OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS PRCTICA 3 INTRODUCCIN Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito

aproximadamente 500.000, pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones de especies) que presentan una amplia distribucin en la naturaleza, contribuyendo a la descomposicin de la materia orgnica (Figura 1) y participando en los ciclos biolgicos. Un pequeo nmero son patgenos de animales y plantas. Figura 1. Estructura de Hongos estructuras para la degradacin de materia orgnica. Inicialmente, los hongos fueron clasificados dentro del Reino Plantae ya que fueron considerados organismos inmviles presentando estructuras que se asientan firmemente en el sustrato sobre el que crecan. Sin embargo, cuando se ha aplicado la biologa molecular en los estudios taxonmicos se ha observado que los hongos estn ms prximos al Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificacin de los seres vivos en cinco reinos, los hongos se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que se divide en cuatro Phyla denominados Ascomycota (el ms extenso que comprende el 50% de los hongos conocidos y aproximadamente el 80% de los hongos patgenos, Basidiomycota, Zygomycota, y Chytridiomycota, encontrndose en los tres primeros los hongos patgenos humanos. Los hongos en los que no se conoce su reproduccin sexual, constituyen un grupo heterogneo denominado Deuteromicetos, hongos imperfectos o mitospricos, que representa el segundo grupo ms numeroso y que tambin incluye patgenos humanos. Los hongos son organismos eucariotas tpicos (Figura 2) y poseen un ncleo que contiene varios cromosomas (siete en Candidaalbicans, ocho en Aspergillus nidulans y diecisis en Saccharomycescerevisiae) delimitado por una membrana nuclear, con nuclolo rico en ARN y orgnulos citoplsmicos, como mitocondrias, vacuolas, retculo endoplsmico, aparato de Golgi y ribosomas 80 S. El citoplasma se encuentra limitado por la membrana citoplsmica, que es una doble capa de lpidos que contiene protenas y esteroles y que controla la permeabilidad celular y participa en la sntesis de la pared celular. La estructura de las clulas de los hongos es muy diferente de la de las bacterias que son organismos procariotas. Aunque comparten muchas estructuras, las clulas de los hongos se diferencian de las de las plantas en la composicin de la pared celular y en que carecen de cloroplastos y clorofila, y de las humanas en que tienen pared celular y en la presencia de ergosterol en la membrana citoplsmica. Por el exterior de la membrana citoplsmica, presentan una pared celular que est compuesta fundamentalmente por polisacridos y por diversas protenas. Los polisacridos ms importantes son la quitina (polmero de n-acetil glucosamina), el manano (polmero de manosa) y el glucano (polmero de glucosa). Los hongos presentan bsicamente dos tipos de morfologas: una multicelular denominada filamentosa y otra unicelular denominada levaduriforme. Los hongos filamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento ms tpico de los hongos microscpicos. En medios de cultivo slidos y tambin sobre cualquier superficie en la que se desarrollen, por ejemplo frutas u otros alimentos, producen colonias algodonosas o pulverulentas que son muy caractersticas. Al microscopio ptico, los hongos filamentosos presentan unas estructuras tubulares, formadas por mltiples clulas, que se denominan hifas. Los hongos obtienen los nutrientes por absorcin y tienen un metabolismo quimiohetertrofo, ya que obtienen la energa y el carbono de compuestos orgnicos sintetizados por otros organismos. Este hecho condiciona su modo de vida, ya que en la naturaleza se encuentran asociados a la materia orgnica en descomposicin, participando en los ciclos naturales de reciclado del carbono y otros elementos naturales o Bial - Arstegui 3 4 RevIberoamMicol 2002 como patgenos oportunistas de los animales y plantas. Los hongos pueden degradar una gran cantidad de componentes, para lo que disponen de potentes exoenzimas que en algunos casos pueden servirles como factores de virulencia en el hospedador. En el laboratorio, los hongos crecen fcilmente en la mayora de los medios de cultivo, necesitando una fuente de carbono orgnica e iones amonio o nitrato como fuentes de nitrgeno. Esta facilidad para crecer en cualquier medio de cultivo y la presencia de conidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el laboratorio. Los hongos filamentosos son aerobios y los levaduriformes anaerobios facultativos. Sus requerimientos de temperatura y de pH son poco exigentes y la mayora crecen en un rango de pH de 2 a 9 y a temperaturas entre 10 y 40 C. La mayora de los hongos presentan reproduccin sexual y asexual. El estado sexual se denomina teleomorfo o meiosprico y el asexual anamorfo o mitosprico. Es relativamente comn que un mismo hongo tenga dos nombres, el del estado anamorfo y el del estado teleomorfo, ya que suelen haberse descubierto y nombrado de forma independiente. En un grupo importante de hongos solamente se conoce la reproduccin asexual, bien porque no se conocen las condiciones adecuadas para que se desarrolle la forma sexual o porque sta se ha perdido a lo largo de la evolucin. Aunque la reproduccin asexual puede lograrse por fragmentacin de las hifas, ya que cada fragmento puede producir una nueva colonia, normalmente los hongos se reproducen, tanto sexual como asexualmente, por medio de esporas. Los hongos producen millones de esporas, cada una con la capacidad para desarrollar una

