Laboratorio de Espectrometra de Masas

ANALIZADORES DE MASAS
Inmediatamente despus del proceso de ionizacin, los iones en fase gaseosa entran en la regin del analizador, que es la zona del instrumento en donde los iones, dentro del rango de masas seleccionado, son separados en base a su relaccin masa/carga. Esta parte del instrumento juega un importante papel en cuanto a la precisin y exactitud de las masas a medir. Los iones son aqu separados por campos magnticos, elctricos, de radiofrecuencia, combinaciones de varios de ellos, o por medida del tiempo de desplazamiento de los iones a lo largo de una distancia fijada previamente. Las propiedades fsicas en que se basan los analizadores para medir las masas estn relaccionadas con laaccin que ejerce un campo magntico, elctrico, de radiofrecuencia o combinaciones de varios de ellos sobre una partcula cargada . Las modificaciones introducidas en su energa cintica , velocidad de desplazamiento, frecuencia de resonancia inducida, etc, son las claves para el entendimiento de los procesos de separacin de los iones. Los analizadores mas ampliamente utilizados hoy da son los siguientes:

-Analizador de Cuadrupolo
El analizador de cuadrupolo consiste en cuatro rodillos paralelos a los que se aplica una corriente contnua (DC) sobre la que se superpone un potencial de radiofrecuencia (RF). El campo creado en los rodillos acta a modo de filtro y determina que iones alcanzarn el detector. Los iones, en esta regin de campo variable, oscilarn dependiendo del campo de radiofrecuencia aplicado asi como de su relacin masa/carga, por lo que solo determinados iones alcanzaran el detector. De este modo, un espectro de masas se conseguir barriendo (scanning ) el campo RF dentro de un rango de frecuencias. El analizador de cuadrupolo es uno de los mas extendidos hoy da.A su relativa sencillez se une una alta tolerancia a vacos relativamente pobres, rango de masas de hasta 3000 Da que le hace muy adecuado para ser acoplado a interfases de cualquier tipo, incluida la ESI, para el anlisis de protenas y biomolculas y lo que es mas importante, su relativo bajo costo. Su principal desventaja es la imposibilidad de realizar anlisis de alta resolucin, masas exactas,etc, as como su limitacin en cuanto a rango de masas.

-Trampa Inica (Quadrupole Ion Trap)

Concebido al mismo tiempo que el analizador de cuadrupolo y por la misma persona (Wolfgang Paul, Premio Nbel ) su fsica es muy similar. Los iones generados en la fuente son atrapados, durante un cierto tiempo, en un campo de radiofrecuencia dentro de un anillo toroidal situado entre dos electrodos hiperblicos. Mediante la aplicacin simultanea de corrientes DC y RF se consigue atrapar y mantener dentro del anillo central los iones procedentes de la fuente de iones. Una vez all, dichos iones pueden ser extrados a voluntad aplicando corrientes de radiofrecuencia variables hasta valores de resonancia y expulsados a traves del anillo de salida. La posicin de los anillos exteriores puede ser modificada para una mayor eficiencia de transmisin. Un espectro de masas completo se obtiene mediante el barrido de un rango de radiofrecuencia determinado. Las trampas inicas tienen usos y utilizaciones similares a los cuadrupolos y est muy extendido su uso como detectores de masas en sistemas CGEM. Otra aplicacin muy extendida es la posibilidad de utilizarlos en la tcnica de masasmasas (MSn), puesto que permite la extraccin de iones individuales (Parents Ions) que posteriormente pueden ser fragmentados para anlisis estructural ( Daughter Ions)

