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Farmacopéia Brasileira 5 ed. volume 1 - Anvisa

Farmacopéia Brasileira 5 ed. volume 1 - Anvisa

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Tabela 1 - Tabela G para valores atípicos.

n

3

4

5

6

7

G1

0,976

0,846

0,729

0,644

0,586

n

8

9

10

11

12

13

G2

0,780

0,725

0,678

0,638

0,605

0,578

n

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

G3

0,602

0,579

0,559

0,542

0,527

0,514

0,502

0,491

0,481

0,472

0,464

Tabela 2 – Teste para grupos contendo valores atípicos.

k

Valor crítico de R+ para intervalo de n observações cada um, ao nível de signifcância α = 0,05

2

3

4

5

6

7

8

9

10

2

0,962

0,862

0,803

0,764

0,736

0,717

0,702

0,691

0,682

3

0,813

0,667

0,601

0,563

0,539

0,521

0,507

0,498

0,489

4

0,681

0,538

0,479

0,446

0,425

0,410

0,398

0,389

0,382

5

0,581

0,451

0,398

0,369

0,351

0,338

0,328

0,320

0,314

6

0,508

0,389

0,342

0,316

0,300

0,288

0,280

0,273

0,267

7

0,451

0,342

0,300

0,278

0,263

0,253

0,245

0,239

0,234

8

0,407

0,305

0,267

0,248

0,234

0,225

0,218

0,213

0,208

9

0,369

0,276

0,241

0,224

0,211

0,203

0,197

0,192

0,188

10

0,339

0,253

0,220

0,204

0,193

0,185

0,179

0,174

0,172

Tabela 2a – Teste para grupos contendo valores atípicos.

k

Valor crítico de (k + 2) R+ para intervalo de n observações cada um, ao nível de signifcância α = 0,05

2

3

4

5

6

7

8

9

10

10

4,06

3,04

2,65

2,44

2,30

2,21

2,14

2,09

2,05

12

4,06

3,03

2,63

2,42

2,29

2,20

2,13

2,07

2,04

15

4,06

3,02

2,62

2,41

2,28

2,18

2,12

2,06

2,02

20

4,13

3,03

2,62

2,41

2,28

2,18

2,11

2,05

2,01

50

4,26

3,11

2,67

2,44

2,29

2,19

2,11

2,06

2,01

350Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 3 – Distribuição t de Student.

α

gl

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

,05

,02

,01

,001

1

0,158

0,325

0,510

0,727

1,000

1,376

1,963

3,078

6,314

12,706

31,821

63,657636,619

2

0,142

0,289

0,445

0,617

0,816

1,061

1,386

1,886

2,920

4,303

6,965

9,925

31,598

3

0,137

0,277

0,424

0,584

0,765

0,978

1,250

1,638

2,353

3,182

4,541

5,541

12,924

4

0,134

0,271

0,414

0,569

0,741

0,941

1,190

1,533

2,132

2,776

3,747

4,604

8,610

5

0,132

0,267

0,408

0,559

0,727

0,920

1,156

1,476

2,015

2,571

3,365

4,032

6,869

6

0,131

0,265

0,404

0,553

0,718

0,906

1,134

1,440

1,943

2,447

3,143

3,707

5,959

7

0,130

0,263

0,402

0,549

0,711

0,896

1,119

1,415

1,895

2,365

2,365

3,499

5,408

8

0,130

0,262

0,399

0,546

0,706

0,889

1,108

1,397

1,860

2,306

2,896

3,355

5,041

9

0,129

0,261

0,398

0,543

0,703

0,883

1,100

1,383

1,833

2,262

2,821

3,250

4,781

10

0,129

0,260

0,397

0,542

0,700

0,879

1,093

1,372

1,812

2,228

2,764

3,169

4,587

11

0,129

0,260

0,396

0,540

0,697

0,876

1,088

1,363

1,796

2,201

2,718

3,106

4,437

12

0,128

0,259

0,395

0,539

0,695

0,873

1,083

1,356

1,782

2,179

2,681

3,055

4,318

13

0,128

0,259

0,394

0,538

0,694

0,870

1,079

1,350

1,771

2,160

2,650

3,012

4,221

14

0,128

0,258

0,393

0,537

0,692

0,868

1,076

1,345

1,761

2,145

2,624

2,977

4,140

15

0,128

0,258

0,393

0,536

0,691

0,866

1,074

1,341

1,753

2,131

2,602

2,947

4,073

16

0,128

0,258

0,392

0,535

0,690

0,865

1,071

1,337

1,746

2,120

2,583

2,921

4,015

17

0,128

0,257

0,392

0,534

0,689

0,863

1,069

1,333

1,740

2,110

2,567

2,898

3,965

18

0,127

0,257

0,392

0,534

0,688

0,862

1,067

1,330

1,734

2,101

2,552

2,878

3,922

19

0,127

0,257

0,391

0,533

0,688

0,861

1,066

1,328

1,729

2,093

2,539

2,861

3,883

20

0,127

0,257

0,391

0,533

0,687

0,860

1,064

1,325

1,725

2,086

2,528

2,845

3,850

21

0,127

0,257

0,391

0,532

0,686

0,859

1,063

1,323

1,721

2,080

2,518

2,831

3,819

22

0,127

0,256

0,390

0,532

0,686

0,858

1,061

1,321

1,717

2,074

2,508

2,819

3,792

23

0,127

0,256

0,390

0,532

0,685

0,858

1,060

1,319

1,714

2,069

2,500

2,807

3,767

24

0,127

0,256

0,390

0,531

0,685

0,857

1,059

1,318

1,711

2,064

2,492

2,797

3,745

25

0,127

0,256

0,390

0,531

0,684

0,856

1,058

1,316

1,708

2,060

2,485

2,787

3,726

26

0,127

0,256

0,390

0,531

0,684

0,856

1,058

1,315

1,706

2,056

2,479

2,779

3,707

27

0,127

0,256

0,389

0,531

0,684

0,855

1,057

1,314

1,703

2,052

2,473

2,771

2,690

28

0,127

0,256

0,389

0,530

0,683

0,855

1,056

1,311

1,699

2,045

2,462

2,756

3,674

29

0,127

0,256

0,389

0,530

0,683

0,854

1,055

1,310

1,697

2,042

2,457

2,750

3,659

30

0,127

0,255

0,389

0,530

0,683

0,854

1,055

1,310

1,697

2,042

2,457

2,750

3,646

40

0,126

0,254

0,388

0,529

0,681

0,851

1,050

1,303

1,684

2,021

2,423

2,704

3,551

60

0,126

0,254

0,387

0,527

0,679

0,848

1,046

1,296

1,671

2,000

2,390

2,660

3,460

120

0,126

0,253

0,386

0,526

0,677

0,845

1,041

1,289

1,658

1,980

2,358

2,617

3,373

0,126

0,256

0,385

0,524

0,674

0,842

1,036

1,282

1,645

1,960

2,326

2,576

3,291

gl = graus de liberdade; α = nível de signifcância

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

351

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Tabela 4 - Distribuição F de Fisher para α = 0,05.

