TÉCNICAS DE CULTURA EM MICOLOGIA

Prof. Carlos Fernando dos Santos CRBM 3158

TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)
Meio de enriquecimento - Semeia vários tipos de fungos. Na microbiologia – meio seletivo

Água destilada.......1000ml
(isentas de elementos nutricionais)

  

Peptona................10g
carne degradados)

(Peptona de carne pedaços de

Dextrose...............40g (Carboidratos) Ágar-Ágar.............20g (15 a 20g, por litro) Clorafenicol...........50mg* pH.......................4,0 a 5,0

(Antibiótico que inibe o crescimento bacteriano ou gentamicina 60mg)

TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)

...........................500ml Infusão de batata. infusão da batata.500ml Glicose......0 a 5..50mg* (Inibir o crescimento bacteriano) pH.15g (Dar consistência) Clorafenicol.........TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Batata Dextrose (BDA) (Meio de enriquecimento..10g (Fonte de carboidrato) Ágar-Ágar.........0 (pH ácido) .............. não é bom usar quando se quer crescimento de microorganismo)       Água destilada......4........

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Batata Dextrose (BDA) .

..3g Fosfato dibásico de potássio.............................................1000ml Sacarose............................................0g Sulfato de magnésio..............1.......4....................0.............................15g Clorafenicol......... para fungos presentes no solo e diferencial..........................0..5g Sulfato de ferro.....................50mg/L* pH....TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Czapek (CZK) (Enriquecimento..0......... quando quer crescer fungos geofílico(afinidade com a terra))           Água destilada.0 a 5...0 ....................................01g Ágar-Ágar.......5g Cloreto de potássio.....30g (fonte de carboidrato) Nitrato de sódio...........

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Czapek (CZK) .

.....................0................10g Ágar-Ágar....................4................................................TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Mycosel (MYC) (Seletivo para dermatófilos)        Água destilada.....0 a 5.............10g Glicose.......05g pH....1000ml Peptona....0..........................0 (ácido) ............15g Ciclo-heximida......4g (Inibe o crescimento de fungos saprofitos) Clorafenicol.......

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Mycosel (MYC) .

.............TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Infusão de Cérebro e Coração Bovino (BHI) (Meio seletivo...................4 (pH básico) ...........1000ml Infusão de Cérebro e Coração(Difco)........................................................ para fungos que crescem em tecidos profuntos)      Água destilada.......................................37g Ágar-Ágar....05g pH......20g Clorafenicol....................7......0.

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Infusão de Cérebro e Coração Bovino (BHI) IMPORTANTE Incubação a 35ºC! .

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA   Meios Semi-sólidos Caldos Semi-sólidos Caldos .

Desprezar meios que queimarem Autoclavação ideal =121ºC por 20 min. .TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA    Observações Importantes   Ferver meios que contém ágar-ágar Adicionar o antibiótico somente após fervura do meio.

TÉCNICAS DE CULTURA     ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO Vidrarias  Detergentes neutros  Autoclave 121ºC/20min Meios de cultura  Autoclave 121ºC/20min Bancadas  Álcool 70%  Hipoclorito de sódio Câmara de fluxo laminar  Álcool 70%.  Luz UV 20 min.  Filtro de ar milipore* .

TÉCNICAS DE CULTURA ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO Hipoclorito de Sódio Desinfecção Perévia da Bancada Bico de Bunsein .

TÉCNICAS DE CULTURA DESINFECÇÃO     Vidrarias Meios de cultura utilizados Filtro milipore Caixas de descarte (Descarpack)*  Autoclave 121ºC durante 20 minutos. .

TÉCNICAS DE CULTURA DESINFECÇÃO E ESTERILIZAÇÃO  Autoclave 121ºC durante 20 minutos Interior do Autoclave Termômetro Barômetro Autoclave Vertical .

TÉCNICAS DE CULTURA CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO  Leveduras Fissão binária / Gemulação  Colônias circulares com bordas variáveis  Cicatriz gemular Bordos Diferencialdos Fissão binária / Gemulação .

TÉCNICAS DE CULTURA CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO  Fungos Filamentosos de maturação distintas  Centrífugo  Zonas .

TÉCNICAS DE CULTURA ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SÓLIDAS        Caldo YG 25ml Balão de 250ml Rolha de gaze + algodão 25g da amostra a ser analisada Crescimento de 5-7 dias Agitação constante(*) Temperatura ambiente(*) .

TÉCNICAS DE CULTURA ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SÓLIDAS .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS    Técnica de pique central em placa de petri Técnica de piques em gradiente em PP. Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Pique Central .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS .

  Piques em gradiente na placa de petri .TÉCNICAS DE CULTURA ISOLAMENTO DE FUNGOS PÓS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO    Placas de petri com Ágar SAB ou BDA Alça de platina em alíquota Câmara de fluxo laminar esterilizada Álcool 70%  Luz UV 20 min.

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Piques em Gradiente .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Pique em Meio Inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE LEVEDURAS   Técnica de estrias em placa de petri Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE LEVEDURAS   Técnica de estrias em placa de petri Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

.TÉCNICAS DE CULTURA ISOLAMENTO DE FUNGOS PÓS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO  Câmara de fluxo laminar esterilizada   Álcool 70% Luz UV 20 min.

.OBRIGADO! fernandoupa@gmail.com Prof:. Carlos Fernando dos Santos CRBM: 3158 Todos os direitos reservados.

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