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extracción y análisis”
Elaborado:
Elena E. Stashenko, Química, Ph.D.
Aceites
Esenciales
DEFINICIÓN
E
l aceite esencial es una mezcla de componentes volátiles, producto del metabolismo
secundario de las plantas. Las esencias son mezclas más o menos complejas en cuya
composición entra una porción de hidrocarburos de la serie polimetilénica del grupo de los
terpenos que responden a la fórmula (C5H8)n (monoterpenos, n=2; sesquiterpenos, n=3;
diterpenos, n=4; etc.) junto con otros compuestos casi siempre oxigenados (alcoholes,
éteres, ésteres, aldehídos y compuestos fenólicos) que son los que transmiten a los aceites
esenciales el aroma que las caracteriza.
Se les llama aceites por su apariencia física y consistencia que es bastante parecida a los
aceites grasos, pero se distinguen de ellos, porque al dejar caer unas gotas de esencia sobre
el papel, éstas se volatilizan fácilmente sin dejar ninguna huella ni mancha grasosa.
LOCALIZACIÓN EN LA PLANTA
L
os aceites esenciales se encuentran muy difundidos en el reino vegetal, especialmente en las
Fanerógamas, en las cuales se hallan repartidas en unas sesenta familias (Compuestas,
Labiadas, Laureáceas, Mirtáceas, Rosáceas, Rutáceas, Umbelíferas, etc.). Se pueden
encontrar localizados en diferentes partes de la planta, por ejemplo: en las hojas
(albahaca, mejorana, menta, romero, salvia, etc.), en las raíces (cálamo, valeriana,
vetíver, etc.), en la corteza (canela, cedro, sándalo, etc.), en las flores (jazmín, rosa,
ylang-ylang, etc. ), en la cáscara del fruto (limón, mandarina, naranja, etc. ), en los frutos
(anís, cardamomo, eneldo, hinojo, etc.).
C D
tie m p o (m in ) tie m p o (m in )
Figura 1. Cromatogramas en la columna DB-1 (60 m) del aceite de ruda (R.
graveolens) obtenido por DES de (A) hojas, (B) tallos, (C) flores y (D) raíces. ( E.E.
Stashenko, H.S. Villa and M. Y. Combariza, J. Microcolumn Separations, 1995, Vol 7,
No. 2, 527)
6
Area relativa (Ai/Aistd)
Cetonas
4 C12H18, C12H16
Derivados de 1,3 - Benzodioxol
2 Furanocumarinas
Alcoholes
0
Acetatos
Raíces Tallos Hojas Flores
Figura 2. Variación en la composición de los aceites esenciales aislados por DES de
diferentes partes de R. graveolens. ( E.E. Stashenko, H.S. Villa and M. Y. Combariza, J.
Microcolumn Separations, 1995, 7(2), 117)
61015 6 10
13 A 2 B
2
24 32
13
1 22 27 41 16 17 19
24 29 3531
39 40
20
0 20 40 60 80 0 20 40 60 80
Tiempo (min) Tiempo (min)
COMPOSICIÓN QUÍMICA
Muchos factores influyen sobre la composición del aceite esencial, entre ellos figuran:
Los aceites esenciales aislados de la cáscara y de las hojas de cítricos (C. sinensis) se
diferencian notoriamente tanto en su composición química, como en la proporción en la
cual se encuentran sus constituyentes (Figura 4).
A B
0 20 40 60 80 0 20 40 60 80
Tiempo (min) Tiempo (min)
Figura 4. Cromatogramas en la columna DB-1 (60 m) de las esencias obtenidas de (A)
cáscara de fruta y (B) hojas de naranja (C. sinensis) (C. Blanco Tirado, E.E. Stashenko,
M.Y. Combariza and J. R. Martínez, J. of Chromatogr. A, 1995, 697, 501).
12
Volátiles totales
8
Monoterpenos
4 Compuestos oxigenados
Sesquiterpenos
0
Limon Mandarina Naranja
30 B
Area relativa (Ai/Astd)
25
20
15
10 Volátiles totales
5 Monoterpenos
Compuestos oxigenados
0 Sesquiterpenos
I II III I II III I II III I III
C. volkameriana C. reticulata C. sinensis C. nobilis
La composición de las esencias aisladas de la cáscara de frutos cítricos depende del grado
de maduración de la fruta (Figura 5B). La mayor generación de metabolitos secundarios
volátiles (representados por el limoneno) se registra en esencias extraídas de frutos en la
etapa intermedia de maduración (coloración verde-amarilla de la cáscara) (Figura 6).
25
Area relativa (Ai/Astd)
20
15
10
5 Prensado en frío
FID FID
A B FID
NPD 1,4-dimetilpiperazina
3-pirrolidinol
3-pyrrolidinol NPD
NPD
0 20 40 60 80 100 20 40 60 80 100
Tiempo (min) Tiempo (min.)
Los exquisitos extractos de las flores de Ylang-ylang (Cananga odorata) poseen diferentes
composiciones químicas dependiendo del estado de maduración de la flor (Figura 8).
Flores
Verdes
0 20 40 60 80 100 120
Flores
Amarillas
0 20 40 60 80 100
Tiempo (min.)
Mientras que en las flores verdes abundan los hidrocarburos (mono- y sesquiterpenos), en
las amarillas, totalmente desarrolladas, prevalecen los compuestos oxigenados (Figura 9,
Tabla II).
