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Tecnicas Bsicas de laboratrio Prof.

: Andr Medeiros Aula do dia 28 de setembro de 2011

AMOSTRAGEM ANALTICA EM LABORATRIO


A amostragem o passo mais importante dentro do contexto da obteno do resultado final, visto que, feita inadequadamente, a anlise quantitativa ou qualitativa se esvazia do ponto de vista cientfico (9). Como, quanto e onde amostrar, fora e dentro do laboratrio, so dvidas constantes quando se busca a confiabilidade de um resultado. Outra questo, pouco explorada, a preservao da amostra, ou seja, onde e como armazen-la. H vrias normas publicadas para amostrar, assim como critrios de aprovao e rejeio, porm, no h clareza suficiente para que o analista se sinta seguro como quando compara intensidades dos sinais de padro e amostra numa anlise instrumental. Porm, j claro para a maioria dos analistas que no h amostragem significativa, no mximo, amostragem representativa, assim como est claro para os estudiosos que as ferramentas existentes servem muito bem mecnica, mas ainda precisam de ajustes para a Qumica.

A diferena entre os termos amostrar e coletar muito sutil, porm, podemos interpretar, amostrar como um termo abrangente e coletar, o ato de pegar ou retirar, isolar ou de tomar uma alquota do que se deseja conhecer analiticamente. (11,12) Na amostragem, deve-se sempre considerar que no existe o lote homogneo, caso existisse, no haveria necessidade analtica ou ainda, nem discutiramos as reaes e interaes da qumica. Partindo-se deste raciocnio, a amostra sempre ser heterognea. Seguindo a mesma linha de raciocnio, se a amostra no homognea, torna-se impossvel retirar uma alquota que signifique o universo amostral, ou seja, praticamente impossvel obtermos uma amostra significativa. Considerando ento a heterogeneidade, o mximo que podemos imaginar sobre uma amostra t-la como representativa do universo amostral. Para conceituar a amostragem, podemos partir do pressuposto de que se trata da operao de coleta de uma amostra representativa para a anlise. Podemos tambm enquadr-la como sendo um processo no qual a coleta ser de uma poro representativa de um lote heterogneo, ou seja, que represente a totalidade do material de interesse para que seja realizada a anlise. Mesmo considerando que foi coletada a melhor amostra representativa, sempre haver necessidade de algum grau de preparao dessa amostra para torn-la disponvel analiticamente. O seguinte exemplo ilustra a complexidade da representatividade: Imaginemos analisar resduo de um determinado agroqumico numa plantao de laranjas que pode ter 500 mil laranjeiras, carregadas da fruta. O primeiro impacto ser a grandiosidade do universo amostral, para isto basta imaginar uma laranjeira ocupando um espao de 4m, isto daria 2 milhes de m. Passado este impacto, surgem as dvidas de qual poro de laranjas coletar no p, ou seja, a do cho, a da parte de baixo ou as superiores, ou ainda, o fruto em amadurecimento ou o maduro. Tendo as

definies s coletar, quantas? Um saco de 60 litros ou um caminho de 10 toneladas? Chegando no laboratrio, novo questionamento pode surgir, ou seja, que poro tomar para analisar. Vrios aspectos devem ser considerados na amostragem: a figura do amostrador, quanto amostrar, a concentrao a ser analisada, o produto a ser analisado, como amostrar, as tcnicas e tecnologias envolvidas e a validao probabilidade. Quando o universo amostral definido, as ferramentas estatsticas ficam mais acertivas, mesmo assim, um pouco de experincia ou de intuio aplicada. A chamada amostragem Probabilstica, conceituada (10) para lotes, tem em suas ferramentas amostragem do tipo: casual simples, sistemtica, conglomerados, mltipla e seqencial. Quando amostramos processo sem definio de dimenso final, como os processos contnuos, a chamada amostragem No Probabilstica, algumas ferramentas do tipo: a esmo, material contnuo e intencional podem ser aplicadas. A figura 1 ilustra a dificuldade de se reduzir o tamanho da amostra para ser analisada. Conclumos que o quanto amostrar sempre ser subjetivo, porm, com alguma cincia aplicada (no sentido de haver um procedimento, uma ferramenta) que possa resultar numa discusso ou numa normatizao (2).

