Actividad 6: Prueba de la capacidad de los extractos de hongos para

aumentar la velocidad de reacción

1.Escribir el nombre del hongo

2.Pesar aproximadamente 1 gramo de hongo y ponerlo en un mortero

3.Añadir 2 ml de tampón de extracción para cada gramo de hongos en el mortero.

Para
calcular la cantidad de tampón de extracción que se necesita, multiplique el peso (en
gramos)
del hongo por 2 y añadir esos mililitros calculados.

Peso del hongo ____ g x 2 = _____ ml

4.Moler los hongos para producir una suspensión.

5. Filtrar las partículas sólidas de la suspensión con un trozo de papel de filtro a un

tubo de microcentrífuga de 1,5 ml.
Alternativamente, si se tiene una centrifugadora, introducir la mezcla con una cuchara
en un tubo de microcentrifuga de 1,5 ml para que precipiten las partículas sólidas al
girar a gran velocidad durante 2 minutos.
Nota: Se necesitan por lo menos 250 ml de extracto para realizar la
reacción enzimática.

6.Poner una etiqueta a las cubetas del 1 al 6. Etiqueta solo

la parte superior de las cubetas.
7.Utilizando una DPTP (pipeta de plástico) limpia, pipetear 500 microlitros de la
solución en cada cubeta. Enjuague el DPTP a fondo con agua

8.Etiquetar un tubo cónico de 15 ml con el tipo de hongo que se está utilizando y, a

continuación
con un DPTP limpia, pipetear 3 ml de sustrato al tubo.

Por favor, leer y entender los pasos 9-10 ¡ totalmente antes de continuar. ¡Estos
pasos son sensibles al tiempo!

9.Utilizando una DPTP limpia, pipetear 250 ml de su extracto enzimática del tubo
cónico de 15 ml de sustrato. EMPIEZA TU TIEMPO.
10.En los tiempos indicados, quitar 500 microlitros de la mezcla de extracto/sustrato de
hongos, y añadirlo a los tubos debidamente etiquetados que ya contienen la solución
de parada.

11.Utilizando una DPTP limpia, añadir 500 microlitros de tampón de extracción a la

cubeta 6. Limpie la DPTP y a continuación, agregue una gota de extracto de hongos.
Esto servirá como el "blanco " para este experimento.

12.Continuar con el análisis de sus muestras. Después de haber terminado su análisis,

enjuagar los tubos de reacción, cubetas, y DPTPs con agua abundante y guardarlos
para posteriores actividades.

Nota: No deseche las soluciones no utilizadas de valores.

Se utilizarán para la próxima actividad.