Ehrlichiosis y Anaplasmosis

canina

Roberto Mujica, M.V. Esp.

Enero, 2011
“… bla, bla, bla, bla, bla,
llueve sobre mojado…”

Fito Páez y Joaquín Sabina

Cantautores y filósofos
 Son enfermedades febriles,
infecciosas, no contagiosas,
inmunosupresoras, anemizantes y
con tendencias hemorrágicas,
causadas por microorganismos
de la familia Anaplasmataceae:
Ehrlichia sp. y Anaplasma sp.
 Taxonomía molecular
Reino: Bacteria
Phylum: Proteobacteria
Clase: Alphaproteobacteria
Orden: Rickettsiales
Familia: Anaplasmataceae
Género: Ehrlichia, Anaplasma, Neoricketsia,
Wolbachia
Tamaño del ADN: 1315030 bp
Número de genes: 984 conocidos

Ulrich LE, Zhulin IB, 2010

 ARBOL FILOGENETICO
FAMILIA Anaplasmataceae

(Laboratory of Molecular, Cellular and Environmental Rickettsiology, OSU. 2010)

 Familia Anaplasmataceae:
Ehrlichia sp., Anaplasma sp.
Son pequeñas bacterias en forma de
cocos, pleomórficas, gram (-),
intracelulares obligadas
Se replican dentro de vacuolas
rodeadas de membrana, vacuola
parasitófora, dentro del citoplasma
de un tipo especifico de células
hospedadoras, granulocitos,
mononucleares y/o plaquetas,
formando racimos llamados Mórulas
Son transmitidas por vectores,
garrapatas o tremátodos, donde se
replican y pasan a animales y
humanos
Lab. Of Molecular, Cellular and Environmental Rickettsioly, O.S.U. 2010
 Infección en caninos
Mononucleares: E. canis, E. chaffeensis, N. risticii y N. helminthoeca
Granulocitos: E. ewingii y A. phagocytophilum. Tambien E. canis
(Arraga C.M., 2006)

Plaquetas: A. platys. También se sospecha de E. canis

Sangre de perros en Sudáfrica: nuevo genotipo de Ehrlichia estrechamente
relacionado a E. ruminantum, por PCR, pero las mórulas no han sido vistas
(Harvey J. W., 2005)

Son frecuentes las coinfecciones con estas especies de bacterias, y con Babesia
canis, Mycoplasma haemocanis (Hemobartonella), Hepatozoon canis y con
bacterias, parásitos, hongos o virus oportunistas (criptococosis, criptosporidiosis,
Distemper canino)

Ojo con Bartonella vinsonii ssp. Berkhoffii , parece una ehrlichiosis complicada
con problemas cardíacos

RECORDAR QUE LA EHRLICHIOSIS

ES UN SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA
 Infección en humanos en
Venezuela
E. canis por PCR en humanos asintomáticos
(Pérez M., Rikihisa Y., Wen H., 1996)

E. canis, comparación molecular y antigénica de

muestras provenientes de garrapatas, perros y un humano
asintomático
(Unver, A., M. Perez, N..Orellana, H. Huang, and Y. Rikihisa. 2001)

E. canis por PCR en 6/20 (30%) humanos sintomáticos a

HME. La secuencia del gen 16S rRNA determinó que es
la misma cepa: E. canis Ehrlichia Humana Venezolana
(Perez M., Bodor M., Zhang C., Xionq Q., Rikihisa Y. 2006)

Un microorganismo parecido a A. platys en plaquetas de

humanos con síntomas (por ME, en Maracaibo)
(Arraga C.M., Palmar M., Parra O., Salas P.1999)
 Trabajos publicados por
Lic. Miriam Pérez, M.Sc.,
Profesora jubilada del DCV-UCLA
E. canis por PCR en humanos asintomáticos
(Pérez M., Rikihisa Y., Wen H., 1996)
Primer reporte de Ehrlichia canis en humanos, en Suramérica. El ADN de la cepa
aislada fue secuenciada, se determinó estrecha relación con E. canis var.
Oklahoma. Se sugiere que es una nueva cepa capaz de producir afección
asintómatica en humanos. Se registra como Ehrlichia Humana Venezolana HVE