gl1
Denominador

gl2 Numerador

1

2

3

4

5

6

8

12

24

1

161,40199,50215,70224,60230,20234,00238,90243,90249,00

254,30

2

18,51

19,00

19,16

19,25

19,30

19,33

19,37

19,41

19,45

19,50

3

10,13

9,55

9,28

9,12

9,01

8,94

8,84

8,74

8,64

8,53

4

7,71

6,94

6,59

6,39

6,26

6,16

6,04

5,91

5,77

5,63

5

6,61

5,79

5,41

5,19

5,05

4,95

4,82

4,68

4,53

4,36

6

5,99

5,14

4,76

4,53

4,39

4,28

4,15

4,00

3,84

3,67

7

5,59

4,74

4,35

4,12

3,97

3,87

3,73

3,57

3,41

3,23

8

5,32

4,46

4,07

3,84

3,69

3,58

3,44

3,28

3,12

2,93

9

5,12

4,26

3,86

3,63

3,48

3,37

3,23

3,07

2,90

2,71

10

4,96

4,10

3,71

3,48

3,33

3,22

3,07

2,91

2,74

2,54

11

4,84

3,98

3,59

3,36

3,20

3,09

2,95

2,79

2,61

2,40

12

4,75

3,88

3,49

3,26

3,11

3,00

2,85

2,69

2,50

2,30

13

4,67

3,80

3,41

3,18

3,02

2,92

2,77

2,60

2,42

2,21

14

4,60

3,74

3,34

3,11

2,96

2,85

2,70

2,53

2,35

2,13

15

4,54

3,68

3,29

3,06

2,90

2,79

2,64

2,48

2,29

2,07

16

4,49

3,63

3,24

3,01

2,85

2,74

2,59

2,42

2,24

2,01

17

4,45

3,59

3,20

2,96

2,81

2,70

2,55

2,38

2,19

1,96

18

4,41

3,55

3,16

2,93

2,77

2,66

2,51

2,34

2,15

1,92

19

4,38

3,52

3,13

2,90

2,74

2,63

2,48

2,31

2,11

1,88

20

4,35

3,49

3,10

2,87

2,71

2,60

2,45

2,28

2,08

1,84

21

4,32

3,47

3,07

2,84

2,68

2,57

2,42

2,25

2,05

1,81

22

4,30

3,44

3,05

2,82

2,66

2,55

2,40

2,23

2,03

1,78

23

4,28

3,42

3,03

2,80

2,64

2,53

2,38

2,20

2,00

1,76

24

4,26

3,40

3,01

2,78

2,62

2,51

2,36

2,18

1,98

1,73

25

4,24

3,38

2,99

2,76

2,60

2,49

2,34

2,16

1,96

1,71

26

4,22

3,37

2,98

2,74

2,59

2,47

2,32

2,15

1,95

1,69

27

4,21

3,35

2,96

2,73

2,57

2,46

2,30

2,13

1,93

1,67

28

4,20

3,34

2,95

2,71

2,56

2,44

2,29

2,12

1,91

1,65

29

4,18

3,33

2,93

2,70

2,54

2,43

2,28

2,10

1,90

1,64

30

4,17

3,32

2,92

2,69

2,53

2,42

2,27

2,09

1,89

1,62

40

4,08

3,23

2,84

2,61

2,45

2,34

2,18

2,00

1,79

1,51

60

4,00

3,15

2,76

2,52

2,37

2,25

2,10

1,92

1,70

1,39

120

3,92

3,07

2,68

2,45

2,29

2,17

2,02

1,83

1,61

1,25

3,84

2,99

2,60

2,37

2,21

2,10

1,94

1,75

1,52

1,00

352Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 5 - Distribuição F de Fisher para α = 0,01.

gl2
Denominador

gl1 Numerador

1

2

3

4

5

6

8

12

24

1

4052

4999

5403

5625

5764

5859

5982

6106

6234

6366

2

98,50

99,00

99,17

99,25

99,30

99,33

99,37

99,42

99,46

99,50

3

34,12

30,82

29,46

28,71

28,24

27,91

27,49

27,05

26,60

26,12

4

21,20

18,00

16,69

15,98

15,52

15,21

14,80

14,37

13,93

13,46

5

16,26

13,27

12,06

11,39

10,97

10,67

10,29

9,89

9,47

9,02

6

13,74

10,92

9,78

9,15

8,75

8,47

8,10

7,72

7,31

6,88

7

12,25

9,55

8,45

7,85

7,46

7,19

6,84

6,47

6,07

5,65

8

11,26

8,65

7,59

7,01

6,63

6,37

6,03

5,67

5,28

4,86

9

10,56

8,02

6,99

6,42

6,06

5,80

5,47

5,11

4,73

4,31

10

10,04

7,56

6,55

5,99

5,64

5,39

5,06

4,71

4,33

3,91

11

9,65

7,20

6,22

5,67

5,32

5,07

4,74

4,40

4,02

3,60

12

9,33

6,93

5,95

5,41

5,06

4,82

4,50

4,16

3,78

3,36

13

9,07

6,70

5,74

5,20

4,86

4,62

4,30

3,96

3,59

3,16

14

8,86

6,51

5,56

5,03

4,69

4,46

4,14

3,80

3,43

3,00

15

8,68

6,36

5,42

4,89

4,56

4,32

4,00

3,67

3,29

2,87

16

8,53

6,23

5,29

4,77

4,44

4,20

3,89

3,55

3,18

2,75

17

8,40

6,11

5,18

4,67

4,34

4,10

3,79

3,45

3,08

2,65

18

8,28

6,01

5,09

4,58

4,25

4,01

3,71

3,37

3,00

2,58

19

8,18

5,93

5,01

4,50

4,17

3,94

3,63

3,30

2,92

2,49

20

8,10

5,85

4,94

4,43

4,10

3,87

3,56

3,23

2,86

2,42

21

8,02

5,78

4,87

4,37

4,04

3,81

3,51

3,17

2,80

2,36

22

7,94

5,72

4,82

4,31

3,99

3,76

3,45

3,12

2,75

2,31

23

7,88

5,66

4,76

4,26

3,94

3,71

3,41

3,07

2,70

2,26

24

7,82

5,61

4,72

4,22

3,90

3,67

3,36

3,03

2,66

2,21

25

7,77

5,57

4,68

4,18

3,86

3,63

3,32

2,99

2,62

2,17

26

7,72

5,53

4,64

4,14

3,82

3,59

3,29

2,96

2,58

2,13

27

7,68

5,49

4,60

4,11

3,78

3,56

3,26

2,93

2,56

2,10

28

7,64

5,45

4,57

4,07

3,75

3,53

3,23

2,90

2,52

2,06

29

7,60

5,42

4,54

4,04

3,73

3,50

3,20

2,87

2,49

2,03

30

7,56

5,39

4,51

4,02

3,70

3,47

3,17

2,84

2,47

2,01

40

7,31

5,18

4,31

3,83

3,51

3,29

2,99

2,66

2,29

1,80

60

7,08

4,98

4,13

3,65

3,34

3,12

2,82

2,50

2,12

1,60

120

6,85

4,79

3,95

3,48

3,17

2,96

2,66

2,34

1,95

1,38

6,64

4,60

3,78

3,32

3,02

2,80

2,51

2,18

1,79

1,00

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

353

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Tabela 6 – Ordem de doses nos ensaios cruzados.

Grupo

Duplo Cruzado

Triplo Cruzado

Fase I

Fase II

Fase I

Fase II

1

ρ1

a2

ρ1

a3

2

ρ2

a1

ρ2

a2

3

a1

ρ2

ρ3

a1

4

a2

ρ1

a1

ρ3

5

-

-

a2

ρ2

6

-

-

a3

ρ1

Tabela 7 – Exemplo de ordem de doses no quadrado latino.

a2

ρ1

a1

ρ2

ρ2

a1

ρ1

a2

a1

a2

ρ2

ρ1

ρ1

ρ2

a2

a1

Tabela 8 – Fórmulas para ensaios com duas doses de cada preparação.

Padrão (P)

1ª Amostra (A)

Amostra h -1 (Z)

Dose menor (soma de respostas)

P1

A1

Z1

Dose maior (soma de respostas)

P2

A2

Z2

Por preparação (soma de respostas)

P1 + P2 = P

A1 + A2 = A

Z1 + Z2 = Z

Constraste linear

P2 – P1 = LP

A2 – A1 = LA

Z2 – Z1 = LZ

Tabela 9 – Fórmulas para ensaio com três doses de cada preparação.

