TÉCNICAS DE CULTURA EM MICOLOGIA

Prof. Carlos Fernando dos Santos CRBM 3158

TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)
Meio de enriquecimento - Semeia vários tipos de fungos. Na microbiologia – meio seletivo

Água destilada.......1000ml
(isentas de elementos nutricionais)

  

Peptona................10g
carne degradados)

(Peptona de carne pedaços de

Dextrose...............40g (Carboidratos) Ágar-Ágar.............20g (15 a 20g, por litro) Clorafenicol...........50mg* pH.......................4,0 a 5,0

(Antibiótico que inibe o crescimento bacteriano ou gentamicina 60mg)

TÉCNICAS DE CULTURA
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA

Ágar Sabouraud Clorafenicol (SAB)

.10g (Fonte de carboidrato) Ágar-Ágar..........500ml Glicose...50mg* (Inibir o crescimento bacteriano) pH..15g (Dar consistência) Clorafenicol........... não é bom usar quando se quer crescimento de microorganismo)       Água destilada..500ml Infusão de batata..0 a 5......4....0 (pH ácido) ...........................TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Batata Dextrose (BDA) (Meio de enriquecimento........... infusão da batata.......

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Batata Dextrose (BDA) .

......... para fungos presentes no solo e diferencial..0......4.................................................3g Fosfato dibásico de potássio............................1..01g Ágar-Ágar.15g Clorafenicol..............................................................................50mg/L* pH.....0 ...........5g Cloreto de potássio..TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Czapek (CZK) (Enriquecimento..............0 a 5...0g Sulfato de magnésio.......0.30g (fonte de carboidrato) Nitrato de sódio......... quando quer crescer fungos geofílico(afinidade com a terra))           Água destilada.............................................................1000ml Sacarose.5g Sulfato de ferro...0.....

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Czapek (CZK) .

.....................0 (ácido) .................05g pH................................0 a 5.......................10g Ágar-Ágar.......15g Ciclo-heximida.....TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Mycosel (MYC) (Seletivo para dermatófilos)        Água destilada.............10g Glicose.....................................4...4g (Inibe o crescimento de fungos saprofitos) Clorafenicol..1000ml Peptona.......0.....0.................

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Mycosel (MYC) .

.......0..TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA Ágar Infusão de Cérebro e Coração Bovino (BHI) (Meio seletivo.........37g Ágar-Ágar..............1000ml Infusão de Cérebro e Coração(Difco). para fungos que crescem em tecidos profuntos)      Água destilada..............................................................................05g pH.......4 (pH básico) ............................20g Clorafenicol..................7...........

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA  Ágar Infusão de Cérebro e Coração Bovino (BHI) IMPORTANTE Incubação a 35ºC! .

TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA   Meios Semi-sólidos Caldos Semi-sólidos Caldos .

.TÉCNICAS DE CULTURA PREPARO DE MEIOS DE CULTURA    Observações Importantes   Ferver meios que contém ágar-ágar Adicionar o antibiótico somente após fervura do meio. Desprezar meios que queimarem Autoclavação ideal =121ºC por 20 min.

 Filtro de ar milipore* .  Luz UV 20 min.TÉCNICAS DE CULTURA     ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO Vidrarias  Detergentes neutros  Autoclave 121ºC/20min Meios de cultura  Autoclave 121ºC/20min Bancadas  Álcool 70%  Hipoclorito de sódio Câmara de fluxo laminar  Álcool 70%.

TÉCNICAS DE CULTURA ASSEPSIA E ESTERILIZAÇÃO Hipoclorito de Sódio Desinfecção Perévia da Bancada Bico de Bunsein .

TÉCNICAS DE CULTURA DESINFECÇÃO     Vidrarias Meios de cultura utilizados Filtro milipore Caixas de descarte (Descarpack)*  Autoclave 121ºC durante 20 minutos. .

TÉCNICAS DE CULTURA DESINFECÇÃO E ESTERILIZAÇÃO  Autoclave 121ºC durante 20 minutos Interior do Autoclave Termômetro Barômetro Autoclave Vertical .

TÉCNICAS DE CULTURA CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO  Leveduras Fissão binária / Gemulação  Colônias circulares com bordas variáveis  Cicatriz gemular Bordos Diferencialdos Fissão binária / Gemulação .

TÉCNICAS DE CULTURA CINÉTICA DO CRESCIMENTO FÚNGICO  Fungos Filamentosos de maturação distintas  Centrífugo  Zonas .

TÉCNICAS DE CULTURA ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SÓLIDAS        Caldo YG 25ml Balão de 250ml Rolha de gaze + algodão 25g da amostra a ser analisada Crescimento de 5-7 dias Agitação constante(*) Temperatura ambiente(*) .

TÉCNICAS DE CULTURA ENRIQUECIMENTO PARA ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS SÓLIDAS .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS    Técnica de pique central em placa de petri Técnica de piques em gradiente em PP. Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Pique Central .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS .

TÉCNICAS DE CULTURA ISOLAMENTO DE FUNGOS PÓS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO    Placas de petri com Ágar SAB ou BDA Alça de platina em alíquota Câmara de fluxo laminar esterilizada Álcool 70%  Luz UV 20 min.   Piques em gradiente na placa de petri .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Piques em Gradiente .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE FUNGOS FILAMENTOSOS Pique em Meio Inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE LEVEDURAS   Técnica de estrias em placa de petri Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

TÉCNICAS DE CULTURA SEMEIO DE LEVEDURAS   Técnica de estrias em placa de petri Técnica de estrias em tubo com meio inclinado .

.TÉCNICAS DE CULTURA ISOLAMENTO DE FUNGOS PÓS-CRESCIMENTO EM CALDO ENRIQUECIDO  Câmara de fluxo laminar esterilizada   Álcool 70% Luz UV 20 min.

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