O produto a ser analisado Dentre as consideraes quanto ao produto a ser analisado, est a preservao da amostra como um todo (11,12). Sabe-se no meio analtico que no h recurso instrumental suficiente quando h uma grande quantidade de amostras a serem analisadas. Tambm de conhecimento geral que a integridade de uma amostra em trnsito por longo perodo depende

do sistema de preservao, principalmente quando se trata de refrigerao. Vrias so as propostas e normas de preservao, mas como saber realmente se o produto a ser analisado aps uma semana ou trinta dias ter o mesmo resultado de uma anlise imediata? O conceito estabilidade ento introduzido quando possvel. Trs tipos principais de estabilidade so observadas: Fsica, Qumica e Biolgica FSICA: - facilidade de contaminao (Higroscopia) - efeito de superfcie (atrao eletrosttica) - perdas por evaporao de espcies da mistura QUMICA: - processos de oxidao - decomposies catalisadas - por temperatura - por umidade - por luz - radiaes ionizantes e no ionizantes - por contato BIOLGICA: - aerbica - anaerbica - em meio propcio Quando for possvel, inicia-se o processo de validao no item estabilidade da amostra. A conduo de estudos de estabilidade muito comum na rea farmacutica, na qual os produtos so pr conhecidos. Na Resoluo RE 560 de 02 de abril de 2002 ANVISA Ministrio da Sade, define-se para produto acabado Estabilidade Acelerada e Estabilidade de Longa Durao. Como transcrio da resoluo temos: I-ESTABILIDADE ACELERADA a) O estudo de estabilidade acelerada deve ser realizado a 40 2C e 75 5% de umidade relativa (UR), durante seis meses, com anlises em Zero, 30, 60, 90 e 180 dias. b) O estudo de estabilidade acelerada deve ser realizado a 50 2C e 90 5% de umidade relativa (UR), durante trs meses, com anlises em Zero, 30, 60 e 90 dias. II-ESTABILIDADE DE LONGA DURAO O estudo de estabilidade de longa durao deve ser realizado a 30 2C e a 70 5% de umidade relativa (UR), durante o perodo em que se pretende comprovar a estabilidade do produto. Neste caso, no primeiro ano as amostras devem ser analisadas nos tempos Zero, 6, 9 e 12 meses e depois deste perodo, uma vez ao ano. Ainda no sistema farmacutico, quando se trata de estabilidade de um determinado frmaco em meio biolgico, utilizam-se as seguintes formas de estabilidade: a) Ciclos de congelamento e descongelamento b) Estabilidade no tempo de bancada

c) Estabilidade simulada segundo Arrhenius (pode-se simular, em funo da cintica e de alguns dados experimentais, o menor tempo em que o analito se reduziria a uma concentrao aceitvel) d) Estabilidade visando o tempo analtico total do estudo As tcnicas e tecnologias envolvidas A amostragem pode ser tambm caracterizada como uma arte, pois, muitas vezes, exige do amostrador habilidades criativas perante determinadas situaes para se obter uma amostragem representativa. Muitas vezes, a amostragem est em funo do que se busca, por exemplo: a) Hidrocarbonetos em gua de rio: em funo da polaridade e densidade, o leo dever estar na poro da superfcie; caso haja uma curva, a tendncia ir para as margens. b) Orgnicos volteis em sacaria: os mais fceis de amostrar so os perifricos, porm, os mais representativos so os que esto protegidos pelos demais sacos. c) Solo: o pH e a CTC (capacidade de troca catinica) podem fornecer informaes que definiro se a coleta ser superficial ou aprofundada. Por exemplo, solo com carter cido para metal como o ferro, provavelmente ele estar percolado ou na poro mais submersa, ao contrrio para o alumnio, que poder estar mais na superfcie. Se pensarmos em nions, como exemplo o Cianeto, se o carter for cido, muito provavelmente este ter sido perdido por volatilidade. d) Tambores: depende do produto, viscoso ou em fases e do que se quer analisar: volteis, metais ou residuais. e) Folhas: o que analisar? Foi material pulverizado ou produto introduzido na semente ou solo. Folhas novas ou folhas velhas. f) Oceano, lago: buscar a regio de maior impacto. Se visvel, timo, se no, estudar o equilbrio do produto a ser analisado para definir se superfcie ou fundo. Em processo contnuo, a amostragem sempre ser complexa. O amostrador dever julgar o melhor ponto ou aquele que mais representa uma situao real para a tomada de amostra. Em algumas situaes, a coleta facilitada pela presso positiva, porm, havendo equilbrio no processo, como no caso de amostragem de vapores nitrosos (equao abaixo), o resultado pode ser prejudicado se analisado em presso diferente a do processo.