Padrão (P)

1ª Amostra (A)

Amostra h -1 (Z)

Dose menor (soma de respostas)

P1

A1

Z1

Dose média (soma de respostas)

P2

A2

Z2

Dose maior (soma de respostas)

P3

A3

Z3

Por preparação (soma de respostas)

P1 + P2 + P3 = P

A1 + A2 + A3 = A

Z1 + Z2 + Z3= Z

Constraste linear

P3 – P1 = LP

A3 – A1 = LA

Z3 – Z1 = LZ

Contraste quadrático

P1 – 2P2 + P3 = QP

A1 – 2A2 + A3 = QA

Z1 – 2Z2 + Z3 = QZ

354Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 10 – Testes de validade (análise de variância).

Fonte de variação

Graus de liberdade (gl)

Soma de quadrados reduzida

Ensaio de duas doses

Ensaio de três doses

Preparações

h – 1

K

2

Z

A

P

2

2

2

+

+

+

nK

K

3

Z

A

P

2

2

2

+

+

+

nK

Regressão

1

Paralelismo

h – 1

(

)

E

2

L

L

L

2
Z

2
A

2
P

+

+

+

nK

(

)

E

2

L

L

L

2
Z

2
A

2
P

+

+

+

nK

Quadrático

1

-

Diferença de Quadráticos

h – 1

-

(

)

Q

6

Q

Q

Q

2
Z

2
A

2
P

+

+

+

nK

Tabela 11 – Estimativa do erro residual.

Fonte de
variação

Graus de
liberdade (gl)

Soma de quadrados reduzida

Delineamento ao acaso

Blocos ao acaso

Quadrado latino

Tratamentos

k - 1

K

Z

P

P

2
d

2
2

2
1

+

+

+

nK

K

Z

P

P

2
d

2
2

2
1

+

+

+

nK

K

Z

P

P

2
d

2
2

2
1

+

+

+

nK

Blocos (flas)

n - 1

--

K

F

F

F

2
n

2
2

2
1

+

+

+

kK

K

F

F

F

2
n

2
2

2
1

+

+

+

kK

Blocos (colunas)n - 1

--

--

K

C

C

C

2
n

2
2

2
1

+

+

+

kK

Erro residual

Por diferença*

*

*

TOTAL

N - 1

K

2

∑y

K

2

∑y

K

2

∑y

* Obitida subtraindo, da soma de quadrados reduzida total, todas as outras somas de quadrados reduzidas calculadas para o delineamento correspondente.

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

355

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Tabela 12 – Tabela de t’ para comparação bicaudal entre (h -1) amostras e um

padrão para um coefciente de confança conjunto de p = 0,95.

gl2

gl1 = (h -1) = número de amostras (excluindo padrão)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

5

2,57

3,03

3,29

3,48

3,62

3,73

3,82

3,90

3,97

6

2,45

2,86

3,10

3,26

3,39

3,49

3,57

3,64

3,71

7

2,36

2,75

2,97

3,12

3,24

3,33

3,41

3,47

3,53

8

2,31

2,67

2,88

3,02

3,13

3,22

3,29

3,35

3,41

9

2,26

2,61

2,81

2,95

3,05

3,14

3,20

3,26

3,32

10

2,23

2,57

2,76

2,89

2,99

3,07

3,14

3,19

3,24

11

2,20

2,53

2,72

2,84

2,94

3,02

3,08

3,14

3,19

12

2,18

2,50

2,68

2,81

2,90

2,98

3,04

3,09

3,14

13

2,16

2,48

2,65

2,78

2,87

2,94

3,00

3,06

3,10

14

2,14

2,46

2,63

2,75

2,84

2,91

2,97

3,02

3,07

15

2,13

2,44

2,61

2,73

2,82

2,89

2,95

3,00

3,04

16

2,12

2,42

2,59

2,71

2,80

2,87

2,92

2,97

3,02

17

2,11

2,41

2,58

2,69

2,78

2,85

2,90

2,95

3,00

18

2,10

2,40

2,56

2,68

2,76

2,83

2,89

2,94

2,98

19

2,09

2,39

2,55

2,66

2,75

2,81

2,87

2,92

2,96

20

2,09

2,38

2,54

2,65

2,73

2,80

2,86

2,90

2,95

24

2,06

2,35

2,51

2,61

2,70

2,76

2,81

2,86

2,90

30

2,04

2,32

2,47

2,58

2,66

2,72

2,77

2,82

2,86

40

2,02

2,29

2,44

2,54

2,62

2,68

2,73

2,77

2,81

60

2,00

2,27

2,41

2,51

2,58

2,64

2,69

2,73

2,77

120

1,98

2,24

2,38

2,47

2,55

2,60

2,65

2,69

2,73

1,96

2,21

2,35

2,44

2,51

2,57

2,61

2,65

2,69

Tabela 13 – Totais e contrates em ensaio com delineamento duplo cruzado.

Padrão (P)

Amostra (A)

Total

FASE I
Dose menor (soma de respostas)

P1I

A1I

-

Dose maior (soma de respostas)

P2I

A2

-

Total

PI

AI

PI + AI = FI

FASE II
Dose menor (soma de respostas)

P1II

A1II

-

Dose maior (soma de respostas)

P2II

A2II

-

Total

PII

AII

PII + AII = FII

Por preparação (soma de respostas)

P

A

y

Contraste linear
FASE I

P2I – P1I = LPI

A2I – A1I = LAI

LPI + LAI = LI

FASE II

P2II – P1II = LPII

A2II – A1II = LAII

LPII + LAII = LII

TOTAL

P2 + P1 = LP

A2 + A1 = LA

LP + LA = ∑ L

356Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 14 – Testes de validade em ensaio duplo cruzado.

Fonte de variação

Graus de
liberdade (gl)

Soma de quadrados reduzida

Paralelismo

1

E

2L

L

2
A

2
P

+

n

Fases X Preparações

1

(Fases – Preparações)

Fases X Regressão

1

Erro I

Diferença

Blocos – Paralelismo – (Fases X Preparações) – (Fases X Regressão)

Blocos (animais)

bl – 1

K

2

B

B

B

2
2

2
2

2
1

+

+

+

n

K

Preparações

1

K

2A

P

2

2

+

n

Regressão

1

(

)

E

NL

L

2

A

P

=

+

Fases

1

Fases X Paralelismo

1

Paralelismo – (Fases X Regressão)

Erro II

Diferença

Total – Blocos – Preparações – Regressão – Fases – (Fases X Paralelismo)

TOTAL

N - 1

K

2

∑y

K = (∑y)2

/N
N = número total de respostas
n = número total de réplicas por dose incluídas as duas fases
bl = número de blocos (animais)
B = soma das duas repostas para cada bloco (animal)

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

357

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Tabela 15 – Constante usada na fórmula para os limites de confança.

Dose de cada preparação (d)

Número de amostras ensaiadas (h – 1)

c’

2

1

1

2

3/2

3

2

4

5/2

5

3

3

1

8/3

2

4

3

16/3

4

20/3

5

8

Tabela 16 – Probitos correspondentes a porcentagem.

%

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

0

-

2,67

2,95

3,12

3,25

3,36

3,45

3,52

3,59

3,66

10

3,72

3,77

3,82

3,87

3,92

3,96

4,01

4,05

4,08

4,12

20

4,16

4,19

4,23

4,26

4,29

4,33

4,36

4,39

4,42

4,45

30

4,48

4,50

4,53

4,56

4,59

4,61

4,64

4,67

4,69

4,72

40

4,75

4,77

4,80

4,82

4,85

4,87

4,90

4,92

4,95

4,97

50

5,00

5,03

5,05

5,08

5,10

5,13

5,15

5,18

5,20

5,23

60

5,25

5,28

5,31

5,33

5,36

5,39

5,41

5,44

5,47

5,50

70

5,52

5,55

5,58

5,61

5,64

5,67

5,71

5,74

5,77

5,81

80

5,84

5,88

5,92

5,95

5,99

6,04

6,08

6,13

6,18

6,23

90

6,28

6,34

6,41

6,48

6,55

6,64

6,75

6,88

7,05

7,33

%

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

97

6,88

6,90

6,91

6,93

6,94

6,96

6,98

7,00

7,01

7,03

98

7,05

7,07

7,10

7,12

7,14

7,17

7,20

7,23

7,26

7,29

99

7,33

7,37

7,41

7,46

7,51

7,58

7,65

7,75

7,88

8,09

Tabela 17 – Coefcientes de ponderação para probitos (w).