16
Area relativa
(Ai/Aistd)
12
Compuestos oxigenados livianos
8
Sesquiterpenos
Monoterpenos
0
I II III
H2 C CH
C CH2
CH3
ISOPRENO (2-metilbutan-1,3-dieno, C5H8)
Nombre Unidades Numero de átomos de
isoprénicas carbono
Monoterpenos 2 C10
Sesquiterpenos 3 C15
Diterpenos 4 C20
Sesterterpenos 5 C25
Triterpenos 6 C30
Carotenoides 8 C40
Resinoides n (C5)n
Durante los últimos 60 años los terpenoides han sido objeto de intensa investigación, por
ejemplo en el área de química orgánica: estudio de mecanismos de reacciones
(carbocationes y sus reordenamientos); en el establecimiento de relaciones tipo “estructura
molecular - color”, “estructura molecular - olor”; en el estudio de reactividad de sistemas
cíclicos y en el análisis conformacional. En cuanto a su aplicación y comercialización los
terpenoides han sido productos tradicionales en la industria perfumística, en la elaboración
de cosméticos, jabones, fragancias, aromatizantes de alimentos, colorantes naturales y otros
productos utilizados como desinfectantes, detergentes, preparaciones farmacéuticas y
suplementos vitamínicos. Aunque algunos terpenoides se aislan de las plantas, muchos de
ellos se sintetizan industrialmente a gran escala.
Los terpenoides presentes en las plantas y otros organismos vivos que los metabolizan están
involucrados en numerosos procesos bioquímicos cumpliendo diversas funciones como
hormonas sexuales, feromonas de insectos, sustancias reguladoras de crecimiento,
insecticidas naturales, pigmentos, receptores en el proceso de visión en los animales. La
distribución de terpenoides puede servir como base de la identificación taxonómica de
plantas y microorganismos. Su implicación directa en interacciones “planta - insecto” y
“planta - planta” yace en el fundamento de la naciente ciencia “Química ecológica”.
En los últimos años un gran número de terpenoides (más de 15000) que se encuentran en la
naturaleza han sido aislados y caracterizados. Existen por lo menos 38 tipos diferentes de
esqueletos de monoterpenoides, alrededor de 200 de sesquiterpenoides y han sido
descubiertas cerca de 500 moléculas individuales de iridoides, uno de los grupos de
monoterpenoides.
MONOTERPENOIDES
L
os compuestos monoterpénicos forman parte de la mayoría de los aceites esenciales que se
extraen de las flores, hojas y tallos de plantas aromáticas. Comúnmente se presentan como
mezclas isoméricas muy complejas y de difícil separación. Solamente el alcanfor puede ser
aislado en forma bastante pura a través de un proceso de cristalización de la esencia que lo
contenga.
Los monoterpenoides de acuerdo con su estructura pueden ser divididos en los siguientes
grupos:
Monoterpenoides acíclicos
Monoterpenoides monocíclicos
Monoterpenoides bicíclicos
MONOTERPENOIDES ACICLICOS
En la industria, el mirceno se obtiene por medio del craqueo térmico del β-pineno. El
craqueo del α-pineno produce ocimeno, básicamente el isómero cis-β-. Los β -ocimenos
también se obtienen por medio de la pirólisis del acetato de linalol. El β-mirceno se utiliza
en la industria para la obtención de compuestos aromatizantes como linalol, geraniol,
mircenal y mircenol, entre otros.
Los monoterpenoles acíclicos, C10H18O, más abundantes en la naturaleza son linalol, nerol
y geraniol:
OH CH2OH
CH2OH
El linalool se encuentra en la naturaleza en diferentes formas ópticas (+)-, (-)- y (±)-, cuyas
propiedades y constantes fisicoquímicas son muy similares aunque tienen olores diferentes.
Se encuentra en aceites de bergamota, ylang-ylang, lavanda, geranio, etc. Se utiliza como
componente importante de preparaciones perfumísticas, como materia prima para la
obtención de citral, acetato de linalilo y otros ingredientes aromatizantes. El linalol posee
propiedades bactericidas, sedantes y puede actuar como atrayente para algunos insectos y
repelente para otros. Es empleado también en la síntesis de la vitamina E y otros
preparados medicinales. La producción mundial del linalol alcanza 6.000 toneladas/año.
El nerol posee una agradable y tenue fragancia que evoca el aroma de las rosas, está
presente en muchos aceites esenciales y es una materia prima valiosa en la industria de
perfumes.
OH
Citronelol
La oxidación del geraniol y del nerol produce los aldehídos biinsaturados, geranial y
neral, respectivamente, comúnmente conocidos como citral A y citral B:
CHO
CHO
Geranial Neral
(Citral A) (Citral B)
O O
CH CHCCH3 CH CHCCH3
α-Ionona β-Ionona
MONOTERPENOIDES MONOCICLICOS
p-Mentano
O
O
O O
OH
HO HO
HO HO
OH
CH3 OH
OH OH
Entre los alcoholes monocíclicos saturados figuran los cuatro isómeros del mentol y del
carvomentol, sustancias abundantes en las plantas aromáticas del género Mentha:
OH OH
OH OH
HO HO HO HO
O O
H H
O O O O
H H
H H
CH3 H3 C H H3 C H CH3
O O
O O
El carano existe en las formas isoméricas cis- y trans-, pero ninguna de ellas se encuentra
en la naturaleza. Estas se preparan por reducción de los caranoles y caranonas.
∆ 3-Careno
Por medio del tratamiento con ácidos (bases) o la irradiación UV (o gamma) en presencia
de sustancias fotosensibilizadoras (benceno, tolueno, etc.) o a través del tratamiento con
superficies activas, el ∆3-careno se isomeriza a ∆2-careno y otros terpenos monocíclicos
entre los cuales figuran el α-terpineno, el diterpeno, el terpinoleno y el silvestreno.
∆ 2-Careno
OH O
cis-Caran-trans-2-ol 4-Caranona
L os monoterpenos bicíclicos de la serie del tuyano tienen los esqueletos básicos de los
tuyanos isoméricos, cuyas configuraciones absolutas son las siguientes:
(+)-cis-Tuyano (+)-trans-Tuyano
En los aceites esenciales del género Salvia se encuentran las monoterpenonas saturadas de
la serie del tuyano, la tuyona y la isotuyona:
H3C H H3C H
O O
Tuyona Isotuyona
Los alcoholes insaturados de la serie del tuyano se obtienen por medio de la oxidación
fotosensibilizada del α-tuyeno:
OH
OH
OH
Umbellulona
OH
Timol
α-Pineno β-Pineno
Los α- y β-pinenos son productos importantes en la industria de síntesis orgánica fina y en
perfumería.
