ESTUDO DIRIGIDO- LABORATRIO DE GENTICA.

1) ta feita 2) ta feita 3) ta feita 4) 5) Hlice dupla destrgira, duas cadeias antiparalelas, bases planas perpendiculares ao eixo, pares A=T e G=C, cada volta completa da hlice mede 3,4 nm, cavidade maior e menor no comprimento da molcula, dimetro da hlice dupla de 2,0 nm. 6) GC= 56% TA= 44% 7) 8) I- O DNA o componente gentico bsico e est presente em todas as clulas do nosso corpo. E ele absolutamente o mesmo nas clulas brancas do sangue, nas clulas da mucosa bucal, nas clulas da raiz do cabelo (bulbo capilar), no smen etc. O teste de paternidade pode ser feito com qualquer tecido que contenha DNA. II- Toda pessoa geneticamente diferente da outra, exceto os gmeos homozigticos (idnticos). Um teste de paternidade robusto e mais completo (com anlise de maior nmero de locos de DNA pela PCR) pode definir a paternidade mesmo havendo parentesco entre a me e o possvel pai ou se houver dvida entre dois supostos pais que so irmos ou meio-irmos, primos ou mesmo pai e filho, tio e sobrinho, av e neto. III- O teste de paternidade pode ser feito em DNA extrado de material exumado, independente do tempo e local de sepultamento, ou da causa da morte. 9) 10) G= 28% T= 22% C= 28% A= 22%

11) 12) 13) 14) FITA SEQUNCIA 15) 16) 17) a) Desnaturao do DNA alvo a ser clonado (90-95C) em fitas simples. b) Anelamento dos iniciadores (entre 50 e 70C) ligao do DNA desnaturado fita simples aos iniciadores (oligonucleotdeos sintticos 15-30 nucleotdeos de extenso). c) Extenso pela polimerase sntese do DNA por uma DNA polimerase termoestvel (Taq- polimerase bactria Thermusaquaticus) em temperaturas entre 70 e 75C. Taq- polimerase estende os iniciadores adicionando nucleotdeos no sentido 5-3; sntese cpia de fita dupla do DNA - alvo. 18) 19) Vantagens: - sensvel e amplifica sequncias especficas DNA de amostras com quantidades muito pequenas de DNA - Pode recuperar e amplificar, c/ iniciadores planejados, amostras de DNA parcialmente degradadas, contaminadas c/ outros materiais ou integradas em matriz (ex.:mbar). Desvantagens: - Necessrio o conhecimento de algumas informaes sobre sequncia nucleotdica do DNA - alvo; - Pequenas contaminaes da amostra c/ DNA de outras fontes podem causar problemas. - necessrio uso paralelo a reao de PCR de controles planejados e adequados. 20) O seqenciamento do DNA o modo definitivo p/ caracterizar uma molcula de DNA clonado ou qualquer DNA, de um clone a um genoma. Permite o entendimento da CAGTATCCTAGGCAT GTCATAGGATCCGTA

organizao genmica e aumenta o conhecimento sobre estrutura, funo e mecanismos de regulao gnica. 21) 22) 23) CGCTTTCATGTCAGCTGTCGAACAGCACGGTGTCCACTCGGATCTCACT CGTGTAAAGGCCCCTGTGCGCTCTCGTGTCAGCTGTCGACAGAC 24) 25) 1- Preparao da amostra protica amostras de protenas provenientes de clulas ou tecidos so preparadas em um tampo de amostra de eletroforese e posteriormente so fervidas. 2- Resoluo ou corrida da amostra por eletroforese em gel para separao de protenas utilizada a poliacrilamida (matriz porosa), cuja concentrao pode variar de acordo com tamanho das protenas analisadas (maiores ou menores). A separao das protenas ocorre mediante a presena de uma soluo condutora de eletricidade (tampo de corrida) e a influncia de um campo eltrico. 3- Transferncia dos polipeptdeos aps a corrida eletrofortica, a protena transferida para uma membrana de nitro celulose ou nylon utilizando o mtodo de transferncia mido (wet) ou semi-seco (semi-dry). 4- Bloqueio de stios de ligao no especficos uma etapa essencial para impedir a adsoro inespecficados reagentes imunolgicos. As solues de bloqueio podem ser proticas (leite em p desnatado ou Albumina Srica Bovina BSA) ou detergentes (Tween20). 5- Adio dos anticorpos essas molculas se ligam as protenas especficas imobilizadas na membrana; pode se utilizar anticorpos primrios marcados (iodine istopo radioativo ou reagentes enzimticos), ou anticorpos primrios no marcados e secundrios marcados. 6- Deteco ou revelao pode ser feita pela presena de radioatividade ou por reagentes enzimticos.