Técnicas para o Estudo do Sistema Nervoso ( mS ‘ss SKY Organizador: Gilberto F. Xavier Apoio: = Editora Pléiade SBNeCFicha de Catalogagao T2553. Técnicas para o estudo do sistema nervoso / organizador: Gilberto F. Xavier, - Sao Paulo : Pigiade, 1999. 238 p. 1, Sistema nervoso 2. Neurofisiologia I. Xavier, Gilberto Fernando CDU 611.8 (Bibliotecaria Responsdvel: Elenice Yamaguishi Madeira - CRB 8/5033)APRESENTAGAO O presente trabalho tem por objetivo oferecer @ comunidade cientifica brasileira da area de Neurociéncias e Comportamento uma breve descrigéo dos aspectos tedricos e praticos de algumas técnicas basicas, cujo uso na investigagao do sistema nervoso vem se tornando cada vez mais frequente. A preocupagéo maior do trabalho nao foi revisar extensamente a matéria. Pesquisadores que atuam na area de Neurociéncias e Comportamento foram convidados para escrever sobre técnicas de uso corrente em suas pesquisas, com énfase na descrigéo dos “segredos que fazem a diferenca”, i.e., dos detalhes nos procedimentos e manipulagées, identificados através do uso frequente da técnica, e que nem sempre sao descritos nos manuais técnicos. Caso esta experiéncia seja bem sucedida, este livro podera ser o primeiro de uma série. A idéia é que diversos pesquisadores de diferentes regides do pais partilhem sua experiéncia acumulada com o restante da comunidade cientifica. Comentarios e sugestées seréo muito benvindos. O intuito dessa empreitada nao poderia ser outro que o de incentivar a investigagao e o ensino em areas que tenham como denominador comum o estudo do sistema nervoso e do comportamento. Setembro de 1999 Gilberto F. XavierAprendizagem e Memoria no Labirinto Radial de 8 Bracos Alexandre de Campos e Maria Inés Porto Saito Departamento de Fisiologia, Instituto de Biociéncias, Universidade de Sao Paulo Rua do Matao, trav. 14, 321, 05508-900, Sao Paulo, SP E-Mail: alexcamp@usp.br INTRODUCGAO As teorias atuais sobre cognicéo animal sofreram grande influéncia de idéias decorrentes da observacao de animais desempenhando tarefas em_ labirintos. Conceitos como memoria visuo-espacial, raciocinio na resolugao de novas situagGes, bem como grande parte das concepgdes sobre aprendizagem e memoria, surgiram no contexto da experimentacao em labirintos (Olton, 1979). Recentemente, o desenvolvimento e aperfeigoamento de novos modelos de labirintos vém permitindo o direcionamento da pesquisa para aspectos mais especificos e sutis das fungdes cognitivas, tornando a compreensao dessas fungdes mais precisa e completa. Esse desenvolvimento se acelerou depois de suplantada a concepgao Behaviorista de acordo com a qual a compreensao dos mecanismos e leis subjacentes aos processos de aprendizagem e memoria deveria ser buscada simplesmente através da avaliagaio do comportamento de animais num numero bastante restrito de aparelhos (caixas de Skinner, por exemplo, no caso de roedores). Progressivamente, o crescente acumulo de evidéncias experimentais veio demonstrar que, em verdade, as caracteristicas estruturais dos aparelhos de teste suprimem alguns tipos de 155comportamento enquanto favorecem outros, reforgando a nogao de que o tipo de labirinto influencia 0 padrao de comportamento observado. Entao, uma diversidade de labirintos surgiram; cada qual, em fungao de suas caracteristicas, favorecendo a avaliagao de aspectos cognitivos especificos. Foi no contexto dessa "revolugao" cognitivista, ocorrida na década de 70 que Olton e Samuelson (1976) propuseram € descreveram o labirinto radial de oito bragos. O APARELHO O labirinto radial de 8 bracos € composto por uma arena central em formato octogonal (regular) @ oito bragos retangulares removiveis (Figura 1), em cujas extremidades finais ha uma depressao circular no assoalho, medindo aproximadamente 3 cm de diametro e 4 cm de profundidade, onde o reforgo (normalmente dado sob a forma de sementes de girassol ou de “pellets") pode ser disponibilizado. Essa depressao deve ser profunda o suficiente para que OS animais n&o enxerguem 0 reforgo antes de chegarem ao terco final do brago. 