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1 FUNDAMENTAO TERICA PORTARIA N. 518, DE 25 DE MARO DE 2004. Estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de potabilidade, e d outras providncias. NORMA DE QUALIDADE DA GUA PARA CONSUMO HUMANO CAPTULO II DAS DEFINIES Art. 4. Para os fins a que se destina esta Norma so adotadas as seguintes definies: I - gua potvel gua para consumo humano cujos parmetros microbiolgicos, fsicos, qumicos e radioativos atendam ao padro de potabilidade e que no oferea riscos sade; II - sistema de abastecimento de gua para consumo humano instalao composta por conjunto de obras civis, materiais e equipamentos, destinada produo e distribuio canalizada de gua potvel para populaes, sob a responsabilidade do poder pblico, mesmo que administrada em regime de concesso ou permisso; III - soluo alternativa de abastecimento de gua para consumo humano toda modalidade de abastecimento coletivo de gua distinta do sistema de abastecimento de gua, incluindo, entre outras, fonte, poo comunitrio, distribuio por veculo transportador, instalaes condominiais horizontais e verticais; IV - controle da qualidade da gua para consumo humano conjunto de atividades exercidas de forma contnua pelo(s) responsvel(is) pela operao de sistema ou soluo alternativa de abastecimento de gua, destinadas a verificar se a gua fornecida populao potvel, assegurando a manuteno desta condio; V - vigilncia da qualidade da gua para consumo humano conjunto de aes adotadas continuamente pela autoridade de sade pblica, para verificar se a gua consumida pela populao atende a esta Norma e para avaliar os riscos que os sistemas e as solues alternativas de abastecimento de gua representam para a sade humana; VI - coliformes totais (bactrias do grupo coliforme) bacilos gram-negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de esporos, oxidase-negativo, capazes de

desenvolver na presena de sais biliares ou agentes tensoativos que fermentam a lactose com produo de cido, gs e aldedo a 35,0 0,5C em 24-48 horas, e que podem apresentar atividade da enzima -galactosidase. A maioria das bactrias do grupo coliforme pertence aos gneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella e Enterobacter, embora vrios outros gneros e espcies pertenam ao grupo; VII - coliformes termotolerantes subgrupo das bactrias do grupo coliforme que fermentam a lactose a 44,5 0,2C em 24 horas; tendo como principal representante a Escherichia coli, de origem exclusivamente fecal; VIII - Escherichia coli bactria do grupo coliforme que fermenta a lactose e manitol, com produo de cido e gs a 44,5 0,2C em 24 horas produz indol a partir do triptofano, oxidase negativa, no hidrolisa a ureia e apresenta atividade das enzimas -galactosidase e -glucoronidase, sendo considerado o mais especfico indicador de contaminao fecal recente e de eventual presena de organismos patognicos;

MEIO DE CULTURA Caldo Lauril Sulfato Triptose Aplicao: Meio para determinao de coliformes pelo mtodo dos tubos mltiplos, teste presuntivo (SILVA, 2005). COMPOSIO TRIPTOSE___________________________20,0 g LACTOSE____________________________5,0 g FOSFATO MONOPOTSSICO___________2,75 g FOSFATO DIPOTSSICO______________2,75 g NaCl________________________________5,0 g LAURIL SULFATO TRIPTOSE___________0,1 g GUA DESTILADA____________________1 L pH 6,8 0,2 121C/15 min Fonte: SILVA, 2005

TCNICA DOS TUBOS MLTIPLOS A tcnica de tubos mltiplos um mtodo de anlise quantitativo que permite determinar o Nmero Mais Provvel (NMP) dos microorganismos alvo da amostra, atravs da distribuio de alquotas em uma srie de tubos contendo um meio de cultura diferencial para crescimento dos microorganismos alvo. A determinao do nmero de microorganismos baseada no princpio de que, uma amostra lquida, pode ser separada por agitao, resultando numa suspenso em que as clulas estejam uniformemente distribudas. A combinao de tubos com crescimento positivo ou negativo, aps a incubao permite estimar, por clculo de probabilidade, a densidade original dos microorganismos na amostra (SILVA, 2005).

TECNOLOGIA DE SUBSTRATO DEFINIDO O Colilert utiliza tecnologia de substrato definido [Defined Substrate Technology (DST)] para deteco de coliformes totais e E. coli em gua. medida que os coliformes se reproduzem no Colilert, eles utilizam -galactosidase para metabolizar o indicador de nutriente ONPG e alter-lo de incolor para amarelo. O E. coli utiliza -glucuronidase para metabolizar MUG e criar fluorescncia. J que a maioria dos no coliformes no conta com estas enzimas, eles no podem se reproduzir e interferir. Os poucos no coliformes que tm estas enzimas so seletivamente suprimidos pela matriz especificamente formulada do Colilert. Esta abordagem diminui a incidncia de falso-positivos e falso-negativos.

Figura 1: reao cromognica e fluorognica Fonte: IDEXX, 2011.

