POP Bioquimica

LABORATRIO: ______________________________________________________________ PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO ALFA-AMILASE
Pg. 1/117 POP - 003/01- B
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica
ndice
CIDO RICO - Mtodo Enzimtico Colorimtrico - UOD-PAP............................................ ALBUMINA - Mtodo Colorimtrico Verde de Bromocresol................................................... ALFA-AMILASE - Mtodo Cintico Gal G2 CNP................................................................ BILIRRUBINA DIRETA E TOTAL - Mtodo Colorimtrico Malloy-Evelyn DMSO. CLCIO ASX -Mtodo ARSENAZO III ................................................................................. CLCIO - Mtodo Colorimtrico (o-CRESOLFTALENA)...................................................... CLORO - Mtodo Colorimtrico (Mercrio Tiocianato) ...................................................... COLESTEROL - Mtodo Enzimtico Colorimtrico .............................................................. HDL COLESTEROL DIRETO - Mtodo Enzimtico Colorimtrico Direto Sem precipitao............................................................................................................................. HDL COLESTEROL - Mtodo Precipitante cido Fosfotngstico...................................... CREATININA - Mtodo Cintico Colorimtrico...................................................................... CREATINO QUINASE (CK-NAC) -Mtodo Cintico UV..................................................... CREATINO QUINASE MB (CK-MB) - Mtodo Cintico UV............................................. FERRO Ferrozine - Mtodo Colorimtrico............................................................................. FERRO CRX - Mtodo Cromazurol B .................................................................................... FOSFATASE ALCALINA - Mtodo Cintico Colorimtrico (DGKC DEA).......................... FSFORO UV - Mtodo Molibdato .................................................................................... FRUTOSAMINA Mtodo Cintico Colorimtrico................................................................. - GLUTAMILTRANSFERASE (GAMA - GT) - Mtodo Cintico Colorimtrico.................... GLICOSE - Mtodo Enzimtico Colorimtrico ....................................................................... MAGNSIO MONO - Mtodo colorimtrico - MAGON SULFONADO................................... PROTENA TOTAL - Mtodo Colorimtrico .......................................................................... PROTENA URINRIA - Mtodo Vermelho de Pirgalol......................................................... TGO / AST - Mtodo Cintico UV........................................................................................ TGP / ALT - Mtodo Cintico UV........................................................................................ TRIGLICRIDES - Mtodo Enzimtico Colorimtrico............................................................ URIA ENZIMTICA - Mtodo Enzimtico Colorimtrico ..................................................... URIA UV - Mtodo Cintico Enzimtico UV ..................................................................... Pgina 03 07 11 16 20 24 28 32 36 41 45 50 54 58 62 66 70 74 77 81 85 90 94 98 102 106 110 114 Reviso 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica CIDO RICO

Mtodo Enzimtico Colorimtrico UOD-PAP 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada principalmente na avaliao de enfermidades renais, doenas metablicas genticas e patologias como leucemias, linfomas, etc. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Sangue: o cido rico o produto final do metabolismo das purinas, estando elevado em vrias situaes clnicas alm da gota. Somente 10% dos pacientes com hiperuricemia tm gota. Nveis elevados tambm so encontrados na insuficincia renal, etilismo, cetoacidose diabtica, psorase, pr-eclmpsia, dieta rica em purinas, neoplasias, ps-quimioterapia e radioterapia, uso de paracetamol, ampicilina, aspirina (doses baixas), didanosina, diurticos, beta-bloqueadores, dentre outras drogas. Diminuio dos nveis encontrada na dieta pobre em purinas, defeitos dos tbulos renais, porfiria, uso de tetraciclina, alopurinol, aspirina, corticides, indometacina, metotrexato, metildopa, verapamil, intoxicao por metais pesados e no aumento do clearance renal. Urina: cerca de 70% do cido rico eliminado pelos rins. Esta dosagem til em pacientes com clculos urinrios para identificao daqueles com excreo urinria de urato aumentada. lcool causa diminuio do urato urinrio. Antiinflamatrios, vitamina C, diurticos e warfarim podem interferir no resultado. Lquido sinovial: pode ser til no diagnstico diferencial de artropatias. 3. PRINCPIO DO MTODO No presente mtodo, o cido rico da amostra sofre a ao da uricase, na presena de oxignio, produzindo alantona e perxido de hidrognio, este em presena de um reagente fenlico (TOOS) e da 4-aminoantipirina, sofre a ao da peroxidase produzindo um complexo violceo (quinonimina), com mximo de absoro em 500 nm. cido rico + O2 + 2H2O
uricase
Alantona + CO2 + H2O2

peroxidase
2H2O2 + 4-aminoantipirina + TOOS 4. PREPARAO DA AMOSTRA
Quinonimina + 3H2O
Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro, urina e lquido sinovial. No usar plasma, pois obtem-se resultados falsamente diminudos. Soro: obtido da maneira usual. Separar dentro das prximas 2 horas da coleta. Soros ictricos ou com hemlise produzem valores falsamente elevados. O fluoreto inibe a Uricase. Urina: de 24 horas, separar 10 mL, acertar o pH entre 7,0 e 9,0 com hidrxido de sdio a 5% e aquecer 10 minutos a 56C para dissolver os cristais de urato e cido rico, evitando resultados falsamente diminudos. Diluir a urina 1:20 com gua destilada ou deionizada e fazer a determinao. Multiplicar o resultado por 20. Lquido sinovial: a coleta no deve ser feita antes de decorridos 07 dias da ltima puno, ou antes de 30 dias aps a administrao de medicamento intra-articular. Armazenamento e estabilidade das amostras: o o o Soro: O analito estvel 03 dias entre 2-8 C ou 06 meses a 10 C (10 C negativos). No utilizar plasma, pois apresenta resultados falsamente diminudos. Urina: Manter refrigerado. Lquido sinovial: At 15 dias entre 2-8oC. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Urina: presena de cido ascrbico. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material. 5. COMPONENTES DO KIT CIDO RICO - UOD-PAP Registro M.S.: 80027310038 Cdigos: BT 10.001 1 fr com 250mL + 1 fr Padro 2,0 mL. BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil.

Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br
Reagente: Tampo Fosfato pH, 7.0 50 mmol, Uricase 450 U/L, Peroxidase 2500 U/L, 4-aminoantipirina 0,3 mmol/L; TOOS 0,34 mmol/L e conservantes. Padro: Soluo de cido rico (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. Se o reagente for mantido de 15 25C, protegido da luz, sua estabilidade ser de 2 semanas O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 500 nm (490-510), com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas.e ponteiras Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico.

Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos.Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Os reagentes devem estar temperatura ambiente. 2. Pipetar em tubos de ensaio: gua destilada Padro Amostra Reagente Branco 20L 1,0mL Padro 20L 1,0mL Amostra 20L 1,0mL
3. Agitar bem e incubar os tubos durante 15 minutos temperatura ambiente (16-25 C) ou durante 10 minutos a 37C. 4. Ler a absorbncia (A) do Padro e da Amostra frente ao Branco a 500 nm (490-510nm). A cor estvel durante 30 minutos. 5. Para espectrofotmetros que requeiram volumes de leitura superiores aos indicados, usar 50 l de amostra ou padro e 2,0 mL de reagente. Os volumes de amostra e de reagentes podem ser modificados proporcionalmente, sem prejuzos para o desempenho do teste. Os clculos permanecem inalterados. Em caso de reduo dos volumes fundamental que se observe o volume mnimo necessrio para a leitura fotomtrica. Volume de amostra menores que 10 L (10 microlitros = 0,01 mL) so crticos em aplicaes manuais e devem ser usados com cautela, pois aumentam a impreciso da medio. Dosagem na urina: Homogeneizar a urina, medir o volume e separar uma amostra de cerca de 20 mL. Ajustar o pH para a faixa entre 7 e 9 com NaOH 5% e aquecer a amostra durante 10 minutos a 56C. Este procedimento dissolve cristais de cido rico presentes, evitando resultados falsamente diminudos. Diluir a urina assim tratada 1:10 (0,1 mL de urina + 0,9 mL de gua destilada ou deionizada), procedendo dosagem como descrito acima para o soro. Multiplicar o resultado obtido por 10. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. Para soro lipmico e/ou com bilirrubina superior a 10 mg/dL, misturar 1,0 mL de NaCl 0,9% e 0,02 mL de soro. Ler em 520 nm ou filtro verde, acertando o zero com gua. Diminuir a absorbncia assim obtida, da absorbncia do teste e calcular a concentrao. Se houver suspeita da presena de cido ascrbico, deixar o soro em repouso durante 90 minutos antes de iniciar a dosagem, para que resultados falsamente diminudos no sejam obtidos. 11. CLCULOS Abs. Teste x Valor padro mg/dL = mg/dL cido rico Abs. Padro Onde: Abs. Teste Absorbncia do teste Abs. Padro Absorbncia do Padro Valor padro mg/dL valor da concentrao do Padro (vide etiqueta do frasco)
Devido tima reprodutibilidade, que pode ser obtida com a metodologia, pode-se utilizar o mtodo do fator:

Fator de calibrao = Conc. do Padro . Absorbncia do Padro Concentrao do Padro Vide etiqueta do frasco.