156Figura 1 — Desenho esquematico do labirinto radial de oito bragos. Os animais submetidos aos testes no labirinto radial normalmente desenvolvern estraiégias comportamentais que podem, _ indesejavelmenie, "mascarar’ o desempenho e comprometer a interpretagdo dos resultados. Por exemplo, ao invés dos animais estarem armazenando uma lista de bragos ja visitados, numa tarefa de memoria operacional (ver descrigao abaixo), algo que demandaria consideravei processamento cognitivo, eles poderiam adotar uma estratégia egocéntrica que consiste simplesmente em sair de um braco e virar sempre a esquerda entrando no brago vizinho. Assim, no intuito de dificultar a utilizagao 157de estratégias similares, recomenda-se que a arena central seja totalmente cercada por paredes de acrilico de aproximadamente 30 cm de altura (transparente se o labirinto for construido para ser utilizado com estimulagao distal, para o teste de memdria espacial). Nessas paredes, em frente a cada um dos bragos, deve haver portas do tipo guilhotina, ligadas a fios de nylon para permitir seu controle a distancia. Um outro comportamento possivel e comum é a passagem de um braco a outro, sem retornar a arena central. Para evitar que os animais procedam dessa maneira, recomenda-se que sejam colocadas placas de acrilico transparente nos segmentos iniciais dos bragos (proximos ao centro do labirinto) medindo 15 cm de largura e 20 cm de altura. Para a confecgao do labirinto, deve-se considerar se os estimulos externos ao labirinto serao ou nao suprimidos da situagao experimental. Por exemplo, caso 0 objetivo da pesquisa seja avaliar a capacidade de aprendizagem associativa dos animais, numa situagaéo onde uma série de estimulos internos (e.g., placas com diferentes padrées visuais) devem ser apresentados em associagdo com o reforgo (Figura 3, adiante), recomenda-se que 0 labirinto apresente paredes altas e opacas para minimizar a influéncia de estimulos externos, "induzindo” os animais a se utilizarem das dicas internas. Por outro lado, caso a pesquisa objetive avaliar capacidades cognitivas de representagdo do espago, entao recomenda-se que as paredes do labirinto sejam baixas ou de acrilico transparente, o que faculta 0 acesso visual a estimulos distais. Também é importante considerar, para a escolha do material empregado na confecg&o do aparelho, que no inicio dos treinos os animais costumam suja-lo.muito. Além disso, mesmo depois do animal se habituar com o labirinto, este deve ser limpo cuidadosamente para que nao restem pistas olfativas, as quais poderiam servir como dicas nao controladas para a solugéo da tarefa. Assim sendo, 158sugere-se que todas as partes do labirinto sejam confeccionadas em acrilico, que além de lavavel apresenta boa durabilidade. MANIPULAGOES NOS PARAMETROS PROCEDIMEN- TAIS E ALTERACOES NO DESEMPENHO Diferengas tanto estruturais dos aparelhos como procedimentais nas tarefas impdem demandas que muitas vezes requerem fungées cognitivas distintas. Dessa forma é importante que se tenha em mente quais variaveis experimentais influenciam o comportamento nessas tarefas e como manipula-las para que se avalie fungées cognitivas especificas. 1) Durag&o do intervalo de retencdo (intervalo entre a aquisic¢ao e a utilizagao da informagao) De maneira geral, o desempenho em tarefas que apresentam intervalos de retengaéo pode ser descrito através de uma fungao negativamente acelerada em relagéo a duragdo do intervalo, ou seja, 0 aumento do intervalo diminui o nivel de desempenho. A manipulagéo dessa variavel pode ser de especial interesse para o estudo de regides cerebrais supostamente envolvidas no processamento de informagées temporalmente dependentes. Assim, admitindo-se que uma dada estrutura sustente o processamento de informagées somente apés decorridos alguns minutos da aquisigaéo da informacéo, uma intervengéo experimental nessa estrutura__(lesao, inativagao temporaria etc.) sO resultaria em prejuizo no desempenho se 0 teste de retengdo fosse realizado apos © perfodo de tempo durante o qual essa estrutura nao é requisitada; testes de retengéo realizados a intervalos de tempo menores podem nao detectar o prejuizo comportamental. 