2 OBJETIVO

Este

relatrio

tem por objetivo analisar, detectar

e quantificar a

presena/ausncia do Grupo Coliforme seja eles, Termotolerantes ou Totais em uma amostra de gua Mineral envasada da Marca gua Crim utilizando a tcnica do nmero mais provvel (NMP) e pelo mtodo americano Colilert Tecnologia do Substrato Definido (TSD).

3 MATERIAIS E REAGENTES

MATERIAIS

Estufa para crescimento microbiano (BOD); Saco estril coletor para amostra; Estantes para tubos de Ensaio; Capela de Fluxo Laminar; Proveta de 100 mL; Tubos de Duhram; Tubos de Ensaio; Pipetas Graduadas; Papel Madeira; Barbante; Erlenmeyer; Autoclave; Banho Maria; Pera.

REAGENTES

Caldo Lauryl Sulfato Triptose (LST); gua mineral.

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4 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

MTODO DO NMP SRIE DE 5 TUBOS PREPARO DO MEIO DE CULTURA Caldo LST Com Concentrao Tripla Pesou-se 5,87 g de LST slido e homogeneizou-se em 55 mL de gua destilada, aqueceu-se para melhor diluio do slido. Clculo LST 35,60 g --------------------------- 1000 mL de gua 3 X--------------------------------- 55 mL de gua X = 5,87 g de LST slido ESTERILIZAO Transferiu-se o caldo LST com concentrao tripla para 5 tubos de ensaio, em seguida esterilizou-se na estufa por 15 minutos 121C juntamente com as pipetas, os tubos de ensaio e Erlenmeyeres. INOCULAO 1 ETAPA: TESTE PRESUNTIVO Higienizou-se a capela de fluxo laminar com lcool 70%, Transferiu-se a amostra da garrafa de gua mineral para uma proveta de 100 mL, Pipetou-se 20 mL da amostra de gua e transferiu-se para cada tubo contendo 10 mL de caldo LST com concentrao tripla homogeneizou-se, sendo 5 amostras para o teste presuntivo com tubos de Duhram invertido. Em seguida incubou-se a 35C por 24-48 horas.

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Figura: Caldo LST e amostra 2 ETAPA: CONFIRMATIVO 2.1 Coliformes Totais Adiciona-se 1 mL das amostras com resultado positivo em quantidades de tubos de ensaio referente a quantidade de tubos positivos contendo 9 mL de caldo Verde brilhante. Incuba-se a 35C por 24-48h.

Figura: Caldo Verde Brilhante e amostra 2.2 Coliformes termotolerantes (E. COLI) Adiciona-se 1 mL das amostras com resultado positivo em quantidades de tubos de ensaio referente a quantidade de tubos positivos contendo 9 mL de caldo EC. Incuba-se a 35C por 24-48h.

Figura: Caldo EC e amostra

MTODO AMERICANO COLILERT TECNOLOGIA DO SUBSTRATO DEFINIDO Coletou-se 100 mL da amostra em um saco estril, em seguida adicionou-se o contedo de uma ampola contendo quantidade pr-distribuda do meio de cultura, disponvel comercialmente e j esterilizado. Incubou-se a 35C por 18 horas.

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5 RESULTADOS E DISCURSSES Aps o perodo de 48h depois da incubao no ocorreu formao de gs indicando resultado negativo para o teste presuntivo de coliformes. Porm para um resultado confivel e conclusvel necessrio realizao do teste em triplicata. Com o resultado negativo do teste presuntivo no foi necessrio realizao do teste confirmativo. O mtodo americano aps 18 horas mostrou-se negativo, confirmando o

resultado negativo do teste presuntivo com LST.

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6 CONCLUSO

Com este experimento foi possvel concluir que a gua mineral analisada atende aos parmetros microbiolgicos de potabilidade e que no oferece riscos sade, o que foi confirmado pelos mtodos do NPM e Colilert com o resultado negativo para presena de coliformes, porm para um resultado mais confivel ou para que se possa emitir um laudo necessrio realizao do teste em triplicata.

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7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Brasil. Ministrio da Sade. Secretaria de Vigilncia em Sade. Coordenao-Geral de Vigilncia em Sade Ambiental. Portaria MS n. 518/2004 / Ministrio da Sade, Secretaria de Vigilncia em Sade, Coordenao- Geral de Vigilncia em Sade Ambiental Braslia: Editora do Ministrio da Sade, 2005. 28 p. (Srie E. Legislao em Sade). Disponvel em: < http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/portaria_518_2004.pdf > Acesso: 17 de junho de 2011. SILVA, N., et al. Manual de mtodos de anlise microbiolgica da gua. So Paulo: livraria Varela, 2005. Mtodo 2011. SANTANA, A. S., et al. Qualidade Microbiolgica de guas Minerais, 2007. Colilert: Tecnologia de Substrato Definido. Disponvel em: <

www.idexx.compubwebresourcespdfen_uswater6406300l.pdf> Acesso: 17 de junho de