2. Introduo A primeira etapa no processo de separao e purificao de compostos intracelulares a ruptura celular.

. Esta etapa to importante que possui influncia no somente sobre a quantidade de protena a ser recuperada, como tambm em sua atividade, a presena de contaminantes e ocorrncia de degradao proteolca, que podem ter influencia negativa nas etapas subsequentes de estudo cintico purificao. O protocolo a ser seguido para lise celular depende do tipo de clula a ser lisada e da localizao da enzima de interesse. Diferentes microorganismos possuem diferentes caractersticas quanto localizao intracelular dessas enzimas. Uma enzima pode estar, por exemplo, no citoplasma ou no interior de uma organela. Um dos mtodos mais utilizados para lise celular em escala laboratorial o mtodo mecnico de lise da parede celular, por no necessitar de grande aparato, utilizando basicamente tubos falcon, prolas de vidro, vrtice e centrfuga. Este um mtodo no especfico, mas possui grande eficincia e aplicao. O processo de ruptura pode variar dependendo da estabilidade mecnica do microoganismo, como a espcie, a idade da cultura, temperatura de cultivo e meio de cultura. Aps o rompimento das clulas, as protenas contidas no lisado podem ser degradas por proteases. Para que se evite a perda de material de interesse, se faz necessrio o uso de inibidores de proteases, como EDTA, E-64, AEBSF, entre outros. A atividade de uma enzima a capacidade que essa enzima tem de reagir com determinados compostos, chamados substratos. A atividade de uma enzima depende da estrutura da protena, e do arranjo de suas cadeias peptdicas na molcula. A determinao da atividade enzimtica est relacionada velocidade da reao que ocorre entre enzima e substrato, sendo uma unidade de atividade (U) a quantidade de enzima que catalisa a reao de 1 mM de substrato por minuto, sendo a atividade especfica expressa em atividade por miligrama de protena (U/mg). A atividade enzimtica pode ser medida em condies que permitam que a velocidade da reao seja mxima, o que significa que o substrato [S] deve ser adicionado em concentraes elevadas, de modo a permitir que toda a enzima [E] presente seja convertida em complexo ativado [ES]. Assim, a velocidade da reao ser proporcional tanto concentrao de enzima quando concentrao de complexo ativado. O alvo das prticas realizadas foi a enzima -glicosidase extrada de Saccharomyces cerevisiae. Essa enzima tem como funo a hidrolise de maltoses ( -glicosdeos), que so transpostadas para o citoplasma via transporte ativo, liberando molculas de glicose que sero posteriormente metabolizadas[].

Os estudos sobre a -glicosidase de S. cerevisiae vo alm das rotas metablicas dessa levedura, mas colaboram tambm para o desenvolvimento de novos frmacos para uso humano. Sendo a enzima de S. cerevisiae mais conhecida e tendo mais modelos tridimensionais resolvidos que a humana, estudos que visam a inibio de -glicosidase humana usam a homologia entre a enzima humana e a da levedura para o desenvolvimento de novos compostos inibidores de -glicosidases para o tratamento do diabetes mellitus tipo II.

Bibliografias!!! http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S010040422008000200028 http://www.feq.unicamp.br/~cobeqic/tBT17.pdf http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/lista_exerc/enzimas_aspectos_gerais. pdf