1892) Intervalo entre testes (ITI) Variagdes na extensao do intervalo entre testes tem sido usadas para se estudar interferéncia pro-ativa (interferéncia que os testes prévios exercem sobre os posteriores) em procedimentos “delayed-matching-to- sample” (DMTS). E importante ressaltar que a nogao de interferéncia pré-ativa sé deve ser aplicada para testes discretos; ou seja, para aqueles testes onde as informac6es cruciais para 0 bom desempenho num teste n4o sao aplicaveis aos demais (para maiores detalhes veja adiante 0 conceito de DMTS). Tem-se demonstrado experimentalmente que oO desempenho em procedimentos de teste discretos é menos acurado para ITis variando entre 0 e 5 segundos, melhorando progressivamente para [Tis maiores (Hest e Steckler, 4996). Portanto, deve-se procurar estender os ITIs para minimizar a influéncia de testes anteriores sobre o comportamento em testes posteriores, salvo em situagdes onde se busca estudar esse efeito. 3) Exposicao ao estimulo Esse parametro pode ser __ influenciado basicamente por trés espécies de manipulagao: tempo de disponibilizagao do estimulo, numero de apresentagoes e resposta requerida. O aumento tanto no tempo quanto no numero de apresentagdes do estimulo resulta numa melhora no desempenho; acredita-se que tal efeito se dé em decorréncia de uma intensificagao dos processos de aquisigéo e codificagao da informagéo. Quanto a resposta requerida, experimentos demonstram que tarefas com apresentac6es "passivas" de estimulos (nao condicionadas a execugdéo de qualquer espécie de comportamento por parte do sujeito para a disponibilizagaéo dos estimulos) produzem desempenhos piores do que tarefas em que respostas (como entrar em 160um brago do labirinto ou pressionar uma barra para receber reforgo) sao requeridas. Isso porque ao exigir uma resposta face ao estimulo, o experimentador garante o direcionamento da atengao do animal para o mesmo. 4) Numero de estimulos A apresentagdo sucessiva de numeros variados de itens, ao promover demandas de processamento distintas, pode ser promissoramenie utilizada na avaliagado de funcdes mnémicas como, por exemplo, capacidade de armazenagem da memoria operacional. Porém, tradicionalmente, as pesquisas sobre fungdes mnemonicas_ realizadas em animais tem usado procedimentos que envolvem DMTS em que somente um item de informagdo € apresentado, devendo ser retido por variaveis periodos de tempo para o desempenho adequado da tarefa. © labirinto radial de 8 bragos oferece a possibilidade de se manipular diversos itens de informagao, bem como sua sequéncia. Assim, nao sé a lembranga especifica dos itens apresentados pode ser testada, mas também a influéncia da ordem de aquisicaéo das informagées sobre a memoria. 5) Reforcamento Uma série de caracteristicas dos estimulos reforgadores tem demonstrado efeitos sobre a aprendizagem em situagdes de labirinto. A natureza e o tipo de reforgo, sua quantidade, e diferengas na probabilidade de recebimento, todos podem influenciar o desempenho; portanto, tais aspectos devem_ ser considerados e controlados por ocasiao do desenho experimental. 