-Analizadores de Sector Magntico y Doble enfoque

Los analizadores de sector magntico y doble enfoque se basan en el efecto que sobre una partcula cargada tienen un campo elctrico y un campo magntico. El primero, acta sobre el haz de iones a modo de filtro energtico y es independiente de la masa del in o de su relaccin masa/carga. Mediante este analizador se consigue colimar los haces inicos que emergen de la fuente en haces monoenergticos uniformes. Una vez conseguido esto, estos haces inicos son dirigidos a la entrada de un campo magntico sectorial . El campo magntico sirve para separar los iones en base a su masa/carga y el radio de curvatura descrito por ellos es una funcin del campo magnetico (B) aplicado. Este campo magntico es generado por una corriente de intensidad variable. Solo aquellos iones cuyo radio de curvatura descrito coincida con el del sector magnetico alcanzarn el detector. Un espectro de masas se consigue variando la intensidad (I) aplicada al electroimn. Se consigue asi, mediante la combinacin de estos dos sectores, un incremento del poder de resolucin considerable, en contraposicin al pobre poder de resolucin de sistemas con solo sector magntico. Resoluciones del orden de 10.000 pueden ser obtenidas casi en trabajos de rutina en los modernos instrumentos. Valores de resolucin de entre 30.000 y 50.000 son posibles en condiciones ptimas de trabajo.

-Analizador de Transformada de Fourier (FTMS)

El analizador de Transformada de Fourier esta basado en la accin que un campo magntico ejerce sobre una partcula cargada (in) girando en un campo de radiofrecuencia. Mediante el primero, los iones son dirigidos al interior de una caja donde giran decribiendo una orbita de dimetro reducido y mnima frecuencia. Por aplicacin de una seal de radiofrecuencia (RF) los iones son excitados a describir rbitas espirales de amplitud creciente. Llega un momento en que la orbita descrita es tal que alcanza el dimetro igual a la distancia de separacin de dos electrodos detectores, momento en el cual son detectados originando una imagen de corriente, que es funcin directa de su relaccin masa/carga. Esta imagen de corriente es integrada mediante una transformada de Fourier y convertida en una seal proporcional a su intensidad. El espectro completo se obtiene mediante un barrido del campo de radiofrecuencia aplicado que varia entre 8 KHz y 100 MHz. La principal ventaja de este tipo de instrumentos esta en la altsima precisin en la medida de masas ( 0.001 % y superiores) y un poder de resolucin casi ilimitado.Por el contrario, el nivel de vaco es un parmetro crtico y su costo es muy elevado.

-Analizador de Tiempo de Vuelo (Time of Flight)

El analizador de tiempo de vuelo es, en cuanto a fundamento, uno de los analizadores mas simples de los que se utilizan hoy en da. Se basa en la medida del tiempo que tardan los iones generados y acelerados con igual energa en la fuente de iones,en alcanzar un electrodo colector situado a una distancia prefijada. Como los iones poseen la misma energa pero diferentes masas alcanzarn el colector a diferentes tiempos, dependiendo de su masa, carga y energa cintica. En el pasado, y debido a las limitaciones de tipo electrnico y de software, su uso fue muy limitado debido a su escaso poder de resolucin y rango de masas. No es de extraar que durante aos este analizador estuviera poco menos que olvidado. Sin embargo, en la ltima dcada, y debido precisamente a los enormes avances en el campo de la microelectrnica y el software ha recibido un increble impulso,hasta el punto de que actualmente, junto con los analizadores de cuadrupolo, es el analizador ms ampliamente utilizado

-Analizadores combinados (Tandem Mass Spectrometry)

Los analizadores combinados se utilizan de forma generalizada para anlisis de estructuras, ya que mediante ellos y en combinaciones adecuadas se pueden hacer experimentos de fragmentacion ( MS de grado n=1, 2, 3, etc.) As por ejemplo, se puede situar un analizador magnetico (MS1), y a continuacin situar un analizador de trampa inica para ver los iones hijo que proceden de un ion padre extraido del primero (MS2). A continuacin un in de este segundo experimento puede ser fragmentado de nuevo por colisin ,obtenindose un nuevo espectro (MS3), etc. Las combinaciones mas usuales suelen estar formadas por combinaciones de analizadores del tipo: cuadrupolo - cuadrupolo sector magntico cuadrupolo sector magntico-sector magntico sector magntico trampa inica cuadrupolo tiempo de vuelo