Negativo: Uma proteína regulatória atua como repressor. tardia. célula. subtilis (= σ70 em E. favorecendo a transcrição.: Bacteriófago SPO1 que infecta e se multiplica em B. aumentando a unemafinidade da RNA pol por ele e favorecendo a transcrição. responsável pela identificação de promotores d genes d expressão t di . transcrição. t de de ã tardia tardia. favorecendo a transcrição. diz-se que o dizcontrole é negativo indutível. intermediária e genes: imediata. A ligação da molécula promove a dissociação transcrição. .No controle positivo repressível. . transcrição. transcrição. indutível. tardia. . mas não é considerado parte dele.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O controle transcricional exercido por cascatas de fatores σ: -A especificidade da ligação da RNApol nos diferentes promotores é dada pela interação com as várias espécies de fatores σ (σ70.Quando o repressor. os genes imediatos são transcritos sob o coli) controle do fator σA de B. É formado pelos genes estruturais.: SPO1 subtilis. subtilis.Controle Positivo: Uma proteína regulatória atua como ativador. Negativo: repressor. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O modelo do Operon: Operon: .: . indutível ti d r une molécula formando um complexo que então se une ao DNA.A disponibilidade desses fatores σ para início da transcrição pode ser uma forma de controle da expressão gênica em nível de transcrição. Ele é promotor. impedindo a transcrição. Operon Trp operador. 2 . operador. o ativador se une ao DNA repressível. Estes 34. .

trpB e trpA) que trpA) produzem componentes de 3 enzimas que convertem corismato em triptofano. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac e a Repressão Catabólica: Catabólica: -A indução do Operon Lac requer tanto a presença da alolactose (indutor) para inativar o repressor. quando a lactose é adicionada ao meio e a glicose está ausente. . DNA.Os níveis de AMPc são controlados pela glicose.Para usar a lactose como fonte de energia. glicose. alolactose. transcrição. β-galactosidase e a transacetilase são codificadas por genes estruturais no Operon Lac de E. mesmo que o repressor Lac esteja dissociado do operador. quanto a ausência de glicose. também é produzida. min. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS . a transcrição não atinge níveis máximos. Antecedendo o promotor há um gene regulador (lac juntos. são produzidas apenas algumas moléculas de cada enzima. . permease. coli.Uma terceira enzima. . Lac. . ligatranscreva os genes estruturais.Modelo de controle da biossíntese de Triptofano. triptofano. reação catalisada pela enzima β-galactosidase.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac (Operon da Lactose): Lactose): -Modelo para o controle genético do metabolismo de lactose em E. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Trp (Operon do Triptofano): Triptofano): . . coli descrito em 1961 por François Jacob e Jacques Monod. enzima. lacY e a transacetilase pelo gene lacA. trpD.A ativação do CAP é ineficaz nesse sistema se o repressor Lac estiver bloqueando a transcrição.O Operon Trp contém 5 genes estruturais (trpE. de síntese de todas as 3 enzimas aumenta cerca de mil vezes dentro de 2 ou 3 min. g estruturais. -A β-galactosidase é codificada pelo gene lacZ. RNApol. a permease pelo gene lacZ. -A repressão catabólica resulta do controle positivo em resposta à glicose. a E. trpC. função no metabolismo da lactose é desconhecida. -Lactose: dissacarídeo de difícil difusão através da membrana celular Lactose: p p devendo ser transportada ativamente para o interior da célula com o auxílio de uma enzima permease. lacA. Monod. O controle positivo requer um fator de ativação. a transacetilase. galactose. a menos que CAP esteja ligada ao DNA. coli deve quebrá-la em quebráglicose e galactose. . 3 . Esta enzima também converte a lactose em alolactose. O baixo nível de p g glicose.No Operon Lac os 3 genes tem um promotor único (P) e são transcritos juntos. . mas sua transacetilase. . coli. permease. produzida. como o complexo AMPc + proteína ativadora do catabolismo (CAP). glicose. repressor. desconhecida. Entretanto. liga a um sítio perto do promotor e estimula a ligação da RNApol. que se CAP). galactosidase.Entretanto.A repressão é feita pela ligação do próprio triptofano ao repressor. I) que tem seu próprio promotor e atua como repressor. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS O Operon Lac: Lac: -As três enzimas. glicose aumenta a produção do AMPc levando à transcrição dos genes do Operon Lac. o que torna o repressor ativo. O repressor ativo liga-se ao operador e impede que a RNApol ativo.Quando a lactose está ausente no meio na qual a bactéria cresce. Triptofano. a taxa ausente.

