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DETECCION MOLECULAR DE
VIRUS DE POSTLARVAS DE
CAMARON BLANCO (Litopenaeus
vannamei)
(Briggs M., et. al., 2005). El TSV llega a afectar a la glándula de la antena,
organohematopoyético, hepatopáncreas, epitelio intestinal, especialmente de
las cecas anterior y posterior. Las partículas virales pueden sobrevivir fuera de
la célula hospedera conservando su patogenicidad a temperaturas entre 0°
hasta los 120°C y en el agua contaminada puede permanecer activo hasta 14
días. El principal mecanismo de infección es horizontal al comer el camarón
sano restos de animales infectados o alimento contaminado. El TSV ataca a
postlarvas, juveniles y adultos, siendo las fases larvarias las más afectadas, lo
que generalmente ocurre entre los 14 a los 40 días postlarva generándose
elevadas mortalidades (Aguado G., et. al., 2008).
Métodos histológicos y moleculares pueden ser usados para la detección,
diagnosis y vigilancia, aunque ensayos de hibridización in situ con sondas
específicas de ADN aplicados a cortes en parafina actualmente proveen una
excelente prueba de diagnóstico certero de este virus (sitio Web de la OIE).
Pruebas de RT-RCP pueden también ser usadas con ventaja en tamaños de
muestras grandes y en muestreos no letales en reproductores. Adicionalmente,
bio-ensayos en camarones vivos y métodos serológicos con anticuerpos
monoclonales, pueden ser también usados en el diagnóstico de infecciones con
TSV (Briggs M., et. al., 2005). El agente etiológico del TSV es un virus con una
sola cadena de ARN, perteneciente a la familia Discistroviridae, género
Cripavirus. Este virus invade y se replica en el citoplasma de las células
epiteliales de la epidermis del exoesqueleto y epidermis cuticular de branquias,
intestino anterior (esófago, estómago) y del intestino posterior. Los síntomas de
la fase aguda son: expansión de cromatóforos rojos y necrosis epitelial en
apéndices; mientras que los organismos de fase crónica pueden exhibir
lesiones cuticulares y expansión de los cromatóforos rojos. Los ejemplares que
sobreviven son portadores y pueden transmitirla horizontal y verticalmente la
enfermedad. En los estados de Sonora, Sinaloa, Chiapas y Guerrero se han
reportado brotes de la enfermedad con pérdidas de hasta el 100% (Rodríguez
G. et. al., 2001).
23 de marzo de 2011
JUSTIFICACION
OBJETIVO GENEAL
Evaluación de las principales enfermedades varales de la región en
camarón blanco (Litipenaeus vannamei) de la Granja Costas del Mar de Cortéz
como prevención a los principales virus patogénicos.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Determinar la presencia o ausencia de WSSV en postlarvas de
Litipenaeus vannamei.
Determinar la presencia o ausencia de TSV en postlarvas de Litipenaeus
vannamei.
23 de marzo de 2011
ADN (se separan las dos hebras de las cuales está constituido). Este paso
puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (94-95 °C) de la
muestra la forma más habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la
desnaturalización depende, por ejemplo, de la proporción de G+C que tenga la
hebra, como también del largo de la misma. Otros métodos, raramente
empleados en la técnica de la PCR, serían la adición de sales o agentes
químicos capaces de realizar la desnaturalización. En el Alineamiento o unión
del cebador, se producirá la hibridación del cebador, es decir, el cebador se
unirá a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario
bajar la temperatura a 40-68 °C durante 20-40 segundos (según el caso),
permitiendo así el alineamiento. Los puentes de hidrógeno estables entre las
cadenas de ADN (unión ADN-ADN) sólo se forman cuando la secuencia del
cebador es muy similar a la secuencia del ADN molde. La polimerasa une el
híbrido de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar ADN. Los
cebadores actuarán como límites de la región de la molécula que va a ser
amplificad. Y en la Extensión o elongación de la cadena, la ADN polimerasa,
tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y partiendo
del cebador como soporte inicial necesario para la síntesis de nuevo ADN. La
polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra
molde añadiendo los dNTP complementarios en dirección 5'→ 3', uniendo el
grupo 5'-fosfato de los dNTP con el grupo 3'-hidroxilo del final de la hebra de
ADN creciente (la cual se extiende). La temperatura para este paso depende
de la ADN polimerasa que usemos. Para la polimerasa Taq, la temperatura de
máxima actividad está en 75-80 °C (comúnmente 72 °C). El tiempo de
extensión depende tanto de la ADN polimerasa usada como de la longitud del
fragmento de ADN que se va a amplificar. Hay una regla comúnmente usada:
en su temperatura óptima, la polimerasa de ADN polimerizará mil bases en un
minuto.
RESULTADOS
23 de marzo de 2011
Figura-1. Verificación de ácidos nucleicos en postlarvas de camarón en las celdas 1-5 y en camarones adultos
en las celdas 6-7), celda 8 para control positivo, celda 9 para control negativo, celda 10 para clona positiva
únicamente en RNA. (A) para DNA y (B) para RNA.
El análisis para WSSV no se presentó virulencia alguna (Figura-2) dado
que las muestras de postlarvas de camarón se encuentran libres del patógeno
WSSV, cabe mencionar que las muestra dos original se perdió al momento de
cargar el gel y, en la muestra tres solo hay un poco de muestra ya que la otra
parte se encuentra en el pozo dos; pese a ello, en ninguna de las dos bandas
se manifiesta presencia del virus, por lo que se aseguran las muestras libres
del patógeno WSSV.
Figura-2. Análisis de WSSV (A) y IHHNV (B). En (A) las bandas 1-6 pertenecen a las postlarvas de
camaron, bandas 6-7 son provenientes de camarones adultos congelados, banda 8 como control
positivo, banda 9 como control negativo. En (B) las bandas 1-6 pertenecen a postlarvas de camarón,
banda 6 proviene de camarón adulto vivo, banda 7 proviene de camarón adulto congelado, banda 8
como clona positiva, banda 9 como control postivo, banda 10 como control negativo.
DISCUSION
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Por otro lado, se conoce bien que el WSSV se manifiesta con mayor
incidencia en los municipios del norte de Sinaloa por su alta producción de
camarón (Montoya R., 2003) es conveniente que los productores realicen
pruebas analíticas ante este patógeno en forma preventiva ya que es la
principal amenaza en las zonas de cultivo regional. Además que el virus
acelera la muda. Sin embargo esto llega a provocar la mortalidad en postmuda
favoreciendo a la propagación del virus, muchas partículas virales serían
liberadas con los exuvios, en tanto que los animales blandos y debilitados
serían presa fácil de los animales sanos (Echeverría F., et. al., 2002). Siendo a
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CONCLUSION.
White Spot Syndrome Virus (WSSV) and Yellow Head Virus (YHV) in imported
commodity shrimp. Aquaculture. 160: 19 - 30.
Yamilka Karenia López. 2006. Diagnóstico por PCR de los virus IHHNV y
WSSV en colecciones biológicas e histológicas de camarón blanco
Litopenaeus setiferus (Lineaeus, 1767). Universidad Autónoma de Campeche.
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