2NO2 N2O4
Numa situao na qual se deseja analisar vrios componentes sob presso positiva ou negativa, so necessrios aparatos prprios, cuidados com a estanqueidade do sistema que pode tanto perder produto como aspirar ar atmosfrico, ou contaminantes externos ao processo. A figura 4 ilustra um sistema de amostragem de vrias substncia numa tubulao

Slidos: reduo de tamanho e mistura

Reduzir o tamanho de amostras slidas fundamental, tanto para garantir eficincia nas reaes qumicas que podero advir, como para garantir melhor homogeneidade. Vrios so os equipamentos que garantem reduo de tamanho, desde de britadores a moinhos, obviamente acompanhados de peneiras que daro o dimetro de corte necessrio para anlise. Os processos de mistura vo desde o enquartamento ou quarteamento sobre uma bandeja at a betoneiras, misturadores duplo cone, etc. A expresso de Badger e Bauchero, que uma derivao da expresso do desvio padro, utilizada para definir o grau de mistura

Validao da amostragem

As ferramentas para verificar se uma amostragem confivel (representativa) so as mesmas utilizadas para o mtodo analtico, porm, as variveis podem ser consideradas diferentes,

como exemplo: enquanto num mtodo analtico para slidos a preocupao est na pesagem, na amostragem est na variabilidade do tamanho de partculas. Obter a estimativa do desvio padro, repetitividade e reprodutividade dentro do ambiente da amostragem , muitas vezes, ao abstrata dentro do universo amostral. Retornando ao exemplo dos ps de laranja mencionado na Introduo, uma repetio de cinco amostragens de 50 laranjas no universo de milhes praticamente desprezvel e pouco representativa. Tomar amostras em quantidades exageradas, como 100 ou 200 amostragens de 1000 laranjas, mais um fato acadmico do que real, pois o custo e a logstica envolvidos seriam proibitivos ou extremamente trabalhosos. A Validao da amostragem pode ter proposta de aplicao em duas situaes principais: - Quando da tomada de amostra para ser levada ao laboratrio - Quando da tomada de amostra para ser analisada Na primeira situao da tomada da amostra para ser levada ao laboratrio que reside a maior dificuldade a que aumenta em funo do custo do produto (retornvel ou no retornvel) ou da quantidade do lote ou do processo contnuo existente. Analogamente ao que j foi abordado anteriormente, exemplos como o de amostrar um litro de petrleo bruto numa refinaria, para representar o processamento de alguns milhares de barris por dia, ou ainda amostrar um litro de gua de uma ETA (estao de tratamento dgua), no qual aps o momento da coleta j se passaram milhares de litros, deixam claro que amostradores e analisadores contnuos sero necessariamente os que daro a informao da situao. Obviamente, sempre haver uma nova expertise, a da correo do amostrado que dever ser aplicada quando os valores mximos ou mnimos permitidos estiverem no conformes. Como validar ento? Pode-se aplicar a validao com as estimativas de varincia e desvios padro (buscar a repetitividade e a reprodutividade), porm essencial buscar valores que permitam a representatividade, ou seja, se o sistema de
Revista Analytica Agosto/Setembro 2003 N 06

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