ACTIVIDAD DE LA CATALASA A DIFERENTES TEMPERATURAS.

Objetivo

Que el alumno observe el efecto de la temperatura en la actividad de la

catalasa con el jugo de zanahoria.

Marco teórico

Existen dos factores que alteran o modifican la actividad enzimática: la

temperatura y el pH.

La velocidad de las reacciones enzimáticas aumenta por lo general con

la temperatura, dentro de un intervalo en que la enzima es estable y
activa. La velocidad por lo general se duplica por cada 10 C° de
aumento de temperatura. Sin embargo las enzimas se desnaturalizan
cuando la elevación de la temperatura sobrepasa cierta temperatura
límite. La cual a su vez es la temperatura óptima de trabajo. A bajas
temperaturas, las reacciones disminuyen mucho o se detienen, pero la
acción catalítica reaparece cuando la temperatura se eleva a valores
normales. La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de
los tejidos animales y vegetales. La función de esta enzima en los tejidos
es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una
molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua
oxigenada). Fue una de las primeras enzimas purificadas y ha sido muy
estudiada. Es una de las enzimas más eficientes con una velocidad de
aproximadamente 200,000transformaciones/segundo/subunidad. La
proteína es un tetrámero formado por cuatro subunidades idénticas.
Cada monómero contiene un grupo prostético Hemo en el centro activo.
En algunas especies también contiene una molécula de NADP por
subunidad cuya función es proteger a la enzima de la oxidación por su
sustrato H2O2. La catalasa trabaja facilitando la descomposición del
peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La eficacia de la catalasa para
la degradación del peróxido de hidrógeno depende de varios factores:

La dosis de la catalasa a usar.

La concentración inicial del Peróxido de hidrógeno.
El tiempo de contacto en la disposición del proceso.
Material

Gradilla
8 tubos de ensaye
Mechero bunsen

Pipeta

Graduada

Pizeta 5ml

Termómetro Perilla de succión

Rejilla de asbesto

Soporte universal
Pinzas para tubo de
ensaye
Vaso de pp. De 250 ml

Reactivos

• Peróxido de hidrogeno (H2O2)

• Jugo de zanahoria

Procedimiento

1. Se lavo todo el material perfectamente.

2. Se preparo la solución de peróxido de hidrogeno a 50:50 (esto es

50ml de agua destilada y 50ml de peróxido de sodio).

3. Se rotularon los 8 tubos de ensaye para diferenciarlos

4. En cuatro tubos de ensaye se introdujo 1 cm de jugo de zanahoria.

5. En otros cuatro tubos de ensaye se añadió 1ml de peróxido de

hidrogeno.

6. Cada tubo de peróxido de hidrogeno se mantuvieron a diferentes

temperaturas así el tubo 1 a 0 grados centígrado, el 2 a 23 grados
centígrados, el 3 a 37 grados centígrados y el tubo 4 a 65 grados
centígrados (durante 5 minutos), con la finalidad de que el
sustrato (peróxido de hidrogeno) tomara la temperatura.

7. Después del tiempo transcurrido a cada tubo de ensaye con el

jugo de zanahoria se le agrega el peróxido de hidrogeno, antes se
marco con un plumón el cm de catalasa en cada tubo para así
cuando reaccione con el peróxido de hidrogeno (al añadirlo se deja
1 min de reposo se marca hasta donde subió la espuma del jugo
para que también se calcularan los cm de la medida inicial a la
medida final).
 8. Se realizo un segundo ensayo con la finalidad de comprobar la
repetitividad de datos.

Resultados

Tabla #1.- Valores obtenidos en cada ensayo a diferentes

temperaturas.

ensayo 1 ensayo 2
TEMP. (° TIEMPO(s DISTANCIA VEL. TIEMPO(s DISTANCIA VEL.
C) eg) (cm) (cm/seg) eg) (cm) (cm/seg)
0 60 1.2 0.02 60 0.8 0.01
23 60 1.3 0.02 60 1.2 0.02
37 60 2.5 0.04 60 2.4 0.04
65 60 2.5 0.04 60 2.6 0.04
Grafica #1.- Grafica de actividad enzimática a diferentes
temperaturas.

Reacción que se lleva a cabo:

CnH2On + H2O2 H2O + O2

Analisis de resultados

Con base a la tabla #1 y a su grafica respectiva podemos observar como

interactua la enzima catalasa presente en las celulas de la zanahoria
cuando se encuentra en contacto con su sustrato el peroxido de
hidrogeno, se realiza una reacción de oxido-reducción donde el peroxido
se transforma en oxigeno y en agua, y que la temperatura optima es
poco precisa debido a que no se observa la desnaturalizacion de la
enzima con los valores de temperatura elegidos, por otra parte si se
puede decir que la velocidad de reaccion a 0°C es muy lenta. En la
bibliografia consultada se tiene que las condiciones optimas son:
temperatura entre 30-40 ºC, pH entre 4-7, preferentemente entre 5-5.5
la temperatura de desnaturalizacion se encuentra entre los 60-70 °C. Por
lo que podemos suponer que la temperatura a la que se desnaturaliza la
enzima esta entre los 66-70°C.

Conclusión

La catalasa es una enzima que descompone el peróxido de hidrógeno en

oxígeno molecular y agua.

Se encuentra en las células animales y vegetales asi como en la sangre.

Descompone a H2O2 produciendo agua (H2O) líquida y oxígeno (O2)

gaseoso.

Las burbujas (O2 gaseoso) son una señal de que está ocurriendo una
reacción.

El calor puede cambiar la conformación de la Enzima y alterar el sitio

activo, afectando la actividad enzimática negativamente. Muchas
enzimas exhiben una temperatura óptima en donde su actividad es
máxima por lo que podemos determinar que .

Bibliografía

Murray, Mayes,Rodwell. “Bioquimica de Harper”. Manual Moderno .14

Edición.
Lenhninger “ Principio de Bioquimica” McGraw Hill. 4 Edición
A. WISEMAN “MANUAL DE BIOTECNOLOGÍA DE LOS ENZIMAS” EDITORIAL
ACRIBIA, S.A.
INDUSTRIAL ENZYMOLOGY (SECOND EDITION), EDITED BY GODFREY &
WEST, STOCKTON PRESS
http://www.biochem.ucl.ac.uk/bsm/pdbsum/
http://www.mty.itesm.mx/die/ddre/transferencia/Transferencia41/biotec.
htm
http://perso.wanadoo.es/sanchez.priebe/articulo.htm
http://www.textileindustries.com/News.htm?CD=267&ID=2146