E. canis, comparación molecular y antigénica de muestras provenientes

de garrapatas, perros y un humano asintomático
(Unver, A., M. Perez, N..Orellana, H. Huang, and Y. Rikihisa. 2001)
Caracterizaron por secuenciación del gen 16S rRNA (1408 pares de bases) la cepa
aislada de caninos y garrapatas, llamándola Ehrlichia Canina Venezolana. La
compararon con la HVE aislada en 1996 y fue idéntica (100% similar) y con la
Ehrlichia canis var. Oklahoma evidenciando su estrecha relación (99,9% similar)

Infección humana con Ehrlichia canis acompañados por signos clínicos en

Venezuela
(Perez M., Bodor M., Zhang C., Xionq Q., Rikihisa Y. 2006 )
E. canis por PCR en 6/20 (30%) humanos sintomáticos a HME. La secuencia del gen
16S rRNA determinó que es la misma cepa: E. canis Ehrlichia Humana Venezolana
 Ehrlichiosis en felinos
Reporte de un gato con poliartritis y aplasia medular, positivo a E. canis por
PCR. Anteriormente habían reportado gatos + por serología y observación de
mórulas en el frotis.
(Breitschwerdt, E. et al. 2002)

Reporte de un gato con infección por A. phagocytophilum en Finlandia.

Síntomas: fiebre, depresión, anorexia, pérdida de peso, secreción ocular y nasal.
Diagnóstico por PCR
(Heikkika H. et al. 2010)

Reporte de un caso de un gato con A. platys en Brasil. Síntomas: anuria, disuria,

estreñimiento, TBCpenia leve. Diagnóstico por PCR.
(Lima F. et al. 2010)

Actualmente, una caso por frotis en Laboratorio Clínico DCV-UCLA (sangre

congelada para hacer PCR. Chavier H., Cortez A., Rodríguez V.)
 TRANSMISION:
Rhipicephalus sanguineus
E. canis, E.ewingii(?),A.platys (?)
Ampliamente difundida a nivel mundial
Transmisión transestadial
Período infectante: 155 dias
NO hospedador intermediario
– Transfusiones de sangre pueden transmitirla
Tambien es vector de:
– Babesia canis, Hepatozoon canis, Bartonella
vinsonii
Ciclo de vida
 Incidencia en una
zona endémica en Venezuela

33% de perros del CEC + a E. canis por PCR

100% de garrapatas R. sanguineus + a E. canis
por PCR
(Unver A., Pérez M., Orellana N., Huang H., Rikihisa Y., 2001)

31% de perros del CEC + a E. canis por PCR

(Huang H, Unver A., Pérez M., Orellana N., Rikihisa Y., 2005)
Incidencia en una zona endémica
en Venezuela:
16% de perros del CEC + a A. platys por PCR
Todos asintomáticos
100% garrapatas R. sanguineus - a A. platys por PCR
Incidencia en otras partes del mundo:
– 33% de perros en una perrera en Carolina del Norte , E.E.U.U.,
+ a A. platys por PCR
– 32% de perros en una perrera Okinawa, Japón, + a A. platys
por PCR
– 5% de los perros asintomáticos y 35% de los TBCpénicos + a A.
platys por IFA en Florida, E.E.U.U.
– 50% + a A. platys por IFA en Louisiana, E.E.U.U.

(Huang H, Unver A., Pérez M., Orellana N., Rikihisa Y., 2005)
 Patogenia
Período de incubación: 7 a 21
días posterior a la picadura de
una garrapata infectada

Fase aguda: Síndrome Febril

Ehrlichia canis se replican en

células fagócíticas mononucleares
en bazo, hígado, nódulos
linfáticos para después
diseminarse.
Afectan endotelio vascular:
vasculitis

Fase subclínica: con o sin

tratamiento
Fase crónica
(Harrus S., et al, 1999; Rikihisa Y., 1999).
 Fase Aguda:
Anemia no
Fiebre regenerativa leve a
Depresión moderada
Anorexia
Linfoadenomegalia Leucopenia /
Secreción ocular o nasal neutropenia
Pérdida de peso leve Trombocitopenia
Tiempos de coagulación Hiperglobulinemia
Vasculitis Hipoalbuminemia

(Harrus S., et al, 1999;