Probitos

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

0,001

0,001

0,001

0,002

0,002

0,003

0,005

0,006

0,008

0,011

2

0,015

0,019

0,025

0,031

0,040

0,050

0,062

0,076

0,092

0,110

3

0,131

0,154

0,180

0,208

0,238

0,269

0,302

0,336

0,370

0,405

4

0,439

0,471

0,503

0,532

0,558

0,581

0,601

0,616

0,627

0,634

5

0,637

0,634

0,627

0,616

0,601

0,581

0,558

0,532

0,503

0,471

6

0,439

0,405

0,370

0,336

0,302

0,269

0,238

0,208

0,180

0,154

7

0,131

0,110

0,092

0,076

0,062

0,050

0,040

0,031

0,025

0,019

8

0,015

0,011

0,008

0,006

0,005

0,003

0,002

0,002

0,001

0,001

Tabela 18 – Valores de χ2

(α = 0,05).

gl

χ2

gl

χ2

1

3,84

9

16,92

2

5,99

10

18,31

3

7,81

11

19,67

4

9,49

12

21,03

5

11,07

13

22,36

6

12,59

14

23,69

7

14,07

15

25,00

8

15,51

20

31,41

25

37,65

358Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 19 - Matriz de respostas no ensaio de antibióticos pelo delineamento 5 x 1, após correção.

Padrão

Amostra

P1

P2

P3

P4

P5

A

B

C

Respostas

y11

y21

y31

y41

y51

A31

B31

...

y12

y22

y32

y42

y52

A32

B32

...

y13

y23

y33

y43

y53

A33

B33

...

y14

y24

y34

y44

y54

A34

B34

...

y15

y25

y35

y45

y55

A35

B35

...

y16

y26

y36

y46

y56

A36

B36

...

y17

y27

y37

y47

y57

A37

B37

...

y18

y28

y38

y48

y58

A38

B38

...

y19

y29

y39

y49

y59

A39

B39

...

Total

y1.

y2.

y3.

y4.

y5.

A3.

B3.

ynz: n é a concentração (P1 a P5) e z é a resposta (de 1 a 9)
Anz: n é a concentração mediana (P3) e z é a resposta (de 1 a 9)

Tabela 20 - Tabela de Análise de variância para o modelo de regressão linear simples – delineamento 5 x 1.

0

1

y = b+ bx

0

1

b=y - bx

Fonte de
variação

gl

Soma de quadrados

Quadrado médio

F calculado

Regressão

1

SQreg = b1Σxy + b0Σy – (Σy)2

/N

QMreg = SQreg

QMreg/ QMres

Erro residual

N - 2

SQres = Σy2

– b1Σxy – b0Σy

QMres = SQres

N- 2

---

Desvio linear

3

SQdesv = SSres - SQep

QMdesv = SQdesv.
3

QMdesv/QMep

Erro puro (ep)

N - 5

SQep = Σy2

– (Σyi)2

/k’

QMep = SQep

N - 5

---

Total

N - 1

SQreg + SQres

---

(Σyi)2

= (y11 + y12 + y13 + … + y19)2

+ … + (y51 + y52 + y53 + … + y59)2

2

(x-x)

N-1= Sxx = desvio padrão da variável (x)

2

(y-y)

N-1 = Syy = desvio padrão da variável resposta (y)

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

359

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

8.10 EXEMPLOS DE
CÁLCULOS ESTATÍSTICOS
APLICADOS EM ENSAIOS
BIOLÓGICOS

8.10.1 EXEMPLO DE ENSAIO
DIRETO

Exemplo 1: ensaio direto com uma amostra.

Ensaio de digital pelo método da parada cardíaca em cobaia

A solução do padrão foi usada na concentração de 0,0658
UI/mL. Uma diluição equivalente de amostra foi preparada
a partir da potência suposta de SA = 1,3 UI/100 mg.

As cobaias foram perfundidas aleatoriamente com solução
padrão ou amostra, registrando-se o volume justamente
necessário para produzir a parada cardíaca em cada animal.

As respostas encontram-se na Tabela 19.

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Da equação 1:
M’= 1,3974 - 1,4089 = - 0,0115

Da equação 6:
M = - 0,0115 + log 1,3 = 0,1024

Da equação 5:
R = antilog 0,1024 = 1,2660

Da equação 3:

Da equação 2:

0251
,
0

000632
,
0

=

=

Ms

Para α = 0,05 com 22 gl, t = 2,07 (Tabela 3)

Da equação 7:

A estimativa média da potência da amostra de digital é

1,27 UI/100 mg. Os limites de confança (p = 0,05) para a

verdadeira potência são 1,12 UI/100 mg e 1,43 UI/l00 mg.

Tabela 21 - Exemplo 1: Doses efcazes para produzir parada cardíaca

Padrão P

Amostra A

Dose letal
mL/kg

Log dose letal
xp

Dose letal
mL/kg

Log dose letal
xA

27,57

1,4404

34,02

1,5317

25,97

1,4145

21,90

1,3404

27,74

1,4431

28,33

1,4523

30,94

1,4905

24,87

1,3957

28,31

1,4519

27,56

1,4403

27,29

1,4360

24,73

1,3932

22,13

1,3450

21,67

1,3359

23,63

1,3735

21,30

1,3284

21,39

1,3302

29,10

1,4639

22,13

1,3450

25,54

1,4072

20,97

1,3216

29,23

1,4658

23,78

1,3762

21,40

1,3304

Σx

19,5641

14,0890

x

1,3974

1,4089

Σx2

27,3829

19,8879

s2

0,003331

0,004211

N

14

10

360Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Os ratos foram injetados subcutâneamente com 0,20 mL
da solução respectiva, durante três dias consecutivos, num
total de 0,6 mL/rato.

Os pesos das vesículas seminais encontram-se na Tabela
22
.

Tabela 22 - Exemplo 2: pesos de vesículas seminais (mg).

p1

p2

p3

a1

a2

a3

8,5

12,5

14,8

10,5

16,8

16,7

10,4

13,1

14,1

10,5

14,3

16,9

11,4

8,3

14,9

9,1

14,9

18,8

11,6

13,1

13,8

9,9

12,3

16,7

10,2

9,0

14,6

10,5

15,4

12,7

9,1

14,4

15,2

8,4

14,9

16,2

9,5

11,7

12,3

10,1

12,8

17,3

7,7

11,72*

15,5

10,1

10,0

12,8

* Valor perdido substituído pela média do tratamento.

8.10.2 EXEMPLOS DE ENSAIOS
INDIRETOS QUANTITATIVOS

Exemplo 2: ensaio com três doses, delineamento
completamente ao acaso.

Ensaio de gonadotrofna coriônica humana pelo método

do aumento de peso de vesículas seminais

As doses utilizadas do padrão foram: p1 = 1,0 UI/mL,
p2 = 2,0 UI/mL e p3 = 4,0 UI/mL. Doses equivalentes da
amostra foram preparadas a partir da potência suposta SA
= 3000 UI/mg.

Tabela 23 - Exemplo 2: totais e contrastes.

Padrão P

Amostra A

Dose menor

P1 = 78,40

A1 = 79,10

Dose média

P2 = 93,82

A2 = 111,10

Dose maior

P3 = 115,20

A3 = 128,10

Preparação

P = 287,42

A = 318,60

Contraste linear

LP = 36,80

LA = 49,00

Contraste quadrático

QP = 5,96

QA = 15,60

Resultados obtidos com as fórmulas da Tabela 9.

