PLANEJAMENTO DE EXPERIMENTOS EM LABORATRIO

(Anlise e Otimizao) Prof. Patricio Peralta-Zamora

XI MET Encontro Nacional sobre Metodologias de Laboratrios da Embrapa.

2006

A partir de uma gota de gua, um pensador lgico poderia inferir a possibilidade de um Atlntico ou de um Nigara, sem jamais ter visto um e outro ou ouvido falar deles. Assim, toda vida uma grande cadeia, cuja natureza revelada pela simples apresentao de um nico elo.
Sherlock Holmes (Um estudo em vermelho. Sir Arthur Conan Doyle).

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O crime no compensa!

A Cincia Forense no permite!

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O curandeiro da selva (1992)

O homem sem sombra (2000)

Cromatografia em fase gasosa ...sem gases?

Cincia a arte de pensar!

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OS DESAFIOS DA QUMICA ANALTICA

CARTER MULTIDISCIPLINAR DA CINCIA NOVAS NECESSIDADES...NOVAS EXIGNCIAS

Convencionais Qumica Ambiental Indstria Farmacologia Medicina Agronomia

Menos convencionais Arqueologia Arte Cincia forense

OBJETIVOS
DESENVOLVER, MODIFICAR E COMBINAR TCNICAS ANALTICAS

Aumentar Sensibilidade Diminuir Interferncias Obter Especiao

Diminuir Custos Aumentar velocidade Aumentar robustez

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O DRAMA DA QUMICA ANALTICA

Desenvolvimento e aplicao de ferramentas teis para a determinao quantitativa e qualitativa de espcies qumicas de interesse.

Inmeras espcies de interesse

Matrizes de extrema complexidade

Concentraes cada vez menores

GRANDE COMPLEXIDADE

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O ARSENAL DA QUMICA ANALTICA

Mtodos clssicos Titulometria e gravimetria Mtodos eletroanalticos Potenciometria, voltametria, etc. Mtodos espectroscpicos Absoro, emisso, fluorescncia, etc. Mtodos cromatogrficos Lquida, gasosa, etc.

Quando usar? Como usar? Como otimizar? Como interpretar?

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AS VERDADES DA ANLISE QUMICA

A Qumica Analtica deixou de ser uma especialidade que pudesse ser dominada por apenas um especialista. Seguindo a tendncia da cincia moderna, os profissionais desta rea foram obrigados a optar por uma sub-especialidade. Desta forma, surgiram os especialistas em tcnicas espectroscpicas, eletroqumicas, cromatogrficas, etc., subespecialidades estas, que ainda podem ser divididas, em funo do grande e crescente nmero de tcnicas instrumentais que so desenvolvidas a cada ano.

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AS VERDADES DA ANLISE QUMICA

Toda anlise qumica complexa. Muito mais quando a espcie de interesse se encontra em baixa concentrao e em uma matriz de grande complexidade. No conhecer a histria de um objeto de anlise (procedncia, natureza, composio aproximada, etc.) meio caminho andado para o fracasso analtico. No existem tcnicas analticas instrumentais completamente livres de interferncia. Em funo deste fato, o conceito de especificidade utpico. No existem tcnicas analticas instrumentais que apresentem uma sensibilidade ilimitada. Em funo deste fato, a determinao de concentraes muito baixas usualmente representa um desafio, o qual muitas vezes s pode ser contornado recorrendo-se ao uso de tcnicas de pr-concentrao centenrias.

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Conselhos preliminares

Porm, igual a um homem que caminha solitrio e na absoluta escurido, decidi ir to lentamente, e usar de tanta ponderao em todas as coisas, que, mesmo se avanasse muito pouco, ao menos evitaria cair
Ren Descartes (Discurso do mtodo)

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Conselhos preliminares

Um mtodo pode ser definido como uma srie de regras para tentar resolver um problema. No caso do mtodo cientfico, estas regras so bem gerais. No so infalveis e no suprem o apelo imaginao e intuio do cientista
Fernando Gewandsznajder (O mtodo nas cincias naturais e sociais).

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

PLANEJAMENTO EXPERIMENTAL
O que se pretende demonstrar com a anlise? Potabilidade de uma amostra de gua Potencial como meio de irrigao .

O que ser dado ao anlise Qual o uso objetivo da resultado?

fornece os primeiros comercial de uma mina de antimnio Potencial indcios para a escolha de procedimentos e tcnicas adequadas. Prova residuogrfica (arma de fogo).

Qual o rigor analtico necessrio? Embora o rigor analtico seja recomendvel em qualquer circunstancia, existem atenuantes que podem ser consideradas. Teor de magnsio em uma amostra de cimento (%) Anlise que objetiva demonstrar o doping de um atleta (ppb).

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

INFORMAES RELATIVAS AMOSTRA

Faixa de concentrao e forma qumica em que a espcie de interesse se encontra

Se voc no conhece todo o histrico da Interferentes que puderem existir na matriz em anlise. sua amostra...desista!