O O
Verbenona Crisantenona Pinocarvona
Entre los alcoholes monoinsaturados se hallan los isómeros del verbenol y del
pinocarvenol:
OH OH
H H
OH H
H OH
cis-Verbenol trans-Verbenol cis-Pinocarveol trans-Pinocarveol
H H H H
OH H OH H
H OH H OH
Verbanol Neoverbanol Isoverbanol Neoisoverbanol
H H H
OH H
OH OH OH
H H H H
Entre los compuestos más importantes de la serie del canfano figuran el alcanfor y el
borneol (componentes de las esencias de plantas de los géneros Salvia y Rosmarinus),
junto con algunos de sus isómeros y derivados:
O O OH
Alcanfor epi-Alcanfor Isofenchona Borneol
HO
Isoborneol
El alcanfor es uno de los terpenos más importantes en la industria, y aunque puede ser
aislado en forma pura de los aceites que lo contienen, actualmente se sintetiza a partir del
pineno.
E ntre los monoterpenos que pertenecen a esta serie los α-, β-, y γ -fenchenos son los
que se hallan más frecuentemente en las esencias de plantas de diferentes géneros:
HO
HO
OH
β-Fenchol α-Isofenchol β-Isofenchol
OH
α-Fenchol
O
O O
Isofenchona α-Fenchocanforona β-Fenchocanforona
SESQUITERPENOIDES
Farnesol Nerolidol
El interés hacia las estructuras de tipo farneseno se despertó a raíz del descubrimiento de la
hormona juvenil extraída de Hyalophora cecropia, que posee el efecto de prevenir la
metamorfósis de insectos inmaduros y se biosintetiza a partir del pirofosfato de farnesilo:
CO2CH3
O
Hormona juvenil
Sesquiterpenos monocíclicos:
H H
Sesquiterpenos bicíclicos:
(-)-α-Muuroleno (-)-α -cis-Bergamoteno
HO
β-Cariofileno Carotol
Sesquiterpenos tricíclicos:
H H
OH
H H
Sesquiterpenos tetracíclicos:
Neocloveno Longicicleno
CLASIFICACIÓN
Los aceites esenciales se clasifican con base en diferentes criterios: consistencia,
origen y naturaleza de los compuestos mayoritarios, entre otros.
Por su origen las esencias se clasifican como naturales, artificiales y sintéticas. Las
esencias naturales se obtienen directamente de la planta y no se someten posteriormente a
ninguna modificación físicoquímica o química, son costosas y variables en su composición.
Las esencias artificiales se obtienen a través de los procesos de enriquecimiento de la
misma esencia con uno de sus componentes, o son las mezclas de varias esencias naturales
extraídas de distintas plantas, por ejemplo, la mezcla de esencias de rosa, geranio y jazmín
enriquecida en linalol, o la esencia de anís enriquecida en anetol.
Las esencias sintéticas son mezclas de diversos productos obtenidos por medio de
procesos químicos. Se utilizan ampliamente en la preparación de sustancias aromatizantes
y saborizantes (esencias de vainilla, limón, fresa, etc. ) (Tabla III).
30 35 40 45
Tiempo (min.)
0 20 40 60 80 Tiempo (min.)
COMPUESTO NOTA
Tabla IV. Composición química del aceite de copaiba ( Copaifera officinalis) (E.E.
Stashenko, H. Wiame, S. Dassy and J.R. Martínez, J. High Resol. Chromatogr, 1995,
18(1), 54)
Pico No. Compuesto Ik Cantidad relativa *, %
DB-1 DBWAX
1 δ -Elemeno 1341 1452 1.59
2 α -Ylangeno 1355 1465 2.90
3 α-Cubebeno 1379 1475 1.99
4 α-Copaeno 1385 1488 20.73
5 ß-Cubebeno 1394 1532 2.65
6 ß-Elemeno 1400 1600 0.87
7 ß-Cariofileno 1429 1597 24.70
8 trans-ß-Bergamoteno 1438 1586 0.41
9 ß-Copaeno 1445 1631 0.49
10 α-Guaieno 1447 1652 0.25
11 α-Humuleno 1460 1700 2.67
12 Germacreno D 1468 1713 2.30
13 Alloaromadendreno 1478 1648 1.79
14 ß-Guaieno 1482 1662 0.47
15 α-Selineno 1485 1723 4.07
16 τ -Muuroleno 1491 1685 1.24
17 α-Muuroleno 1495 1727 0.71
18 ß-Selineno 1498 1725 0.79
17 ß-Bisaboleno 1500 1733 1.53
20 δ-Guaieno 1508 1713 0.93
21 γ -Cadineno 1515 1753 5.51
22 δ-Cadineno 1522 1753 7.71
23 Calameneno 1525 1827 0.21
24 C15H24 1533 - 0.47
25 Himachaleno 1538 1823 1.05
26 C15H24 1568 - 0.18
27 C15H24 1585 1914 0.33
28 C15H24 1593 1935 0.19
29 C15H24 1604 1960 0.21
30 C15H26O 1613 1988 1.23
31 Cedrol 1622 2069 4.83
32 C15H24 1635 2077 1.15
33 Cadaleno 1647 2200 0.73
* Los porcentajes fueron alculados con base en las áreas de los picos en la columna DB-1 (60m)
APLICACIONES
OBTENCIÓN
METODOS DIRECTOS
Compresión de cáscara
Raspado de cáscara
Lesiones mecánicas de la corteza
DESTILACIÓN
ENFLEURAGE
Por su sencillez, bajo costo y altos rendimientos, el arrastre con vapor es la técnica más
usada en la industria de aceites esenciales. Varias Farmacopeas la recomiendan
como el método optimo de obtención de esencias. Durante la extracción por
arrastre con vapor pueden ocurrir procesos colaterales, tales como polimerización y
resinificación de los terpenos, hidrólisis de ésteres y formación de algunas
sustancias artefactos debido al empleo de temperaturas elevadas.