Rikihisa Y., 1999;
Harvey J. W., 2005).
Subclínico
Meses o años

Crónico
Trombocitopenia y
leucopenia severas
Hipoplasia o Aplasia
medular
Hemorragias
Signos de SNC
Signos oculares
Síndrome de
inmunodeficiencia:
Infecciones secundarias
Muerte por
complicaciones
 Diagnóstico
Ejemplares con signos clínicos de la enfermedad y
contacto con garrapatas, 7 a 21 días antes
Una combinación de signos clínicos, anormalidades
hematológicas, y hallazgos de laboratorio
(Mark Neer T., 2002).
Anormalidades hematológicas mas comunes
– anemia no regenerativa (82%)
– trombocitopenia (82%)
– leucopenia (32%)
– pancitopenia (18%)
producida por hipoplasia de células precursoras en la médula ósea,
ocurre en fase crónica grave y con mayor frecuencia en perros de la
raza Pastor Alemán
(Mark Neer T., 2002).
 Diagnóstico
– Visualización de la mórula de la E. canis dentro de las células
afectadas

– Pruebas serológicas: detección de anticuerpos séricos

específicos
Inmunofluorescencia indirecta IFI
Elisa: Snap 4X ® (Laboratorios IDEXX, Maine, U.S.A)
(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001,
Mark Neer T., 2002).

– Técnicas de biología molecular

Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la amplificación
del ADN de la E. canis
Secuenciación del ADN obtenido por PCR
PCR en tiempo real (RT – PCR)
Western Inmuno blott
(Couto G., 2002; Harvey J. W, 2005; Arraga C. M., 2006)
Visualización de la mórula dentro
de las células afectadas
Frotis sanguíneo
Frotis de capa blanca
Frotis por aposición de Pulmón, Hígado, Bazo,
Médula ósea
Limitantes:
– método poco sensible, depende de la existencia de
leucocitos infectados en la muestra de examinada, nivel de
parasitemia, fase de la enfermedad
– habilidad técnica para identificar al microorganismo
(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001,
Bulla C., et al, 2004).
Pruebas Serológicas

Inmunofluorescencia Indirecta
Test de ELISA: Snap 4X de IDEXX

E. canis IFA/Western Blot

Limitantes de pruebas serológicas
La seroconversión al antígeno apropiado es
retrospectivo
Puede haber reacción cruzada dentro de
individuos del mismo género (E. canis con E.
chaffeensis y E. ewingii)
En áreas endémicas da positivos a
trombocitopénicos por otras causas (síndrome
paraneoplásico, TBCpenia inmunomediada)

(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001,

Mark Neer T., 2002).
Ténicas de biología molecular
Ventajas:
– Alta sensibilidad y especificidad
– Posibilidad de detectar variaciones mínimas en
la secuencia de bases del ADN (variaciones
entre cepas)
Desventajas:
– Altos costos y técnicas delicadas
Reacción en cadena de polimerasa (PCR)

– Mecanismo de replicación “in vitro” de ADN,

dirigido por la enzima ADN-polimerasa
– Mimetización de la Replicación del ADN
Extracción de ADN
Amplificación del gen 16s rRNA de E. canis
Electroforesis en gel de agarosa
 RT PCR

PCR en tiempo real (RT PCR):

– Proceso de amplificación y detección se producen de
manera simultanea en un mismo tubo vial cerrado
– Por fluorescencia se puede medir durante la
amplificación la cantidad de DNA sintetizado por PCR.
 Tratamiento Curativo:
Tetraciclinas: Recuperación rápida, 24 horas
– Doxiciclina: 10 mgs/kg/día V.O. SID o dividida en dos
tomas/dia x 14 dias (consenso internacional)
– Oxitetraciclina: 22 mgs/kg V.O., V.I.V. (L.A.?) TID c/ 8
horas por 14 a 21 días
(Mark Neer T., 2002; Couto G., et al, 2002).
Dipropionato de Imidocarb:
– 5 mgs/kg IM , dos dosis, intervalo de 14 días entre ambas
– Recuperación lenta de anormalidades de laboratorio
– Efectos colaterales indeseados: Parasimpáticomiméticos
Otros:
– Rifampicina
– Cloramfenicol
– Enrofloxacina
(Mark Neer T., 2002; Couto G., et al, 2002;
Harvey J.W.; Arrraga C.M., 2006).
 Tratamiento Preventivo:

Control del vector

Oxitetraciclina: 6 – 10 mg/kg SID por 14 a 21 días
(Mark Neer T., 2002; Couto G., et al, 2002).

