TUTORIAL DE CLCULO DE VMX Y KM

Profesora Fabiola Jamett Daz

Explicar la manera de resolver los clculos de Km y Vmx. A travs del siguiente ejercicio. Datos para la enzima fosfatasa cida.

[S] mM 0,50 0,75 2,00 4,00 6,00 8,20 10,0

V0 A405/min 0,075 0,090 0,152 0,196 0,210 0,214 0,230

El clculo de Km y de Vmx, segn Michaelis Menten se realiza graficando los datos brutos de la tabla: en el eje x concentracin de sustrato y el el eje Y Vo. Graficado la lnea asntota a la grafica corresponde a la Vmx, que se extrae del eje Y. por lo tanto Vmax = 0,24 (A/min) y recuerden la Km ser Vmax, es decir aproximadamente. (Debe cortar en el eje X) Km = 1,2 mM

Grfica de Michaelis Menten

0,25 0,2 Vo A/min 0,15

Vmx

Vmax
0,1 0,05 0 0 2 4 6 mM [S] 8 10 12

Km = 1,2 mM

Ahora aplicando los dobles recprocos, esto es Lineaweaver-Burk, Se debe graficar 1/[S] vs 1[Vo]. Generar la tabla y graficar. Sin necesidad de graficar se calcula la pendiente de la recta y el intercepto; esto lo hacen las calculadoras con regresin lineal; si no la tiene use las siguientes frmulas: Pendiente: b = ( [(Xi X )(Yi - Y)] / (Xi-X)2)1/2 ; Intercepto: a = Y - bX

En este caso: a = 1 / V mx y b = Km/ Vmx. Reemplazando los valores de a y b por los obtenidos y despejando, se obtiene Vmx y Km. En el ejemplo:

[S] mM 0,50 0,75 2,00 4,00 6,00 8,20 10,0

V0 A405/min 0,075 0,090 0,152 0,196 0,210 0,214 0,230

1/[S] 2 1,33 0,5 0,25 0,167 0,122 0,1

1/[Vo] 13,33 11,11 6,58 5,10 4,76 4,67 4,35

El intercepto a = 4,03 y la pendiente b= 4,86, por lo tanto Vmx =0,248 y Km = 1,21; valores que concuerdan y se acercan a los calculados en la grfica de Michaelis Menten.

Ahora grficamente, tal como se indica se sacan los valores que apuntan las flechas y se reemplazan: 3,9 = 1/ Vmx , por lo tanto Vmx = 0,256 y -0,70 = -1/Km, por lo tanto Km = 1,42. Grficamente siempre existe menos precisin.

LINEAWEAVER-BURK
14 12 10 1/[S] 8 6

1/Vmx
4 2

-2

-1

-1/Km 0
1/Vo

El intercepto a = 4,03 y la pendiente b= 4,86, por lo tanto Vmx =0,248 y Km = 1,21; valores que concuerdan y se acercan a los calculados en la grfica de Michaelis Menten.

Ahora para el caso Eadie Hofstee; se grfica Vo/[S] vs Vo. Generar la tabla y graficar. Sin necesidad de graficar se calcula la pendiente de la recta y el intercepto. En este caso a el intercepto ser a = V mx. y la pendiente b = -Km

[S] mM 0,50 0,75 2,00 4,00 6,00 8,20 10,0

V0 A405/min 0,075 0,090 0,152 0,196 0,210 0,214 0,230

Vo/[S] 0,15 0,12 0,076 0,049 0,035 0,026 0,023

V0 A405/min 0,075 0,090 0,152 0,196 0,210 0,214 0,230

La grfica sera ms o menos as:

Eadie Hofstee
0,35 0,3 0,25 Vo 0,2 0,15 0,1 0,05 0 0 0,02 0,04 0,06 0,08 Vo/[S] 0,1 0,12 0,14 0,16

V mx -Km

Por lo tanto la velocidad mx sera cercana a los 0,25 grficamente y la Km = pendiente. Si los datos los ingresamos a una ecuacin de la recta por anlisis de regresin lineal. La pendiente sera b= 1, 25 y el intercepto a= 0,252, por lo tanto: V mx = 0, 25 y Km = 1,25 mM. Por lo tanto no es necesario realizar las grficas, porque el reclculo de los valores es una recta con intercepto y pendiente.

Ahora estn en condiciones de hacer el mismo ejercicio para la grfica Wong-Hanes [S]/Vo vs [S] , y Eisenthal and Cornish Bowden ( -[S] vs Vo ).