La técnica de extracción con solventes (éter de petróleo, pentano, éter etílico, etc.)
permite obviar estos inconvenientes, al trabajar a temperaturas bajas sin alterar la
composición “original” del aceite. Sin embargo, esta técnica es costosa, contaminante,
presenta dificultades en aislamiento completo del solvente y además algunas sustancias
como ácidos grasos, ceras, pigmentos y otros pueden ser coextraídos con el aceite.
Frecuentemente la maceración con solventes orgánicos se usa particularmente para la
obtención de los componentes individuales, y más a menudo, como etapa previa a la de
arrastre con vapor.
El creciente interés por las extracciones utilizando fluidos supercríticos se desprende de
diversas ventajas tanto económicas, como operacionales que esta técnica presenta sobre los
métodos de extracción convencionales.
El método se basa en que los aceites esenciales son completamente miscibles con el CO2
líquido y su solubilidad es variable dentro de la región supercrítica. La extracción con
fluidos supercríticos presenta muchas opciones para lograr y controlar la selectividad
deseada, la cual es bastante sensible a variaciones en la presión, la temperatura y el tipo de
solvente ( CO2, Propano). El extracto queda prácticamente libre de solvente, pudiéndose
recuperar éste con pérdidas mínimas por el calentamiento isobárico o descomposición
isotérmica. La extracción de aceites con fluidos supercríticos ha cobrado especial interés
durante la última década. Entre las “limitaciones” de esta técnica figura el alto costo en la
inversión inicial.
En la Figura 13 aparecen los perfiles cromatográficos del aceite de ylang-ylang obtenidos
por destilación-extracción simultánea con solvente (A) y con fluído supercrítico (CO2,
1100 psi) (B). Se puede observar mayor recuperación de sesquiterpenoides y compuestos
oxigenados pesados con el metodo de fluído supercrítico (Figura 14).
11 19 20 22 47 55 62 81
4
84 A
80
64
8
1
2 78
36
15 67
28
77
0 20 40 60 80 100 120
Time (min.)
11 19 20 22 55 62 81 84
83 B
17
47
4
43
80
73
1 3 8 34 87
36
12 29 89
86 90
88
0 20 40 60 80 100 120
Time (min.)
Figura 13. Cromatogramas típicos, en la columna DB-1 (60m), del aceite esencial de
Ylang-ylang obtenido por (A) extracción-destilación simultánea con solvente y (B)
fluído supercrítico (E.E. Stashenko, N. Quiroz and J.R. Martínez, J. High Resol.
Chromatogr., 1996, 19(6), 353).
70
60
Area relativa, %
50
30 Sesquiterpenos, C15H24
10 Monoterpenos, C10H16
0 Compuestos nitrogenados
SFE SDE
PROPIEDADES
Tabla
VI.45 α-Farneseno 1484 - 2.10 ± 0.24 2.71 ± 0.15 tr 4.84 ± 0.03
Contin
46 Biciclogermacreno 1490 1744 tr 0.05 ± 0.01 tr 0.06 ± 0.32
47 γ- Muuroleno 1494 1676 0.66 ± 0.06 1.32 ± 0.05 3.93 ± 0.03 tr
48 N.I. 1500 - 1.41 ± 0.16 2.21 ± 0.23 1.97 ± 0.03 3.53 ± 0.02
49 δ- Cadineno 1497 1768 tr tr 3.57 ± 0.03 2.53 ± 0.02
50 γ-Cadineno 1510 1772 2.84 ± 0.25 0.13 ± 0.01 0.27 ± 0.03 0.27 ± 0.05
51 α- Selineno 1512 1744 tr 0.03 ± 0.01 tr tr
52 Calameneno 1514 1842 tr 0.06 ± 0.00 tr tr
53 Elemol 1524 2076 0.08 ± 0.02 0.04 ± 0.00 0.19 ± 0.03 0.08 ± 0.00
54 α- Muuroleno 1534 1769 tr 0.30 ± 0.04 tr 0.26 ± 0.01
55 α-Nerolidol 1547 2008 0.53 ± 0.04 0.02 ± 0.00 0.07 ± 0.03 tr
56 α-Bisabolol 1551 2029 1.92 ± 0.12 tr 0.86 ± 0.03 0.91 ± 0.00
57 β-Nerolidol 1555 2051 tr 0.08 ± 0.01 tr tr
58 Viridiflorol 1580 2163 0.05 ± 0.01 0.04 ± 0.02 0.28 ± 0.03 tr
59 Ledol 1585 - 36.87 ± 2.88 25.38 ± 3.17 20.11 ± 0.02 20.34 ± 0.03
60 Globulol 1595 2104 tr 9.08 ± 1.28 7.49 ± 0.02 2.31 ± 0.01
61 δ-Cadinol 1620 2150 0.58 ± 0.10 tr 0.25 ± 0.03 8.13 ± 0.03
62 α-Cadinol 1631 2224 8.23 ± 0.63 0.16 ± 0.03 tr 0.26 ± 5.54
63 N.I. 1663 - 1.08 ± 0.20 0.23 ± 0.02 0.15 ± 0.03 0.12 ± 0.01
64 β- Eudesmol 1665 2248 0.37 ± 0.00 0.20 ± 0.03 tr 0.18 ± 0.01
65 1-Eicoseno 1994 - - - 0.09 ± 0.03 0.07 ± 0.00
66 Hidrocarburo, C20 2000 - - - tr 0.07 ± 0.09
67 Hidrocarburo, C22 2200 - - - tr 0.07 ± 0.01
68 Ferruginol (PM 286)* 2226 - - - tr 0.24 ± 0.04
69 N.I. 2252 - - - 0.28 ± 0.03 0.25 ± 0.07
70 N.I. 2258 - - - tr 0.13 ± 0.23
71 N.I. 2274 - - - 0.17 ± 0.03 0.20 ± 0.03
72 Acetato de eudesmol 2281 - - - 0.23 ± 0.03 0.25 ± 0.16
73 N.I. 2284 - - - 0.32 ± 0.03 0.14 ± 0.01
74 Totarol* 2290 - - - 0.12 ± 0.01 0.13 ± 0.26
75 Abietal (PM 286)* 2303 - - - 0.17 ± 0.03 0.27 ± 0.01
76 Palustrol 2329 - - - 1.05 ± 0.03 1.23 ± 0.00
77 Diterpeno (PM 300) 2339 - - - 0.26 ± 0.03 0.13 ± 0.05
