UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHÃO

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE

DEPARTAMENTO DE FARMÁCIA
CURSO DE FARMÁCIA
DISCIPLINA: TOXICOLOGIA CLÍNICA II
Profª. Dra. Camila Guimarães

Elton Santos Sousa

DETERMINAÇÃO ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CARXIHEMOGLOBINA

São Luis-MA

2010
 Introdução:

O chumbo é um elemento especialmente importante em saúde

ocupacional, devido a sua ampla utilização em processos industriais e
sua toxicidade aguda e crônica. Por ser altamente resistente a
corrosão atmosférica e à ação de ácidos, especialmente o sulfúrico,
este metal é muito utilizado em construções, na fabricação de baterias
chumbo-ácidas, na fabricação de produtos químicos, tubos, conexões
e como envoltório de cabos telefônicos e outros.

A toxicidade do chumbo se manifesta principalmente em quatro

sistemas: gastrointestinal, renal, nervoso e hematopoiético, sendo
este último de grande importância no monitoramento biológico à
exposição a este metal. O principal efeito do chumbo neste sistema é
a redução dos níveis do grupo prostético heme, causado pela inibição
de algumas enzimas utilizadas na síntese da hemoglobina, devido a
ligação do metal à enzima ácido -aminolevulínico desidratase (ALA-
D), causando o acúmulo do ácido delta aminolevulínico (ALA) no
sangue e na urina (Alessio & Foá, 1983; ATSDR, 1990; Landrigan,
1989; Paolielo et al., 1993). Deste modo, a determinação da
concentração do ácido  -aminolevulínico urinário (ALA-U) tem sido
proposta para o monitoramento da exposição ocupacional ao chumbo,
paralelamente aos níveis do metal no sangue (Pb-S).

O chumbo elementar é um metal de aparência acinzentada, classificado no

grupo IV-B da tabela periódica,cujo o principal minério é a galena (pbS).A via
respiratória é tida como a de maior importância na exposição ocupacional ao
chumbo inorgânico.A meia-vida do chumbo no sangue e nos tecidos moles é
similar,da ordem de 30 a 35 dias, e no osso é estimado em 30 anos.A
eliminação do chumbo é feito prepoderantimente pela via renal(cerca de 70%)
e fecal (cerca de 10%).Para o chumbo inorgânico existe vários indicadores
biológicos sendo dois de dose interna:chumbo sanguineo (pb-S) e chumbo
urinário(pb-U) A determinação de chumbo no sangue (pb-S) é referida como o
melhor indicador e o mais aceito para avaliação biológica das exposições ao
metal,mais como esta querendo determinar ácido delta animo levulénico na
urina(ALA-U) o fluido biológico de escolha é a urina pois na síntese do heme o
ALA-U é o metabólito do cumbo que é excretado na urina.

Matérias, Reagentes e Solventes:

1.Material biológico:
urina
2.Solventes e Reagentes:
Acetato de etila
Acetoacetato de etila
Tampão acetato 1 M(82g/L),pH 4,6
Reativo de Erlich modificado-preparar no momento do uso

p-amino dimetil benzaldeido 2g

Ácido acetrico glacial 60ml
Ácido perclórico 8,5ml
Água destilada 10ml
Acido acético glacial qsp... 100ml

3.Solução-padrão:
Solução estoque(1600 mg/L) preparada em tampão acetato 1M pH 4,5
(estável indefinidamente se armazenada em freezer,ao abrigo da luz).
Curva de calibração:1.28/2,56/5,12/12,8mg/L(preparado em tampão
acetato 1M pH 4,6)-estável por um mês se armazenado em geladeira, ao
abrigo da luz.

PROCEDIMENTO (ALA-U)

 Utilisou-se sete tubos de extração com tampa esmerilhada;

 No primeiro tudo,que é da amostra, adiciona-se 1mL de urina, 1mL de
tampão e 200µL de acetato de etila;
 No segundo tubo, o brando da amostra, contém 1mL de urina e 1mL de
tampão;
 Nos tubos da curva de calibração, que são o 3,4,5 e 6 com
concentrações 1,28; 2,56; 5,12 e 12,8 respectivamente deve-se adicionar
1mL de água, 1mL de padrão e 200µL de acetato de etila, em cada hum
dos tubo;
 E no sétimo tubo, que é o branco da curva, deve-se adicionar 1mL de
água e 1mL de tampão.
 Em seguida vedar todos os tubos com fita teflon e agitar em mixer 5s;
  em banho Maria deixa ferver durante 10 minutos, o banho Maria serve
para ´promover a interação do ALA-U com o acetato de etila,

em seguida deixe esfriar e logo após deve-se adicionar 3mL de acetato de

etila e vedar com fita teflon cada um dos tubos.O acetato de etila é o
agente extrator,ele extrai o grupo pirrou da urina;

 Agitar durante 10 minutos;

 Desprezar a fase aquosa de todos os tubos;
 Transferir 2mL, de cada tubo, da fase orgânica para um tubo de ensaio e
adicionar 2mL do Reativo de Erlich, esse reativo tem a função de reagir
com o ALA-pirroul formando o ALA-pirrol-Erlich que é a substancia colorida
e essa substancia colorida é quantificada no aparelho.
 Agitar em mixer durante 5 segundos;
 Aguardar 10 minutos
 Ler em 553nm contra o respectivo branco.

