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22‐09‐2010

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Introdução à Unidade Curricular 
ç
de Imunologia

Aulas Prático‐Laboratoriais

Programa Aulas Práticas

Prática laboratorial 1: Introdução às técnicas de Imunologia

Prática laboratorial 2: Isolamento de células do sangue: leucócitos

Prática laboratorial 3: Isolamento de células do sangue: células mononucleares

Prática laboratorial 4: Citometria de fluxo (I): análise de características morfológicas

Prática laboratorial 5: Citometria de fluxo (II): análise de características fenotípicas

Prática laboratorial 6: Imunofluorescência (I): detecção de auto‐anticorpos ‐ marcação

Prática laboratorial 7: Imunofluorescência (II): detecção de auto‐antigénios ‐ observação

ISCSN, CESPU 1
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Técnicas de Imunologia:
Isolamento de células do sistema imunológico do sangue:
‐ Leucócitos Totais

lise de
eritrócitos

Leucócitos totais do sangue

1.1. Neutrófilos

1.2. Basófilos
1. Granulócitos ou
Células Polimorfonucleares 1.3. Eosinófilos

1 4 Mastócitos
1.4.

2. Células Mononucleares

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Técnicas de Imunologia:
Isolamento de células do sistema imunológico do sangue:
‐ Células Mononucleares

Antes ----- Centrifugação ----- Depois

Plasm a +
Sangue diluído Plaquetas

20m in. @ 2200 × rpm Células


m ononucleares

Lym phoprep +
m istura de células
Lym phoprep
Granulócitos

Glóbulos verm elhos

Figura 1. Separação de células m ononucleares do


sangue periférico em gradientes de densidade

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Células monocucleares do sangue

1. Monócitos

2.1. Linfócitos B

2.2. Linfócitos T
2. Linfócitos
2 3 Linfócitos NK
2.3.

2.4. Linfócitos NKT

Técnicas de Imunologia:
Contagem de leucócitos
Concentração celular (nº células/mL) = Nº de células no quadrado do meio x Diluição x 104
Câmara de Newbauer
Neubauer

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Técnicas de Imunologia:
Citometria de fluxo e Imunofluorescência

MARCAÇÃO DIRECTA MARCAÇÃO INDIRECTA

Citometria de fluxo e Imunofluorescência: a interacção Ag‐Ac

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CITOMETRIA DE FLUXO

CITOMETRIA DE FLUXO

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CITOMETRIA DE FLUXO

Células
Leucócitos
ó Totais l
Mononucleares

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IMUNOFLUORESCÊNCIA

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IMUNOFLUORESCÊNCIA

Oral epithelial cells monolayer, Overlay Fluorescence


- Red: ferritin antibody staining
- Blue: nucleus (DAPI)
- Green: DIC
-Objective HCX PL APO 63x (1.4 - 0.6) OIL
Leica DM5500 B and Leica DFC350 FX
Taken by Ricardo Almeida, Hans-Knöll-Institute, Germany
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