P. 1
Relatório aula prática

Relatório aula prática

|Views: 2.238|Likes:
Publicado porAdélia Motta

More info:

Published by: Adélia Motta on Jun 12, 2011
Direitos Autorais:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOCX, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

07/05/2013

pdf

text

original

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA Determinação de glicose em amostras biológicas por espectrofotometria no UV-Vis

1. INTRODUÇÃO

A luz é uma forma de radiação eletromagnética, e pode ser uma mistura de diversas ondas com comprimentos de onda distintos, chamada de policromática, ou apenas um comprimento de onda definido, chamada de monocromática. O comprimento de onda é representando pelo símbolo , medido em nanômetros (nm, 10 -9 m) e indica a distância medida longitudinalmente entre dois picos ou vales da onda. O espectro eletromagnético representa as diferentes faixas de radiação em função do comprimento de onda e freqüência da onda. A freqüência é o movimento oscilatório da onda, medida em oscilações por segundo (s -1) ou Hertz (Hz). Em um espectro eletromagnético cujo comprimento de onda aumenta para a direita, as ondas mais enérgicas e de maior freqüência estão no extremo esquerdo (raios gama e raios-X), enquanto as radiaçõe s mais fracas estão à direita. Assim, a energia contida em uma onda é tão maior quanto menor o comprimento de onda e maior a freqüência.

As ligações covalentes podem ser simples (sigma). . estrutura eletrônica e material ou molécula pode ser realizado pela espectrometria. visível (400-700 nm) e infravermelho (700-15. O estudo da relação comprimento de onda absorvido. As ligações sigma são mais fortes porque os orbitais atômicos dos dois átomos interagem frontalmente. fundindo em um único orbital molecular linear. formando uma nuvem el etrônica torcida. no entanto. enxofre. As ligações pi. são fracas porque os orbitais atômicos "se curvam" no espaço para interagir. A espectrofotometria bioquímica está preocupada com as faixas do ultravioleta (UV.A região do espectro eletromagnético compreendida entre 400 -700 nm é aquela em que estão as ondas que sensibilizam as células do olho humano responsáveis por captar as cores. As cores são faixas de ondas dentro desse intervalo de 300 nm. por exemplo. Quando o olho humano vê verde. Os elétrons numa molécula podem estar compartilhados entre dois átomos (participando de uma ligação covalente) ou em pares isolados em átomos de oxigênio. A radiação absorvida está relacionada com a estrutura eletrônica espacial da molécula que constitui o material .000 nm). dupla (sigma e pi) ou tripla (sigma. é porque os comprimentos de onda do vermelho e azul foram absorvidos pelo objeto refletindo a luz. pi e pi). 185-400 nm). nitrogênio e halogênios [4].

Em suma. a concentração do substrato.grupos cromóforos [4]. a energia necessária é igual à diferença energética entre os d ois orbitais. gerando um decaimento exponencial através do caminho percorrido na amostra. há elétrons não ligantes que saltam para orbitais antiligantes. que combinadas são conhecidas como a Lei de BeerLambert[1]. porque estas ondas tem comprimento de onda menor e ener gia maior. que é definida como a razão entre a intensidade de luz emitida para a amostra e a intensidade emitida da amostra. de energi a maior e geralmente desocupado . ligante pi. A absorbância é o inverso do logaritmo da transmitância. a luz pode sofrer desvios. Cada orbital ligante possui um respectivo orbital antiligante. refrações ou absorção. A absorção no UV-Vis depende da presença de grupos funcionais com elétrons de valência com energia de excitação menores . os orbitais podem ser classificados como: ligante sigma. Os métodos espectrofotométricos em bioquímica residem basicamente sobre duas leis. A transmitância e a absorbân cia têm grandezas arbitrárias. reflexões. moléculas que possuem ligações pi e/ou pares isolados absorvem no UV -Vis. ou seja. antiligante sigma . Beer afirma que a quantidade de luz absorvida é proporciona l à quantidade de moléculas presentes no meio percorrido pelo feixe. os elétrons devem ser excitados do orbital inferior menos energético (ligante) para um superior mais energético (antiligante). como nos orbitais moleculares. . passando pela amostra. Isso é expressado matematicamente pela equação.Os orbitais moleculares ligantes estão preenchidos por elétrons quando a molécula está no estado fundamental. de forma que. Além desse tipo de salto. Para ocorrer a absorção de energia. As intensidades emitidas e recebidas variam porque. Em energia crescente. assim moléculas que possuam somente ligações covalentes simples sem pares isolados absorvem energia ultravioleta apenas ( < 185 nm). elétrons de pares isolados. antiligante pi. Lambert afirma que a fração de luz absorvida por um meio é independente da intensidade da luz incidente e que cada cam ada sucessiva do meio absorve a mesma proporção de luz passando por ela. O espectro de absorbância ou gráfico de absorbância é obtido aumentando-se o comprimento de onda de um feixe monocromático de luz e medindo a absorbância. Ligações fortes precisam de mais energia para serem excitadas.

