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PCR - Reação em Cadeia da Polimerase

Técnica da biologia molecular empregada para obter-se amplificação de DNA


in-vitro, empregando elementos naturais do processo de replicação. Método
eficiente e rápido para amplificação de seqüência especificas de DNA.
Conseguem amplificar uma pequena quantidade de DNA.
-Os produtos do PCR recebem o nome de Amplicons

Replicação in-vitro do DNA


Ocorre alternância de temperatura em cada ciclo: Desnaturação, Anelamento,
Polimerização.

Taq DNA polimerize: temperatura ótima 72° e é estável ate temperaturas


superiores a 92°
Tem onde começar (primer) e sabe o momento de acabar.

Princípios da técnica do PCR


Requer 6 componente essenciais: -DNA polimerize termoestável (sobrevivem a
altas temp.)
-Um par de oligonucleotideos para iniciar a síntese
de DNA
-Deoxinucleotideos trifosfato
-MgCl2 (DNA polimerize)
-Tampão (manutenção do ph)
-DNA
Colocar em um tubo e levar para o termociclador (projetado para que a DNA
polimerize pudesse ser adicionada a cada ciclo)

Qualquer seqüência alvo de DNA pode ser amplificada pelo PCR, a localização é
feita pelos primers.
Oligonocleotideos são altamente seletivos

Fases: 1) Desnaturação do molde de DNA por aquecimento (94° - 96°)


2) Pareamento dos iniciadores a sequcncia alvo fita simples (55° - 65°) -
Anelamento
3) Extensão pela DNA polimerize termoestável (72°) - Polimerização

Cada uma das novas fitas extendidas serve como template para a síntese de uma
nova fita, com isso há um aumento exponencial do numero de fitas novas.

- Identificação dos produtos amplificados: eletroforese em gel após coloração de


brometo de etidio e eletroforese em gel de poliacrilamida.
Gel de Agarose.

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