Tabela 24 - Exemplo 2: análise de variância.

Fonte de variação

gl

Soma de
quadrados

Quadrado
médio

F

Α

Preparações

1

20,26

20,26

Regressão

1

230,05

230,05

79,05

<0,01

Paralelismo

1

4,65

4,65

1,60

>0,05

Quadrático

1

0,97

0,97

0,33

>0,05

Diferença de quadrados

1

4,84

4,84

1,66

>0,05

Tratamentos

5

260,77

52,15

Erro

41*

119,18

s2

= 2,91

TOTAL

47

379,95

*Retirado um grau de liberdade por ter sido substituído um valor perdido.
As somas de quadrados foram obtidas empregando-se as fórmulas das Tabelas 9, 10 e 11.

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

361

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

N = 48
n = 8
K = (y)2

/N = 7 651,25

y2

= 8 031,21

Total = 8 031,21 – 7 651,25 = 379,95

Erro = 379,95 – 260,77 = 119,18

Validade do ensaio

O ensaio cumpre com as condições de validade:

a) regressão signifcativa, F calculado 79,05 é maior que o
valor crítico da Tabela 5 para α = 0,0l, g11 = 1 e g12 = 41;

b) desvio de paralelismo não signifcativo, F calculado
1,60 é menor que o valor crítico da Tabela 4 para α = 0,05,
g11 = 1 e gl2 = 41e

c) desvio de linearidade não signifcativo, F = 0,33 e 1,66.

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Utilizar fórmulas 10 a 15.

I = log 2,0 = 0,3010

t = 2,02 com 41 gl da Tabela 3

SA = 3 000

log SA = 3,4771

M = 0,1460 + 3,4771 = 3,6231

R = anti log 3,6231 = 4 198,56 UI/mg

C’ = 8/3, da Tabela 15

M’s = 0,2679

M’i = 0,0381

Logaritmo dos limites de confança da potência

Ms = 0,2679 + 3,4771 = 3,7449

Mi = 0,0381 + 3,4771 = 3,5151

Limites de confança da potência

Rs = anti log 3,7445 = 5552,64 UI/mg = anti log 3,5151 =
3274,16 UI/mg

Exemplo 3: ensaio com três doses, delineamento blocos
ao acaso.

Ensaio de antibiótico usando placas de Petri

As doses utilizadas do padrão foram:

p1 = 0,25 UI/mL, p2 = 0,50 UI/mL e p3 = 1,00 UI/mL.

Doses equivalentes da amostra foram preparadas com base
na potência suposta SA = 1 650 UI/mg.

Os diâmetros dos halos de inibição encontram-se na
Tabela 25.

Tabela 25 - Exemplo 3: diâmetro de halos de inibição.

Placas
(Blocos)

Padrão P

Amostra A

Total
Bloco

p1

p2

p3

a1

a2

a3

1

17,0

20,4

24,0

17,4

20,7

24,4

123,9

2

14,9

19,7

22,7

14,9

19,3

22,2

113,7

3

15,0

18,6

22,0

15,0

18,0

22,3

110,9

4

14,6

18,3

22,4

14,8

19,0

22,2

111,3

5

14,7

18,0

22,3

14,4

17,8

22,6

109,8

6

14,4

19,1

23,3

14,5

19,3

23,0

113,6

7

14,9

19,0

22,5

15,0

19,4

22,4

113,2

yP= 287,42
24

= 11,97

362Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 26 - Exemplo 3: totais e contrastes.

Padrão P

Amostra A

Dose menor

P1 = 105,5

A1 = 106,0

Dose média

P2 = 133,1

A2 = 133,5

Dose maior

P3 = 159,2

A3 = 159,1

Preparação

P = 397,8

A = 398,6

Contraste linear

LP = 53,7

LA = 53,1

Contraste quadrático

QP = -1,5

QA = -1,9

Resultados obtidos com as fórmulas da Tabela 9

Tabela 27 - Exemplo 3: análise de variância.

Fonte de variação

gl

Soma de
quadrados

Quadrado
médio

F

Α

Preparações

1

0,0150

0,0150

0,09

>0,05

Regressão

1

407,3657

407,3657

2396

<0,01

Paralelismo

1

0,0129

0,0129

0,080

>0,05

Quadrático

1

0,1376

0,1376

0,81

>0,05

Diferença de quadrados

1

0,0019

0,0019

0,01

>0,05

Tratamentos

5

407,53

3020,25

Placas

6

22,18

3,70

21,8

< 0,01

Erro

30

4,99

s2

= 0,17

As somas de quadrados foram obtidas empregando-se as fórmulas das Tabelas 9, 10 e 11.

N = 42

n = 7

=

2

y

15 535,96

Total = 15 535,96 - 15 101,261 = 434,7

Erro = 434,7 - 22,18 - 407,53 = 4,99

Validade do ensaio

O ensaio cumpre com as condições de validade:

a) regressão signifcativa, F calculado 2390 é maior que o
valor crítico da Tabela 5 para α = 0,01, g11 = 1 e g12 = 30;

b) desvio de paralelismo não signifcativo, F calculado
0,08 é menor que o valor crítico da Tabela 4 para α= 0,05,
g11 = 1 e gl2 = 30, e

c) desvio de linearidade não signifcativo, F calculados =

0,81 e 0,01.

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Utilizar fórmulas 10 a 15.

I = log l,00-log 0,50 = 0,301 t =

t = 2,04 com 30 gl da Tabela 3.

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

363

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

SA = 1650 UI/mg

M = M’ + log 1650 = 0,003157 + 3,217480 = 3,2206

R = anti log 3,2206 = 1662

C = 407,3657/[407,3657 – 0,17 (2,04)2

] = 1,0017

c’ = 8/3, da Tabela 15

M’s = 0,0235

M’i = -0,0171

Logaritmo dos limites de confança da potência

Ms = 0,0235 + 3,2175 = 3,2410

Mi =-0,0 171 + 3,2175 = 3,2004

Limites de confança da potência

Rs = anti log 3,2410 = 1742 UI/mg

Ri =

anti log 3,2004 = 1586 UI/mg

Exemplo 4: ensaio com duas doses, delineamento
quadrado latino.

Ensaio de oxitocina método da contração do útero
isolado de rata

As doses administradas do padrão foram: p1 = 0,2 mL e p2
= 0,25 mL de solução contendo 0,02 UI/mL.

Doses equivalentes da amostra foram preparadas com base
na potência suposta de 10 UI/mL diluída 1:500.

Tabela 28 - Exemplo 4: ordem de adição das doses.

Filas

Colunas

1

2

3

4

1

p1

p2

a1

a2

2

p2

p1

a2

a1

3

a1

a2

p1

p2

4

a2

a1

p2

p1

Tabela 29 - Exemplo 4: registros de contrações em mm.

Filas

Colunas

Total
Filas

1

2

3

4

1

38

43

35

40

F1 = 156

2

38

30

44

38

F2 = 150

3

39

45

37

40

F3 = 161

4

45

38

45

37

F4 = 165

Total Coluna

C1 = 160

C2 = 156

C3 = 161

C4 = 155

Total das doses

P1 = 142

P2 = 166

A1 = 150

A2 = 174

Tabela 30 - Exemplo 4: totais e contrastes.

Padrão

Amostra

Dose menor

P1 = 142

A1 = 150

Dose maior

P2 = 166

A2 = 174

Preparação

P = 308

A = 324

Contraste linear

LP = 24

LA = 24

364Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

N =16
n =4
K = (y)2

/N = 6322

/16 = 24 964

Tratamentos =

0,
160

24964

4

174

150

166

142

2

2

2

2

=

+

+

+

Colunas =

5,
6

24964

4

155

161

156

160

2

2

2

2

=

+

+

+

Total= 25220 - 24964 = 256,0

Erro= 256,0 - 160,0 - 31,5 - 6,5 = 58,0

A analise não apresentou diferenças signifcativas (p >
0,05) entre flas e entre colunas.