1616) Natureza do estimulo A natureza do estimulo é um fator critico para a aquisicao e desempenho em _ varias tarefas comportamentais, provavelmente porque estimulos de naturezas diferentes variam em_ saliéncia (Hest e Steckler,1996). A nogao de saliéncia de estimulo sé faz sentido quando discriminada a espécie a que se refere; diferentes espécies animais apresentam amplas variagdes tanto nas capacidades de processamento quanto nas habilidades de discriminagao sensorial. De especial importancia para o estudo das fungées de memoria é a distingao entre as modalidades espacial e nao-espacial. O termo nao-espacial, nesse contexto, se apresenta em sentido amplo e engloba uma série de modalidades sensoriais. Essa inespecificidade da categoria nao-espacial reflete basicamente dois fatos. O primeiro 6 a necessidade de criagao de uma categoria que se contraponha a bem definida categoria espacial. O segundo € a relativa escassez de pesquisa dirigida a tal categoria. Inumeras evidéncias experimentais demonstraram que ratos se utilizam preferencialmente de estimulos discriminativos externos para se orientarem, quando estes est&o associados a uma determinada localizagao espacial (aprendizado de local, ou espacial) (O'Keefe e Nadel, 1979; Olton, 1978; O'Keefe, 1983). Adicionalmente, pesquisas envolvendo lesées ou registro de atividade unitaéria em células hipocampais apontam para a relagao dessa estrutura cerebral com o processamento de informagées de natureza espacial (O'Keefe e Conway, 1978; O'Keefe, 1983; Jarrard e col., 1984; McNaughton e col., 1986). Todavia, enquanto algumas teorias sobre fungao hipocampal relacionam essa estrutura nervosa somente com 0 processamento de informagées espaciais (O'Keefe e Nadel, 1978), outras propdem que tal estrutura estaria envolvida com o processamento de classes mais amplas 162de estimulos, sendo os espaciais apenas uma parte destes. Assim, a distingaéo entre modalidades espacial e nao-espacial se reveste de especial importancia no estudo das fungées hipocampais e de memoria. PROCEDIMENTO GERAL DE TREINO NO LABIRINTO RADIAL DE 8 BRACOS Reforcamento No labirinto radial, utiliza-se basicamente o reforgamento positivo que pode, por seu lado, variar quanto ao tipo: alimentar (sementes de girassol, pelotas de ragao, entre outros), agua ou fuga e abrigo de uma forte fonte de luz. O tipo de reforgo mais utilizado, entretanto, 6 o alimento. Apesar de observacées iniciais terem indicado que o treino pode se tornar mais rapido quando os animais sao privados de agua, havendo uma diminuigaéo do nimero de sessGes de treino para que a tarefa seja aprendida. No caso da privacao alimentar, os animais devem passar a ter acesso ao alimento durante um periodo de somente 1 ou 2 horas por dia. Nesse caso, € muito importante que se cuide para que os animais mantenham pelo menos 85% do peso inicial. para que nao fiquem debilitados a ponto de causar interferéncias em seu desempenho. A privagéo, seja ela qual for, deve comecar juntamente com 0 inicio das sess6es de manipulagao. Manipulagao A manipulagéo prévia dos animais reduz a neofobia, facilitando 0 treinamento. Cada sesso de manipulagao consiste em segurar o animal, passando-o de uma mo para outra algumas vezes e simulando os movimentos a serem efetuados durante a fase de treino 163(ver adiante). Nesse periodo é interessante que o reforco (quando desconhecido do animal) seja oferecido em suas gaiolas, para que eles se habituem a ele. Esta fase deve durar, em média, 5 dias e cada animal deve ser manipulado durante 5 a 10 minutos por dia. Pré-exposi¢ao ao aparelho Apés 0 periodo de manipulagao, segue-se a pré- exposigao dos animais ao aparelho de testes. Nesta fase © reforgo nao deve ser oferecido dentro do aparelho. ‘Os animais devem ser submetidos a no minimo 2 dias de pré-exposigao, que consiste na simples permanéncia dos animais no aparelho, com acesso a todos os bragos, por 10 minutos. O objetivo desta etapa é possibilitar aos animais a exploragao e a familiarizagao com © labirinto, permitindo, inclusive, que adquiram informagé6es sobre 0 ambiente que auxiliem posteriormente no desempenho da tarefa. Nesta fase, 0 labirinto deve ser apresentado como nas sessées de ireino que se seguirao, ou seja, sem dicas internas quando o treino objetiva a orientagao espacial e com as pistas internas para o treino de orientagao por dicas proximais. Manipulacées de Variaveis experimentais e fungoes cognitivas Nesta secdo sera realizada uma descrigao das principais versdes do labirinto radial de oito bragos e dos procedimentos de treino empregados em cada uma delas. Sera ressaltado como a manipulagao de algumas variaveis, procedimentais ou estruturais, permite criar testes especificos para se avaliar diferentes atividades cognitivas, dando especial énfase aos mnémicos. 