cido rico (mg/dL) = Absorbncia do Teste x Fator Clculo p/ Urina: Urina (mg/24 h) = mg/dL x volume urinrio (em mL) 100
12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL cido rico x 59,5 = mmol/L cido rico Valores de referncia Para amostras de Soro e Plasma: Homens: 2,5 a 7,0 mg/dL = 148 a 416 mmol/L Mulheres: 1,5 a 6,0 mg/dL = 89 a 356 mmol/L Para amostras de Urina: 250 a 750 mg/24horas. Para amostras de Lquido sinovial: Valores prximos ao do soro colhido na mesma ocasio. Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 20 mg/dL (1190 mmol/L) Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias O cido ascrbico > 0,3 mmol/L, a hemoglobina > 1g/L e bilirrubina > 15 mg/dL interferem. A lipemia pode afetar os resultados. Falsos Valores elevados: acetozolamida, clorotiazida, furosemida, metildopa, fenotiazida, salicilatos, etc. Falsos Valores baixos: vitamina C (cido ascrbico), acetohexamida, alopurinol, azatiopina, probemicida, mercaptopurina, coumarim, estrgenos, sulfinpirazona, etc. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Barham D, Trinder P. Analyst 1972; 27:142-145. Fossati P, Prencipe L, Bert G. Clin Chem 1980; 26:227-231. Pagana K.D. : Mosbys diagnostic and laboratory test reference 1992, 754-758. Guyton, Fisiologia humana e Mecanismos das doenas 1993, 5edio. cido rico Bula do Kit Biotcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 11-12. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 58-59
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica ALBUMINA

Mtodo Colorimtrico Verde de Bromocresol 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao do estado nutricional, de enfermidades hepticas avanadas, enfermidades renais e casos de desidratao grave. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A albumina uma protena globular produzida pelo fgado que o principal componente protico de um soro humano normal. Tem diversas funes importantes: Transporte de molculas hidrofbicas como a bilirrubina e os cidos graxos. Isto possvel devido a zona hidrofbica que existe em sua estrutura. Esta caracterstica utilizada para dosar a albumina. Nutrio; Manuteno da presso osmtica sangnea; Variaes nos nveis sricos de albumina no so especficos j que podem ser devido a um grande nmero de alteraes, no entanto til para monitorar o estado do paciente. Havendo leso heptica ou renal teremos distrbios que podem ser resumidos em: Hipoalbuminemia: que ocorre nas doenas hepticas crnicas, na sndrome nefrtica e casos de desnutrio grave. Essa reduo est relacionada a diminuio da sntese heptica ou perda excessiva renal, levando a uma diminuio da presso coloidosmtica do plasma provocando um aumento de reabsoro de sdio e gua e conseqentemente causando edema, ictercia e anemia dilucional. Hiperalbuminemia: observada em casos de desidratao grave e queimaduras externas, onde teremos a perda excessiva de gua causando uma hemoconcentrao. Em algumas situaes clnicas, o conhecimento dos nveis de albumina suficiente e at pode oferecer algumas vantagens em relao protena. 3. PRINCPIO DO MTODO A albumina presente na amostra reage com o verde de bromocresol em meio cido, formando um complexo colorido que quantificado espectrofotometricamente. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente: O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Realizar a coleta pela manh Amostras: Soro, lquido pleural ou lquido asctico. Soro: obtido da maneira usual. Lquido pleural ou lquido asctico: O material no colhido no laboratrio. O exame feito somente com material enviado at 06 horas depois da coleta. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro: O analito estvel 3 dias entre 2 8C e 7 dias a 10oC (10C negativos.) Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de lipemia intensa. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material. 5. COMPONENTES DO KIT ALBUMINA Cdigos: Registro M.S.: 80027310032 BT 10.002 - 1 fr de 250 mL + 1 fr de Padro - 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Tampo Succinato 0,88 mmol pH 4,2 , verde de bromocresol 0,17 mmol/L, azida sdica 9mmol. Padro: Soluo de Albumina (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso.

Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar a temperatura ambiente 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes a temperatura ambiente. Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 630 nm (620-640), com cubetas Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas.e ponteiras Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais.

Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. O reagente contm azida sdica que txica, portanto, tomar cuidado para evitar a ingesto e no caso de contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. No descarte do reagente, usar bastante gua, pois a azida pode formar compostos explosivos com tubulaes de cobre e chumbo. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Padro Albumina Amostra Reagente Branco 1,0 mL Padro 5 L 1,0 mL Amostra 5 L 1,0 mL
2. Agitar bem e deixar nos tubos durante 10 minutos temperatura ambiente. 3. Ler a absorbncia (A) do Padro e da Amostra frente ao Branco a 630 nm. A cor estvel durante 30 minutos. 4. Para espectrofotmetros que requeiram volumes de leitura superiores aos indicados, usar 0,05 ml de amostra ou padro e 2 mL de reagente. Os volumes de amostra e de reagentes podem ser modificados proporcionalmente, sem prejuzos para o desempenho do teste. Os clculos permanecem inalterados. Em caso de reduo dos volumes fundamental que se observe o volume mnimo necessrio para a leitura fotomtrica. Volume de amostra menores que 10 L (10 microlitros = 0,01 mL) so crticos em aplicaes manuais e devem ser usados com cautela, pois aumentam a impreciso da medio.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas de segurana estabelecidas. Fazer referncia ao Manual ou POP de Segurana. 11. CLCULOS Abs. Amostra x conc. Padro = g/dL Albumina Abs. Padro Onde Abs. Amostra Absorbncia da Amostra Abs. Padro Absorbncia do Padro Conc. Padro valor da concentrao do Padro (vide etiqueta do frasco) Devido a grande reprodutibilidade, que pode ser obtida com a metodologia, pode-se utilizar o mtodo do fator: Fator de calibrao = Conc. do Padro . Absorbncia do Padro Concentrao do Padro Vide etiqueta do frasco.
Albumina (g/dL) = Absorbncia do Teste x Fator Globulina = Protena Total Albumina Relao A/G = Albumina / Globulina 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada : g/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mol/L = g/dL x 144,9 g/L = g/dL x 10 Valores de referncia Os valores so normais entre 3,5 e 4,8 g/dL. Estes valores so unicamente orientativos. Recomendamos que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia.

