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los tipos
de compuestos a separar. Siempre se recomiendan ensayos previos a pequea escala (capa fina). Si se tiene una muestra a separar, sus componentes pueden obtenerse en forma aislada, pasando un solvente o mezcla de los mismos de suficiente polaridad como para arrastrarlos, en forma de bandas separadas, al fondo de la columna de separacin. Las bandas aisladas pueden distinguirse por su color o fluorescencia bajo la influencia de la luz UV, o reaccionar con un indicador coloreado. Tambin suele efectuarse una cromatografa en capa fina (analtica) con una muestra de las bandas aisladas y efectuar un revelado posterior, pudiendo ser ste destructivo o no. El procedimiento ms general es un flujo continuo a travs de la columna (rellena con fase estacionaria polar) de solventes de polaridad creciente para ir eluyendo cada componente individualmente. Los solventes usados generalmente como eluyentes estn ordenados en la Tabla 3 en orden de polaridad creciente.
Cromatografa en columna Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una
Seminario de slidos-Qumica Orgnica I para la Licenciatura en ptica Ocular y Optometra
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C).
La muestra a cromatografiar puede ingresarse lquida (se vaporiza en el equipo antes de ingresar a la columna) o gaseosa. Por tanto la condicin esencial para utilizar la tcnica de CG es que los componentes de la mezcla sean vaporizables. Las columnas empleadas son tubos de vidrio o metal con una longitud de 1 a 200 m y dimetro de 0,1 a 50 mm. Las mismas estn dispuestas en forma de espiral y ubicadas dentro de un horno para permitir el control de temperatura de la separacin. Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eludas a la salida de la columna cromatogrfica. El detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica. Funciona comparando una propiedad fsica entre el gas portador puro y el mismo gas portador llevando cada uno de los componentes que previamente se han separado en la columna, esta accin se traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificar mediante un registrador grfico integrador permitiendo indicar el momento que salen de la columna los componentes a travs de cromatogramas. Los detectores ms usados en CG son: detector de conductividad trmica, detector de ionizacin a la llama, detector de captura electrnica, detector de fotometra a la llama, detector de espectrometra de masas. La cromatografa de gases se utiliza para identificar y determinar el nmero de componentes de una mezcla. Su uso es de tipo analtico (el ms difundido) o preparativo.
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RESOLUCIN (HPLC) La cromatografa lquida de alta presin utiliza un instrumental muy distinto (Figura 6) con ventajas significativas. En este mtodo se utilizan columnas de dimetro muy reducido (por ejemplo 2-5 mm), rellenas de materiales especiales pulverulentos, cuyas partculas tienen un dimetro promedio no mayor de 30-40 m. Este tipo de columna es muy eficaz, pero ofrece una gran resistencia al flujo de la fase mvil, o sea, una gran cada de presin. Por esta razn es necesario emplear sistemas de bombeo de alta presin (hasta 400 atm) que hagan fluir la fase mvil a una velocidad razonable a travs de la columna. La cantidad de fase estacionaria dentro de la columna es pequea, por lo que se requiere que la muestra tambin sea pequea, entre 1 y 10 mg. Si la presin de entrada a la columna no es muy elevada (100 atm o menos), la muestra se introduce en la cmara de inyeccin mediante una jeringa de alta presin. A presiones ms elevadas, se utilizan las vlvulas de inyeccin. Un detector, colocado a la salida de la columna, proporciona un registro continuo de la composicin del lquido que sale, lo que permite obtener cromatogramas como los de la Figura 7 (similar al de CG) y que se utiliza para identificar y cuantificar los componentes de la muestra. Otra ventaja de este mtodo es el escaso deterioro de la columna a pesar de su repetido uso, si bien en algunos casos es necesario regenerarla. Las ventajas mltiples de HPLC hacen de esta tcnica analtica una de las ms populares hoy da.
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15- Si tiene una mezcla de acetona, Cl2CH2 y tolueno. Es posible realizar una cromatografa en placa delgada de los mismos con el objeto de separarlos? Por qu? 16- Qu es el revelado de una placa? Que es un revelador universal y uno especfico? Nombre por lo menos dos de cada clase. 17- Defina la cromatografa de particin. Si la cromatografa en papel es de particin: cules son las dos fases lquidas? 18- Qu tipo de sustancias se cromatografan en papel? Por qu no usa placa de slice o almina? 19.- Porqu debe saturar la cuba con el solvente a usar antes de una cromatografa en capa fina o papel?
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Cl4C
ter de petrleo
tolueno
tolueno-AcOEt (5:1)
M: muestra A B: patrones Cul de las siguientes opciones es correcta? a) La mezcla (M) es binaria. b) Tiene al menos 2 componentes. c) La mancha de menor Rf es B. d) La mancha de mayor Rf es A. e) No se puede afirmar nada de lo anterior 22. Si realiza una cromatografa en capa delgada de silicagel de una solucin clorofrmica que contiene los siguientes compuestos: C6H5COCH3 , CH3C6H4COOH y C6H5OCH2CH3 Se probaron 2 solventes de elusin A y B obtenindose: solvente A B Rf1 0.20 0.40 Rf2 0.35 0.70 Rf3 0.80 0.85
a) Asigne los compuestos a cada Rf. b) cul solvente es ms polar c) cmo revelara las placas cromatografiadas? Proponga 3 mtodos y aclare si son o no destructivos.
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