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Técnicas de preparo de meios de cultura

Técnicas de preparo de meios de cultura

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TÉCNICAS DE CULTURA EM MICOLOGIA

Prof. Carlos Fernando dos Santos CRBM 3158

TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)
Meio de enriquecimento - Semeia vários tipos de fungos. Na microbiologia – meio seletivo

Água destilada.......1000ml
(isentas de elementos nutricionais)

  

Peptona................10g
carne degradados)

(Peptona de carne pedaços de

Dextrose...............40g (Carboidratos) Ágar-Ágar.............20g (15 a 20g, por litro) Clorafenicol...........50mg* pH.......................4,0 a 5,0

(Antibiótico que inibe o crescimento bacteriano ou gentamicina 60mg)

TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)

.........TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Batata Dextrose (BDA) (Meio de enriquecimento........ não é bom usar quando se quer crescimento de microorganismo)       Água destilada.15g (Dar consistência) Clorafenicol.......500ml Glicose......0 (pH ácido) ..500ml Infusão de batata.....50mg* (Inibir o crescimento bacteriano) pH.......10g (Fonte de carboidrato) Ágar-Ágar.. infusão da batata......0 a 5.........................4........

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Batata Dextrose (BDA) .

..4............................5g Cloreto de potássio............1..............0 ....... para fungos presentes no solo e diferencial....1000ml Sacarose........ quando quer crescer fungos geofílico(afinidade com a terra))           Água destilada........................................5g Sulfato de ferro..........TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Czapek (CZK) (Enriquecimento....0g Sulfato de magnésio.0...............................0....................0.....................01g Ágar-Ágar..........30g (fonte de carboidrato) Nitrato de sódio..............50mg/L* pH............................15g Clorafenicol................................3g Fosfato dibásico de potássio........0 a 5...

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Czapek (CZK) .

.........................0 (ácido) ...................4................0.......4g (Inibe o crescimento de fungos saprofitos) Clorafenicol...15g Ciclo-heximida.....TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Mycosel (MYC) (Seletivo para dermatófilos)        Água destilada.....0..............................05g pH........0 a 5.......1000ml Peptona.............................................10g Ágar-Ágar.................10g Glicose..

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Mycosel (MYC) .

....20g Clorafenicol........TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Infusão de Cérebro e Coração Bovino (BHI) (Meio seletivo....................................05g pH...0.................7................37g Ágar-Ágar..................... para fungos que crescem em tecidos profuntos)      Água destilada.......................................................1000ml Infusão de Cérebro e Coração(Difco)..4 (pH básico) .............

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Infusão de Cérebro e Coração Bovino (BHI) IMPORTANTE Incubação a 35ºC! .

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA   Meios Semi-sólidos Caldos Semi-sólidos Caldos .

. Desprezar meios que queimarem Autoclavação ideal =121ºC por 20 min.TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA    Observações Importantes   Ferver meios que contém ágar-ágar Adicionar o antibiótico somente após fervura do meio.

 Luz UV 20 min.TÉCNICAS DE CULTURA     ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO Vidrarias  Detergentes neutros  Autoclave 121ºC/20min Meios de cultura  Autoclave 121ºC/20min Bancadas  Álcool 70%  Hipoclorito de sódio Câmara de fluxo laminar  Álcool 70%.  Filtro de ar milipore* .

TÉCNICAS DE CULTURA ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO Hipoclorito de Sódio Desinfecção Perévia da Bancada Bico de Bunsein .

.TÉCNICAS DE CULTURA DESINFECÇÃO     Vidrarias Meios de cultura utilizados Filtro milipore Caixas de descarte (Descarpack)*  Autoclave 121ºC durante 20 minutos.

TÉCNICAS DE CULTURA DESINFECÇÃO E ESTERILIZAÇÃO  Autoclave 121ºC durante 20 minutos Interior do Autoclave Termômetro Barômetro Autoclave Vertical .

TÉCNICAS DE CULTURA CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO  Leveduras Fissão binária / Gemulação  Colônias circulares com bordas variáveis  Cicatriz gemular Bordos Diferencialdos Fissão binária / Gemulação .

TÉCNICAS DE CULTURA CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO  Fungos Filamentosos de maturação distintas  Centrífugo  Zonas .

TÉCNICAS DE CULTURA ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SÓLIDAS        Caldo YG 25ml Balão de 250ml Rolha de gaze + algodão 25g da amostra a ser analisada Crescimento de 5-7 dias Agitação constante(*) Temperatura ambiente(*) .

TÉCNICAS DE CULTURA ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SÓLIDAS .

Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS    Técnica de pique central em placa de petri Técnica de piques em gradiente em PP.

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Pique Central .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS .

TÉCNICAS DE CULTURA ISOLAMENTO DE FUNGOS PÓS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO    Placas de petri com Ágar SAB ou BDA Alça de platina em alíquota Câmara de fluxo laminar esterilizada Álcool 70%  Luz UV 20 min.   Piques em gradiente na placa de petri .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Piques em Gradiente .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Pique em Meio Inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE LEVEDURAS   Técnica de estrias em placa de petri Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE LEVEDURAS   Técnica de estrias em placa de petri Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

.TÉCNICAS DE CULTURA ISOLAMENTO DE FUNGOS PÓS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO  Câmara de fluxo laminar esterilizada   Álcool 70% Luz UV 20 min.

Carlos Fernando dos Santos CRBM: 3158 Todos os direitos reservados.OBRIGADO! fernandoupa@gmail.com Prof:. .

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