nueva colonia. Las esporas sexuales se producen tras la fusin de los ncleos de dos hifas sexualmente compatibles o de dos levaduras y posterior meiosis. La morfologa de las esporas sexuales es muy variada y tiene gran inters para la identificacin fngica, ya que presentan diferencias caractersticas.

OBJETIVOS 1. 2. 3. Conocer procesos de preparacin en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de hongos Observar la morfologa de los hongos y distinguir las diferentes estructuras que presenta. Diferenciar los diferentes tipos de hongos segn su origen y materia orgnica que pueden degradar

Una semana antes de realizar el laboratorio se debern cultivar hongos, los cuales sern observados en el laboratorio. En diferentes frascos de vidrio de plstico o vidrio de boca ancha, colocar los siguientes materiales: a) un trozo de pan de marca o de panadera, b), un trozo de tomate, papaya u otros alimentos en descomposicin. Dejar la caja a la intemperie un da en un lugar sombreado y despus taparla. Colocar los frascos de preferencia en un lugar fresco por cinco das y llevarla posteriormente al laboratorio. Materiales y y y y y y y y y y y y y y Microscopio Agujas de diseccin Solucin salina al 1% Gotero Pinza de punta roma Lugol Cajas de Petri Azul de metileno Portaobjetos Cubreobjetos Cuchilla-bistur Muestras de hongos Cinta transparente Champin

Procedimiento en el laboratorio -Abrir los frascos y separa los diferentes productos colocndolos en una caja de Petri. -Empleando el estereoscpico, observa cada uno de los productos y describe la apariencia que tienen los mohos o pelusas que se observan sobre ellos, as como las manchas que aprecies sobre los mismos. -En el cuadro que se presenta en la seccin de resultados debers indicar que olor despiden los diferentes productos: si es azucarado, picante como vinagre, rancio, ftido, etc. Estas observaciones son subjetivas. Igualmente debers indicar el color de los mohos, manchas o pelusas, si se ve como polvo o como gelatina. -Una vez descritos los productos observados con el estereoscpico, realizar una serie de preparaciones temporales y observar con el microscopio compuesto la estructura microscpica que presentan, aadir una gota de colorante y describir la estructura que logra identificar. Elaborar los esquemas representativos de las observaciones y anxala a este reporte. En caso de no observar hifas, conidiforos o esporangiforos seala las caractersticas de forma y color que presentan conidisporas y esporangisporas. -Respecto al champin, realizar con un bistur un corte lo ms fino posible tanto en la cabeza del hongo como de su talo o estpite, colocarlo en el porta objeto, aadir una gota de azul de metileno, describir a travs de un

esquema las estructuras que observa.

-Tcnica cinta adhesiva: colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro. Una vez concluidas las observaciones trata de agrupar a los hongos observados de acuerdo a las caractersticas comunes. Completar en el siguiente cuadro y gua. Sustrato o alimento Olor que despide Apariencia de las colonias Estructuras observadas

Cuestionario 1. En qu consisten las diferencias que presentan los hongos encontrados o desarrollados en los distintos materiales? 2. Qu origen tienen olores que despiden los diferentes alimentos? Sealar si stos pueden indicar cul sustancia o compuesto degradan los hongos 3. Tras realizar las observaciones con el microscopio compuesto, qu estructuras se pueden identificar en los organismos observados. 4. Con base en las caractersticas observadas en los diferentes organismos, Cmo se clasifican los organismos observados? 5. Realizar un esquema con las divisiones del reino hongo o fungi.