164Situac4o espacial vs nao-espacial Na versdo espacial do labirinto radial, todos os cito bragos sao similares entre si, apenas sua localizagao espacial em relagaéo aos outros bracos difere. E importante enfatizar que 0 desempenho adequado em tarefas espaciais requer a presenga de estimulos distais que mantenham fixas suas relagées uns com os outros, e que apresentem facil discriminagao e visualizagao a partir do labirinto (Figura 2). Na versao para dicas proximais (internas ao jabirinto, n&o-espacial), diferentes padroes visuais sao colocados nos pisos dos bragos (circulos brancos pequenos contra um fundo preto, quadriculado preto e branco, listras brancas e pretas alternadas etc.) (veja Figura 3) e sua localizagaéo em relagaéo aos estimulos distais da sala é variada de tentativa para tentativa para evitar o uso de informagées de carater espacial (Winocur, 1980; Jarrard, 1993). Para minimizar a influéncia de dicas espaciais e maximizar a de dicas internas ao labirinto recomenda-se que os labirintos corfeccionados para a verso ndo-espacial possuam paredes altas e opacas ou ent&o que recebam uma iluminagao dirigida apenas ao interior do labirinto, com o restante do ambiente mantido as escuras. Cortinas pretas ao redor do labirinto podem ser utilizadas para minimizar o acesso a estimulos distais. Ambas as vers6es, espacial e para dicas internas ao labirinto, podem ser usadas para avaliar diferentes tipos de memoria (ver a seguir). 165a Figura 2 — Desenho esquematico do labirinto radial, verso espacial. Os estimulos distais dispostos ao redor do labirinto favorecem a utilizagao de estratégias de orientagao espacial. Dois conceitos de memoria estao intimamente ligados as diferentes verses do labirinto radial: memoria de referencia e memoria operacional (Olton 2 col., 1979). Memoria de referéncia armazena informagdes que independem do contexto, sendo de ocorréncia freqiente. Memoria operacional retém informag6es contextualmente especificas por periodos varidveis de tempo, enquanto a informagao é relevante. Prejuizos neste Ultimo tipo de meméria resultam num comprometimento do desempenho no labirinto radial, uma vez que o animal teria dificuldades em 166reter as informagées sobre os bragos ja visitados, e dos quais 0 alimento ja foi retirado; esse prejuizo se expressa por visitas frequentes a bracos ja visitados numa dada tentaliva. a + + + ++ t+ + + + + ++ + + ; + + + =s-t = TNUAUMUUAL EIA Figura 3 — Desenho esquematico da versao para dicas proximais (internas ao labirinto) do labirinto radial de oito bracos. Versdo tradicional para o teste de memoria operacional - gito bracos reforcados Nesta situacdo todos os oito bragos do labirinto radial recebem reforco no inicio de cada tentativa. O animal é colocado no centro da plataforma. Nesse 167momento, as portas em guilhotina que dao acesso aos bragos encontram-se fechadas. O animal é retido na plataforma central por um periodo de 5 a 10 segundos, findos os quais abre-se todas as _ portas concomitantemente. Apds a entrada do animal em um brago (com as 4 patas), a porta deve ser fechada. O animal é retido no braco até consumir 0 reforgo. Caso 0 animal cometa um erro, i.e., reentrar num brago previamente visitado, ele deve permanecer no interior do brago por um periodo de no minimo 30 segundos, passados os quais a porta é aberta, permitindo que o animal retorne