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Bioclin

TRANSAMINASE TGO
K034
INSTRUES DE USO
FINALIDADE Mtodo para a determinao da transaminase oxalactica (AST ou TGO). Teste colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO Metodologia: Reitmamm e Frankel A transaminase catalisa a transferncia do grupamento amino de um alfa-aminocido para um alfa-cetocido. L-aspartato + Alfa-cetoglutarato L-glutamato + oxalacetato. O oxalacetato reage com a dinitrofenilhidrazina. A intensidade de colorao da hidrazona formada, em meio alcalino, diretamente proporcional quantidade de oxalacetato, em determinado tempo, que, por sua vez, funo da atividade enzimtica. REAGENTES Nmero 1 - Substrato de TGO ou AST - Conservar entre 2 e 8C. Contm: tampo fosfato 0,1 mol/L pH 7,4, cido L asprtico 0,153 mol/L, cido alfa cetoglutrico 2 mmol/L e azida sdica 7,7 mmol/L. Nmero 2 - Reagente de Cor - Conservar entre 2 e 8 C. Contm: 2,4-dinitrofenilhidrazina 1,0 mmol/L e cido clordrico 1,0 mol/L. Nmero 3 - Hidrxido de Sdio Concentrato - Conservar entre 2 e 8 C. Contm: hidrxido de sdio 5 mol/L. Nmero 4 - Padro - Conservar entre 2 e 8 C. Homogeneizar bem antes de usar. Contm: piruvato de sdio 2,53 mmol/L, tampo fosfato 0,1 mol/L ph 7,4 e azida sdica 7,7 mmol/L. APRESENTAO REAGENTES VOLUME Embalagem TGO Reagente N 1 ...................... 50 mL Reagente N 2 ...................... 50 mL Reagente N 3 ...................... 40 mL Reagente N 4 ........................ 4 mL EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotmetro ou colormetro, banho-maria (37 C), relgio ou cronmetro, pipetas, tubos de ensaio, papel monolog ou milimetrado. Encontram-se no mercado especializado de artigos para Laboratrios de Anlises Clnicas. CONDIES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C. O transporte, em temperaturas entre 15 e 30 C, no dever exceder a 72 (setenta e duas) horas. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade. CUIDADOS ESPECIAIS 1 - Somente para uso diagnstico in vitro; 2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos; 3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes; 4 - Apesar dos substratos conterem um preservativo devem-se evitar contaminaes bacterianas; 5 - Devido a maior concentrao de TGO nas hemcias, a hemlise prejudica o teste, fornecendo resultados falsamente elevados; 6 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de biossegurana, de acordo com a legislao vigente; 7 - Manusear com cuidado os reagentes N 1 e N 4, que contm azida sdica, pois so irritantes para pele e mucosas; 8 - O Reagente N 3 custico; evitar contato com a pele. O Reagente N 2 contm cido e deve ser manipulado com cuidado, pois irritante para pele e mucosas, podendo causar queimadura leve. AMOSTRAS Soro ou plasma (colhido com heparina ou EDTA). O analito estvel 4 dias entre 2 e 8 C e 2 semanas 10 C negativos. DESCRIO DO PROCESSO PREPARO DO HIDRXIDO DE SDIO DE USO (0,4 N): Transferir quantitativamente o contedo do frasco N 3 (40 mL) para um balo volumtrico de 500 mL e completar at a marca com gua destilada ou deionizada livre de CO2. Homogeneizar bem e armazenar em frasco plstico. Estvel em temperaturas entre 15 e 30 C. Curva de Calibrao No usar o mtodo do fator para as dosagens de TGO, pois as absorbncias no so diretamente proporcionais a atividade enzimtica. Preparar com bastante rigor a curva de calibrao descrita abaixo: Tubo 1 2 3 4 5 Padro --100 L 200 L 300 L 400 L Substrato de TGO 1,0 mL 0,9 mL 0,8 mL 0,7 mL 0,6 mL gua dest. 200 L 200 L 200 L 200 L 200 L TGO U/mL 0 24 61 114 190

Adicionar a cada tubo 1,0 mL de Reagente de Cor N 2, homogeneizar e deixar em repouso por 20 minutos temperatura ambiente. Opcionalmente, este tempo pode ser reduzido para 5 minutos, incubando em banho-maria a 56 C. Adicionar 10,0 mL de hidrxido de sdio de uso (0,4 N). Homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. A cor permanece estvel por 60 minutos. Determinar as absorbncias ou transmitncias em 505 nm (490-540), acertando o zero com gua destilada ou deionizada. Traar a curva de calibrao, colocando na ordenada os valores de absorbncia (papel milimetrado) ou transmitncia (papel monolog), e na abcissa, os valores de unidades/mL. TCNICA Marcar os tubos de ensaio para dosagem da TGO e proceder como a seguir: TGO Substrato TGO N 1 Incubar a 37 C por 3 minutos Amostra Reagente N 2 100 L 250 L Homogeneizar e incubar a 37 C por 30 minutos Homogeneizar e deixar em repouso por 20 minutos a temperatura ambiente ou por 5 minutos a 56 C. Hidrxido de sdio de uso 2,5 mL Homogeneizar por inverso e deixar em repouso por 5 minutos, temperatura ambiente. Transferir para as cubetas e medir a absorbncia ou transmitncia em 505 nm (490-540), acertando o zero com gua destilada ou deionizada. A cor estvel por 30 minutos. Calcular os valores de TGO atravs da curva de calibrao. Se o resultado obtido for acima de 180 unidades, diluir a amostra com NaCl 0,85% e proceder nova determinao. O valor obtido deve ser multiplicado pelo fator de diluio. 250 L