VaIidade do ensaio

O ensaio cumpre com as condições de validade:

a) regressão signifcativa, F calculado 14,9 é maior que o
valor crítico da Tabela 5 para α = 0,01, gl1 = 1 e g12 = 6;

b) desvio de paralelismo não signifcativo, F calculado 0,0
é menor que o valor crítico da Tabela 4 para α = 0,05, g11
= 1 e gl2 = 6.

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Utilizar fórmulas 10 a 15

I = log 0,25 - log 0,20 = 0,0969

t = 2,45 com 6 gl da Tabela 3

SA = 10 log SA = l

M = 0,0323 + 1 = 1,0323

R = anti log 1,0323 = 10,8 UI/mL = Potência estimada

c’ = 1, da Tabela 15

M’s = 0,1402

M’i = -0,0324

Logaritmo dos limites de confança da potência

Ms = 0,1402 + 1 = 1,1402

Mi = 0,0324+ 1 = 0,9676

Limites de confança da potência

Rs = anti log 1,1402 = 13,81 UI/mL

Ri = anti log 0,9676 = 9,28 UI/mL

Exemplo 5: ensaio duplo cruzado.

Ensaio de insulina em camundongos

As doses utilizadas do padrão foram p1 = 60 mUI/mL e p2
= 120 mUI/mL. Foram preparadas doses equivalentes da
amostra, a1 = 60 mUI/mI e a2 = 120 mUI/mL a partir da
potência suposta SA = 27,4 UI/mL.

Tabela 31 - Exemplo 4: análise de variância

Fonte de
variação

gl

Soma dos
quadrados

Quadrado médio

F

Α

Preparapção

1

16,0

16,0

1,65

> 0,05

Regressão

1

144,0

144,0

14,89

< 0,01

Paralelismo

1

0,0

0,0

0,00

> 0,05

Tratamento

3

160,0

Filas

3

31,5

10,5

1,08

> 0,05

Colunas

3

6,5

2,2

0,23

> 0 05

Erro

6

58,0

s2

= 9,67

Total

15

256,0

As somas de quadrados foram obtidas empregando-se as fórmulas das Tabelas 8, 10 e 11.

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

365

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Os camundongos foram injetados com 0,1 mL da solução respectiva para cada 10 g de peso médio, de acordo com a
Tabela 6.

As respostas encontram-se na Tabela 30.

Tabela 32 - Exemplo 5: concentração de glicose sanguínea (mg/100 mL), quarenta minutos após injeção.

Grupo 1

Grupo 2

Grupo 3

Grupo 4

p1

a2

total

p2

a1

total

a1

p2

total

a2

p1

Total

37,1

16,6

53,7

32,4

32,4

80,8

36,8

17,0

53,8

30,9

52,1

83,0

35,2

40,1

75,3

35,2

35,2

103,0

53,2

24,9

78,1

27,8

59,4

87,2

43,1

33,9

77,0

35,3

35,3

108,4

71,2

58,2

129,4

35,4

39,1

74,5

41,3

16,2

57,5

32,9

32,9

78,1

37,1

24,8

61,9

49,8

79,0

128,8

54,2

33,2

87,4

31,9

31,9

65,0

45,9

22,7

68,6

28,2

37,3

65,5

41,4

13,1

54,4

51,2

51,2

113,6

82,2

42,7

124,9

49,9

51,1

101,0

48,6

32,7

81,3

38,2

38,2

114,4

64,8

33,9

98,7

28,3

59,5

87,8

57,8

50,4

108,2

39,7

39,7

89,8

49,1

37,6

86,7

39,6

55,8

95,4

71,1

47,3

118,4

37,0

37,0

110,8

44,1

10,4

54,5

32,2

40,6

72,8

60,8

26,1

86,9

38,9

38,9

103,5

64,7

34,7

99,4

55,1

68,2

123,3

78,2

50,9

129,1

42,6

42,6

97,2

88,0

61,6

149,6

40,6

61,4

102,0

76,1

54,4

130,5

30,4

30,4

80,0

90,1

60,3

150,4

43,5

52,8

96,3

Tabela 33 - Exemplo 5: totais e contrastes.

Padrão P

Amostra A

Total

FASE I
Dose menor

P1l = 644,9

A1l = 727,2

Dose maior

P2l = 445,7

A2l = 461,3

TOTAL

Pl = 1090,6

Al =1188,5

Fl = 2279,1

FASE II
Dose menor

P1ll = 656,3

A1ll = 704,9

Dose maior

P2ll = 428,8

A2ll = 414,9

TOTAL

Pll = 1085,1

All =1119,8

Fll = 2204,9

Preparação Contraste Linear

P = 2175,7

A = 2308,3

y = 4484,0

FASE I

LPl = -199,2

LAl = -256,9

Ll = -465,1

FASE II

LPll = -227,5

LAll = -290,0

Lll =-517,5

TOTAL

Lp =-426,7

LA = -555,9

L = -982,6

Resultados obtidos com as fórmulas da Tabela 13

Tabela 34 - Exemplo 5: análise de variância.

Fonte de variação

gl

Soma de quadrados

Quadrado médio

F

Α

Paralelismo

1

173,88

173,88

0,53

> 0,05

Fases × Preparações

1

41,61

41,61

0,13

> 0,05

Fases × Regressões

1

28,60

28,60

0,09

> 0,05

Erro I

44

14 545,64

330,58

Blocos

47

14 789,73

314,67

Preparações

1

183,15

183,15

3,01

> 0,05

Regressão

1

10 057,32

10 057,32

165,52

< 0,01

Fases

1

57,35

57,35

0,94

> 0,05

Fases × Paralelismo

1

0,19

0,19

0,00

> 0,05

Erro II

44

2 673,39

60,76

TOTAL

95

27 761,13

As somas de quadrados foram obtidas empregando as fórmulas das Tabelas 13 e 14.

366Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

N = 96
n = 24
b1 = 48
K = (y2

/N = 4 484,02

/96 = 209 440,17

y2

= 237 201,30

Total = 237 201,30 – 209 440,17 = 27 761

Fase × paralelismo =

=

Fase × preparações =

=

Erro I = 14 789,73 – 173,88 – 41,61 – 28,60 = 14 545,64

Erro II = 27 761,13 – 14 789,73 – 183,15 – 10 057,32 –
57,35 – 0,19 = 2 673,39

Validade do ensaio

O ensaio cumpre as condições de validade:

a) regressão signifcativa, F calculado 165,52 é maior que o
valor crítico da Tabela 5, para α = 0,01, g11 = 1 e g12 = 44;
b) paralelismo não signifcativo, F calculado 0,53 é menor
que o valor crítico da Tabela 4, para α = 0,05, g11 = 1 e gl2
= 44; e

c) nenhuma das três interações foi signifcativa — os três

valores de F calculados: 0,13, 0,09 e 0,00 foram menores
que o valor crítico da Tabela 4 para α = 0,05, g11 = 1 e gl2
= 44.

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Utilizar fórmulas 10 a 15.

I = log 120 – log 60 = 2,0792 – l,77820,301

t = 2,01 com 44 gl da Tabela 3

SA = 27,4

log SA = 1,4377

M = - 0,0406 + 1,4377 = 1,3791

Potência estimada: R = antilog 1,3971 = 24,95 UI/mL

c’ = 1 da Tabela 15

(

) ( ) (

) ( )

[

]2

2

301
,
0

1

0406
,
0

025
,1

1

025
,1

0406
,
0

025
,1

''

+

±

=

i

s

MM

M’s = 0,0064

M’i = - 0,0064

Logaritmo dos limites de confança

Ms = 0,0064+1,4377 = 1,4441
Mi = -0,0896+1,4377 = 1,3481

Limites de confança da potência

Rs = anti log 1,4441 = 27,80 UI/mL
Ri = anti log 1,3481 = 22,29 UI/mL

Exemplo 6: médias móveis

Ensaio de heparina pelo método de inibição da coagulação
de plasma ovino citratado

As doses utilizadas do padrão, em mL, foram: = p1 = 0,78;
p2 = 0,76; p3 = 0,74; p4 = 0,72; p5 = 0,70 e p6 = 0,68. Doses
equivalentes (a) da amostra foram preparadas a partir da
potência suposta SA = 140,6 UI/mg.