13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 6 g/dL Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias A bilirrubina > 25 mg/dL e a hemoglobina > 1 g/L interferem no mtodo. Falsos Valores elevados: o uso de torniquete por mais de 3 minutos provoca um aumento no valor. Falsos Valores baixos: plasmas obtidos com heparina, ltio e oxalato de potssio combinando com fluoreto de sdio, fornecem resultados falsamente diminudos. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Doumas B. T: Watson, WA & Biggs H.G. Clin. Chim. Acta. 1971;31:1:87. Henry, R; Sobel, C. & Berkman, S. Anal. Chem. 29/10:1491 (1957). Jacobs DS, Kasten Jr. BL. Laboratory Test Handbook, Hudson. Lexi-Comp Inc., 1996, 66. Albumina Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 11-12. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 58-59
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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica ALFA-AMILASE

Mtodo Cintico Gal G2 - CNP 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de enfermidades pancreticas agudas ou crnicas e no diagnstico da parotidite (caxumba). 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A amilase uma hidrolase que degrada complexos de carboidratos, sendo, predominantemente, de origem pancretica e da glndula salivar. So conhecidas duas isoenzimas: a pancretica e a salivar, na proporo de 40:60 em soro de indivduos sadios. As dosagens da amilase srica e urinria so amplamente utilizadas no diagnstico de doenas do pncreas, bem como na investigao da funo pancretica. Na maioria dos pacientes com pancreatite aguda, seus nveis sricos elevam-se duas a 12 horas aps o incio do episdio, atingindo pico em 24 horas e retornando ao normal entre 48 a 72 horas. A magnitude da elevao srica no diretamente relacionada com a gravidade do envolvimento pancretico, mas indica, com grande probabilidade, um diagnstico de pancreatite aguda. Aumentos da amilase srica no so necessariamente devidos pancreatite. Tumores de pulmo e de ovrio podem produzir hiperamilasemia em torno de 50 vezes do intervalo de referncia. Em torno de 25% da amilase srica normalmente eliminada na urina. Na insuficincia renal est aumentada em proporo extenso do comprometimento renal. Amilase srica normal pode ser encontrada (em torno de 20%) em pacientes com pacreatite aguda. Em episdios agudos de pancreatite crnica, nveis de amilase podem estar ligeiramente aumentados, porm, freqentemente, permanecem em nveis normais. A amilase pode ligar-se a protenas (ex.: imunoglobulinas), formando complexos de alto peso molecular denominados macroamilases. Isso caracterizado por amilase srica elevada e urinria normal e pode ocorrer em indivduos sadios.
Nveis aumentados
Parotidite Pancreatite aguda Macroamilasemia Gravidez ectpica Ocluso mesentrica Queimaduras graves Leso de glndula salivar Doena intra-abdominal (peritonite, apendicite aguda etc.) Intoxicao alcolica Insuficincia renal grave Obstruo das vias biliares Obstruo intestinal Obstruo do canal pancretico Cncer de pncreas Cetoacidose diabtica Neoplasias (pulmo ou ovrio)
Nveis diminudos
Insuficincia pancretica Fibrose cstica avanada Hepatopatias graves
AMILASE URINRIA Uma quantidade significativa de amilase srica excretada na urina e, portanto, elevaes sricas sero refletidas na mesma. A amilase urinria parece atingir nveis mais elevados, persistindo por perodos mais longos, quando comparada com a srica. A macroamilasemia se caracteriza por elevao dos nveis sricos de amilase com valores urinrios normais. A relao entre o clearance de amilase/creatinina auxilia no diagnstico diferencial da macroamilasemia (clearance muito baixo). A relao normal de 1% a 4%. Encontra-se aumentada na pancreatite aguda, diminuda na macroamilasemia e normal ou pouco diminuda na hiperamilasemia salivar. 3. PRINCPIO DO MTODO A -amilase catalisa a hidrlise do 2-cloro-4-nitrofenil--galactosilmatside (Gal-G2--CNP) liberando 2-cloro-4-nitrofenol. A quantidade de 2-cloro-4-nitrofenol liberada medida a 405 nm, sendo proporcional atividade da enzima no soro. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Realizar a coleta pela manh. Amostras Pode ser usado soro, urina, lquido pleural ou lquido asctico. Soro: obtido da maneira usual. Urina: de 2 a 24 horas, sem conservantes. Colhido de maneira usual. Quando se determina a amilase na amostra de urina, deve-se tambm determinar a creatinina na mesma amostra. O resultado dever ser reportado com Relao amilase/Creatinina (U/g), com o objetivo de compensar as variaes de atividade da amilase em amostras obtidas de cada mico.
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Lquido pleural ou lquido asctico: O material no colhido no laboratrio. O exame feito somente com material enviado at 06 horas depois da coleta. Armazenamento e estabilidade das amostras: A -amilase em soro e plasma estvel pelo menos por 5 dias a 2-8C. A heparina no interfere como anticoagulante. o A dosagem da amilase urinria deve ser feita em urina de 2 a 24 horas, mantida entre 2 e 8 C, sem conservantes. Outros lquidos biolgicos tambm devem ser colhidos sem conservantes, Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise ou sinais de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT - AMILASE - Gal G2 - CNP Cdigos: BT 11.001.00 2 fr com 15mL BT 11.001.00 2 fr com 30mL Registro M.S.: 80027310013
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente Substrato: Tampo biolgico pH 6,00 50 mmol/L; Cloreto de sdio 70 mmol/L; Cloreto de clcio 6 mmol/L; Gal G2 CNP 2,22 mmol/L Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 8 C Cuidados especiais: Pipetar o substrato com a boca, soprar no substrato, usar material contaminado com saliva e suor e conversar junto ao frasco destampado so aes que podem contaminar o reagente com quantidades microscpicas de saliva ou suor, capazes de deteriorar irreversivelmente o substrato. Segundo estudos de estabilidade a absorbncia do substrato, medida contra a gua, apresenta um acrscimo de 0,003 por ms. Elevaes repentinas da absorbncia do substrato indicam contaminao com saliva ou suor, capazes de deteriorar irremediavelmente o substrato. No utilizar o reagente quando sua absorbncia, medida contra a gua em 405 nm, for igual ou maior que 0,005 ou quando mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 405 nm, com cubetas termostatizadas Pipetas automticas e ponteiras. Centrfuga. Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados.
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8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. necessrio o uso de proteo respiratria, para evitar a contaminao do reativo. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase. Recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos.Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso OBS: Leituras de absorbncia do reativo superiores a 0,600 A com o aparelho zerado em 405 nm com gua deionizada indicam deteriorao do reativo. Procedimento manual 1. Pr-aquecer o Reagente durante alguns minutos, a temperatura desejada. 2. Pipetar em uma cubeta: Soro / Plasma Reativo Amostra 3. 1.0 mL 10l Urina 1.0 mL 10l Lquidos Pleural / Asctico 1.0 mL 10l
Misturar e inserir no porta-cubetas termostatizado.
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4. Anotar a absorbncia aps 1 minuto e efetuar novas leituras aps mais 1, 2 e 3 minutos (A1, A2 e A3 respectivamente).
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS Para linearidade: A / min x 7537 a 37oC Amilase Urinria/Hora Amilase (U/l) x volume urinrio (ml) Amilase urinria (U/h) = 1000 x tempo de coleta (h) Relao Amilase/Creatinina Amilase (U/l) x 100 Relao Amilase/Creatinina (U/g) = Creatinina (mg/dl) Relao depurao da amilase / depurao da creatinina Determinar a atividade da amilase e a concentrao da creatinina no soro e em uma amostra de urina e aplicar os resultados na seguinte frmula: Amilase na urina (U/l) x Creatinina no soro (mg/dl) Relao (%): Amilase no soro (U/l) x Creatinina na urina (mg/dl) Mtodo para clculo do fator VT = volume total do ensaio VA = volume da amostra 1000 = converso de U/ml para U/l x VA x d d = espessura da soluo = absortividade milimolar do 2-cloro-4-nitrofenol em 405 nm, pH 6,0 a 37 C (12,9) 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS VT x 1000 Fator = Unidade utilizada: U/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): U/L Valores de referncia: Para os Lquidos Pleural / Asctico os valore so iguais aos do soro.Valores maiores que 3 vezes o limite superior de referncia indicam aumento considervel da atividade da amilase srica. Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico. Soro/Plasma Urina 37C < 86 U/L < 470 U/L x 100
Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade A reao linear entre 10 e 1038 (0,150 a 405nm)U/L. Para valores acima de 1038 U/L, diluir a amostra com soluo salina 0,9% e repetir a dosagem. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio.Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: Temperatura de incubao: A determinao deve efetuar-se a 37C. Os anticoagulantes fluoreto, oxalato, citrato e EDTA interferem. Amostras com hemlises produzem resultados falsamente diminudos. Valores de bilirrubina at 20 mg/dL e hiperlipemia (triglicerides at 1500 mg/dL) no interferem. Falsos Valores elevados: Meperidina, codena, morfina, lcool, diurticos, salicilatos, tetraciclina, amostra contaminada.