Matérias, Reagentes e Solventes(creatinina)

Material biológico:

Urina

Solventes e reagentes:

Solução saturada de ácido pícrico: 2g/l

NaOH 10%

Solução de picrato alcalino;3ml de NaOH 10% +15ml da solução de ácido

pícrico. Preparar imediatamente antes do uso.

Soluçao padrão:
Solução padrão estoque(1,0mg/l): 50mg de creatinina/ 50ml de HCL 0,1 N.
Adicionar 2 gotas de tolueno. Concervar em freezer.

Curva de calibração :0,002/ 0,005/ 0,01 e 0,02g/L(preparadas em água)

PROCEDIMENTO (CREATININA)

 Usam-se seis tubos de ensaio onde serão adicionado o branco a

amostra e a curva de calibraçao;
 No primeiro tubo, o branco, adiciona-se 5mL de água e 1mL de padrão;
 No segundo tubo, o da amostra, coloca-se 25µL de urina, 5mL de água
e 200µL de acetato de etila;
 Nos quatro últimos tubos, que são o da curva de calibração, com
concentrações 0,02; 0,01; 0,005 e 0,002 mg/mL respectivamente deve-se
adicionar 5mL da solução padrão em cada tubo;
 Adicionar 2,5mL de picrato alcalino em todos os tubos;
 Agitá-los em mixer durante 5 segundos;
 Repouso de 15 minutos;
 Ler em espectrofotômetro 525nm.

Resultados:

Calcular a concentração da amostra com base na curva de calibração

A amostra de urina do trabalhador exposto ao chumbo tem Absorbança = 0,41
Y= 0,0636x + 0,0154
0,41 = 0,0636x + 0,0154

X = 0,41 - 0,0154 = 6,20 mg/L

0,0636

Determinação do Kmédio

K1 = 0,093 → 0,0726 K2 = 0,185 → 0,0723

1,28 2,56

K3 = 0,338 → 0,0660 K4 = 0,83 → 0,0648

1,28 12,8

Kmédio = 0,0689

ALA-U mg/urina = 0,41 = 5,9507 mg/urina

0,0689

ALA-U mg/urina = 0,41 = 5,9507 mg/urina

0,0689
 CONC ABS

0,002 0,071

0,005 0,176

0,01 0,343

0,02 0,682

Calcular a concentração da amostra com base na curva de calibração

A amostra de urina do trabalhador exposto ao chumbo tem Absorbança =
0,032
Y= 33,874x + 0,0047
0,032 = 33,874x – 0,0047

X = 0,032 - 0,0047 → 0,000805x200 = 0,16 mg/L

33,874

Determinação do Kmédio

K1 = 0,071 = 35,5 K2 = 0,176 = 35,2

0,002 0,005

K3 = 0,343 = 34,3 K4 = 0,682 = 34,1

0,01 0,02

Kmédio = 34,775
 CREATININA mg/urina = 0,032 x 200 = 0,1840 mg/urina

34,775

VALORES DE ALA-U/CREATININA
 Pela curva

ALA-U mg/g creatinina = 6,20 → 38,75 mg/g creatinina

0,16

 Pelo Kmédio

ALA-U mg/g creatinina = 5,9507 → 32,34 mg/g creatinina

0,1840

DISCUSSÃO E CONCLUSÃO

Índice biológico máximo permitido :

 ALA-U – 10 mg/g creatinina (NR-7).
 Chumbo urinário - 100µg/g creatinina (NR-7)
 Chumbo no sangue: 60-µg/ 100 ml (NR-7)
 ZnPP – 100 µg/ 100 ml (NR-7).
De acordo com o indice IBMP estabelecido pelo Ministério do Trabalho e
Emprego (MTE) os valores encontrados estão acima do permitido,
demostrando assim que o trabalhador estar exposto ao toxicante
correndo vários risco de saúde, com isso esse paciente deve ser
acompanhada e o MTE tem que intervir.
 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

MOREAU,REGINA LÚCIA DE MORAIS.toxicologia analítica/Regina Lúcia de

Morais, Maria Elisa Pereira Basto de Siqueira.-Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2008.il.-(ciências farmacêuticas)

CAD. SAUDE PÚBLICA vol.16 Rio de Janeiro/Mar. 2000