HPLC

High Performance Liquid Cromatography

CLAE: Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

 HPLC
Características:

• Alta resolução
– separa ampla variedade de amostras
complexas
• Alta sensibilidade
– ng – pg
• Rapidez
– automatização
– 1 a 60 min
HPLC
É uma técnica de separação cujo princípio depende da
distribuição diferenciada dos componentes de uma
mistura entre duas fases, fases uma considerada
estacionária e a outra, móvel.
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• Fase Móvel
– mistura
– veloc. de bombeamento: 1,0 – 5,0 L min-1

• Fase Estacionária
– Coluna
• resinas aminadas ou sulfonadas
– Amina quaternária -N(CH3)3+
– Ácido sulfônico -SO3-
• diâmetro: 5, 10, 50 µm
• 5 a 30 cm comprimento
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 Bomba HPLC

Sistema de
Tratamento de Detector
Dados
HPLC
HPLC

Aminoácidos e peptídeos:
E eletrônica

• absorvem na faixa do espectro UV

– 210 – 220 nm
• aminoácidos aromáticos:
– Tyr, Phe, Trp
– 250 – 290 nm
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Cromatograma
HPLC