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Procedimento Operacional Padro - Bioqumica

Falsos Valores baixos: Citratos, oxalatos e fluoretos. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Winn-Deen, E.S., DAVID, H.Sigler E., amd Chavez R., Clin Chem., 34,10,(1988), 2005. Rauscher, E., et al, Clin Chem., 31,1:14 (1985)
I.D.P., Wootton and H. Freeman, Microanalysis Medical Biochemistry (1982). CNPG3 Technology: Genzyme Manual, 1-35, Cambridge, 1996; Henry JB. Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1996; 525-527. Jacobs DS, Kasten Jr BL. Laboratory Test Handbook, Hudson: Lexi-Comp Inc., 1996; 79-80, 91. Kaufman RA, Tietz NW. Clin Chem 1980; 26: 846-853. Pesce AJ, Kaplan LA. Methods in Clinical Chemistry, St. Louis: The C.V. Mosby Co., 1987; 817-830. Rosenblum JL. Clin Chem 1992; 38:920. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27: 493-501.
Alfa-Amilase Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 11-12. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 58-59
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BILIRRUBINA DIRETA E TOTAL
Mtodo Colorimtrico Malloy-Evelyn DMSO 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao heptica, biliar e nas doenas hemolticas. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A bilirrubina formada principalmente pela degradao da molcula heme e transportada at o fgado, veiculada pela albumina. Nesta fase a bilirrubina insolvel em gua e conhecida como Bilirrubina No Conjugada ou Bilirrubina Indireta. No fgado, a bilirrubina se liga ao cido glicurnico para formar a Bilirrubina Conjugada, mediante a atuao da enzima uridil difosfato glucoroniltransferase, transformando-se assim em Bilirrubina Direta ou Bilirrubina Conjugada. A Bilirrubina Conjugada ou Bilirrubina Direta excretada pelas vias biliares at o intestino, onde metabolisada pela flora bacteriana residente, um grupo de produtos complexo, conhecidos como estercobilinogenio. Esta eliminao se d de maneira praticamente completa. A Bilirrubina Total a soma das duas bilirrubinas (Direta + Indireta). Esta Bilirrubina apresenta nveis sricos elevados na presena de obstruo das vias biliares, doenas hemolticas e na insuficincia heptica. O monitoramento da Bilirrubina do neonato, em particular do prematuro de suma importncia, pois uma elevao acentuada da Bilirrubina Indireta, superando a barreira hemato-enceflica podendo causar danos cerebrais irreversveis. 3. PRINCPIO DO MTODO Quase todas as tcnicas de quantificao da Bilirrubina se baseiam na reao de Malloy-Evelyn, que quantifica colorimetricamente a formao de azobilirrubina, de colorao vermelha, quando a bilirrubina reage sob determinadas condies com o cido sulfanlico diazotado. A Bilirrubina conjugada, muito polar, reage em meio aquoso com o reativo de diazotao, Bilirrubina Direta, a colorao aparece aps o contato do soro e o reativo. A Bilirrubina livre, pouco polar, no d uma reao direta e preciso adicionar um terceiro reativo para que seja produzida a reao de diazotao com o aparecimento da cor; por este motivo se chama Bilirrubina Indireta. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 04 horas. No caso de recm-nascidos, antes da prxima mamada. Amostras Soro: obtido da maneira usual. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro. Estvel por 8 horas a temperatura ambiente, 12 horas entre 2-8 C ou 24 horas congelado. Proteger da luz. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT BILIRRUBINA DIRETA E TOTAL DMSO Registro M.S.: 80027310029 Cdigos: BT 10003 1 fr. - 50 mL R1 (Bilirrubina Direta )+ 1 fr. - 50 mL R2 (Bilirrubina Total) + 1 fr. - 5 mL R3 (Nitrito) BT 10003 1 fr. -250 mL R1 (Bilirrubina Direta )+ 1 fr. -250 mL R2 (Bilirrubina Total) + 1 fr. -25 mL R3 (Nitrito) BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente 1 Bilirrubina Direta: cido sulfanlico 35 mmol/L, cido clordrico 180 mmol/L. Reagente 2 Bilirrubina Total: cido sulfanlico 40 mmol/L, cido clordrico 60 mmol/L, Dimetilsulfxido 10 mmol/L Reagente 3 Nitrito: Nitrito de sdio 33 mmol/L,azida sdica 16 mmol/L.
Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar protegido da luz.
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Conservar entre 2 8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 550 nm.(530 - 570) com cubeta. Pipetas automticas e ponteiras Banho Maria. Centrfuga. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais.
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Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos: Modo mono-reativo: Preparar alquotas na proporo de 30 partes de Reativo 1 (Bilirrubina Direta) ou Reativo 2 (Bilirrubina Total) + 1 parte de Reativo 3 (Nitrito). Estvel por 48 horas, quando mantido em frasco fechado a 2-8C e realizadas calibraes dirias. Os reativos de trabalho desenvolvem uma colorao alaranjada, porm isto no interfere no resultado final. Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: (Nota 1) Branco Total 1,0 mL 50 L Total -1,0 mL 30 L 50 L Branco Direta 1,0 mL 50 L Direta 1,0 mL 30 L 50 L
R-1 Bil Direta R-2 Bil. Total R-3 - Nitrito Amostra/Padro 2. Nota: 1)
Agitar bem e deixar reagir durante 5 minutos a temperatura ambiente. Ler as absorbncias. Para pediatria pode-se variar os volumes proporcionalmente: R 1 / R - 2 = 1000 L R3 = 30 L Amostra = 20 L
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Conservar a amostra e o reativo protegidos da luz. 11. CLCULOS CLCULOS Clculos: Bilirrubina Total = AT ABT x Concentrao da Padro AP ABP Bilirrubina Direta = AD ABD x Concentrao da Padro AP ABP Onde: AT = Absorbncia amostra Bilirrubina Total ABT = Absorbncia branco da amostra de Bilirrubina Total AD = Absorbncia amostra Bilirrubina Direta ABD = Absorbncia branco da amostra de Bilirrubina Direta AP = Absorbncia do Padro ABD = Absorbncia do Branco de Padro Com fator: Bilirrubina Total (mg/dL) = AT ABT x 25,0 Bilirrubina Direta (mg/dL) = AD ABD x 15,0 UNIDADES SI: mg/dL bilirrubina x 17,1 = mol/L bilirrubina Exemplo: AT = 0,092 ABT = 0,040 AT - ABT =0,052 AD = 0,033 ABD =0,020 AB- ABD = 0,013
Bilirrubina Direta = (mg/dL) = 0,013 x 15 = 0,19 mg/dL Bilirrubina Total = (mg/dL) = 0,052 x 25 = 1,30 mg/dL Para amostras peditricas, com volume de amostra reduzido para 20 L, os valores de fator se modificam para: BD = 36,5 e BT = 60,8.
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12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL bilirrubina x 17,1 = mol/L bilirrubina Valores de referncia Bilirrubina Total: at 1,2 mg/dL (20,5 mol/L) Bilirrubina Direta: at 0,4 mg/dL (6,8 mol/L). Bilirrubina Total (Recm-nascidos) mg/dL Idade Cordo < 24 horas < 48 horas 3 a 5 dias 7 dias Pr-maturo 2,9 8,0 12,0 15,0 15,0 Termo 2,5 6,0 10,0 12,0 10,0 Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: at 15 mg/dL = 256 mol/L Para valores superiores diluir a amostra 1:2 com soluo salina e repetir a determinao multiplicando o resultado por 2. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias A leitura da amostra de branco evita a interferncia da lipemia, hemlise ou turbidez dos soros liofilizados. Falsos Valores baixos: Soros fortemente hemolisados podem fornecer valores falsamente diminudos 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Hijmans Van der Bergh AA, Muller P., Biochem. 77, 90 (1916). Malloy, H.T. and Evelyn, KA, J.Biol.. Chem. 119, 481 (1937).
Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27: 493-501 Sims FH, Horn C. Am J Clin Path 1958; 28: 412.
Matimek, RG Clin. Chim. Acta, 13, 161 (1966). Walters MI, Gerarde RW, Microchem 15, 231 (1970). Bilirrubina Direta e Total Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 69. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 62
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CLCIO ASX
Mtodo ARSENAZO III 1. INDICAO MDICA Para determinao dos nveis de Clcio srico. Este on atua como mediador na contrao muscular, transmisso nervosa e mediao da coagulao sangunea. O hormnio paratireoideano e a Vitamina D aumentam a absoro do clcio do trato gastrointestinal, liberando-o para os ossos em caso de dficit desse on. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Sangue: o clcio total encontra-se ligado s protenas (47%) e livre (43%). Hipercalcemia encontrada no hiperparatireoidismo, algumas neoplasias com ou sem metstases sseas, mieloma, desidratao, hipervitaminose D, sndrome de imobilidade, hipertireoidismo, hepatopatias, insuficincia renal, sarcoidose, linfoma, uso de diurticos e estrgenos. Nveis baixos de clcio total so encontrados na osteomalcia, pancreatite, hipomagnesemia, hipervolemia, m absoro, deficincia da vitamina D, diminuies de albumina e em situaes que cursam com fsforo elevado (insuficincia renal, hipoparatireoidismo). Nveis crticos de clcio total so aqueles inferiores a 6 mg/dL e superiores a 14 mg/dL. Na interpretao dos valores normais deve-se levar em conta nveis de albumina. A hemlise pode elevar os resultados. Urina: til na investigao dos efeitos da vitamina D e PTH sobre a reabsoro ssea. Tambm utilizado na avaliao de nefrolitase. Exame deve ser realizado aps 4 dias de dieta. Sua determinao preferida na urina de 24 h; urina recente pode ser utilizada realizando a razo clcio: creatinina. Hipercalciria encontrada nas hipercalcemias, hiperabsoro intestinal de clcio, distrbios da reabsoro tubular de clcio, corticoterapia, osteoporose, acromegalia, hipertireoidismo, feocromocitoma, Cushing. Hipocalciria pode ser secundria hipocalcemia, insuficincia renal, osteomlacia, raquitismo, alcalose, uso de diurticos e estrgenos. Clcio Inico: O clcio inico a frao biologicamente ativa do clcio srico total, representando 43% desse. Sua concentrao mais baixa noite e maior pela manh. A dosagem do clcio inico independe da albumina, entretanto varia com o pH (aumenta na acidose; diminui na alcalose). 3. PRINCPIO DO MTODO A pH levemente cido o clcio forma com o arsenazo (III) um complexo azul, cuja intensidade medida a 650 nm. A intensidade de cor proporcional a quantidade de clcio presente na amostra. No observada nenhuma interferncia do magnsio no pH mencionado. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. A determinao na urina requer uma dieta prvia de pelo menos 3 dias livres de clcio (eliminar leite e derivados). Amostras Podem ser utilizados soro, plasma ou urina Soro no hemolisado, plasma (heparina). Evitar amostra de plasma contendo EDTA, citrato ou oxalato. A amostra deve ser obtida por via venosa, porm sem deixar o torniquete por muito tempo, para evitar que alteraes no nvel de albumina ao redor do torniquete forme um gradiente de concentrao de clcio. O uso do torniquete pode aumentar o nvel de clcio em 0,5 mg/dL (0,10 mol/L) No utilizar soro proveniente de pacientes em Terapia com EDTA hiperparatireoidismo. Neste caso, recomendvel o uso da tcnica espectrofotomtrica de Absoro Atmica.O soro deve ser separado do cogulo o mais rpido possvel, Urina: Coletar todo volume da mico de 24 horas, homogeneizar bem todo o volume de 24 horas, separar 5,0 mL e adicionar 1 gota de HCl concentrado. Esta a amostra teste. Armazenamento e estabilidade das amostras: Clcio na amostra de soro ou plasma estvel 7 dias entre 2-8oC ou 6 meses 20 C. Urina: at 02 semanas em HCl 50% temperatura ambiente. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras No deve ser utilizado soro hemolisado. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material
5. COMPONENTES DO KIT CLCIO ASX (ARSENAZO III) Cdigos: BT 12002 2 fr. com 50,0 mL cada + 1 fr. Padro 2,0 mL Registro M.S.: 80027310052
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BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Arsenazo III 0.18 mmol/L, Tampo MS 1.6 mmol/L, pH 6,8, conservantes Padro: Soluo de Clcio (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 15 - 30 C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 15 - 30 C Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 650 nm (600-660) com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente.
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Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada.. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos..Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Padro Amostra Reagente 2. 3. Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Agitar bem e deixar os tubos durante 2 minutos temperatura ambiente.. Ler a absorbncia (AP) do Padro e (AA)da Amostra frente ao Branco 650 nm (600 660 nm). A cor estvel durante 20 minutos. Para anlise bicromtica utilizar filtro de referncia: 700 nm. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais O uso de detergente inico para limpar o material outra fonte de contaminao com clcio. O material utilizado na preparao do reativo dever estar completamente isento de ons clcio. Sugerimos a lavagem com cido ntrico 6N ou com detergente no inico. Depois lavar vrias vezes com gua deionizada..
11. CLCULOS Determinar a absorbncia do padro Ap e Calcular o Fator de calibrao: FC = concentrao do padro Absorbncia padro
FC = Fator de Calibrao
Clcio Srico: Clculo da concentrao de Clcio: (Multiplicar a absorbncia pelo fator de calibrao) Concentrao Clcio (mg/dL) = Abs. Teste x FC Clcio Urinrio Ca Urina (mg/dL) = Abs. Teste x FC Dosagem de Clcio na urina de 24 horas: mg/24 = clcio urina (mg/dL) x vol urinrio 24 h (mL) 100 Clculo do Clcio Ionizvel: Cal
ioniz.=
6 x Ca (0,19 x P) + A 3
Cal ioniz. = clcio ionizvel Ca = Clcio srico em mg/dL P = Protena Total (g/dL) A = Albumina (g/dL)
(0,19 x P) + A + 6 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL clcio x 0,25 = mmol/L clcio
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Valores de referncia Soro e plasma: Crianas: 10,0 11,6 mg/dL = 2,5 - 2,9 mmol/L Adultos: 8,8 10,8 mg/dL = 2,2 2,7 mmol/L Urina: 100-300 mg/24 horas = 25 87,5 mmol/24 horas Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 20mg/dL = 5 mmol/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias A hemoglobina (1,5 g/L), a bilirrubina (20 mg/dL), o magnsio (10 mg/dL) e os fosfatos (20 mg/dL) no interferem. Triglicrides acima de 900 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos. Falsos Valores elevados: estrgenos, sais de clcio, vitamina D, anticidos, dieta rica em clcio. Falsos Valores baixos: cortisona, gentamicina, meticilina, uso excessivo de laxante, heparina, dieta pobre em clcio, cloreto de sdio intravenoso. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Zak B., Epstein E., Babinski E.S., Review of Calcium Methodologies - Annals of Clinical and laboratory Science 5, 195 212 (1975). Guyton, Fisiologia humana e Mecanismos das doenas 1993, 5 edio Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981; 27: 493-501. Jacobs DS, Kasten Jr BL. Laboratory Test Handbook, Hudson: Lexi-Comp Inc., 1996; 96-98. Clcio Arsenazo III Bula do Kit Biotecnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 11-12. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 58-59
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CLCIO
