TCNICAS MICROSCPICAS

OBJETIVO: Equilibrio ptimo entre magnificacin, resolucin y contraste.

CARACTERSTICAS DE UN MICROSCOPIO
- n de aumentos - lmite de resolucin (LR): Distancia mnima a la que se encuentran dos puntos que pueden ser detectados como distintos por el sistema ptico. LR = /2nsen : longitud de onda 2nsen : apertura numrica n : ndice de refraccin del medio 2sen : caracterstica del objetivo

TCNICAS MICROSCPICAS
Microscopa ptica:

Campo claro Campo oscuro Contraste de fases Interferencia Polarizacin Fluorescencia

TCNICAS MICROSCPICAS
Microscopa Electrnica: Transmisin Barrido

Microscopa Confocal

CONTRASTE DE FASES
Dr. Frits Zernike. 1934, desarrollo del mtodo. 1953, premio Nobel. Objetos de fase, principalmente clulas vivas en cultivo sin teir. Estructuras de clulas con ndice de refraccin ms alto que el medio circundante reducen la velocidad de la luz y la difractan. Cuanto ms gruesa es la estructura de la clula o ms alta su densidad ptica, mayor ser el desplazamiento de fase. El ojo humano no es capaz de percibir ese desplazamiento.

PRINCIPIO DEL CONTRASTE DE FASES

Traslado del desplazamiento de fase invisible a diferencias visibles de intensidades. RESULTADO: Las estructuras de los especmenes aparecen oscuras contra un fondo gris.

MICROSCOPA DE FLUORESCENCIA
FLUOROCROMOS: Molculas fluorescentes que tienen longitudes de onda de absorcin y emisin especficas.

FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO: * Fuente de luz apropiada * ptica * Seleccin de filtros

Energa

IMPORTANCIA DE SEPARAR LA FLUORESCENCIA DE LA LUZ INCIDENTE.

FILTROS: * primario o de excitacin * barrera

EPIFLUORESCENCIA

MICROSCOPA CONFOCAL

MICROSCOPIO CONFOCAL
* Desarrollado en 1953 y ampliamente utilizado en los ltimos 10 aos. * Producto de fusin entre diferentes campos: microscopa, tecnologa laser, ptica, electrnica e informtica. * En la microscopa confocal las estructuras son detectadas al visualizar la luz que proviene de un nico plano focal de la muestra, excluyendo la luz que est fuera de foco.

APLICACIONES
Marcaje inmunolgico. Identificacin de organelas celulares. Trfico de protenas. Localizacin gnica en cromosomas. Anlisis de movilidad molecular. Marcaje mltiple. Imagen celular in vivo.

Saccharomyces cerevisiae