78 Diterpeno (PM 286) 2352 - - - 1.35 ± 0.03 2.46 ± 0.09
79 Diterpeno (PM 286) 2390 - - - 4.93 ± 0.02 0.87 ± 0.02
80 4,4-Dimetil, 5α−,13α- 2428 - - - 0.20 ± 0.01 0.92 ± 0.19
androst-8-eno*
81 Acetato de totarol * 2437 - - - 0.32 ± 0.02 0.39 ± 0.05
82 Abietol (PM 288)* 2453 - - - tr 0.55 ± 0.49
83 Diterpeno (PM 316) 2463 - - - 2.93 ± 0.03 0.05 ± 0.17
84 13-Isopropil-podocarpen- 2502 - - - 0.99 ± 0.03 0.31 ± 0.23
12-ol, 20-al*
85 Hidrocarburo, C25 2500 - - - 1.09 ± 0.61 3.61 ± 0.16
86 N.I. 2521 - - - 1.62 ± 0.10 0.50 ± 0.19
87 N.I. 2531 - - - 4.33 ± 0.01 0.99 ± 0.06
88 N.I. 2563 - - - 0.99 ± 0.02 0.17 ± 0.28
89 Hidrocarburo, C27 2700 - - - 0.25 ± 0.03 0.30 ± 0.22
b)
Porcentajes calculados con base en las áreas de los picos en la
columna HP-1, promedio de tres extracciones.
Tr-trazas *Identificado tentativamente
Por exposición al aire los aceites esenciales se tornan espesos y se colorean intensamente.
El olor de las esencias es extraordinariamente variable y constituye su característica más
definida; son muy poco solubles en agua, pero solubles en solventes orgánicos (acetona,
éter, pentano, alcohol etílico concentrado, etc.).
PROPIEDADES FISICOQUIMICAS
H istoricamente, antes del uso de las técnicas modernas del análisis químico
instrumental (GC/MS, RMN-H1, RMN-C13, FT-IR, Cromatografía
multidimensional, análisis “headspace”, etc.) la caracterización de aceites esenciales se
limitaba a las siguientes determinaciones de propiedades “macroscópicas”:
Valores de estos parámetros para un gran número de aceites se encuentran reunidos en los
textos de Güenter y Gildemeister & Hoffman. La evaluación de estas constantes
fisicoquímicas se realiza como un estudio preliminar con el fin de descubrir adulteraciones
de los aceites volátiles, sobre todo para los que poseen alto valor comercial.
A
nteriormente, la identificación de los componentes individuales del aceite se convertía
en una larga y “tiempo-consumible” operación, que incluía el aislamiento y
purificación de éstos (Cromatografía de capa delgada, cromatografía en columna,
destilación fraccionada, etc.) para su posterior determinación estructural por métodos
químicos tradicionales (Obtención de derivados, reacciones de coloración, pruebas de
grupos funcionales, etc. )
El estudio de diferentes variables (Cultivo, condiciones geobotánicas, métodos de
extracción, época de recolección y partes de la planta, métodos de almacenamiento y
manejo del material vegetal, edad, actividad biológica, propiedades organolépticas,
etc. ) que condicionan la CALIDAD y la APLICABILIDAD del aceite esencial y, por
ende, su precio y aceptabilidad en el mercado, se realiza a través del establecimiento de
la composición química del aceite.
Destilación fraccionada
Cromatografia preparativa
Cromatografia en columna
D urante las dos últimas décadas se ha demostrado que el mejor método para el
estudio de la composición de los aceites esenciales es la técnica de acoplamiento
de cromatografía de gases con espectrometría de masas (GC/MS) . Es un método
completamente adecuado para la identificación debido a que los componentes del
aceite son compuestos volátiles y de bajo peso molecular (< 300 dalton). La esencia se
aplica directamente al cromatógrafo sin ningún tratamiento previo. Esto elimina
cualquier posibilidad de introducir modificaciones en la composición de la muestra o
en la estructura de sus constituyentes.
Los componentes del aceite pueden ser simultáneamente separados e identificados con
base en sus tiempos e índices de retención y los espectros de masas, los cuales son
característicos para cada sustancia. El método GC-MS permite realizar en una sola
operación, para una muestra del orden de 1 µL, un análisis cualitativo junto con una
indicación de las proporciones en las que se encuentran los componentes. Cuando se
dispone de sustancia patrón, la calibración del equipo permite un análisis cuantitativo
exacto de la muestra. Los constituyentes del aceite se identifican también por sus
espectros de masas (patrones de fragmentación).
73
F ID
37
70
78
76
67
4 24
65
32 57
80
56
71
7 16 72
18 69 74 77
75 79
3 15
0 50 100
T ie m p o (m in .)
60
NPD
NPD
N - i s o b u t i l - 2 Z ,6 E ,8 Z - d e c a t r ie n a m i d a ( E s p i la n t o l)
O
H H H
(CH 3 ) 2 CHCH 2 NH C
C C C C H
H CH 2 CH 2 C C
H CH 3
67
57
65
71
66 68
0 20 40 60 80 100
T ie m p o ( m i n .)