Inducción de RI protectora:
– Inoculación de cepas subtratadas
– Reinoculación inmediatamente después de tratamiento
completo
(Pérez M. y Mujica R., 1995; Harrus S., et al, 1997;
Harrus S., et al, 1998; Harrus S., et al, 1999)

Doxiciclina: 100 mgs./ ejemplar durante su permanencia en

zonas endémicas de la enfermedad
(Davousta B., et al. 2005)
 Tratamiento Preventivo:
Inmunoterapia:
– Pasiva: Administrar células u
otros componentes de la RI
– Activa: estimular al SI a
responder más eficientemente
al antígeno:
LPS´s + componentes de pared
celular bacteriana
Acemannan
(Pérez M. y Mujica R., 1995; Harrus S., et al, 1997;
Harrus S., et al, 1998; Harrus S., et al, 1999;
Mujica R., et al , 2005)
 Vacunas anti E. canis:

Vacuna atenuada contra la ehrlichiosis

– Registrada en 2010
– Autores: Simon Harrus, Gad Baneth
– Agente: Fennemore Craig
– Resultados: Atenuación de síntomas, falló para
reducir TBCpenia, permitió la eliminación
espontánea de la bacteria (negatividad por PCR , 4
meses post inoculación experimental)
Otra registrada en 2005 y patentada por
Wyeth®
– Mejores resultados en el reporte de la patente
– Se desconoce su situación actual
 Consideraciones Generales sobre la Ehrlichiosis
canina y humana y sobre otras infecciones emergentes
Diversas especies de mamíferos pueden ser atacadas por
varias especies de la flia. Anaplasmateceae individualmente o
en forma conjunta
Veterinarios están aportando información médica comparativa
sobre Ehrlichiosis y Anaplasmosis y discuten sus riesgos
zoonóticos
Esfuerzos de las farmacéuticas para desarrollar nuevos
garrapaticidas para el control del vector
Desarrollo de nuevas técnicas diagnósticas
Bartonelosis canina y humana: Enfermedades infecciosas
emergentes
Enfermedad del “arañazo” felino (Cat Scratch disease):
Bartonelosis felina
Dr. Edward Breitschwert
LAVC, Lima, Perú, Octubre 2009
Implicaciones Zoonóticas de la Ehrlichiosis
Ehrlichia canis, E. chaffeensis y E. ewingii han sido
aisladas de pacientes humanos induciendo síntomas
clínicos
Anaplasma phagocytophilium ha sido aislada de
humanos (transmitida por Ixodes)
El rol del perro como reservorio no esta claro. Se cree
que es menor. Los principales reservorios pueden ser
venados, roedores y otros pequeños mamíferos.
E. chaffeensis ha sido detectada en perros por PCR,
en una perrera en el sureste de Virginia, E.E.U.U.

Dr. Edward Breitschwert

LAVC, Lima, Perú, Octubre 2009
Preguntas?

Gracias….
 Bibliografia
The MiST2 database: a comprehensive genomics resource on
microbial signal transduction. Ulrich LE, Zhulin IB. Nucleic Acids
Res. 2010
Validation of chemoprevention of canine monocytic ehrlichiosis with
doxycycline B. Davousta, A. Keundjianb, V Rousc, Laurent Maurizid,
D. Parzya.Vet. Microbiolgy. 2005.
Molecular evidence supporting Ehrlichia canis-like infection in cats.
Breitschwerdt, E. Et al. J. Vet. Intern. Med. Nov. 2002
Anaplasma phagocytophilum infection in a domestic cat in Finland:
Case report . Heikkilä H., Bondarenko A., Mihalkov A., Pfister K.,
Spillmann T. Acta Vet Scand. 2010.
Detección molecular de Anaplasma platys en un gato infectado de
forma natural en Brasil. Lima, F, Soares, PT., Ramos, C., Araújo,
F. ; Ramos F.; Souza, IF II ; Faustino, M., Alves, L. Braz. J.
Microbiol. 2010