a plataforma central. Essa permanéncia no bracgo, sem receber alimento, serve como reforgo negativo e acelera o processo de aprendizagem da tarefa. Depois do retorno a plataforma central, decorre um intervalo de 5 a 10 segundos antes que as portas sejam reerguidas novamente. Esse intervalo, durante o qual o animal é retido na plataforma central, tem por objetivo evitar a adocgéo de qualquer espécie de estratégia de sequenciamento (por exemplo, entrar sempre no braco vizinho), quebrando assim tais sequéncias. Um teste termina quando o alimento contido em todos os bragos for consumido ou entao que 10 minutos tenham se passado, aquilo que ocorrer primeiro. A melhor estraiégia que pode ser empregada nesse tipo de tarefa é escolher todos os bragos, evitando repetir entradas em bragos ja visitados, numa mesma teniativa. Assim, os arimais podem obter todo o reforgo disponivel com o menor niimero de entradas. Animais normais, ap6s aproximadamente 20 sessdes de teste, escolhem mais de 7 bragos diferentes nas 8 primeiras escolhas; 2, apds 40 sessdes de teste, desempenham a tarefa praticamente sem erro (Olton e Samuelson, 1976). Para desempenhar adequadamente a tarefa, os animais devem reier, na memoria operacional, uma relagéo dos bragos ja visitados e evita-los. Como as informagdes coletadas numa tentativa sao titeis apenas 168durante o decorrer da mesma, supdem-se que sejam retidas na memoria operacional, conforme previamente definida. Uma das vaniagens do emprego dessa versao do labirinto radial, em relac&o aos outros procedimentos de teste de memoria operacional (por exemplo, DMTS - ver abaixo), é a possibilidade que ela confere de se testar a memoria para listas de itens. Adicionalmente, fendmenos como os de primazia (tendéncia de retencao dos primeiros itens de uma sequéncia em relagdo aos itens intermediarios) e recéncia (tendéncia de retengcao dos ultimos itens da lista em relagao aos intermediarios) também podem ser avaliados. Uma varianie desse procedimento pode ser realizada pela incorporagao de um intervalo de retengao, que pode durar até 1 hora, assim que 4 dos 8 bracgos reforgados tiverem sido escolhidos. Durante esse intervalo, os animais podem ser mantidos na arena central ou retirados do labirinto (essa é oulra varidvel que pode ser manipulada). O reforg¢o consumido no periodo anterior nao é reposto. Decorrido o intervalo de retengao os animais podem voltar a escolher livremenie em quais bragos do labirinto entrarao. Reentradas em bragos jé visitados no periodo anterior ao intervalo de retengao devem ser consideradas erros de memdria operacional, ois nestes nao mais havera reforgo. A incorporagdo sse intervalo de retengao permite que se avalie os aiios da passagem do iempo sobre fatores como raimento temporal do trago de memoria. O emprego a varianie é particularmente interessanie no estudo ve esiruturas cerebrais envolvidas coim o processamento de informagdes mnémicas por periodos variaveis de tempo contades a partir da aquisicao da informagao. 169Verso DMTS tipica para o teste de memoria operacional - sem estratégia de forrageamento prévia Num procedimento DMTS tipico, um estimulo é apresentado ao animal (fase de aquisigaéo) e seguido por um intervalo de retengdo ("delay"). Por fim, reapresenta- se 0 mesmo estimulo acompanhado de outros itens e reforca-se a escolha daquele que fora apresentado inicialmente (fase de escolha). Para desempenhar adequadamente essa tarefa o animal deve reter na memoria operacional a informacao sobre o estimulo apresentado na fase de aquisigao, a fim de escolhé-lo novamente quando exposto a situagao de escolha. Apés ter sido escolhido, o estimulo deixa de ser relevante, podendo ser apagado. No labirinto radial de oito bragos tal procedimento é executado reforgando-se apenas um dos oito bracos e colocando-se 0 animal no centro do labirinto com todas as portas fechadas. Abre-se, entao, somente a