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COLORAÇÕES

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COLORAÇÕES: Coloração de Gram: 1.preparar o esfregaço; 2.fixar rapidamente no Bico de Bunsen; 3.cobrir com cristal violeta (1min.); 4.

colocar lugol (1 min.); 5.descorar com álcool-cetona; 6.cobrir com safranina ou fucsina (30 seg.); 7. lavar; 8. secar; 9. examinar ao microscópio em objetiva de imersão; 10. resultado: bactérias Gram +: roxo escuro bactérias Gram -: avermelhadas (rosadas). Wirtz-Conklin Coloração de Esporos Algumas bactérias são capazes de formar células de repouso muito resistentes, denominadas esporos ou endosporos. A formação de esporos é pouco comum entre bactérias patogênicas, ocorrendo principalmente nas espécies saprófitas do Gênero Bacillus, o qual apresenta uma espécie patogênica, o B. inthracis. O gênero Clostridium, bacilos Gram-positivos anaeróbios, também formam esporos. Os esporos consistem em um cerne central denso, um córtex fibrilar e uma capa externa. Numa cultura em que há bacilos esporulados e outros ainda nãio portadores de esporos, dá-se a estes últimos o nome de formas vegetativas, ao passo que os esporos correspondem às formas de repouso ou resistência. Quando os esporos são colocados em meio nutritivo conveniente, germinam retornando à forma vegetativa. O mecanismo de formação do esporo pode ser resumido em: a. condensação do cromossomo bacteriano no lugar correspondente ao pré-esporo; b. formação de um septo transversal que isola o pré-esporo do corpo bacteriano; c. crescimento da parede transversal em torno do pré-esporo e formação de uma membrana própria; d. maturação do pré-esporo com a elaboração de uma capa lipoprotéica (exósporo); e. liberação do esporo. Os esporos são muito letais aos efeitos do calor, dessecamento, congelamento, substâncias químicas tóxicas (anti-sépticos e desinfetantes) e radiações, do que as formas vegetativas. Material necessário: - duas lâminas para microscopia; - suporte para lâminas; - corante verde-malaquita; - corante safranina; - cultura de bactérias esporuladas( B. subtilis); - Bactéria para coloração de Gram; - lápis para vidro; - microscópio, óleo de imersão, papel absorvente. Procedimentos: a. fazer um esfregaço da cultura bacteriana, fixar e corar pelo Gram. b. fazer um esfregaço da cultura bacteriana, fixar e corar pelo Wirtz-Conklin, conforme segue: - corar por 5 min. com solução de verde malaquita a quente; - deixar esfriar e lavar em água;

. Técnica: a. Bactérias Gram + : roxo . Coloração de Bactérias Álcool-Ácido. deixar secar e observar em imersão.esfregaço preparado de material de escarro de paciente tuberculoso já fixado. com safranina a frio. com solução violeta genciana . . corar o fundo durante 30n seg. durante 5 min. Nas micobactérias coradas pelo método de Ziehl-Neelsen.lavar e secar . observar em imersão. dentro da placa de Petri.corar por 1 a 2 min. lavar em água corrente. c.suporte para lâminas. aquecendo a lâmina até a emissão de vapores. Resultado: esporos coram-se em verde. Correr exaustivamente o campo até encontrar bacilos corados em vermelho. b. . 6 .lavar em água corrente .corar com 1 min.e núcleos : vermelho .. O mecanismo da coloração de Ziehl-Neelsen parece estar relacionado com a estrutura e composição da parede celular das micobactérias. Material necessário: . escorrer o corante e diferenciar com álcool-ácido (álcool a 95% e ácido clorídrico a 1%). f. óleo de imersão. de colorações especiais. d.. ricas em lipídeos (ácido micólico). Não deixar ferver nem secar. ocorrendo precipitação da fucsina. corar com fusina de Ziehl concentrada. MÉTODO DE GRAM : composição química e integridade da parede celular 1 . o corante (fucsina) fica numa fase imiscível na água.bateria para coloração de Ziehl fucsina de Ziehl álcool-ácido azul de metileno . bactérias Gram .diferenciar com álcool ( tempo delicado . A parede celular destas bactérias permite coloração pela fucsina apenas quando a temperatura é elevada (coloração a quente). com solução de lugol . papel absorvente. com solução aquosa diluída em azul de metileno. necessitanto. 4 . MÉTODO DE WIRTZ .15 segundos ) . 3 .corar o fundo rapidamente com fucsina diluída ( fucsina de Gram ) . . aproximadamente 15 seg. formas vegetativas em vermelho.escorrer o corante e cobrir por 1 min.grampo para lâminas. 5 . Tempo delicado.CONKLIN : evidenciação de esporos 1 .esfregaço fixado pelo calor . . 7 .lavar em água corrente . contrastando com outros microorganismos e núcleos celulares em azul. portanto.lavar em água.Resistentes: Ziehl-Neelsen Mecanismo de coloração para ácido-resistentes: As micobactérias dificilmente adquirem colorações convencionais (Gram). tornando as células coradas resistentes a descoloração pelo álcool-ácido. e. 2 . lavar e secar. para a qual a parede celular é relativamente impermeável à temperatura ambiente.microscópio.