O ensaio foi desenvolvido conforme está descrito no
método de avaliação de heparina nesse volume.

Foram realizados três ensaios. A título de exemplo do
cálculo de M, somente se desenvolverá o ensaio No

1.

Os graus de coagulação encontram-se na Tabela 35.

Tabela 35 - Exemplo 6: graus de coagulação = y.

Tubo

Padrão P

Amostra A

p (mL)

y

A (mL)

Y

1

0,78

0,00

0,78

0,00

2

0,76

0,00

0,76

0,25

3

0,74

0,50

0,74

0,75

4

0,72

0,75

0,72

1,00

5

0,70

1,00

0,70

1,00

6

0,69

1,00

0,68

1,00

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

367

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

(

)

1731
,
2

3

/

1805
,
2

1995
,
2

1392
,
2

=

+

+

=

M

R =

0,
149

log =

M

anti

UI/mg
= (2,1392+2,1995+2,1805)/3 = 2,1731 = antilog M =
149,0 UI/mg

Calcular a variância do erro:

s2

= {14,1686 - 42,4999/3}/2

s2

= 0,001

s =

0316
,
0

001
,
0 =

n’ = 3
t = 4,3 (Tabela 3 gl =2)

Calcular o intervalo de confança:

L =

1569
,
0

7321
,
1

3,
4

0316
,
0

2

=

×

×

L/2 = 0,0784
Ms = 2,1731 + 0,0784 = 2,2515
Mi = 2,1731 - 0,0784 = 2,0947
Rs = 178,4
Ri = 124,4

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Utilizar fórmulas 27, 28 e 40 a 45.

xiP = 0,8691
yiP = 0,8572

x(i + 1) = 0,8691

y(i + 1) = 0,750

xP =

(

)

8661
,
0

750
,
0

417
,
0

8691
,
0

8572
,
0

5,
0

4171
,
0

8691
,
0

=

−−

+

xiA = 0,8807

yiA = 0,333

x(i + 1)A = 0,8691

y(i + 1)A = 0,667

xA =

(

)

8749
,
0

667
,
0

333
,
0

8807
,
0

8691

5,
0

333
,
0

8807
,
0

=

+

SA = 140,6 UI/mg

M1 = 0,8661 – 0,8749 + log 140,6 = 2,1392

Supondo que outros dois ensaios realizados com a mesma
amostra forneceram as estimativas:

M2 = 2,1995 e M3 = 2,1805, calcular M

Tabela 36 - Exemplo 6: médias emparelhadas.

Tubo

Padrão P

Amostra A

Log dose
(mL
× 10)
x
P

Médias
log dose
xi
P

Médias grau
coagulação
yi
P

log dose
(mL
× 10)
x
A

Médias
log dose
xi
A

Médias grau
coagulação
yi
A

1

0,8921

-

-

0,8921

-

-

2

0,8808

0,8807

0,167

0,8808

0,8807

0,333

3

0,8692

0,8491

0,417

0,8692

0,8691

0,667

4

0,8572

0,8572

0,750

0,8573

0,8572

0,917

5

0,8450

0,8450

0,917

0,8451

0,8450

1,000

6

-

-

-

0,8325

-

-

Exemplo 7: ensaio microbiológico com 5 doses do
padrão e uma dose da amostra (5 x 1)

Ensaio de antibiótico usando placas de Petri - Doseamento
microbiológico de Benzilpenicilina benzatina pó para
injetável.

As doses utilizadas do padrão foram:

0,15 UI/mL; 0,30 UI/mL; 0,60 UI/mL; 1,20 UI/mL; 2,40
UI/mL

Doses equivalentes da amostra foram preparadas com base
na potência suposta

SA de 600.000 UI/frasco

368Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 37 - Exemplo 7: leituras dos halos de inibição.

Diâmetro dos
halos de inibição

P1

P3

P2

P3

P4

P3

P5

P3

13,87

19,88

16,24

19,54

23,47

19,21

27,41

19,32

12,95

20,60

16,35

19,85

23,04

18,97

27,62

19,61

13,08

20,43

16,88

19,86

23,19

19,39

26,67

19,72

12,86

19,85

15,34

18,49

23,04

19,68

27,50

19,65

13,24

20,07

15,98

19,06

22,65

19,14

27,41

19,27

13,08

20,06

15,50

19,20

23,01

19,65

26,53

20,04

12,88

19,75

16,26

19,96

23,99

19,81

27,30

19,25

13,39

20,30

16,70

19,70

23,85

19,72

27,49

19,53

13,31

20,30

16,70

19,95

23,82

19,55

27,27

19,90

Média

13,184

20,138

16,217

19,512

23,340

19,458

27,244

19,588

Média de P3 (36 leituras): 19,674

Tabela 38 - Exemplo 7: leituras dos halos de inibição após correção.

Diâmetro dos
halos de inibição

P1

P2

P3

P4

P5

x1 = - 0,82391

x2 = - 0,52288

x3 = - 0,22185

x4 = 0,079181

x5 = 0,380211

13,406

16,402

19,674

23,686

27,496

12,486

16,512

19,674

23,256

27,706

12,616

17,042

19,674

23,406

26,756

12,396

15,502

19,674

23,256

27,586

12,776

16,142

19,674

22,866

27,496

12,616

15,662

19,674

23,226

26,616

12,416

16,422

19,674

24,206

27,386

12,926

16,862

19,674

24,066

27,576

12,846

16,862

19,674

24,036

27,356

(Σyi)2

13106,59

21729,12

31352,37

44945,7

60503,21

x = concentração do antibiótico em logaritmo

Totais

N = 45

Σx = -9,983205
Σ y = 896,936
Σ y2

= 19.076,73

Σ (Σyi2

)/9

= 19.070,78 Σ xy = -100,374
∑(x – x)(y – y) = 98,61069
∑(x – x)2

= 8,155715

∑(y – y)2

= 1.199,081

1)

(

2

−−

Σ

Nx

x

= 0,4305

1)

(

2

−−

Σ

Ny

y

= 5,2203

b0 = 22,61426 b1 = 12,09086

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

369

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Tabela 39 - Exemplo 7: análise de variância.

b1 = 12,09 b0 = 22,61 r = 0,997

Fonte de variação

gl

Soma de quadrados

Quadrado médio

F calc.

Regressão

1

1.192,3

1192,3

5691,5

Erro residual

43

6,80

0,2

---

Desvio de linearidade

3

0,85

0,3

3

Erro puro

40

5,95

0,1

---

Total

44

1.199,1

---

Tabela 40 - Exemplo 7: leitura das amostras.

A1

P3

A2

P3

A3

P3

19,66

19,78

19,57

18,73

18,69

18,57

19,49

19,45

18,91

19,12

19,04

18,89

19,94

19,50

19,02

19,70

19,28

19,12

19,38

19,68

19,41

19,55

19,38

19,14

19,88

19,90

19,32

19,38

19,22

19,40

19,88

19,91

19,55

19,74

19,22

19,10

19,74

19,45

19,41

19,33

20,03

19,45

19,15

19,04

19,47

19,68

19,33

19,45

19,45

19,32

19,48

19,46

19,45

19,45

Σyi2

= 31.176,96

Σyi2

= 30.986,56

Σyi2

= 30.324,74

Σyi2

= 30.516,6

Σyi2

= 30.150,85

Σyi2

= 29.780,40

Tabela 41 - Exemplo 7: diferenças nas respostas pareadas ou

( )1

/

A

P

X

y

y

b

= −

(fórmula 16).

