Universidade Federal do Par Faculdade de Biotecnologia Biotecnologia aplicada Reproduo Animal Prof. Dr.

Moyss dos Santos Miranda

DIAGNSTICO GENTICO PR-IMPLANTAO

C. Leonardo Arajo Luciana Paradela

Diagnstico gentico pr-implantao (DPI)

O que ?
 uma tcnica utilizada para identificar defeitos genticos em embries criados atravs de Fertilizao In Vitro (FIV) antes da implantao no tero;  Permite verificar se existe alguma alterao no nmero ou estrutura dos cromossomos, o sexo do embrio, a existncia de alguma mutao especfica responsvel por uma doena gentica;  Alternativa ao diagnstico ps concepo atual para casais que esto em risco de transmisso de uma doena gentica grave;

Processo - DPI

 Meio de preveno de doenas genticas hereditrias, eliminando o dilema de interrupo da gravidez aps o diagnstico pr-natal desfavorvel.

Indicaes para o diagnstico gentico pr-implantao

 Recomendado quando os casais esto em risco de transmisso de uma anormalidade gentica conhecida para seus filhos;
Esta informao ajudar os pais a escolher quais embries eles querem -. E que a rejeitam como insalubre, ou simplesmente indesejveis (Zitner 2002)

Implantao no tero

Candidatos primrios para DPI

 Casais com histria familiar de doenas ligadas ao X;  Casais com translocaes cromossmicas;  Portadores de doenas autossmicas recessivas;  Portadores de doenas autossmica dominante.

Candidatos primrios para DPI

 Doenas ligadas ao cromossomo X

Risco de 25% de ter um embrio afetado

Candidatos primrios para DPI

 Translocaes cromossmicas

Falhas na implantao, abortos repetitivos, problemas mentais e fsicos.

Candidatos primrios para DPI

 Doenas autossmicas recessivas

Risco de 25% de ter um embrio afetado

Candidatos primrios para DPI

 Doenas autossmicas dominante

Risco de 50% de ter um embrio afetado

Condies diagnosticadas atravs do DPI

(1) doenas ligadas ao sexo; (2) defeitos de um nico gene; (3) desordens cromossmicas

Condies diagnosticada atravs DPI

(1) Doenas ligadas ao sexo:
 Recessivo hemofilia; sndrome do X frgil; distrofia neuromuscular.  Dominante sndrome de Rett; incontinncia pigmentar; raquitismo

Condies diagnosticada atravs DPI

(2) defeitos de um nico gene:
fibrose cstica, doena de Tay-Sachs, anemia falciforme e doena de Huntington; Deteco com da tcnica molecular utilizando a Reao em Cadeia da Polimerase (PCR); Alguns defeitos possuem vrias mutaes associadas; PGD pode identificar mutaes genticas que no causam doenas, mas aumenta o risco de um conjunto de doenas. Ex: BRCA1

Condies diagnosticada atravs DPI

(3) desordens cromossmicas:
Rearranjos Cromossmicos, como translocaes, inverses e delees; Deteco por Hibridizao Fluorescente in Situ (FISH);

Testes genticos
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) Hibridizao Flourescente in Situ (FISH)
Hibridizao Genmica Comparativa (CGH)

Reao em Cadeia da Polimerase (PCR)

 Utilizada para diagnstico de defeitos de um nico gene, incluindo doenas dominantes e recessivas;  Maneira rpida e eficiente de teste de DNA.

Requer uma alta qualidade da amostra de DNA, difcil de se obter de uma nica clula, como um corpo polar ou um blastmero; Contaminao paterna (excesso de espermatozides) e contaminao materna (clulas do cmulus); Erros podem gerar transferncia de um embrio afetado ou descarte de um normal.

Hibridizao Flourescente in Situ (FISH)

 Sondas de DNA marcadas com fluorescncia para detectar anomalias cromossmicas como micro delees e rearranjos cromossmicos complexos;  Utilizado para determinao do sexo, doenas ligadas ao X, anormalidades cromossmicas e deteco de aneuploidias;  Pode ser utilizado em cromossomos interfsicos, diferente da cariotipagem.