60
50
40
41 126
30
98
20 53 68
39 86
10 142
115 155 167 178 192 206 221
m/z-->0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
ESPECTROMETRIA DE MASAS
EM de monoterpenos
Los monoterpenos monocíclicos (felandreno, α -terpineno, γ -terpineno, terpinoleno),
bicíclicos (∆ 3-careno, α-pineno, sabineno, canfeno) y acíclicos (mirceno, allo-ocimeno) ,
poseen una fragmentación característica común: presentan en sus EM el ión m/z 93(>80%)
como pico de base o de alta intensidad, producido por una ruptura alílica en la molécula
acompañada de la eliminación de un radical C3H7°. El ión molecular M+ ° (m/z 136) es de
intensidad media o baja (< 30%) y se descompone eliminando sucesivamente los radicales
CH3° y C3H7°, con formación de los iones en m/z 121 y 93, respectivamente. El ión (M-
C3H7)+ posteriormente pierde CH3° para generar el fragmento (M-C3H7-CH3)+ en m/z 79.
γ -Terpineno
El γ-terpineno posee en su espectro (Figura 18) los picos característicos para los
monoterpenos, mencionados anteriormente.
m/z-->0
30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
+.
-CH3 . , -H. C6 H5 +
m/z 77(42.8% )
- CH (CH3 )2 .
+
M+. m/z 136(29% ) m/z 93(100% ) -2H.
+
γ −Terpineno
m/z 91(42.8% )
m/z 105(22.8% )
+
-C2 H2
m/z 121(83.7% )
C6 H7 +
m/z 79 (37.1% )
Otros iones importantes producidos a partir del ión M+ ° por pérdida del radical CH3°,
eliminación del grupo isopropenílico y 2H° son (M-CH3)+ en m/z 121(22.86%) y (M-
C3H5-2H)+ en m/z 93 (68.5%), respectivamente. El ión (M-C3H5-2H)+ elimina
posteriormente un radical CH3°, originando el fragmento en m/z 79 (36.43%), tal como
aparece en el Esquema 2.
Scan 1042 (13.659 min): NARVEX01.D (*)
Abundance 68
90
93
80
70
60
50 79
40
30 53 94 121 136
107
20
51 105
10 63 75 82 117
m/z-->0
50 60 70 80 90 100 110 120 130 140
-C2 H5 . -C2 H4
(M-C2 H5 )+ C6 H7 +
O O
m/z 107(21.1% ) m/z 79(36.4% )
+.
M m/z 136 (25.9% )
-2H.
+.
RDA -H.
m/z 67(74.3% )
m/z 68(100% )
EM de monoterpenoles
α -Terpineol
En el EM del α-Terpineol (Figura 20) aparece el ión C3H7O+ en m/z 59 (100%) como pico
de base, que se produce por una ruptura α del enlace exocíclico. El fragmento m/z 59
decae posteriormente por eliminación del CH3° y genera el ión CH3CO+ en m/z 43
(35.4%). En el espectro del α-terpineol el ión molecular M+ ° en m/z 154 no se registra; sin
embargo, los iones característicos (M-CH3)+ en m/z 139(7.1%), (M-H2O)+ en m/z 136
(34.2%), y (M-CH3-H2O)+ en m/z 121 (41.4%) indican su formación inicial y permiten
elucidar su peso molecular. El fragmento (M-H2O)+ en m/z 136 (34.2%), producto de la
deshidratación de la molécula ionizada, se disocia posteriormente eliminando los radicales
CH3°, C3H5° y 2H° con formación de los iones (M-H2O-CH3)+ en m/z 121(41.4%) y (M-
H2O-C3H5-2H)+ en m/z 93 (55.7%), respectivamente, tal como aparece en el Esquema 3:
+.
+. +
RDA + -H.
OH
- CH3 . m/z 71(8.5% ) m/z 68(14.3% )
-H2 O C5 H7 +
(M-CH3 -H2 O)+
OH
+ m/z 121(41.4% ) m/z 67(18.6% )
OH
PM 154 m/z 139(7.1% )
α− Terpineol - CH3 .
+
+.
- H2 O m/z 91(8.6% )
RDA
-2H.
-C3 H5 .,-2H.
(M-H2 O-C3 H5 -2H)+
m/z 136(34.2% ) m/z 93(55.7% )
Terpinen-4-ol
En el EM del terpinen-4-ol (Figura 21) aparece el ión molecular M+ ° en m/z 154 de
intensidad mediana (13.4%). La presencia del grupo hidroxilo en la molécula se confirma
por la aparición de los fragmentos (M-H2O)+ en m/z 136 (7.1%), (M-H2O-CH3)+ en m/z
121 (5.71%) y (M-C3H7-H2O)+ en m/z 93 (46.1%). La localización del enlace doble en el
ciclo se corrobora por la reacción monomolecular de tipo retro Diels-Alder (RDA) que
ocurre tanto en el ión M+ °, como en el fragmento (M-C3H7)+ en m/z 111 (41.4%). Este
proceso se acompaña por la formación de fragmentos “complementarios”, hidrocarbonados
C5H8+ en m/z 68(12.8%), C5H9+ en m/z 69 (26.4%) y oxigenados CH3CO+ en m/z 43
(47.1%), C5H10O+ en m/z 86 (37.8%), con distribución de la carga positiva sobre ambas
partes de la molécula disociada, respectivamente, tal como se observa en el Esquema 4.
75
111
93
50
55 69 86
25 154
83 136
57 97 121
m/z-->0
+
OH
m/z 139(0.8% )
+. + m/z 121(5.7% )
-H2 O -CH3 .
+.
-C2 H4
m/z 136(7.1% )
OH
-H2 O -2H. +
+H. C5 H9 +
o m/z 69(26.4% )
- C2 H4 o
RDA
+.
OH
- CH3 . +
o CH2 =CH-C=OH
CH3
m/z 86(37.8% ) m/z 71(100% )
Las dos rupturas alílicas (a y b) en el ión M+° generan el fragmento C4H70+ en m/z 71 (a),
pico de base en el espectro, y el ión hidrocarbonado en C5H9+ en m/z 69(40%) (b). El
primero decae posteriormente por eliminación de una molécula de etileno, con formación
del fragmento CH3CO+ en m/z 43 (74.2%), y el segundo forma un ión alílico (m/z 41),
también por pérdida de la molécula C2H4.
