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I) Cromatografia
Coluna
Cromatográfica
Fase
Fase
Estacionária
Móvel
Mistura a ser
separada
a) Cromatografia Gasosa
1 6
3
1 – Reservatório do gás de arraste (N2 ou H2 ou He ou Ar)
2 – Local onde a amostra será injetada (“vaporização” da amostra)
3 – Coluna Cromatográfica
4 – Detector
5 – Amplificador de sinal
6 – Formação do Cromatograma (gráfico concentração de amostra x tempo)
b) Cromatografia Iônica
Coluna
Cromatográfica
Após a interação dos íons da amostra com a resina, uma solução chamada
eluente é passada pela coluna de cromatografia liberando assim os íons que
estavam interagindo com a resina. O tempo de retenção/separação das diferentes
espécies é que determinará a concentração dos diferentes íons na amostra. Antes
de passar pelo detector, as amostras passam por uma segunda coluna
cromatográfica, a coluna supressora de eluente, que irá bloquear a detecção de
íons que por ventura possam fazer parte da constituição do eluente e que
poderiam interferir na concentração iônica real da amostra; ou seja, somente os
íons da amostra são encaminhados para análise. Desvantagens: técnica de custo
extremamente elevado e que requer mão de obra altamente especializada na
operação do sistema e análise de dados. É usada para fracionar peptídeos,
aminoácidos, hemoglobinas e hemoglobina glicada.
c) Cromatografia Líquida de Alta Pressão (HPLC)
HPLC: sigla do inglês que significa High Pressure (or Performace) Liquid
Chromatography. Atualmente chamada de Cromatografia Líquida de Alta
Eficiência (CLAE). Possui como características: a elevada sensibilidade, a alta
velocidade de reação e o grande desempenho com confiabilidade e rapidez na
liberação de resultados. Trata-se de um tipo de cromatografia que utiliza um
líquido como fase móvel, que é injetado na coluna cromatográfica a altas pressões
e diferentes tipos de fase estacionária, variando de acordo com aquilo que se quer
analisar. Os constituintes da fase estacionária, em geral se encontram altamente
particionados, o que gera uma separação mais eficiente. Constitui-se de
reservatórios para os reagentes, bombas que propulsionam a fase móvel a altas
pressões, injetor de amostra, coluna cromatográfica e um detector acoplado a um
computador. A técnica de CLAE (HPLC) é a base para o entendimento e
realização de outras técnicas como a cromatografia gasosa e de troca iônica. A
utilização de partículas ainda mais finas (0,1 nm) e pressões ainda mais elevadas
(15.000 psi) tem gerado o que se chama de CLUE (Cromatografia de Ultra
Eficiência). É usada principalmente para fracionar hemoglobinas e hemoglobina
glicada. Pode ser usada para proteínas, peptídeos e aminoácidos.
Tipo de reação química, que ao se processar gera energia luminosa. Durante uma
reação química, os reagentes se transformam em estados intermediários
eletronicamente excitados, e ao passarem para um estado de menos excitado,
liberam a energia absorvida na forma de luz. O composto químico Luminol, é um
dos representantes mais conhecidos da quimioluminescência. Quando em contato
com o sangue, por exemplo, utiliza o ferro da hemoglobina como catalisador para
a reação de liberação de luz. Esse composto é muito usado em perícia criminal,
quando se quer investigar a presença de vestígios de sangue em uma cena de
crime. Mesmo que o local tenha sido limpo, o luminol evidencia a presença do
sangue.
Laboratorialmente, hormônios, drogas e microorganismos podem ser identificados
por testes colorimétricos. Tais métodos utilizam-se de anticorpos ligados a um
marcador luminescente (cromógeno) que pode ser o próprio luminol ou mais
modernamente derivados de acridina, sistema avidina-biotina, entre outros.
III) Colorimetria
IV) Cinético
analito (enzima)
Substrato Produto (reação colorimétrica)
V) Cinético Enzimático:
Muito semelhante ao método cinético, porém o analito não é uma enzima e sim o
substrato que será utilizado por uma enzima específica. O produto dessa primeira
reação enzimática pode então ser captado por outra(s) enzima(s) que está
acoplada a uma reação colorimétrica, de liberação de gás ou formação de
precipitado.
enzima 1
Analito (substrato) Produto 1
enzima 2
Produto 1 Produto Final reação colorimétrica;
liberação de gás ou
formação de ppt
IFD
IFI
Adição do
anti-anticorpo
Revelação
X) Nefelometria e Imunoturbidimetria
Substrato
da enzima Cromógeno incolor
Substrato
modificado
E +
Oxida o
cromógeno Cromógeno colorido
enzima
XII) Eletroquimioluminescência