destas.Mecanismo adicional de regulação da expressão gênica que controla a capacidade da RNApol em continuar o alongamento além de determinados sítios.RNAs anti-senso: Pequenas moléculas de RNA complementares a seqüências particulares nos RNAm que se ligam a estes e inibem a tradução. grampo. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: .Disponibilidade de proteínas ribossômicas. . continue.Mesmo que a transcrição do Operon Trp tenha sido iniciada (↓ [ ] de triptofano). espaço. transcrição. . .Os ativadores parecem ser mais comuns em células eucarióticas. embora tanto estes quanto os repressores estejam presentes também em células procarióticas. por neutralizar as cargas positivas das histonas. .Os genes eucarióticos não estão organizados em operons. Desestabiliza o mRNA susceptível a endonucleases.Resposta limitada às mudanças nutricionais e ambientais. celular. Outros genes são expressos em um padrão temporal específico durante o d n l im nt . essa pode não prosseguir até o sítio de término. procarióticas. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Estrutura da Cromatina X Regulação Gênica: Gênica: . sítios. desenvolvimento -Todas as células de um organismo levam a mesma informação genética. . desenvolvimento.O sítio de atenuação está localizado a 162nt após o sítio de início da 162nt transcrição. ambientais. tecido. . Os (HAT). Evita E ita ligação ao ribossomo ribossomo. tornando-o EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Características Gerais: -A expressão gênica em eucariotos é regulada no tempo e no espaço.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS A Atenuação da Transcrição: Transcrição: - A Atenuação da Transcrição: Transcrição: . término.Quando necessário que a tradução ainda ocorra. ACETILAÇÃO 4 . a maior parte da transcrição termina ali. Alguns genes são expressos de maneira específica para cada tecido. grupos acetil desestabilizam a estrutura do nucleossomo. ali.O término da transcrição é marcado por uma estrutura em forma de grampo. Mimetiza um terminador. EXPRESSÃO GÊNICA EM PROCARIOTOS RNAs Regulatórios: . permitindo que o DNA se separe destas. Caso o triptofano seja abundante.O DNA deve se desenrolar das proteínas histonas para que ocorra a transcrição através: através: -Acetilação das histonas: A adição de grupos acetil (CH3CO) às histonas: proteínas histonas catalisada pela enzima Acetiltransferase (HAT). Regulação Traducional: . gênica. -A estrutura da cromatina afeta a expressão gênica.os próprios p g p p q ribossomos impedem a formação do grampo permitindo que a transcrição continue. mas apenas um subgrupo de genes é expresso em cada tipo celular. operons.