Em mundial de coleta de Em poca de redede rede computadores, a de tempos mundial informaes deste tipo e bastante simplificada, at para necessidades computadores, ignorncia crime! analticas pouco ortodoxas. Voc poder se surpreender quando descobrir a quantidade de pessoas que j se interessaram pelo seu objeto de estudo. Vale a pena salientar que, na falta de informaes deste tipo, o estabelecimento de uma metodologia de anlise pode resultar penosamente demorado e decepcionante.

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

ESCOLHA DO PROCEDIMENTO ANALTICO CRITRIOS : Compatibilidade entre a concentrao da espcie de interesse e a sensibilidade fornecida pela ferramenta analtica.

SENSIBILIDADE LIMITE DE DETECO Compatibilidade entre a complexidade da matriz SELETIVIDADE de interferentes) e a seletividade da tcnica. ESPECIFICIDADE

(presena

Facilidade na implementao da metodologia. Maior nmero de etapas (abertura, diluio, pr-concentrao, separao, etc.), maior risco de contaminao ou perda da espcie de interesse. Assim, quanto mais simples, melhor.

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

ESCOLHA DO PROCEDIMENTO ANALTICO

CRITRIOS : Disponibilidade. s vezes, terceirizar melhor que desenvolver uma rotina analtica complexa, principalmente para a realizao de anlises Caar pernilongos com espingarda espordicas.

no muito inteligente.

Segurana. Procedimentos mais seguros e menos poluentes devero ser selecionados preferencialmente. Custo. Dentro deste contexto, importante destacar que a melhor escolha sempre a mais simples.

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

ESCOLHA DO PROCEDIMENTO ANALTICO

CASOS ESPECIAIS: Tamanho da amostra (anlise clnica e forense) Necessidade de preservao (tcnicas no-destrutivas, autenticao de obras de arte e peas arqueolgicas). Velocidade de anlise (controle de qualidade de processos industriais) Implementao de sistema on line (monitoramento contnuo, em tempo real). importante lembrar que existe um pequeno nmero de tcnicas instrumentas que permitem este tipo de controle. Dentre outras, destacam-se as tcnicas espectroscpicas e potenciomtricas.

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

AMOSTRAGEM, PRESERVAO E ESTOCAGEM

Comea o drama
representatividade

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ETAPAS DA ANLISE QUMICA

AMOSTRAGEM

Teoria de Gy (Pierre Gy) Sampling for Analytical Purposes, Wiley, 1998 Reconhece7 tipos de erros na amostragem, alm do erro inerente ao procedimento analtico. Representatividade Contaminao (estocagem) Perda (adsoro, volatilizao, etc.) Decomposio (preservao) Erros involuntrios Erros voluntrios (desleixo) Amostragem: arte de selecionar uma pequena poro de material, a partir de uma amostra de grandes propores.

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TRATAMENTO DE DADOS ANALTICOS

Disso resulta que mais freqente recolherem-se informaes sobre as coisas desconhecidas que dedicar-se ateno s j conhecidas

Francis Bacon (Aforismos sobre a interpretao da natureza e o reino do homem)

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TRATAMENTO DE DADOS ANALTICOS

Algarismos significativos Exatido (Erros) Preciso (Desvios) Repetibilidade Reprodutibilidade Rejeio de resultados (Teste Q ou de Dixon) Comparao de mdias (Teste t ou de Student) Comparao de precises (Teste F ou de Snedecor) Expresso de resultados

X +/- t s
N

QUIMIOMETRIA Planejamento fatorial de experimentos

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Planejamento fatorial de experimentos

Sistema multivariado de otimizao Objetivos Triagem de variveis Otimizao de variveis Interao entre variveis

Sistema univariado convencional negligencia interao

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Otimizao univariada convencional

C
Ponto de partida Valor otimizado de pH Valor otimizado de pH e C Universo no explorado

pH

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Planejamento fatorial de experimentos

Procedimento Definir variveis relevantes Quali e Quantitativas Definir nveis do estudo Conhecimento do sistema qumico

Variveis = n Nveis = N Experimentos = Nn

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Planejamento fatorial de experimentos Exemplo 1

Objetivo: otimizar uma sntese orgnica (maximizar) Variveis envolvidas: temperatura (T) e catalisador (C) Nmero de determinaes: (nveis)variveis: 22: 4 determinaes Varivel T (0C) C Ensaio 1 2 3 4 T + + Nvel (-) 40 A Nvel (+) 60 B R1 57 92 55 66 Respostas R2 61 88 53 70 Desvio: 2 pp Rm 59 90 54 68

Combinaes C TC + + + +

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Planejamento fatorial de experimentos Exemplo 1

Interpretao geomtrica dos resultados
B Catalisador 54 +14 Efeitos T = (+14+31)/2 = 22,5 -5 -22 C = (-5-22)/2 = -13,5 Melhores condies 90 Temperatura de 60 0C Catalisador A

68

59

+31

40

Temperatura

60

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Planejamento fatorial de experimentos Exemplo 1

Catalisador

54

68

Caminho univariado com sorte

59

90

Caminho univariado sem sorte

40 60 Temperatura

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Planejamento fatorial de experimentos Operao evolucionria