a hidroxila do quinto carbono ataca o primeiro carbono. O primeiro carbono passa a ser mais um centro quiral chamado de carbono anomérico. Ela foi descoberta em 1928 por Müller em Aspergilus niger e Penicillium glaucum.4) é uma enzima e cataliza a oxidação de Beta -D-glicose para Delta-D-glicolactona na presença de oxigênio molecular. para determinações de concentrações usando espectrofotometria. A relação entre as duas grandezas é dada por A = log 10 (1/T) = . a função aldeído está no primeiro carbono. de forma que outros compostos no meio reacional permanecem ilesos. Isso é devido ao fato da enzima e o substrato terem um encaixe ótimo. criando uma cadeia fechada.em cada um.3.Flavina Adenina Dinucleotídeo .1. diz-se que a glicose é do tipo alfa. A glicose é um carboidrato poliidroxialdeído de seis carbonos. O anel se arranja no espaço de forma a aumentar os ângulos entre as ligações para estabilizar a estrutura. é usada a absorbância. caso contrário é beta.1% é transmitida . e os outros cinco possuem uma hidroxila lateral. Dessa forma. EC 1. enquanto a L-glicose a possui do lado esquerdo. A D-glicose possui a hidroxila do lado direito do quinto carbono contando a partir do carbono com o grupo aldeído. no qual a enzima torce ou aproxima partes do substrato para incitar a reação. Com exceção do primeiro e sexto carbono. Enzimas em tecidos animais que oxidam glicose são fac ilmente diferenciáveis da glicose oxidase porque não precisam de oxigênio molecular e não geram peróxido de hidrogênio. mas não em plantas superiores e animais [5].log10 T. a glicose oxidase é um dímero com grupo prostético FAD . não a transmitância. seja do tipo chave -fechadura ou induzido. As enzimas são específicas para um substrato e só reagem catalisando uma reação. As enzimas são catalisadores biológicos que aceleram reações bioquímicas nos organismos vivos.É importante notar que somente a absorbância é linearmente proporcional à concentração do meio. [referencia]. e posteriormente em outros fungos. Quando a hidroxila anomérica está abaixo do plano do anel. Sendo assim. Por exemplo. Os produtos da catálise de oxidação de . os outros quatro são centros quirais. A glicose oxidase (Beta-D-glicose:oxigênio 1-oxiredutase. Em solução aquosa. Em sua forma aberta. quando A = 2 apenas 1% da luz incidente é transmitida e quando A = 3 apenas 0.

Ponteira de 100-1000µL. Freqüentemente o peróxido de hidrogênio gerado é aproveitado em outra reação que possa ident ificar o andamento da primeira. peroxidase.glicose oxidase. Amostra de plasma de ovelha. padrão I e II e desconhecido I e II. fenol e tampão TRIS. MATERIAIS y Reagente padrão . Reativo de trabalho resfriado. OBJETIVO Determinar a concentração de glicose em amostras biológicas. Pipetador de 100-1000µL. Nos tubos desconhecido I (D1) e desconhecido II (D2) foram adicionados 20µL da amostra de plasma e 2ml do reativo de trabalho. Esses reagentes são incolores e a reação não pode ser acompanhada por observação a olho nu. Nos tubos padrão I (P1) e padrão II (P2) foram adicionados 20µL do reativo padrão e 2ml do reativo de trabalh o.glicose são peróxido de hidrogênio e um éster cíclico. Cubeta. que depois é hidrolisado em ácido glucônico linear. 4 -aminofenazona. Pipetador de 10-100µL. . Reagente trabalho . y y y y y y y y y y MÉTODOS Os cinco tubos de ensaio foram marcados como branco. Ponteira de 10-100µL. Gelo.solução de glicose de concentração conhecida de 100mg/dL. y y No tubo branco (B) foram adicionados 2 mL do reativo de trabalho. 5 Tubos de ensaio.