Anormalidades dos cromossomos 13, 18 e 21. Fluorescncia mltiplas hibridizao in situ demonstrando cromossomos 13 (triplide), 18, 21 e Y.

 PCR categoriza o seguinte:

Defeitos genticos nicos na doena autossmica; Defeitos genticos nicos da infertilidade masculina; Identificao de sexo em doenas ligadas ao X.

 FISH categoriza o seguinte:

Aneuploidia em mulheres em idade materna avanada; Aneuploidia para a infertilidade masculina; Identificao de sexo em doenas ligadas ao X; Abortos recorrentes causadas por translocaes dos pais.

FISH preferido porque a PCR assume o risco de diagnsticos equivocados causada por contaminao.

Hibridizao Genmica Comparativa (CGH)

 Anlise de FISH permite a avaliao precisa de apenas 7-9 cromossomos  Permite a enumerao de todos os 23cromossomos  Consiste na marcao do ncleo com um corante fluorescente e uma clula de controle marcado com uma outra cor  Quadro detalhado de todo o comprimento do cromossomo que pode detectar desequilbrio de segmentos cromossmicos.

Mtodos para a obteno de embries

 Fertilizao in vitro (FIV);

 Injeo intracitoplasmtica de espermatozide (ICSI)

Procedimentos de Bipsia
 Corpsculo Polar  Blastmero  Blastocisto
 Abertura da Zona Pelcida  Retirada da clula

Bipsia de Corpsculo Polar

Primeiro corpsculo polar: Ocito maturado Segundo corpsculo polar: Fertilizao Deteco de doenas monognicas e translocaes de origem materna

Bipsia do Blastmero
Preferncia por zigotos de 8 clulas Contedo gentico dos pais pode ser analisado Blastomero TOTIPOTENTE

Bipsia de Blastocisto
Maior quantidade de material disponvel Retirada de clulas do trofoblasto No prejudicial ao desenvolvimento embrionrio

Existe a preferncia pela ICSI, pois a FIV pode apresentar problemas durante a anlise dos resultados

Consideraes e Desafios do Diagnstico gentico pr-implantao

Devido a limitaes inerentes, como a presena de mosaicismo, recomendvel que os pacientes se comprometam com o diagnstico pr-natal, mesmo aps a realizao do DPI; Remoo de uma nica clula sem quebr-lo ou causar srios danos tecnicamente difcil e requer habilidade e experincia. Danos ao embrio (projetado para ser de 0,1%) pode ocorrer acidentalmente durante a remoo da clula; A metodologia de diagnstico para uma nova doena um processo demorado e caro;

Consideraes e Desafios do Diagnstico gentico pr-implantao

Um nmero relativamente grande de ocitos ou embries encontrados podem ser anormais, deixando apenas alguns ou nenhum embrio saudvel para transferncia; Para triagem aneuploidia, nem todas as anormalidades cromossmicas ou genticas podem ser diagnosticadas com DPI porque apenas um nmero restrito de cromossomos podem ser examinados de uma s vez durante o curso de um procedimento nico; Alguns distrbios de um nico gene podem no ser passveis de DPI devido a uma variedade de mutaes que podem resultar em uma doena gentica especfica (como, fibrose cstica). Casais devem realizar testes especficos a fim de gerar "sondas" para o teste. O processo de gerao de sondas moleculares pode levar vrias semanas.

Vantagens
A tecnologia disponvel pode ajudar a eliminar algumas doenas genticas no futuro; Opo de prevenir a doena espera de uma possvel cura; O DPI evita uma deciso de aborto, difcil e muitas vezes traumtica, especialmente em gravidez avanada; Casais com alto risco de doenas genticas possuem a oportunidade de ter uma criana livre de sua doena particular;

A tecnologia tem feito todos os tipos de coisas possveis que eram impossveis ou inimaginveis em uma idade mais precoce. Todas essas coisas devem ser realizadas na prtica? Esta a questo mais geral de tica a ser feita ...
Baronesa Mary Warnock

tica

Obrigado