INSULINA

ESTRUTURA E FUNES

A insulina um pequeno hormnio polipeptdico constitudo por duas cadeias e ( 51 aminocidos) unidas por duas pontes dissulfureto que permitem a conexo dos aminocidos 7 e 7, 20 e 19. Uma terceira ponte de dissulfureto na cadeia liga os resduos 6 e 11. Este hormnio fundamental para manter o nvel de glicose no sangue, de forma que o crebro, msculos, corao e outros tecidos tenham a quantidade de "combustvel" necessria para o metabolismo celular normal. A insulina tambm desempenha um papel muito importante no metabolismo das gorduras e das protenas na circulao sangunea. Promove, por exemplo, o transporte de aminocidos do sangue para os msculos e outras clulas. Dentro destas, a insulina no s responsvel pela promoo da absoro intracelular de aminocidos da circulao, aumentando a sntese proteica, como tambm reduz o catabolismo (processo de quebra de protenas dos msculos). A acrescentar s demais funes j descritas, h participao da insulina na sntese de neurotransmissores e no funcionamento eficaz do sistema imunitrio. O cromo um mineral muito importante no

desempenho das funes da insulina na medida em que transporta e veicula o acar da corrente sangunea para as clulas alm de facilitar a ligao da insulina membrana celular. Caso os nveis mnimos de cromo estejam ausentes, a insulina incapaz de atuar prejudicando a formao de massa muscular do organismo ( efeito anablico ) e no reduzir a gordura convenientemente.

HISTRIA

A doena que provocada pela anormal atividade da insulina o diabetes, que embora j fosse conhecido h dois mil anos, s nos ltimos cem foram descobertas formas de o tratar e controlar. Em 1921 na Universidade de Toronto no Canad, Dr. Frederick Banting (cirurgio) e Charles Best (estudante de Fisiologia) descobriram a insulina. Esta importantssima descoberta levou a que Banting e McLeod (porque as experincias foram realizadas no laboratrio J. J.R.Macleod) recebessem o premio Nobel da medicina em 1923. A insulina foi a primeira protena em que foi comprovada atividade hormonal, a primeira protena a ser cristalizada (Abel, 1926), a primeira protena a ser sequenciada ( Sanguer et al, 1955 ), a primeira protena a ser sintetizada por tcnicas qumicas ( Duetal;Zahn;Katsoyanis; 1964 ), a primeira protena foi demonstrada como sendo sintetizada na forma de uma molcula grande precursora ( Steiner et al, 1967 ) e a primeira a ser preparada para o uso comercial com a metodologia do DNA recombinante. Em 1958 o cientista Frederick Sanger ( Reino Unido ) foi laureado com o prmio Nobel de Qumica por ter contribudo no trabalho sobre a estrutura da insulina. Em 1978 fez-se a clonagem do gene da insulina humana e em 1982 a insulina humana era produzida por Engenharia Gentica.

BIOSSNTESE E EXTRAO
A insulina humana pode ser extrada do pncreas na medida em que esta produzida nas clulas dos ilhus de Langerhans do pncreas.

No processo de sntese proteica, os aminocidos entram na ordem exata para a formao de cada protena . Como existe uma grande semelhana entre os tipos de insulina humana, suna e bovina tambm pode ser extrado destes dois ltimos mamferos. A insulina suna difere num nico aminocido, substituio da alanina ou treonina na poro 30. A bovina tem esta modificao mais as substituies de alanina por treonina em 8 e valina por isoleucina em 10. Estas modificaes no alteram a atividade biolgica dos vrios tipos insulina. Assim, atravs destas extraes (suna e bovina ) possvel haver terapia padro para a diabetes mellitus. Para o caso de indivduos com antecedncias alrgicas produzida insulina humana.

PRODUO SINTTICA Engenharia Gentica

A insulina pode ser produzida sinteticamente atravs de uma tcnica que consiste em modificar geneticamente a bactria Escherichia coli para a tornar capaz de sintetizar o hormnio ausente. Deste modo, este hormnio produzido em trinta dias o que equivale a um tero do tempo necessrio para a obter pelo mtodo tradicional. Depois introduzido o gene da prinsulina humana da bactria fazendo com que o gene, precursor da insulina ativa, passe a produzir o hormnio em grandes quantidades.

As bactrias tambm tm DNA como material gentico e produzem RNA para sintetizar protenas. A Escherichia coli tem um segmento de DNA que possui aproximadamente 4 a 5 mil genes. Alm desse segmento possui tambm pores de DNA que se denominam por plasmideos. Estes podem-se reproduzir, duplicando o seu DNA. Deste modo quando a clula de uma bactria se multiplica, a clula filha recebe um cromossomo e plasmideos iguais aos da clula me. Os genes contidos nos plasmideos no so essenciais para a vida da bactria mas podem ser responsveis pela sntese de protenas que aumentam a resistncia dessas bactrias aos antibiticos. Estas bactrias, reproduzem-se de modo muito rpido. Para a bactria produzir insulina humana, ela precisa de ter o RNA especfico para sintetizar essa protena. Nenhuma bactria possu DNA com informaes para a sntese da insulina mas, atualmente, possvel alterar o DNA da bactria introduzindo segmentos de DNA humano no DNA das bactrias, atravs de tcnica de cortar o DNA com enzimas especificas e de refazer o DNA com outras enzimas. Se as bactrias forem mantidas vivas e em crescimento, tornam-se verdadeiras fbricas de produtos exatamente iguais aos que o organismo humano produz.

Passo-a- passo da Produo de Insulina Humana Recombinante

Em um microorganismo (E.coli) foi inserido um

fragmento de DNA com instrues para expressar uma protena, o precursor de insulina (pr-insulina).

Esse microorganismo colocado em um fermentador

para reproduzir e, sob determinadas condies, expressar a protena de interesse.

A pr-insulina se precipita na forma de corpos de A pr-insulina, uma vez separada dos resduos celulares,

incluso dentro da clula, que posteriormente rompida.

ser transformada em insulina e purificada em diversas etapas. Primeiramente, ligaes intra-moleculares, pontes de di-sulfeto, sero desfeitas para que novamente se liguem nas posies corretas na renaturao.

Em seguida, a pr-insulina renaturada purificada e

convertida em insulina, atravs de reaes qumicoenzimticas, e submetida a novas etapas de purificao por troca-inica, RP-HPLC e cristalizao, obtendo-se assim o cristal de insulina, que posteriormente formulado.