Mtodo Colorimtrico (o-CRESOLFTALENA) 1. INDICAO MDICA Para determinao dos nveis de Clcio srico. Este on atua como mediador na contrao muscular, transmisso nervosa e mediao da coagulao sangunea. O hormnio paratireoideano e a Vitamina D aumentam a absoro do clcio do trato gastrointestinal, liberando-o para os ossos em caso de dficit desse on. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Sangue: o clcio total encontra-se ligado s protenas (47%) e livre (43%). Hipercalcemia encontrada no hiperparatireoidismo, algumas neoplasias com ou sem metstases sseas, mieloma, desidratao, hipervitaminose D, sndrome de imobilidade, hipertireoidismo, hepatopatias, insuficincia renal, sarcoidose, linfoma, uso de diurticos e estrgenos. Nveis baixos de clcio total so encontrados na osteomalcia, pancreatite, hipomagnesemia, hipervolemia, m absoro, deficincia vitamina D, diminuies da albumina, e em situaes que cursam com fsforo elevado (insuficincia renal, hipoparatireoidismo). Nveis crticos de clcio total so aqueles inferiores a 6 mg/dL e superiores a 14 mg/dL. Na interpretao dos valores normais deve-se levar em conta nveis de albumina. Hemlise pode elevar seus resultados. Urina: til na investigao dos efeitos da vitamina D e PTH sobre a reabsoro ssea. Tambm utilizado na avaliao de nefrolitase. O exame deve ser realizado aps 4 dias de dieta. Sua determinao preferida na urina de 24 h. Urina recente pode ser utilizada realizando a razo clcio / creatinina. Hipercalciria encontrada nas hipercalcemias, hiperabsoro intestinal de clcio, distrbios da reabsoro tubular de clcio, corticoterapia, osteoporose, acromegalia, hipertireoidismo, feocromocitoma, Cushing. Hipocalciria pode ser secundria hipocalcemia, insuficincia renal, osteomalcia, raquitismo, alcalose, uso de diurticos e estrgenos. Clcio inico: O clcio inico a frao biologicamente ativa do clcio srico total, representando 43% desse. Sua concentrao mais baixa noite e maior pela manh. A dosagem do clcio inico independe da albumina, entretanto varia com o pH (aumenta na acidose; diminui na alcalose). 3. PRINCPIO DO MTODO O composto o-cresolftalena (CFC) reage com Clcio presente na amostra em meio alcalino originando um complexo colorido que se pode quantificar espectrofotometricamente. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. A determinao na urina requer uma dieta prvia de pelo menos 3 dias livres de clcio (eliminar leite e derivados). Amostras Podem ser utilizados soro, plasma ou urina Soro no hemolisado, plasma (heparina). Evitar amostra de plasma contendo EDTA, citrato ou oxalato. A amostra deve ser obtida por via venosa, porm sem deixar o torniquete por muito tempo, para evitar que alteraes no nvel de albumina ao redor do torniquete forme um gradiente de concentrao de clcio. O uso do torniquete pode aumentar o nvel de clcio em 0,5 mg/dL (0,10 mol/L) No utilizar soro proveniente de pacientes em Terapia com EDTA hiperparatireoidismo. Neste caso, recomendvel o uso da tcnica espectrofotomtrica de Absoro Atmica.O soro deve ser separado do cogulo o mais rpido possvel, Urina: Coletar todo volume da mico de 24 horas, homogeneizar bem todo o volume de 24 horas, separar 5,0 mL e adicionar 1 gota de HCl concentrado. Esta a amostra teste. Armazenamento e estabilidade das amostras: Clcio na amostra de soro ou plasma estvel 7 dias entre 2-8oC ou 6 meses 20 C. Urina: at 02 semanas em HCl 50% temperatura ambiente. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras No deve ser utilizado soro hemolisado. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT CLCIO o-CRESOLFTALENA-Complexona (CFC) Registro M.S.: 80027310027 Cdigos: BT 12001 1 fr. com 50,0 mL RA + 1 fr. com 50,0 mL RB + 1 fr. Padro 2,0 mL
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BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reativo A: Tampo Etanolamina 500 mmol/L. Reativo B: orto-cresolftalena complexona 0,62 mmol/L; 8-hidroxiquinolena 69 mmol/L. Padro de Clcio: Soluo estabilizada de Clcio (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 15 e 30 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 15 - 30 C Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 570 nm (550-590) com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias.
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Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada.. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos..Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos Reativos: Reativo de Trabalho: Mistura na proporo de 1 mL de Reativo A + 1 mL de Reativo B. Estvel por 24 horas a temperatura ambiente. Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Padro Amostra Reat. Trab. 2. 3. Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Agitar bem e deixar os tubos durante 10 minutos temperatura ambiente. Decorridos os 10 minutos, ler a absorbncia do Padro e da Amostra frente ao Branco do reativo 570 nm.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais O material utilizado na preparao do reativo de trabalho dever estar completamente isento de ons clcio. Sugerimos a lavagem com cido ntrico 6N ou com detergente no inico. Depois lavar vrias vezes com gua deonizada. O uso de detergente inico para limpar o material outra fonte de contaminao com clcio. A tcnica se caracteriza por Absorbncias dos brancos muito baixas, leituras acima de 0,200 de Absorbncia indicam contaminao grosseira por clcio e os reativos devem ser desprezados. Um novo reativo de trabalho deve ser preparado. 11. CLCULOS Determinar a absorbncia do padro Ap e Calcular o Fator de calibrao: FC = concentrao do padro Absorbncia padro Clcio Srico: Clculo da concentrao de Clcio: (Multiplicar a absorbncia pelo fator de calibrao) Concentrao Clcio (mg/dL) = Abs. Teste x FC Clcio Urinrio Ca Urina (mg/dL) = Abs. Teste x FC Dosagem de Clcio na urina de 24 horas: mg/24 = clcio urina (mg/dL) x vol urinrio 24 h (mL) 100 FC = Fator de Calibrao
Clculo do Clcio Ionizvel:

Cal ioniz. = clcio ionizvel Ca = Clcio26 srico em mg/dL P = Protena Total (g/dL) A = Albumina (g/dL)

6 x Ca (0,19 x P) + A 3 (0,19 x P) + A + 6 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL clcio x 0,25 = mmol/L clcio
Cal
ioniz.=
Valores de referncia Clcio no Soro: 8,5 - 10,5 mg/dL = 2,12 - 2,63 mmol/L Clcio inico: 4,0 - 5,4 mg/dL = 1,0 1,35 mmol/L Urina: 60 - 200 mg/24 horas = 1,5 - 5,03 mmol/24 horas 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 20 mg/dL (5,0 mmol/L) Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias A hemoglobina (1,5 g/L), a bilirrubina (20 mg/dL), o magnsio (10 mg/dL) e os fosfatos (20 mg/dL) no interferem. Triglicrides acima de 900 mg/dL produzem resultados falsamente elevados por interferncia fotomtrica. Falsos Valores elevados: estrgenos, sais de clcio, vitamina D, anticidos, dieta rica em clcio. Falsos Valores baixos: cortisona, gentamicina, meticilina, uso excessivo de laxante, heparina, dieta pobre em clcio, cloreto de sdio intravenoso. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Martineck, R.G. J.Am. Med. Tech. 33:416 (1971). Henry, R.J. Clinical Chemistry, Principles and Techniques, Harper & Row Publishers (1964). Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981; 27: 493-501. Jacobs DS, Kasten Jr BL. Laboratory Test Handbook, Hudson: Lexi-Comp Inc., 1996; 96-98. Clcio o-Cresolftalena Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 11-12. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 58-59
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CLORO
Mtodo Colorimtrico (Mercrio Tiocianato) 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na dosagem de ons cloretos no sangue. A determinao dos cloretos em amostras de sangue e urina faz parte da avaliao dos distrbios hidro-eletrolticos e cido-bsicos. A dosagem do cloreto no suor til no diagnstico da fibrose cstica. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Cloro Srico o principal nion extracelular. Juntamente com o sdio, representa a maioria dos constituintes osmoticamente ativos do plasma. Desta forma, est envolvido na manuteno da presso osmtica e balano hidroeletroltico. A maior parte do cloro ingerido absorvida e o excesso excretado na urina. Nveis Aumentados Insuficincia renal aguda Nveis Diminudos Acidose metablica associada a elevao de nions orgnicos(cetoacidose diabtica e insuficincia renal) Acidose respiratria
Acidose metablica associada diarria prolongada com perda de bicarbonato Acidose tubular renal Alcalose respiratria Alguns casos e hiperparatireoidismo primrio Desidratao Diabetes insipidus Hiperfuno adrenocortical Intoxicao por salicilato
Alcalose metablica Aldosteronismo Doena de Addison Hipersudorese Nefrite perdedora de sal Secreo gstrica persistente Vmito prolongado
Cloro Urinrio Normalmente a excreo urinria de cloro se aproxima da ingesto. So observados nveis fisiologicamente aumentados na diurese ps-menstrual e diminudos na reteno hdrica pr-menstrual. Nveis Aumentados Aumento da ingesto Uso de diurtico Depleo de potssio Doena de Addison Necrose tubular aguda Pielonefrites Rim policstico Sndrome de Bartter Uso de teofilina Nveis Diminudos Diminuio da ingesto de sal Vmito Diarria Aspirao gstrica Diabetes insipidus Fstulas gastrointestinais Sndrome de Cushing
Cloro, Lquor Acompanha as alteraes (diminuio ou elevao) dos nveis sricos. Diminuindo na meningite tuberculosa e outras meningites bacterianas. 3. PRINCPIO DO MTODO O on cloreto reage com o on mercrico liberando uma quantidade equivalente de on tiocianato que em presena de ferro trivalente forma um complexo colorido violeta. A intensidade da colorao do complexo proporcional a concentrao do on cloreto presente na amostra.