DE GRAM Corantes utilizados para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas (coloração de gram) . 2 . durante 3 a 6 minutos . 3 .NIELSEN : coloração de bacilos ácido . Corpos bacterianos : verde claro . seco ao ar . 2 .corar com fucsina de Ziehl concentrada . 5 . aquecendo até emissão de vapores . Bacilos ácido .resistentes : vermelho . SOLUÇÃO DESCORANTE P/GRAM corante utilizado para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas . por 5 min. com solução aquosa de verde de malaquita a 0. com solução aquosa safranina a 0.lavar cuidadosamente em água corrente . Esporos : verde .filtro e secar sem passar na chama .lavar . 3 .corar o fundo rapidamente com solução diluída de azul de metileno . corpos bacterianos e detritos : vermelho .2 .lavar rapidamente com água corrente . sem lavar . 5 . enxugar com papel . MÉTODO DE ALBERT . violeta de genciana e fucsina fenicada.lavar em água corrente . flagelos : marrom escuro .coloração de gram.contracorar 1 a 2 min. 5 . cobrir com lugol forte por 1 minuto . granulações : violáceas .lavar com água corrente e depois com água destilada .composto de álcool acetona. 3 . 3 .escorrer e diferenciar com álcool clorídrico a 1 % ( tempo delicado ) .TRIBONDEAU : evidenciação de flagelos 1 .5 % . MÉTODO DE ZIEHL . aquecendo a lâmina até emissão de vapores .corar a quente . Célula : marrom claro . 6 . .LAYBORN : evidenciação de grânulos de polifosfato metacromáticos 1 .resistentes 1 . 4 .corar por 3 a 5 minutos com corante de Layborn ( azul de toluidina + verde malaquita ) . outras bactérias e núcleos : azul . MÉTODO DE FONTANA .mordençar com solução B . .cobrir com solução de prata e aquecer até emissão de vapores durante meio minuto .esfregaço .esfregaço fino .lavar e secar . 5 .lavar e secar . 2 .cobrir o esfregaço com líquido de Ruge . COL.escorrer e . renovar o fixador ( para lavar a hemoglobina dissolvida ) e deixar por 1 minuto. 4 . 4 . 7 .5 % .lavar e secar ao ar . lugol fraco.fixar na chama três vezes . 4 .

onde cora o núcleo da célula e destaca a cromatina).FUCSINA FENICADA (GRAM) Corante utilizado para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas (coloração de gram).Aq) Corante destinado a histologia. E A 36 Corante utilizado para histologia (coloração de papanicolaou. SAFRANINA Corante destinado a coloração de gram. CRISTAL VIOLETA (GRAM) Corante utilizado para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas (coloração de gram). LUGOL FRACO Corante utilizado para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas (coloração de gram). composto dos seguintes corantes: hematoxilina de harris. . CONJUNTO DE COLORAÇÃO DE PAPANICOLAU Conjunto de corantes utilizados para histologia (coloração de papanicolau). VIOLETA GENCIANA P/GRAM Corante utilizado para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas (coloração de gram). AZUL DE METILENO(1%Sol. onde cora os citoplasmas acidófilos e basófilos). AZUL DE TOLUIDINA 1% Corante destinado a histologia. ea 36 e orange g-6. onde cora os citoplasmas na presença de queratina). ORANGE G-6 Corante utilizado para histologia (coloração de papanicolaou. HEMATOXILINA DE HARRIS corante utilizado para histologia (coloração de papanicolaou.

