UNIVERSIDAD DE NARIO FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES PROGRAMA DE BIOLOGIA PRACTICA DE LABORATORIO No 7 CINETICA DE CRECIMIENTO En cualquier sistema biolgico,

el CRECIMIENTO se lo define como el incremento ordenado de todos los componentes qumicos. El incremento de masa no refleja realmente crecimiento debido a que las clulas podran estar simplemente incrementando su contenido de productos almacenados tales como glicgeno. En un medio adecuado, para el cual tienen que estar completamente adaptadas, las bacterias estn en un estado de crecimiento balanceado. Durante este periodo, el incremento de biomasa esta acompaado por un incremento comparable de todas las otras propiedades relevantes de la poblacin tales como, protena, ADN, ARN y contenido de agua intracelular. En otras palabras, los cultivos que estn en crecimiento balanceado mantienen una composicin qumica constante. Este fenmeno simplifica la tarea de medir la rata de crecimiento de un cultivo bacterial; as la rata de incremento de todos los componentes de la poblacin es la misma, la medicin de cualquier componente es suficiente para determinar la rata de crecimiento. En un recipiente cerrado conocido como cultivo en batch, o en medio no renovado; una tpica CURVA DE CRECIMIENTO es la representada en la figura 1. Esta curva de crecimiento puede dividirse en varias fases: FASE DE LATENCIA: Cuando una poblacin microbiana se inocula en un medio fresco, no ocurre crecimiento inmediatamente , sino despus de cierto tiempo que se llama fase de latencia; la cual puede ser mas larga o mas corta dependiendo de muchos factores. Este es un tiempo de adaptacin a un nuevo medio, para lo cual es preciso que se sinteticen enzimas que permitan metabolizar los compuestos presentes en el nuevo medio. FASE EXPONENCIAL: Esta fase es la consecuencia de la divisin consecutiva de una clula. La mayora de los microorganismos crecen exponencialmente, pero las velocidades de crecimiento exponencial pueden variar esencialmente. Tal velocidad es influenciada por las condiciones ambientales (temperatura, composicin del medio de cultivo), as como por las caractersticas genticas del microorganismo en cuestin. FASE ESTACIONARIA: En un cultivo en donde no se renueva el medio el crecimiento exponencial no puede ocurrir indefinidamente. Lo que habitualmente sucede es que, o bien un nutriente esencial del medio de cultivo se acaba, o algn producto de desecho se acumula en el medio hasta alcanzar concentraciones

inhibitorias; la poblacin entonces alcanza la fase estacionaria. En esta fase no hay incremento neto (o decremento) del nmero de clulas. Sin embargo todava ocurren muchas funciones celulares, incluyendo el metabolismo energtico y algunos procesos biosinteticos. FASE DE MUERTE: Si la incubacin continua despus que la poblacin alcance la fase estacionaria, las clulas deben permanecer vivas y metablicamente activas pero tambin deben morir. Si esto ultimo ocurre se dice que las clulas entran en fase de muerte. En algunos casos esta fase va acompaada de lisis celular.

Fig. 1: Curva de crecimiento obtenida en cultivo cerrado

Los mtodos turbidimtricos nos permiten por medio del uso de espectrofotmetros, determinar el crecimiento microbiano. OBJETIVOS Determinar la cintica de crecimiento de cada uno de los aislados en un medio liquido adecuado para cada microorganismo (de acuerdo a la identificacin previa que hayan realizado) Trazar la curva de crecimiento del microorganismo, utilizando el mtodo turbidimetrico

MATERIALES

Aislados microbianos Espectrofotmetro Medio de cultivo liquido estril Tubos de ensayo Pipetas Blanco PROCEDIMIENTO Inicialmente para el uso del espectrofotmetro hay que seleccionar la longitud de onda del filtro en nanmetros (nm) por la sustancia pura, en este caso caldo nutritivo sin inocular. Lo anterior lo logramos construyendo la curva de absorbancia espectral, as: 1. Coloque en cero el equipo con agua destilada como blanco a 380 nm 2. Vierta en la cubeta caldo nutritivo estril y mida la absorbancia o densidad ptica (D.O) a 380 nm 3. Coloque en cero nuevamente el equipo con agua destilada a 400nm, mida la D.O para el caldo nutritivo estril a esa longitud de onda 4. Repita la operacin anterior variando la longitud de onda del filtro a: 450, 500, 560, 580, 600, 650 nm respectivamente. 5. Trace la curva de absorbancia espectral y determine la longitud de onda del filtro a la cual la D.O es mxima. Esta es la longitud de onda seleccionad para el ensayo de cintica de crecimiento. Cintica de Crecimiento: 1. Inocule 100l de un cultivo de 18h de incubacin previa de su aislado en un tubo de ensayo que contiene 5ml de medio de cultivo lquido apropiado. 2. Determine la densidad ptica (a 600nm) del caldo inoculado, teniendo en cuenta que el tubo este LIBRE DE HUELLAS DACTILARES O MARCAS QUE IMPIDAN UNA LECTURA REAL. Este es el tiempo cero (T0); en su grafica de crecimiento. 3. Realice el anterior proceso cada 20 minutos 4. Registre los datos organizadamente en un cuadro RESULTADOS Trace la curva de crecimiento para el aislado seleccionado por ustedes. CUESTIONARIO

1. Cul es el efecto de la concentracin de nutrientes sobre la tasa de crecimiento. 2. Defina que son los cultivos continuos de microorganismos y mediante un diagrama simplifique este tipo de sistema. 3. Mediante que mtodos se puede determinar el nmero de clulas de un microorganismo. Explique FUENTES: STANIER, Roger Y. et al, (1986) The Microbial World, Ed. Prentice Hall, Fifth Edition. MADIGAN, Michael T. et al, (2009) Brock Biologa Microorganismos, Ed. Pearson Addison Wesley, 12a Edicin. de los