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4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Usar soro ou plasma (EDTA, oxalato, citrato, heparina), urina (colhida com intervalo de 24 horas), suor e lquor. Soro ou plasma: obtido da maneira usual. Para evitar a passagem do cloreto para as hemcias, o plasma ou soro, devem ser separados at 1 hora aps a coleta. O analito estvel por 7 (sete) dias entre 15 30oC e vrios meses a 10oC negativos. Urina ou lquor: Para dosagem no lquor ou na urina, utilizar amostras centrifugadas. Urina de 24 horas. Diluir a urina 1:2. Multiplicar o resultado obtido por 2. Armazenamento e estabilidade das amostras: O on cloreto estvel na amostra at 04 dias se armazenado entre 2-8oC. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT CLORETO Cdigos: Registro M.S.: 80027310028 BT 12003 1 fr com 50mL. + 1 fr Padro 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Tiocianato de mercrio 12.9 mM, nitrato de ferro (III) 170 mM, cido ntrico 50 mM. Padro: Soluo de ons Cloreto (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco). Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 15 30C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 15 a 30 C. Manter protegido da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 460 - 500 nm com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos.
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Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Padro Amostra Reagente Branco 2,0 mL Padro 5 L 2,0 mL Amostra 5 L 2,0 mL
2. Homogeneizar bem e incubar os tubos durante 5 minutos temperatura ambiente. 3. Ler a absorbncia (A) do Padro e da Amostra frente ao Branco 460-500 nm. A cor estvel durante 30 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Cuidados especiais com a gua utilizada! Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente. 11. CLCULOS Abs. Amostra X Concentrao do padro = mEq/L cloreto Abs. Padro
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Onde: Abs. Amostra Abs. Padro Absorbncia da Amostra Absorbncia do Padro
Devido tima reprodutibilidade, que pode ser obtida com a metodologia, pode-se utilizar o mtodo do fator: Fator de calibrao = Conc. do Padro . Absorbncia do Padro Concentrao do Padro Vide etiqueta do frasco.
Cloreto (mEq/L) = Absorbncia do Teste x Fator 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mEq/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mmol/L = mEq/L x 0,5 Valores de referncia Para amostras de Soro e Plasma: 98 110 mEq/L = 49 55 mmol/L Para amostras de Urina: 170 250 mEq/24h = 85 125 mmol/L Suor at 40 mEq/L. Lquor: 118 a 132 mEq/L Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 200 mEq/L (100 mmol/L) Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias Para amostras Lipmica, ictricas e hemolizadas, fazer o branco da amostra com gua destilada. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Zall D.M.,Fisher D., Garner D.O.,Anal. Chem.,28,1665 (1956) Skeggs L. Metodologia Technicon. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27: 493-501. Cloro Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 11-12. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 58-59
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COLESTEROL
Mtodo Enzimtico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao dos riscos de aterosclerose e monitoramento de pacientes diabticos, obesos e com hipotiroidismo. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO O colesterol um componente estrutural importante da membrana celular e precursor para biossntese de cidos biliares e hormnio esterides. O colesterol total compreende todo colesterol encontrado em vrias lipoprotenas, sendo cerca de 60% a 70% transportados pela LDL- lipoprotena, 20% a 35% pela HDL-lipoproteina e 5% a 12% pela VLDL-lipoproteina. O colesterol o principal lipdio associado doena vascular aterosclertica. Uma dosagem de colesterol elevada uma boa indicao dos riscos de aterosclerose, a qual uma degenerao de artrias de grande e mdio calibre atravs da deposio de lipoprotenas, dentre elas o colesterol, com conseqente inflamao e fibrose de suas paredes. A aterosclerose desencadeia vrias disfunes em vrios rgos principalmente no corao, crebro e rins. AUMENTO: ictercia obstrutiva, D. de Von Gierke, hepatite por vrus, cirrose porta, S. nefrtica, pancreatite crnica, aps pancreatectomia, diabetes mellitus, hipotireoidismo, hipercolesterolemia familiar(deficincia de receptores LDL), hipercolesterolemia polignica, hiperlipidemia familiar combinada, disbetalipoproteinemia familiar, aterosclerose, gota, anorexia nervosa, hepatoma, S. de Cushing, porfiria intermitente aguda, gravidez. Drogas: corticosterides. DIMINUIO: hepatopatias graves, inanio, uremia terminal, septicemia, hipertireoidismo, S. de m absoro, m nutrio, uso de ACTH e corticides, anemia perniciosa, anemia hemoltica , anemia hipocrmica severa, hemofilia, acantocitose, D. de Addison, grandes queimados, D.de Gaucher, D. de Tangier, abetalipoproteinemia, linfangiectasia intestinal. 3. PRINCPIO DO MTODO Os steres de colesterol existentes na amostra so hidrolisados pela enzima colesterol esterase produzindo o colesterol livre. A enzima colesterol oxidase, em presena de oxignio, catalisa a oxidao do colesterol livre, produzindo perxido de hidrognio. A enzima peroxidase catalisa a oxidao do reagente fenlico (fenol) pelo perxido de hidrognio formado, em presena de 4-aminoantipirina, produzindo um composto rseo-avermelhado (quinonimina), que apresenta mximo de absoro em 500 nm. Colesterol esterificado + H2O ------------------>Colesterol + Ac. graxo Colesterol +1/2 O2 ----------------> Colestenona + H2O2 2 H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol -------------> Quinonaimina +4H2O 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente: O paciente deve estar com peso e dieta estveis por trs semanas e em jejum de 12 a 14 horas (O jejum no imprescindvel para a dosagem de colesterol total, mas o para a determinao dos triglicrides e fraes do colesterol). A abstinncia alcolica desejvel nas 72 horas que antecedem o teste. Evitar garroteamento por perodo superior a 2 minutos e colher em posio sentada com o paciente em repouso por 5 minutos. Amostras: Soro ou plasma, lquido asctico ou lquido pleural. Soro: obtido da maneira usual. Separar dentro das prximas 2 horas da coleta. Soro ou plasma heparinizado, outros anticoagulantes podem interferir no resultado final. No usar amostras visivelmente hemolisadas. Lquido asctico ou lquido pleural: O material no colhido no laboratrio. O exame feito somente com material enviado at 06 horas depois da coleta Armazenamento e estabilidade das amostras: As amostras de soro / plasma podem ser guardadas 2 8OC por uma semana ou 20OC por 2 meses. Volumes mnimos e ideais A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise intensa. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material.
peroxidase col. oxidase col. Esterase
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5. COMPONENTES DO KIT COLESTEROL Cdigos: Registro M.S.: 80027310039 BT 10.004 1 fr com 250mL + 1 fr Padro 2,0 mL BT 10.004 4 fr com 250mL + 1 fr Padro 2,0 mL.
