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Departamento de Ciencia & Tecnología

Microbiología General

Nutrición Microbiana

COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Medio Ingredientes Concentración Ingrediente común Ingrediente particular


TSA Triptona 15.0 g Peptona, Agar todos Triptona
Peptona de Soya 5.0 g excepto (TSB), Cloruro de
Cloruro Sodio 5.0 g Sodio excepto (EMB).
Agar 15.0 g
TSB Triptona 17.0 g Peptona, Cloruro de Sodio Dextrosa Triptona.
Peptona de Soya 3.0 g excepto (EMB), Di ,
2.5 g potasio Fosfato con
Dextrosa
2.5 g (EMB), Agar todos
Cloruro Sodio 5.0 g excepto (TSB)
Di potasio Fosfato 2.5 g

MSA Cloruro Sodio 75.0 g Peptona, Cloruro de Sodio Rojo de Fenol, Extracto
D(-)-Manita 10.0 g excepto (EMB), Agar de Carne, D(-)-Manita.
Extracto de Carne 1.0 g todos excepto (TSB).
Mezcla de Peptonas 10.0 g
Rojo de Fenol 0.025 g
Agar 15.0 g
MacConkey Lactosa 10.0 g Peptona, Lactosa en Cristal Violeta, Sales
Peptona 3.0 g común con (EMB), Agar Biliares, Rojo Neutro.
Sales Biliares 1.5 g todos excepto (TSB).
Peptona de Gelatina 17.0 g
Rojo Neutro 0.03 g
Cloruro Sodio 5.0 g
Cristal Violeta 0.001 g
Agar 13.5 g

EMB Eosina Amarillenta 0.4 g Peptona, Lactosa en Eosina Amarillenta, Azul


Azul de Metileno 0.065 g común con MacConkey. de Metileno.
Lactosa 5.0g Di potasio de Fosfato en
Peptona 10.0 g común con (TSB), Agar
Bacteriológica 2.0 g todos excepto (TSB).
Di potasio Fosfato 5.0 g
Sacarosa 13.5 g
Agar
MEDIOS DE CULTIVO

1) Triptona Soya Agar (TSA), Agar


Trypticase Soy Agar (TSA)
Triptona Soya (TSB), Caldo
Trypticase Soy Broth (TSB)
Se emplea como medio de uso general para el cultivo de todo tipo de microorganismos.

Fundamento
Se ajusta a la formulación de la USP y a la Ph. Eur. Por el contenido de peptona de soja y
peptona de caseína resulta una aportación nutritiva que permite el desarrollo óptimo de un gran
número de microorganismos, tanto exigentes como no exigentes. Se utilizan como tales o como
base para preparar medios especiales (Agar Sangre, Agar Proteus).
Fórmula (por litro) del Agar
pH final:7,3 ± 0,2

Preparación
Suspender 30 g (Caldo) ó 40 g (Agar) en 1 l de agua destilada; mezclar bien y calentar
ligeramente hasta disolución total. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleo
Tratar el medio según los fines a conseguir

2) Sal y Manitol, Agar


Mannitol Salt Agar

Se emplea para el aislamiento selectivo y recuento de Estafilococos patógenos en productos


lácteos, cárnicos, marinos y otros productos alimenticios. También se emplea con el mismo fin en
productos farmacéuticos y cosméticos.

Historia
La formulación del medio se basa en la propiedad, ya enunciada por Koch, de que el crecimiento
de los Estafilococos no era inhibido por una concentración de Sodio Cloruro del 7,5%, mientras
que esto sí sucedía con la mayoría de las bacterias restantes. Chapman confirmó esta experiencia
añadiendo que los Estafilococos patógenos crecían de forma abundante al tiempo que los no
patógenos lo hacían en pequeñas colonias. La formulación de este medio corresponde a las
recomendaciones de la USP.

Fundamento
El efecto inhibidor se debe a la alta concentración de Sodio Cloruro del medio. Con la
fermentación de la D(-)-Manita se genera ácido que ocasiona el viraje del rojo de fenol al ama-
rillo, permitiendo así una mayor claridad en el momento de establecer el diagnóstico, ya que la
mayoría de los Estafilococos patógenos fermentan este azúcar.
pH final:7,4 ± 0,2
Preparación
Suspender 111 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1
minuto. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.
Modo de empleo
Sembrar grandes inóculos en la superficie del medio.
Incubar a 37ºC de 24 a 48 horas

3) MacConkey, Agar
MacConkey Agar

Medio de cultivo utilizado en la investigación de organismos coliformes.

Historia
Este medio se basa en la fórmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y
lactosa para el aislamiento de bacilos entéricos Gram-negativos. El medio ha sufrido múltiples
variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adición de otros ingredientes o por la
modificación de las proporciones entre ellos. Actualmente corresponde a las recomendaciones de
la USP y la Ph. Eur.

Fundamento
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias
Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el
medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo
presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas
dan colonias incoloras.
pH final:7,1 ±0,2

Preparación
Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1
minuto. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45ºC y distribuir en placas de
Petri estériles con 20 ml en cada una. Dejar solidificar las placas parcialmente destapadas.

Modo de empleo
Sembrar por estría en la superficie de la placa.
Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas

4) Eosina Azul de Metileno (EMB), Agar


Eosin Methylene Blue Agar (EMB)

Se emplea como medio diferencial para el aislamiento y diferenciación de bacterias entéricas


Gram-negativas

Historia
Los primeros en desarrollar este medio fueron Holt-Harris y Teague, que a partir de la mezcla de
azul de metileno y eosina consiguieron un efecto diferenciador muy claro entre las bacterias
capaces de fermentar la lactosa y las que no lo eran. La inclusión de la sacarosa fue propiciada
para aquellos microorganismos que fermentan con dificultad la lactosa, y fácilmente la sacarosa.
Fundamento
Por la combinación de estos dos colorantes y los dos hidratos de carbono se pueden distinguir
algunos géneros. Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas (Salmonella y Shigella) dan
colonias incoloras, mientras que las lactosa y/o sacarosa-positivas dan colonias púrpura-violeta-
negruzco con/sin un centro oscuro y quedan rodeadas de una zona incolora. Por el efecto de estos
mismos colorantes también queda inhibido el crecimiento de la micro flora acompañante, sobre
todo la Gram-positiva. También es posible la identificación de Candida albicans.

Preparación
Suspender 36 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1
minuto. No sobrecalentar. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleo
Sembrar en la superficie del medio.
Incubar entre 35º y 37ºC de 18 a 24 horas