CORANTE DE LAYBOURN Corante destinado a pesquisa de bacilo diftérico na coloração de Albert Laybourn.r.CORANTE DE MAY GRUNWALD Corante destinado a hematologia.COL.r. que se coraram com a fucsina. 3. foi corado pela fucsina ácida a quente e diferenciado com álcool acidulado (técnica de Ziehl-Nielsen). fucsina fenicada e axul de metileno loefler.composto de álcool ácido. Este corte de pele.FONTANA TRIBOND.coloração de ziehl neelsen .a.1%P/IMUN. PONCEAU S Para coloracão na técnica de eletroforese. Os bacilos. Hanseníase virchowiana da pele. AZUL DE CRESIL BRILHANTE Corante destinado a contagem de reticulócitos. (bacilo álcool-ácido resistente). na coloração de Ziehl-Nielsen. CONJ. CORANTE DE WRIGHT Corante destinado a hematologia. FUCSINA FENICADA (GRAM) Corante utilizado para pesquisa de bactérias gram positivas e gram negativas (coloração de gram). AZUL DE METILENO LOEFFLER Corante destinado a pesquisa de barr (bacilo álcool-ácido resistente . não são descorados pelo álcool acidulado e aparecem claramente em .ZIEHL-NELSEEN Corantes destinados a pesquisa de b.coloração de ziehl neelsen). LUGOL FORTE Corante destinado a parasitologia.COL. Para uso no preparo das diluiçoes nas técnicas de imunofluorescência indireta. de um caso semelhante ao da lâmina A. AZUL DE EVANS 0. Corantes para coloração de espiroquetas pela impregnação com a prata. CONJ.

May Grunwald Corante utilizado em Hematologia anterior ao Giemsa para contagem diferencial da série branca e observação da morfologia dos eritrócitos. Líquido de Hayem Líquido utilizado para diluição e contagem de eritrócitos.usado em coloração citológica humana. Azul de Cresil Brilhante Corante utilizado na coloração de Reticulócitos. GIEMSA Corante utilizado em hematologia posterior ao May Grunwald para contagem diferencial da série branca. Álcool Acetona Utilizado como descorante para a coloração de Gram. por exemplo. Os bacilos de Hansen são vistos isoladamente ou em aglomerados chamados globias no citoplasma dos macrófagos (células de Virchow). não sendo observada. Hematoxilina de Harris e Orange G. Rees e Ecker Líquido utilizado para diluição e contagem de plaquetas.vermelho (daí o termo bacilos álcool-ácido resistentes ou BAAR). Observação da morfologia dos eritrócitos.Conjunto de Coloração Composto pelos corantes EA36. A formação de globias é exclusiva da hanseníase virchowiana. . Orange G Corante utilizado na coloração de Papanicolau. os bacilos estão unidos entre si por uma substância chamada gléia. Papanicolau . Líquido de Tuerck Líquido utilizado para diluição e contagem de leucócitos. Nas globias. Álcool Ácido (descorante para BAAR) Descorante para a coloração de Ziehl-Neelsen. O restante do tecido fica corado em azul pálido por azul de metileno. na tuberculose ou em micobacterioses atípicas.

Ziehl-Neelsen Conjunto de coloração destinado à pesquisa de bacilos álcool-ácido-resistente (BAAR). Azul de Metileno de Loeffler Corante utilizado na coloração de Albert Laybourn. Estes coram-se de vermelho e os demais elementos celulares e bactérias em azul. destinado à pesquisa de bactérias com granulações metacromáticas. Fucsina Fenicada (Gram) Corante destinado na coloração de Gram para corar os microorganismos Gram negativos. células e leucócitos. Cristal Violeta Corante destinado na coloração de Gram para corar os microrganismos Gram positivos. destinado a reforçar a ação do corante. . Similar ao Cristal Violeta. Azul de Metileno Concentrado Corante utilizado na coloração de Ziehl-Neelsen.Azul de Gabbet Corante destinado à coloração de Mycobacterium lepral na pesquisa de Hanseníase. Diagnóstico presuntivo de Corynebacterium diphteriae. Lugol Fraco Lugol utilizado na coloração de Gram com função de mordente. Violeta de Genciana para Gram Corante utilizado na coloração de Gram. destinado à pesquisa de Mycobacterium leprae. para coloração de Ziehl-Gabbet destinado à pesquisa de Mycobacterium leprae. Fucsina de Ziehl-Gabbet Corante utilizado juntamente com o azul de Gabbet. Ziehl-Gabbet Conjunto de coloração à frio.

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