Em seguida. Soluções após aquecimento. todos foram homogeinizados e incubados em banho maria a 37ºC por 10 minutos.292 0. Figura 1. Supôs-se que essa mudança era causada pela quantidade de glicose que cada amostra apresentava.366 0. foram dei xados na bancada para esfriar. nos primeiros minutos antes do aquecimento. obtivemos os seguintes dados. de incolor para rosa. pois houve diferença de tom entre mais forte e mais clara (Figura 1).Após as adições. TUBO B P1 P2 D1 D2 ABSORBÂNCIA 0. que foi zerado com a substância do tudo branco.001 0.292 . tanto para a solução padrão como para a desconhecida.330 0. Retirados do banho. foi analisado a absorbância da amostra e do padrão a 505 nm no espectrofotômetro. RESULTADOS E DISCUSSÕES Observou-se que com a adição do reativo padrão as amostras apresentaram mudança na colo ração. Com a análise no espectrofotômetro.

195 e na D2 83. Uma amostra de concentração conhecida é posta no espectrofotômetro e sua absorbância anotada. e é a absortividade da solução analisada. Com esses.Pela Lei de Lambert -Beer. b é a espessura da cubeta que contém a amostra e C é a concentração molar do analito. A = e. Essa razão é a mesma para amostras da mesma solução analisadas na mesma cubeta.C. Isolando ³ e. Então temos A p/Cp = Ad/Cd. onde A é a absorbância.b´ na fórmula. obtemos A/C. podemos determinar as concentrações de duas amostras do mesmo anali to por comparação. A amostra de concentração desconhecida e a absorbância anotada também. determinamos a concentração de glicose que era desconhecida. . obtivemos 84.b.905 mg/dL. na amostra D1.

foi possível atingir o objetivo proposto : determinar o nível de glicose em amostras através de método enzimático.CONCLUSÕES A suposição foi confirmada pelo Espectrofotômetro que acusou a presença de glicose nas amostras que continham plasma sanguíneo. . Usando a metodologia.

Biosensor espectrofotométrico para determinação de glicose . GORE.com. N.br/books?id=ySi_ pbehlOoC>. Acesso em 14 out.. 31ª Reunião Anual da SBQ. UFJF. 2009. Acesso em 14 out.MG.google. M. 1991. J. 2p. Chem.com/2008/08/ espectrofotometria-uv-visivel-seg-sem. Universidade Federal de Goiás. google. Disponível em <http://books. M. E. EVERSE. com. NUPIS. Ed. EVERSE. R. 2000. Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular. Reino Unido: Oxford University Press. (Slides em PDF).wordpress. 533p. University of Maryland. CERQUEIRA. Sociedade Brasileira de Química SBQ. L. CRC Press. Acesso em 15 out. 2009. Department of Chemical and Biomolecular Engineering. Disponível em <http://books. Disponível em<http://www. Glucose assay by dinitrosalicylic colorimetric method. 2009.pdf>. Departamento de Engenharia Química DEQUI . B. Acesso em 15 out.umd. br/books?id=A8gQmQD39UgC>. C. LOPES. 2009. ed. F.revistas.Escola de Engenharia de Lorena EEL/USP. Acesso em 14 out. Disponível em <http://books. 2009. da. Spectrophotometry and spectrofluorimetry.edu/~nsw/ench485/lab4a. Acesso em 10 out. 2009.REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Inst Ci enc Exat. 7.ufg. WHITAKER. 2. Neotrop.php/RBN/article/viewFile/4850/4060>.br/books?id=dCjsBlnQhc4C>.. F. ed.. Rev. Acesso em 10 out. Juiz de Fora. Peroxidases in chemistry and biology. J. 2007. Espectrofotometria UV-visível. 2009. 2. Principles of enzymoloy for the food sciences. GRISHAM. A.br/cdrom/31ra/resumos/T0079 1. C.htm>. R. vol 2. Dept Quim. MATOS. Bio.br/index. K. google..files. Johnson. Disponível em <http://sec. WANG. . CRC Press. K. SILVA. 79.eng.sbq. G. Oxford. L. J. 5. 3. M. V. Disponível em <http://bcortez. 2. Disponível em <http://www. 74 -76 (2002) 4. M.pdf>. M.com. 4(1): 74-75. 6. R. 1994. SOUZA. 8. Determinação amperométrica de glicose em mel usando as enzimas peroxidase e glucose oxidase imobilizadas em reator tubular.org. B.

You're Reading a Free Preview

Descarregar
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->