Los iones C4H7O+ (m/z 71), C5H9+ (m/z 69), CH3CO+ (m/z 43) y C3H5+ (m/z 41) son
fragmentos “diagnóstico” en el EM del linalol y permiten distinguirlo fácilmente de otros
monoterpenoles.
+. -CH3 .
+
-H2 O m/z 121(20% )
-C3 H7 .
+
m/z 136(7.1% ) m/z 93(64.2% )
OH
(a) +.
(b) +
OH
ruptura
alílica -C2 H4 +
O CH3 C O
(a)
M+. m/z 154(1.4% ) m/z 43(74.2% )
m/z 71(100% )
Linalool
+
ruptura -C2 H4 CH
alílica
O CH2 + CH2
(b)
m/z 41(30.6% )
m/z 69(40% )
EM de Sesquiterpenos
δ -Cadineno
En el EM del δ -cadineno (Figura 23) el ión molecular M+ ° en m/z 204(45.71%) tiene una
intensidad media. El pico de base en su espectro corresponde al fragmento (M-C 3H7)+ en
m/z 161(100%), el cual se forma por la pérdida del radical isopropilo de la molécula
ionizada. La posición del doble enlace en el ciclo A se comprueba por la aparición de un
ión en m/z 134(60%), producto de la reacción monomolecular de retro Diels-Alder (RDA)
que ocurre tanto en el ión M+ ° como en el fragmento (M-C3H7)+, tal como se observa en el
Esquema 6.
Abundance Scan 3766 (32.330 min): YA01.D (*)
161
90
80
119
70
105
60
134
50 204
91
41
40
81
30 55 69 79
20 39 189
10 123 147 205
163 176
m/z-->0
40 60 80 100 120 140 160 180 200
-CH3 .
+
m/z 189 (11.6% )
+. -C2 H4 O
A B
+.
-CH3 . -C2 H5 .
-C2 H4 O
O O
C5 H5 +
m/z 119 (65.7% ) m/z 105 (60% )
m/z 65 (6.4% )
La presencia de la secuencia característica, de los iones en m/z 65, m/z 91, 105, 119, 131,
sugiere la formación de estructuras aromáticas con sustituyentes alquílicos.
α-Bisaboleno
En el EM del α-Bisaboleno (Figura 24) se registra el ión molecular M+ ° de intensidad
baja; el cual decae rápidamente dando lugar a los fragmentos (M-CH3)+ en m/z 189(8.6%),
(M-C3H7)+ en m/z 161(24.3%) y (M- C3H7-C2H4)+ en m/z 133(80.0%). El pico de base es el
ión en m/z 93(100%) producto de la reacción RDA de la molécula ionizada, acompañada
del reordenamiento con eliminación rápida del radical isopropilo C3H7°, tal como se
observa en el Esquema 7.
O
H
PM 204 (M+.)*
α- Bisaboleno
-CH3 . -C3 H7 .
+
-C2 H4 -C2 H4
H
+
+
m/z 189(8.6% ) m/z 161(24.3% ) m/z 133(80% )
-C3 H6 .
RDA
+
m/z 91(74.3% )
-2H.
.
+
.
+
-C3 H7 .
O H O
+
EM de alcoholes y aldehídos
Los aceites esenciales de cítricos, de ruda y algunas plantas de la familia Umbelífera
poseen alcoholes y aldehídos alifáticos, por ejemplo, n-octanol, n-nonanol, n-nonanal, n-
decanal y el α-sinensal, responsables por el aroma fresco y agradable, típico de los cítricos.
n-Octanol
En el EM del n-octanol (Figura 25) no se registra el ión molecular M+. (P.M. 130) debido
a su inestabilidad con respecto al impacto de electrones, comportamiento típico de los
alcoholes alifáticos. Sin embargo, en el EM aparecen los fragmentos característicos (M-
H2O)+ en m/z 112 (1.43%) y (M-H2O-CH3)+ en m/z 97 (2.86%), producidos por la pérdida
sucesiva de una molécula de agua y del radical CH3°. El pico de base en m/z 56(100%) se
genera por desprendimiento del ión molecular de un fragmento C4H90H. Los iones (M-46)+
en m/z 84(48.6%) y (M-60)+ en m/z 70(62.8%) se forman por la pérdida paralela de las
moléculas C2H5OH y C3H7OH del ión M+°, respectivamente
90
80
70
70
60
50 84
40
30
20 68
10 54
73 97
81 112
m/z-->0
45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120
n-Decanal
En el EM del n-decanal (Figura 26) no aparece el ión M+° (PM 156), comportamiento
característico de los aldehídos alifáticos saturados con más de 10 átomos de carbono. En el
EM del n-decanal, que es semejante al de los alcanos, donde prevalecen los fragmentos en
la región de masas pequeñas (< m/z 80), se observan las secuencias de iones homólogos en
m/z 29(44.2%), 43(94.2%), 57(100%), 71(30%), ..., CnH2n+1+ y m/z 41(87.1%), 55(77.1%),
69(34.3%), ..., CnH2n-1+. Los productos de descomposición más significativos desde el
punto de vista de diagnóstico estructural son los fragmentos resultantes de la transposición
de McLafferty; en donde la carga positiva se distribuye entre los fragmentos
“complementarios”, oxigenado C2H4O+ en m/z 44(85.7%) e hidrocarbonado, C8H16+ en m/z
112(22.8%), tal como aparece en el Esquema 8.