porta do brago que contém o reforgo. Apdés o animal ter consumido o reforgo ele € retirado do labirinto e submetido a um intervalo (de retencdo) antes de ser recolocado novamente no labirinto. Durante esse intervalo o reforco deve ser reposto no mesmo brago onde foi anteriormente disponibilizado. Assim, conforme pode ser observado, o animal na fase de aquisigao ¢ “induzido” a entrar no brago reforgado (brago este que ele devera retornar na fase de escolha). Tal manipulagao diminui substancialmente a interferéncia que poderia ser estabelecida caso o animal tivesse (na fase de aquisigao) que esquadrinhar o labirinto em busca do reforgo, entrando numa série de bracos antes de encontrar aquele reforgado (ver a descrigao do item seguinte). Por fim, 0 animal é reposto no labirinto e todas as 8 portas s4o abertas. O teste termina quando o reforgo for encontrado e consumido. 170Verséo DMTS para o teste de memoria operacional - com estratégia de forrageamento prévia Para se executar essa versao do procedimento DMTS coloca-se 0 animal no labirinto com apenas um dos oito bracgos reforgado. Todas as 8 portas em guilhotina sao levantadas ao mesmo tempo e, inicialmente, 0 animal deve vasculhar os bragos em busca daquele que possui reforgo. Apdés ter encontrado o brago reforgado, retira-se 0 animal do labirinto por um periodo de tempo pre-estabelecido (intervalo de retencéo), durante o qual o refor¢o é reposto no mesmo brago que o continha anteriormente, e o animal é recolocado no labirinto para novas escolhas. A estratégia otima na primeira tentativa (fase de aquisigao) envolve escolher cada brago apenas uma vez e nao repetir escolhas até encontrar o alimento. Este componente da tarefa requer memoria operacional para a lista de bragos ja visitados ¢ nao reforgados. Na segunda tentativa (fase de escolha), o animal deve retornar ao braco reforgado durante a primeira tentativa. Este componente da tarefa requer memoria operacional para um unico brago reforgado, utilizada apds um intervalo de tempo que pode ser controlado pelo experimentador. Para animais normais, o numero de bracos visitados na primeira tentativa, até encontrar o alimento, esta em torno de 4. Aumentos adicionais neste numero (associados a reentradas em bragos _previamente visitados) indicam problemas na memoria operacional para uma lista de bragos. Durante a segunda tentativa, esses animais tendem a encontrar 0 brago reforgado na primeira ou segunda escolhas, Aumentos na quantidade de entradas e/ou reentradas em bragos, nessa tentativa, também expressam prejuizos na memoria operacional. Assim sendo, a memoria operacional é testada em duas ocasides diferentes: (1) durante a tentativa de 71aquisigdo da informago, na qual os animais devem reter a lista de bracos visitados para nao repetirem as escolhas e (2) na tentativa de escolha, quando a informagéo armazenada na tentativa de aquisigao deve ser utilizada para a escolha do brago correto. A memoria operacional utilizada durante a primeira tentativa parece envolver processos, ao menos em parte, diferentes da memoria operacional utilizada durante a segunda tentativa. O registro da lista de bragos ja visitados e nao reforgados durante a tentativa de aquisigéo deve ser mantido durante toda a tentativa até que o braco reforgado seja encontrado; enquanto que na tentativa de escolha o animal deve usar somente a informagdo coletada na tentativa anterior sobre qual braco foi reforgado. Assim, a demanda da tarefa na segunda tentativa, que envolve o retorno a um brago no qual o animal ja recebeu reforco naquele dia, parece menor do que a demanda da tarefa na primeira tentativa, que envolve guardar a lista de todos os bragos ja visitados e nao reforcados, evitando-os até que o brago reforgado seja encontrado. No momento do inicio da segunda tentativa, seria interessante que somente a informagao a respeito do braco reforcado na tentativa anterior, contida