Os Insuladores ou Isoladores são seqüências de DNA que bloqueiam a propagação da influência dos reforçadores. gênica. catalisada por uma enzima DNA metiltransferase.Mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor são inativados por 10% metilação. -As alterações de metilação do DNA em células tumorais incluem a perda da metilação em seqüências normalmente metiladas (hipometilação) e o ganho de seqüências metiladas em locais geralmente hipometilação) não metilados (hipermetilação). . reprimindo a transcrição. visto que todas as células do corpo trazem a mesma carga genética. desnecessários. comparativamente ricas em nucleotídeos CpG e quase sempre estão livres de metilação. Podem estar localizados muito basal. ligada ao grau de metilações anormais em alguns tumores. impróprias. são CpG. na maioria dos casos. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: -Via seqüências de DNA localizada 5’ upstream: Reforçadores upstream: (“enhancers”) e Silenciadores (“silencers”). É um CpG. transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS .Metilação de DNA é o mecanismo que permite que determinados genes (e não outros) se manifestem dentro de células normais especializadas. metiltransferase. envolve mudança na seqüência de DNA. . reforçadores. removem o grupamento acetil estabilizando a estrutura do nucleossomo reprimindo assim.Este processo é mais comum nas bases citosinas ligadas covalentemente à guanina. -O que as diferencia é a manifestação de um ou de outro gene durante o desenvolvimento d n l im nt e em t d a sua vida p r desativar g n m toda u id para d ti r genes desnecessários. A resistência à quimioterapia está. Alguns podem ser componentes regulam.Complexos de Remodelagem da Cromatina: Alguns fatores de Cromatina: transcrição e outras proteínas regulatórias ligam-se diretamente a sítios ligamparticulares no DNA sem acetilar as proteínas histonas promovendo o início da transcrição. pequenas porções de DNA. 5 . -Metilação do DNA: Fenômeno epigenético* que ocorre pela DNA: epigenético* transferência de um grupamento metil (CH3) ao carbono 5 da citosina. pois não mutação. região promotora dos genes humanos e a metilação dentro das ilhas está associada à inativação da transcrição do gene correspondente. DNA. denominados dinucleotídeos CpG. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS -Desacetilação das histonas: Outras enzimas denominadas desacetilases histonas: (HDAC) removem estes grupamentos acetil e restauram a estrutura compactada da cromatina. (“silencers”). Os silenciadores servem para diminuir o nível de transcrição basal. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . que histonas. a expressão gênica. transcrição.*Fenômeno epigenético pode ser definido como mudança no material genético que altera a regulação da expressão gênica de maneira que esta é passada para as células filhas dentro das células somáticas.Evidências sugerem que a metilação do DNA esteja associada à desacetilação das histonas.Em contraste. . A metilação parece atrair as HDAC. porém não é caracterizada como mutação. Estas ilhas CpG estão freqüentemente localizadas na metilação. genética.Células cancerígenas: metilação anormal de DNA desativa genes que cancerígenas: normalmente evitariam divisões celulares impróprias. integrais dos promotores. gênica. chamadas ilhas CpG. tumores. distantes do gene que eles regulam. hipermetilação) EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS . correspondente. promotores. Os reforçadores são elementos reguladores positivos que servem para aumentar o nível de transcrição basal. . processo associado à repressão da expressão gênica. basal. metilação.

* Regiões transcricionalmente ativas (cromatina frouxa) são mais sensíveis à degradação pela DNase.Apresentam partes funcionais denominadas de domínios. eucarióticas. motivos. locus.Via fatores de transcrição: proteínas especiais ou seqüências transcrição: reguladoras presentes nos reforçadores e nos promotores. TFIIB. (Ex.Duas hélices alfa que se ligam ao sulco maior do DNA.: TFIIA. 2) Deleções na região 5’upstream do gene da β-globina inativam a expressão do locus. ativos. por 60 a 90 aa que são responsáveis pela ligação ao DNA. Presentes em células procarióticas e eucarióticas. transcrição. em que os mesmos são coordenadamente regulados durante a diferenciação e desenvolvimento. controle na expressão destes genes visto que: que: 1) Seqüências reguladoras presentes em promotores e reforçadores não são suficientes para controlar a expressão.Descoberto no fator TFIIIA envolvido na transcrição do RNAr 5S pela RNA pol III.: TFIID).Alça de aa com Zinco na base que se ligam ao sulco maior do DNA. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Motivo Zinc Finger .: Genes de globina: a região de controle do locus (LCR). sendo este um bom parâmetro na identificação de genes ativos. globina.Hélices de Leucinas e um braço básico.Estes fatores apresentam domínios funcionais de ligação ao DNA e de ativação da transcrição. Presentes em células eucarióticas. 2) Fatores Específicos (Ativadores. Co-ativadores e CoCoCorepressores): repressores): responsáveis pela expressão de proteínas célulacélulaespecíficas. 3) Presença de sítios hipersensíveis à DNase* na região 5’upstream do gene da β-globina. DNA. expressão. Motivo Zíper de Leucina . desenvolvimento. Ex. III. DNA. expressão. Presentes em células eucarióticas. que se ligam a dois sulcos maiores do DNA. Dentro dos DNA. TFIID). Repressores. . EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS - EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Proteínas de Ligação ao DNA: DNA: Proteínas que se ligam a seqüências de DNA e que influenciam sua expressão. EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS Em eucariotos muitos genes estão organizados em locus multigênicos. Em geral formam pontes de hidrogênio com as bases do DNA ou interagem com o arcabouço açúcar-fosfato do DNA.: Ex. Dividempromotores. Motivo Hélice-Giro-Hélice Hélice-Giro. básico. açúcarDNA. 6 .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Transcrição e Regulação Gênica: Gênica: . . Dividemse em duas classes: classes: 1) Fatores Basais de Transcrição: necessários para a expressão de todos Transcrição: g p p p os genes transcritos pela RNApol II. específicas. DNA. eucarióticas. eucarióticas. exerce globina: (LCR). domínios existem estruturas características denominadas motivos. duas leucinas interdigitadas. . estando presentes em todas as células (Ex. compostos domínios.