Abundancia
57 Scan 2386 (20.622 min): NARVEX22.D (*)
90
43
80 41
70
60
50
70
82
40
30
95 112
20 84 96
10 53 72
128
m/z-->0
30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130
Los iones con la carga positiva localizada sobre el oxígeno, generan una serie de
fragmentos homólogos en m/z 44(85.7%), 58(8.6%), 72(10.8%), ..., CnH2nO+. La
localización de la carga sobre la parte hidrocarbonada de la molécula origina iones de las
series olefínica CnH2n-1+ (m/z 41, 55, 69, 83 ...) y alifática. CnH2n+1+ (m/z 43, 57, 71, 85 ...).
Transposición de McLafferty:
H +. +.
. OH (CH2 )5 - CH3
CH3 (CH2 )5 - CH O+ Transposición CH
CH2
McLafferty C +
C
CH2 H CH2
CH2 H
m/z 44(85.7% ) m/z 112(22.8% )
PM 156
n-Decanal
-CH2 =CH2
m/z 83(35.0% )
-CH2 =CH2
m/z 69(34.4% )
m/z 55(77.1% )
m/z 41(87.1% )
ruptura
alílica
+.
CH2 = CH - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - CH3
m/z 29(44.2% )
m/z 43(94.2% )
-CH2 =CH2
m/z 57(100% )
-CH2 =CH2
m/z 71(30.0% )
Geranial
En el EM del geranial (Figura 27), monoterpenal acíclico, el ión molecular M+ ° (PM 152)
no se registra. Los procesos asociados a su ionización disociativa involucran la eliminación
de una molécula de agua y del radical C3H7°, con formación de los iones (M-H2O)+ en m/z
134(2.86%) y (M-C3H7)+ en m/z 109(24.3%). La ruptura alílica origina el fragmento
hidrocarbonado en m/z 69(100%), pico de base en el espectro, que posteriormente elimina
la molécula de etileno para convertirse en un ión alílico en m/z 41(90%), tal como se ilustra
en el Esquema 9.
90
80
70
60
50
40 84
30
20 94 109
67 81 123 137
53 59 95 152
10
107 119 134
0
m/z--> 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160
+ .
CHO
-C3 H7 . -CH3 .
O (M-C3H7)+ (M-C3H7-CH3)+
m/z 109(24.3% ) m/z 94(14.3% )
PM 152
Geranial
+
ruptura
alílica - C2 H4
+ +
m/z 41(90% )
m/z 69(100% )
El gran poder analítico de la espectroscopía RMN surge del hecho que la energía necesaria
para invertir la orientación de un núcleo dado, no depende exclusivamente de la magnitud
del campo magnético aplicado, sino que está modulada por la densidad electrónica
alrededor del núcleo, su orientación y distancia electrónica alrededor del núcleo, su
orientación y distancia relativas a otros núcleos vecinos, y por la geometría global de la
molécula. Es decir, la estructura de la molécula hace que los núcleos que la constituyen
requieran diferentes valores de energía para invertir su orientación con respecto al campo
magnético aplicado, ya que a cada uno corresponde un ambiente químico diferente. En
consecuencia, los núcleos de carbono-13 o hidrógeno en la muestra, se pueden distinguir en
un gráfico de intensidad de adsorción versus energía (espectro RMN).
En el espectro de RMN se distinguen diferentes regiones, las cuales están asociadas con
ambientes químicos similares para los núcleos que forman parte del mismo tipo de grupo
funcional. Por ejemplo, los hidrógenos de los grupos CH3 aparecen en el extremo derecho
del espectro, mientras que los hidrógenos de los grupos aldehído (R-CHO) aparecen en el
extremo opuesto.
Dada la alta resolución disponible hoy en día con esta técnica, es posible distinguir dentro
de los picos pertenecientes a una misma región del espectro (funcionalidad) aquellos
correspondientes a diferentes constituyentes del aceite esencial. Esto permite, a través del
estudio del comportamiento de sus intensidades y áreas, utilizar esta técnica para
supervisar cambios cualitativos y cuantitativos en la composición química del aceite
esencial, para aquellos componentes presentes en concentraciones mayores del 1%. A
través de experimentos de RMN conocidos como DEPT, es posible obtener subespectros,
en los cuales únicamente aparecen las señales de los carbonos con un mismo grado de
protonación. Es decir, pueden lograrse espectros en donde las señales son exclusivamente
de carbonos cuaternarios o carbonos metílicos, o metilénicos o metínicos. Esta selectividad
es de gran utilidad para la caracterización del aceite esencial y el control de su calidad.
ESPECTROSCOPIA INFRARROJA
Las señales que aparecen en un espectro infrarrojo informan sobre la energía absorbida por
las diferentes formas en que pueden vibrar las moléculas constituyentes de la muestra, tales
como variaciones en la longitud de los enlaces, torsiones y variaciones angulares. Una
técnica analítica bastante potente se obtiene al acoplar la cromatografía de gases con la
espectroscopía infrarroja (GC-FT-IR).
La corriente de gas que sale de la columna cromatográfica se dirige por medio de líneas de
transferencia calentadas, hasta una celda para gases o hasta un tubo de luz. Típicamente
éste está hecho de acero inoxidable, vidrio o cuarzo, con un recubrimiento interior en oro y
con ventanas transparentes a la luz infrarroja (KBr).
Para obtener el espectro de los componentes de la mezcla gaseosa que circula por el tubo
de luz, se hace pasar luz infrarroja desde una de las ventanas del tubo y en el otro extremo
se instala un detector altamente sensible, cuya señal se analiza por el método de la
transformada de Fourier ( interferometría). Luego de atravesar el tubo de luz, la corriente
gaseosa se lleva a un detector convencional de cromatografía de gases. De esta manera se
obtiene el cromatograma de la muestra y los espectros infrarrojo de sus constituyentes.
El paso final del análisis es la búsqueda automática de los espectros infrarrojo obtenidos en
una biblioteca de espectros en fase vapor de compuestos patrones.
La mayoría de los productos naturales, tales como aceites, perfumes, carbones y destilados
del petróleo, contienen muchos compuestos isoméricos. Debido a que la mayoría de estos
isómeros difieren en sus espectros infrarrojo, la metodología GC-FTIR se presta para el
estudio.