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LIMITAES DO PROCESSO Testar periodicamente a calibrao para detectar alguma alterao na resposta do espectrofotmetro ou do colormetro CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao aos valores pr-estabelecidos para os controles. VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia, em U/mL, para o presente mtodo foram obtidos atravs da determinao de TGO em populaes sadias do sexo masculino e feminino. TGO ..................... 4 a 36 Unidades/mL Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. Para converter os valores de Unidades/mL em Unidades Internacionais (UI), multiplicar por 0,482. DESEMPENHO DO PRODUTO CONTROLE DE QUALIDADE Exatido RECUPERAO A anlise de recuperao Kit Transaminase Colorimtrica TGO Bioclin foi feita com 05 determinaes de amostras. As exatides foram calculadas e se encontraram em boa concordncia com os valores de referncia, obtendo uma recuperao entre 95 e 103%. COMPARAO DE MTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLGICA O Kit Transaminase Colorimtrica TGO Bioclin foi comparado com outro mtodo para dosagem de TGO comercialmente disponvel. Foram realizadas 07 anlises e os resultados foram avaliados. A equao linear obtida foi Y = 0,983549X + 2,086110 e o coeficiente de correlao = 0,985110. Com estes resultados, pode-se concluir que o kit apresenta boa especificidade metodolgica. Preciso REPETIBILIDADE A repetibilidade refere-se a 20 determinaes sucessivas de TGO, utilizando-se 3 amostras com concentraes diferentes. Foram encontrados os seguintes resultados: AMOSTRA 1 (U/mL) 93,4 1,60 1,72 AMOSTRA 2 (U/mL) 23,85 1,14 4,77 AMOSTRA 3 (U/mL) 27,9 1,37 4,92

Sensibilidade A sensibilidade do Kit Transaminase Colorimtrica TGO Bioclin foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra isenta da presena de TGO. A mdia encontrada foi de 6,3 U/mL, com desvio padro de 1,13 U/mL. A sensibilidade, que indica o limite de deteco do mtodo, corresponde a 3 vezes o desvio padro, sendo igual a 3,39 U/mL. ESPECIFICIDADE DIAGNSTICA O aumento da atividade da enzima aspartato amino transferase TGO/AST, de localizao citomitocondrial, reflete alteraes de vrios tecidos. Esta enzima encontra-se em alta concentrao no corao, fgado, msculo esqueltico, rins e pncreas; sua atividade no plasma aumenta 6 a 8 horas, aps infarto do miocrdio, alcanando um pico em 24 a 48 horas, aps o acometimento. Considerveis aumentos ocorrem em hepatites virais, txicas, doenas necrticas hepticas (3 a 50 vezes o Valor de Referncia - VR), mononucleoses (20 vezes o VR), colestase intra-heptica (20 vezes o VR) e distrofias musculares (8 vezes o VR). Nas DH crnicas, associadas necrose celular, devido ao aumento da liberao de AST (mitocondrial), pode ocorrer inverso da relao ALT/AST. Ocorre ainda aumento de seus nveis na mononucleose infecciosa e nas colestases intra e extra hepticas.

NMERO DE TESTES 200 Testes/100 L de amostra / 3 mL de Reagente REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - CABAL, P., LEEPER, R., WROBLEWISKI, F.: Am. J. Clin. Path. 26: 1101, 1956; 2 - LA DUE, J. S., WROBLEWISKI, F., KARMEN, A.: Science 120:497, 01954; 3 - MOHUN, A. F., COOK, I. J. Y.: Am. J. Clin. Path. 27:235, 1957; 4 - WROBLEWISKI, F., CABAUD, P., Am. J. Clin. Path. 27:235, 1957; 5 - TONKS, D. B.: Clin. Chem. 9: 217, 1983. GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Bioclin so testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies adequadas. DADOS DO FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: ( 31 ) 3439.5454 - Fax ( 31 ) 3439.5455 e-mail - bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Servio de Assessoria ao Cliente Tel.: 0800 0315454. e-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro do kit de Transaminase TGO na ANVISA: 10269360139

NMERO MDIA DP CV

REPRODUTIBILIDADE A reprodutibilidade refere-se a 20 determinaes de TGO, em 3 dias diferentes, com 3 amostras de concentraes diferentes. Foram encontrados os seguintes resultados: Amostra Amostra Amostra 1 2 3 Concentrao (U/mL) Desvio padro (U/mL) Coeficiente de Variao (%) 92,90 0,53 0,57 23,88 0,06 0,24 27,05 1,14 4,23

Reviso: Dezembro/09

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