estimula a transcrição. A presença de metais pesados células. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: silenciamento do RNA: iniciado por moléculas bifilamentares de RNA RNA: que são cortadas e processadas. Ex. (RNAsi). diferentes.Elemento de resposta basal Nos elementos de resposta existem seqüências consenso curtas.Elemento de resposta a metais TRETRE. 7 . Embrião Fetal Adulto EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Outros elementos de resposta são encontrados antecedendo o gene da metalotioneína e também contribuem para aumentar a transcrição. Estas são denominadas elementos de reforçadores. A região LCR. onde. p ç p diferentes). embora não estejam agrupados como operons. Ex. ) sítios alternativos de poliadenilação do RNAm (idem). operons.: Ex. transcrição. EXPRESSÃO GÊNICA COORDENADA Vários genes eucarióticos podem ser ativados pelo mesmo estímulo. marcada por sítios hipersensíveis a DNase. resposta. controle do transporte do RNAm para o citoplasma (translocação).O RNAsi podem estimular a metilação d seqüências complementares Os A d l l de l no DNA. genes. decomposição.: O gene da metalotioneína.17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA e LOCUS MULTIGÊNICOS A expressão dos genes de globina é determinada não somente pelo seus promotores. gênica. estímulo.: Ex. ligam-se à seqüências complementares do RNAm causando ligamcorte e decomposição. DNA. RNAm. que codifica uma proteína que se liga a metalotioneína.hsp) ajudam a evitar heathsp) danos contra agentes estressantes (calor) são produzidas por 20 genes diferentes que são expressos coordenadamente. (idem).Elemento de resposta a hormônios glicocorticóide (TGGTACAAAATGTTCT) MREMRE. metais pesados e os remove das células. globina). transcrição. mas também pelo LCR localizado a montante do 1º gene do cluster (ε-globina). GREGRE. após estímulo específico. permite o acesso de proteínas regulatórias possam se ligar e ativar a transcrição dos genes. se ligam as proteínas regulatórias para ativar a transcrição gênica. . Os genes de expressão coordenada são capazes de responder ao mesmo estímulo pois têm seqüências regulatórias em comum nos seus promotores e reforçadores.Elemento de resposta a ésteres de forbol (TGACTCA) BLEBLE. EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS PósPós-Transcrição X Regulação Gênica: Gênica: . O pequenos RNA interferentes processadas. translocação) controle citoplasmático da estabilidade (degradação por ribonucleases) do RNAm. resposta.: As proteínas de choque térmico (heat-shock . Um único gene pode ser regulado por vários elementos de resposta diferentes.Os genes eucarióticos podem ser regulados por meio do controle do processamento do RNAm: RNAm: sítios alternativos de “splicing” do RNAm (a seleção de sítios splicing” alternativos de corte leva à produção de proteínas diferentes).

- - 8 .17/11/2009 EXPRESSÃO GÊNICA EM EUCARIOTOS Tradução e Pós-Tradução X Regulação PósGênica: Gênica: Disponibilidade dos componentes necessários à maquinaria da tradução (ribossomos. metilação) e especificidade de degradação. Disponibilidade de proteínas que se p p q ligam nas pontas 5’ e 3’ do RNAm (CAP binding proteins e PoliA binding proteins) proteins). modificações covalentes (acetilação. fatores de iniciação e alongamento. Após a tradução as proteínas eucarióticas passam por uma seleção alternativa de vias de processamento: processamento: clivagem proteolítica. fosforilação. aminoacil RNAt). RNAt). remoção da seqüência sinal. degradação.

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