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Operao evolucionria

Exemplo: Estudo para diminuio do custo na produo de um certo produto petroqumico. Fatores para otimizao: Taxa de refluxo da coluna de destilao (Tr) Relao entre fluxo de reciclagem e fluxo de purga (F) Varivel Tr F Ensaio 1 2 3 4 5 Nvel (-) 6,7 7,5 Nvel (0) 6,9 7,7 C + + 0 Nvel (+) 7,1 8,0 Resposta ($/T) R1 92 95 86 91 92

Combinaes T + + 0

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Operao evolucionria
Efeito Tr: (-92+95-86+91)/2= +4,0 Efeito F: (-92-95+86+91)/2= -5,0 Efeito Tr vs F: (+92-95-86+91)/2= +1,0

Interpretao

F
8,0 7,75 7,5

86 92 92
6,7 6,9

91

Concluso Menor custo Menor Tr Maior F

95
7,1

Tr

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Novo planejamento
F
8,5 8,25 8,0

80 82 83
5,9 6,3

81

Efeito Tr: +1,0 Efeito F: -3,0

84
6,7

Efeito Tr vs F: 0,0

Tr

Concluso Menor custo: Maior F, Tr inexpressivo (+1,0)

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Novo planejamento
F
8,75 8,50 8,25

86

85

80
84
5,9 6,3

83
6,7

Tr

Concluso final Menor custo: F: 8,5, Tr: 6,3

Tempo gasto: 4,5 meses, Custo: US$ 9000, Lucro: US$ 150000/ano

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Deslocamento do planejamento
8,75 8,50 8,25

80

5,9

6,3

8,0 7,75

95 7,50
6,7 6,9 7,1

Triagem de variveis, Planejamentos fracionados

Varivel H2SO4 (mol/L) KI (mol/L) H2O2 (mol/L) Tempo (s) Ensaio 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 1 + + + + + + + + 2 + + + + + + + + Nvel (-) 0,16 0,015 0,0020 90 3 + + + + + + + + 4 + + + + + + + + Nvel (+) 0,32 0,030 0,0040 130

Otimizao de reao cataltica para determinao de molibdnio 24 = 16 Exp. Efeitos 1: -2,38 2: 109,38 3: 54,38 4: 67,13 12: -1,13 13: 2,88 14: 1,13 23: 25,63 24: 21,88 34: 9,88

Combinaes

Resposta
R 52 61 124 113 85 66 185 192 98 86 201 194 122 139 289 286

Triagem de variveis, Planejamentos fracionados

Varivel H2SO4 (mol/L) KI (mol/L) H2O2 (mol/L) Tempo (s) Nvel (-) 0,16 0,015 0,0020 90 Nvel (+) 0,32 0,030 0,0040 130

Otimizao de reao cataltica para determinao de molibdnio 24-1 = 8 Exp. Efeitos 1: -2,25 2: 114,75 3: 51,75 4: 69,75 12: 8,75 13: 24,75 14: 26,75 23: 26,75 24: 24,75 34: 8,75

Combinaes
Ensaio 1 2 3 4 5 6 7 8 1 + + + + 2 + + + + 3 + + + + 4 + + + +

Resposta
R 52 86 201 113 122 66 185 286

4 = 1x2x3

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Superfcie de resposta

Exemplo: Determinao dos valores de tempo (t) e temperatura (T) que permitam o maior rendimento de uma reao qumica.

58,2 Temperatura (0C) 64,6 68,0 86,8 54,3 60,3 73,3 64,6 68,0
Planejamento 22 = 7 exp. Caminho de ascenso ao mximo= 3 exp. Planejamento 22 = 4 exp. Planejamento estrela = 4 exp.

62,3 54,3 60,3

Tempo (min)

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Superfcie de resposta
Y=b0 + b1X1 +b2X2 Y=b0 + b1x1 +b2X2+ b11x12 +b22x22 +b12x1x2
Y=87,37 - 1,38X1 +0,36X2 - 2,14X12 - 3,09X22 -4,88X1X2

Modelo linear

Modelo quadrtico

Grfico tridimensional que mostra comportamento da resposta em funo de mudanas de t eT OTIMIZAO: OK

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CONSIDERAOES FINAIS
A Cincia deixou de ser uma especialidade que possa ser dominada por apenas um especialista. Colaborar preciso! Toda anlise qumica complexa. Muito mais quando a espcie de interesse se encontra em baixa concentrao e em uma matriz de grande complexidade. Planejar preciso! Todo processo tecnolgico requer estudos preliminares orientados a maximizar a sua potencialidade. Otimizar preciso!

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AGRADECIMENTOS

Comisso Organizadora do Evento Dr. Airton Kunz Anelise Sulzbach

Patricio Peralta-Zamora
zamora@quimica.ufpr.br DEPARTAMENTO DE QUMICA, UFPR
Grupo de desenvolvimento de tcnicas avanadas para tratamento de resduos http://www.quimica.ufpr.br/tecnotrat/

TECNOTRATER