na memoria operacional, fosse considerada. Pois, se 0 animal errasse © braco reforgado nas primeiras entradas, ele teria que guardar uma nova lista de informagées sobre os bragos visitados nessa tentativa de escolha para evita-los no decorrer dessa tentativa. A permanéncia de informagoes sobre bragos visitados na tentativa anterior poderia prejudicar o desempenho dos animais nesse momento. Verséo_para_o teste concomitante_das_ _memodrias operacional e de referéncia Nesta versdo do labirinto radial, 4 bragos sao sempre reforcados enquanto que os outros 4 nunca 172recebem reforco (deve-se observar, todavia, que nao haja mais do que dois bragos ou dicas proximais vizinhas que estejam relacionadas a_ reforgo). Inicialmente posiciona-se o animal no centro da arena central e permite-se que ele percorra livremente o labirinto. O mesmo esquema de controle das portas guilhotina usado na versao tradicional deve ser empregado nesta versdo. Se a rnodalidade do estimulo utilizado for dicas internas ao labirinto, entéo a posicao dos pisos que recobrem os bragos (padr6es visuais) devem ser variados randomicamente de teste para teste. Os reforgos sao fornecidos para as entradas em bracos com as mesmas dicas (pisos) independente de seu posicionamento espacial. Por outro lado; caso a modalidade escolhida seja a espacial (dicas distais), entao 0 reforco permanece nas mesmas localidades em relagdo as dicas externas ao labirinto. Tendo em vista que somente em 4 dos 8 bragos ha a disponibilizagado de reforgo, os tipos de erros possiveis devem ser analisados de maneira separada. Define-se operacionalmente 3 tipos de erros: (1) erros de memoria de referéncia - entradas em bragos que nunca apresentaram reforgo; (2) erros de memoria operacional para bracos corretos (WM-C) - reentradas em bracgos associados a reforgo numa mesma tentativa; e (3) erros de memoria operacional para bracos incorretos (WM-I) - reentradas em bragos nunca reforcados, numa mesma tentativa. Xavier e col. (em preparacao) mostraram que animais com les6es do giro denteado por aplicagao topica de colchicina exibem um aumento consideravel na quantidade de erros de memoria operacional para bracos corretos (WM-C), enquanto a quantidade de erros de memoria de referéncia e erros de memoria operacional para bragos incorretos (WM-I) encontra-se inalterado. 173Referéncias Bibliograficas Hest, A. and Steckler, T. (1996). Effects of procedural parameters on response accuracy: lessons from delayed (non-) matching procedures in animals. Cognitive Brain Research. 3: 193 - 203. Hodges, H. (1996). Mazes procedures: the radial-arm and water maze compared. Cognitive Brain Research. 3: 167 - 181. Jarrard, L. E. (1993). On the role of the hippocampus in learning and memory in the rat. Behavioral and Neural Biology. 60: 9 - 26. Jarrard, L. E. (1986). Selective hippocampal lesions and behavior: Implications for current research and theorizing. In The Hippocampus, vol. 4, pp.: 93 - 126. O'Keefe, J. (1983). Spatial memory within and without the hippocampal system. In Neurobiology of the Hippocampus (Seifert, ed.), pp.: 375 - 403. Olton, D. (1978). Characteristics of spatial memory. In Cognitive Aspects of Animal Behavior (Hulse, Fowler and Honig, eds.),pp. 341-373. Olton, D. (1979). Mazes, maps, and memory. American Psychologist. 34(7): 583 - 596. Olton, D. S. (1983). Memory functions and the hippocampus. In Neurobiology of the Hippocampus (Seifert, ed.), pp.: 335-373. Olton, D. S., Becker, J. T. and Handelmann, G. E. (1979). Hippocampus, space, and memory. The Behavioral and Brain Sciences. 2: 313 - 365. Winocur, G. (1980). The Hippocampus and Cue Utilization. Physiological Psychology. 8(2): 280 - 288. Xavier, G.F., Lunardelli, M.C. & Schewinsky, S.R. Is disruption of performance in working memory tasks after dentate gyrus selective lesion due to behavioural inflexibility? Manuscrito em preparacdo. 174