X1

X2

X3

X4

- 0,0099256

0,0694789

0,0099256

- 0,0198511

0,0033085

- 0,0173697

0,0124069

- 0,0256410

0,0363937

- 0,0562448

0,0132341

0,0330852

- 0,0248139

- 0,0115798

0,0198511

- 0,0281224

- 0,0016543

- 0,0049628

- 0,0148883

0,0066170

- 0,0024814

- 0,0157155

0,0099256

0,0016543

0,0239868

0,0066170

0,0479735

- 0,0281224

0,0090984

- 0,0173697

- 0,0099256

0,0645161

0,0107527

0,0016543

0,0000000

- 0,0264682

Tx = 0,044665

Tx = - 0,04549

Tx = 0,088503

Tx = - 0,02233

Tx2

/9 = 0,000222

Tx2

/9 = 0,00023

Tx2

/9 = 0,00087

Tx2

/9 = 0,0000554

Σ X2

= 0,024058 Σ (Tx 2

/9) = 0,001377

t = 2,042

k’ = 9

f = 9

n = 32

s = 0,02662

½ L = 0,01812 (fórmula 20)

370Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Tabela 42 - Exemplo 7: logaritmo da razão de potência e limites de confança para as amostras A1, A2, A3 e A4.

A1

A2

A3

A4

Logaritmo da razão
de potência (log)

0,004963

- 0,00505

0,009833

- 0,00248

M’AS e M’AI

0,02308- 0,01316 0,01307 0,01564 0,01564 0,02795

0,01564 - 0,02060

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

para amostra A1:

Utilizando as fórmula 17 e 20 a 25

M’(A1) = Σ X1/9 = 0,004963

M = M’ + log 600.000 = 5,78311
R = antilog 5,78311 = 606.895,97 UI/frasco

M’as (A1) + ½ L = 0,004963 + 0,01812 = 0,02308
M’Ai (A1) - ½ L = 0,004963 - 0,01812 = -0,01316

Logaritmo dos limites de confança da potência

MAs (A1) = 0,02308 + log 600.000 = 5,80123
MAi (A1) = -0,01316 + log 600.000 = 5,76499

Limites de confança da potência

Rs = antilog 5,80123 = 632.746,9 UI/frasco
Ri = antilog 5,76499 = 582.091,5 UI/frasco

Tabela 43 - Exemplo 7: coefciente de Variação (fórmula 18).

A1

A2

A3

A4

Desvio padrão (s)

0,269

0,232

0,356

0,229

Média

19,62

19,35

19,24

19,26

Coefciente de variação (CV)

1,37

1,20

1,85

1,19

Figura 1 - Exemplo 7: Gráfco da curva de regressão

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

371

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

8.10.3 EXEMPLO DE ENSAIO
INDIRETO “TUDO OU NADA”

Exemplo 8: Ensaio dicotômico de duas doses, método

de probitos simplifcado

Ensaio de insulina pelo método de convulsão em
camundongos

As doses utilizadas do padrão foram p1 = 18 mUI/
camundongo e p2 = 30 mUI/camundongo.

Doses equivalentes da amostra (a1 = 18 mUI/camundongo
e a2 = 30 mUI/camundongo) foram preparadas com base na
potência suposta SA = 40 UI/ mL.

Os camundongos foram injetados subcutaneamente com
0,25 mL/camundongo da solução respectiva. Previamente
foram divididos ao acaso em quatro grupos, que receberam,
respectivamente,

Tabela 44 – Exemplo 8: Respostas (% de camundongos em convulsão).

Padrão P

Amostra A

p1

p2

a1

a2

Número de camundongos injetados (n)

30

28

28

24

Número de camundongos em convulsão

9

17

11

18

Porcentagem de respostas (%)

30,0

60,7

39,3

75,0

Validade do ensaio

O ensaio cumpre as condições de validade:

a) regressão signifcativa, F calculado 12,15 é maior que

o valor crítico da Tabela 5, para p = 0,01, gl1 = 1 e gl2 =

infnito; e

b) desvio de paralelismo não signifcativo, F calculado

0,09 é menor que o valor crítico da Tabela 4, para p = 0,05;
gl1 = 1 e gl2 = infnito.

Tabela 45 Exemplo 8: Transformação em probitos, totais e contrastes.

Padrão P

Amostra A

p1

p2

a1

a2

Probito (Tabela 16)

P1 = 4,48

P2 = 5,27

A1 = 4,73

A2 = 5,67

Ponderação w (Tabela 17)

0,576

0,619

0,540

0,540

Preparação

P = 9,75

A = 10,4

y = 20,15

Contraste linear

LP = 0,79

LA = 0,94

L = 1,73

Resultados obtidos com as fórmulas da Tabela 8.

Tabela 46 Exemplo 8: Análise da variância.

Fonte de variação

gl

Soma de
quadrados

Quadrado médio

F

p

Preparação

1

0,1056

0,1056

1,71

> 0,05

Regressão

1

0,7482

0,7482

12,15

< 0,01

Paralelismo

1

0,0056

0,0056

0,09

> 0,05

Erro

Infnito

s2

= 0,0616

As somas de quadrados foram obtidas empregando-se as fórmulas da Tabela 10, tomando n = 1.

372Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

8

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

Cálculo da estimativa de potência e limites de confança

Utilizar fórmulas 10 a 15.

I = log 30 – log l8 = 1,4771 - l,2553 = 0,2219

t = 1,96 com gl = infnito e p = 0,05 (da Tabela 3)

SA = 40,0

log SA = 1,6021

M = 0,0839 + 1,6021 = 1,6860

RA = anti log 1,6860 = 48,53 UI/ mL = Potência estimada

c’ = 1 (da Tabela 15)

( ) ( )

[

]

2

2

2219
,
0

0839
,
0

425
,
1

4625
,
0

0839
,
0

4625
,
1

''

+

±

×

=

i

s

MM

1658
,
0

1227
,
0

''

±

=

i

s

MM

M’s = 0,2885

M’i = - 0,0431

Logaritmo dos limites de confança

Ms = 0,2885 + 1,6021 = 1,8906
Mi = 0,0431 + 1,6021 = 1,5590

Limites de confança da potência

Rs = 77,73 UI/mL
Ri = 36,22 UI/ mL

Usando o método completo de análise de probitos, obteve-
se uma estimativa de potência de 48,48 com limites de 35,9
e 75,92 UI/ mL.

8.10.4 EXEMPLO DE
COMBINAÇÃO DE
ESTIMATIVAS DE POTÊNCIA

Exemplo 9: Combinação de estimativas de potência

Combinação de ensaios de corticotrofna pelo método
de depleção de ácido ascórbico supra-renal em ratas

hipofsectomizadas

Três ensaios independentes da mesma amostra foram
realizados conforme procedimento descrito em Combinação
de Estimativas de Potência
(8.8). Os resultados dos ensaios
encontram-se na Tabela 47.

Tabela 47 Exemplo 9: Dados para combinação de potências.

Ensaio 1

Ensaio 2

Ensaio 3

M

1,24797

1,25164

1,42193

L

0,29097

0,90082

0,11555

t2

4,1209

4,1209

4,2025

gl

34

33

27

Cálculo da potência média ponderada

13966

0148
,
14746174

,
2058

WW

=

=

=M

M

R = anti log 1,3966 = 24,9

Teste de homogeneidade dos log das estimativas de
potência.

( )

=

=

5,
5

W

2

2

M

M

M

c

(Tabela 18) = 5,9

Como c2

calculado é menor que o valor crítico, não se tem
elementos para suspeitar de heterogeneidade.

Cálculo dos limites de confança

0260
,
0

0198
,
1474

/

1

W

/

1

=

=

=

M

s

Ms = 1,4226

Mi = 1,3700

Rs = 26,5

Ri = 23,5

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

373

Farmacopeia Brasileira, 5ª edição

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