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Tampo fosfato 182,42 mmol/L pH 7,2; 4-Clorofenol 20 mmol/L; 4-Aminoantipirina 0,6 mmol/L; Colesterol esterase (CHE) > 750 U/L; Colesterol oxidase > 200 U/L; Peroxidase > 2000 KU/L, Colato de Sodio 8 mM. Padro: Soluo de Colesterol (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 500 nm (490-510) com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante.
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O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Deixar o Reagente durante alguns minutos temperatura ambiente ou em um banho de gua. 2. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Padro Amostra Reagente
3. Agitar bem e incubar os tubos durante 15 minutos temperatura ambiente ou durante 10 minutos a 37C. 4. Ler a absorbncia (AP) do Padro e a (AA) da Amostra frente ao Branco 500 nm. A cor estvel durante 30 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS Colesterol (mg/dL) = Abs. Amostra X Concentrao do Padro Abs. Padro Devido tima reprodutibilidade, que pode ser obtida com a metodologia, pode-se utilizar o mtodo do fator: Fator de calibrao = Conc. do Padro . Absorbncia do Padro Concentrao do Padro Vide etiqueta do frasco.
Colesterol (mg/dL) = Absorbncia do Teste x Fator 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mmol/L = mg/dL x 0,026 Valores de referncia Faixa Etria 2 a 19 anos 20 anos ou acima Valor (mg/dL) Menor que 170 De 170 a 199 Maior que 200 Menor que 200 De 200 a 239 Maior que 240 Interpretao Desejvel Limtrofe Aumentado timo Limtrofe Alto
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* Dados das III Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Preveno da Aterosclerose 2001. Lquido Asctico ou Lquido Pleural: Inferior ao soro com triglicrides elevados: = quiloso Superior ao soro com triglicrides normal: = quiliforme Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 800 mg/dL Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias - cido Ascrbico: mesmo em baixas concentraes (abaixo de 2 mg/dL) o cido ascrbico induz a resultados falsamente diminudos. - Hemoglobina e Triglicrides elevados (amostra com turvao evidente): Hemoglobina acima de 150mg/dL (hemlise significativa) e hiperlipemia acentuada induzem a resultados falsamente aumentados. Bilirrubina: Bilirrubina at 15 mg/dL no interfere no resultado do teste. Falsos valores elevados: Esterides, anticoncepcional oral, bromatos, fenotiazina, sulfonamidas, fenitona, aspirina e epinefrina. Falsos valores diminudos: neomicina, tetraciclina, heparina, agentes hipoglicemiantes, kanamicina, colchicina. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Trinder P. - Ann Clin Biochem 6124 (1969). Abell, L.L.; Levy, B.B.; Kendalll, F.E.:J. Biol. Chem. 195-357 (1952) Castelli, W.P. Current Prescribing 6177: 39 (1977). Bull Org Mond Sant. 1970;43:891. Fredriickson DS, Levy RJ, Lee RS. New Engl J Med 1967; 276:24, 94, 148, 215, 276. Good NE, Winger GD, Winter W, Connoly TN, Izawa S, Singh RMM. Biochemistry 1966;5:467. Colesterol Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 125. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 67-68
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HDL COLESTEROL DIRETO
Mtodo Enzimtico Colorimtrico Direto Sem precipitao 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada principalmente na avaliao de dislipidemias associadas a patologias coronrias. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Vrios estudos sugerem existir uma forte correlao inversa entre os nveis de C-HDL e o risco de aterosclerose. Isso devese ao fato da HDL-lipoprotena estar envolvida no chamado transporte reverso do colesterol para ser metabolizado no fgado (stio de maior excreo do colesterol). Valores de CHDL so dependentes de sexo e idade, tendendo a decrescer temporariamente aps infarto agudo do miocrdio. Em doenas da tireide, seus valores no devem ser usados como estimativa de risco de aterosclerose, visto que o hipotireoidismo aumenta e o hipertireoidismo diminui seus nveis. Valores de HDL colesterol so aproximadamente 1/5 do colesterol total. Fatores que contribuem para o decrscimo do colesterol HDL Fatores genticos: hipoalfalipoproteinemia. Fumo. Obesidade. Hipertrigliceridemia. Sedentarismo. Esterides,andrognios, progestgenos, anablicos, tiazdicos. Bloqueadores beta adrenrgicos. Neomicina. Anti-hipertensivo. 3. PRINCPIO DO MTODO O anticorpo anti-lipoprotena humana presente no Reagente A se liga as lipoprotenas (LDL, VLDL e Quilomicrons) deixando a lipoprotena HDL livre. Quando adicionado o Reagente B, somente o Colesterol HDL reage com a cadeia enzimtica (CHE-CO). O perxido de hidrognio produzido pela reao enzimtica produz um complexo de cor azul sob condensao oxidativa com F-DAOS e 4-AAP, em presena de peroxidase. A concentrao do HDL presente na amostra proporcional a absorbncia, medida 600 nm. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar com peso e dieta estveis por trs semanas e em jejum de 12 a 14 horas (O jejum no imprescindvel para a dosagem de colesterol total, mas o para a determinao dos triglicrides e fraes do colesterol). A abstinncia alcolica desejvel nas 72 horas que antecedem o teste. Evitar garroteamento por perodo superior a 2 minutos e colher em posio sentada com o paciente em repouso por 5 minutos. Amostras Soro no hemolisado, plasma (heparina ou EDTA) Armazenamento e estabilidade das amostras: O Colesterol estvel na amostra 7 dias 2-8 C ou 30 dias 20 C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Soro hemolisado. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material. 5. COMPONENTES DO KIT COLESTEROL HDL - DIRETO Registro M.S.: 80027310035 Cdigos: BT 10.006 1 fr R-A com 45 mL. + 1 fr. R-B com 15 mL + 1 fr Calibrador 1,0 mL BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646
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Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br
Reativo A: 4-aminoantipirina 0,9 mM, POD > 2400 U/L, Ascorbato oxidase > 2700 U/L; Anticorpos anti-lipoprotena humana 2,0 U/L. Reativo B: Colesterol esterase > 4000 U/L, Colesterol oxidase > 2000 U/L; F-DAOS 0,8 mM; Tampo MES 30 mM, pH 7,0. Calibrador: Soro liofilizado (Valor da concentrao vide etiqueta do frasco). Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 e 8 C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 600 nm, com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana.
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No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada.. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos: Calibrador: Reconstituir o calibrador com exatamente 1,0 mL de gua destilada ou deionizada. Fechar o frasco e homogeneizar cuidadosamente, para dissolver todo o liofilizado. Evitar a formao de espuma. Deixar em repouso por 30 minutos antes do uso.
O calibrador estvel 03 dias se conservado entre 2-8C ou 30 dias a 20C, depois de reconstitudo. Congelar e descongelar somente uma vez. Homogeneizar cuidadosamente depois de descongelado.
Reagentes: Os reagentes so fornecidos na forma lquida, pronto para uso. A estabilidade dos reativos de pelo menos 60 dias, aps o frasco aberto, se conservados de 2-8C e tomados os devidos cuidados para evitar contaminao. Procedimento manual Tcnica Micro: 1. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 4 L 300 L Calibrador 4 L 300 L Amostra 4 L 300 L
gua destilada Calibrador Amostra Reativo A 2. 3.
Homogeneizar, incubar a 37 C por 5 minutos. Ler a absorbncia a 600 nm (A1) da amostra e (A1p) do padro. Adicionar: 100 L 100 L 100 L
Reativo B 4. 5. 6.
Homegeneizar e incubar 5 minutos a 37 C. Ler a absorbncia (A2p) do Padro e (A2) da amostra frente ao Branco a 600 nm. A reao estvel por 30 min. se protegida da luz.
Tcnica Macro: 1. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 10 L 750 L Calibrador 10 L 750 L Amostra 10 L 750 L
gua destilada Calibrador Amostra Reativo A
2. Homogeneizar, incubar a 37 C por 5 minutos. Adicionar: 3. Ler a absorbncia a 600 nm (A1) da amostra e (A1p) do padro. Adicionar: Reativo B 250 L 250 L 250 L
4. Homogeneizar e incubar 5 minutos a 37 C. 5. Ler a absorbncia (A2p) do Padro e (A2) da Amostra frente ao Branco a 600 nm. 6. A reao estvel por 30 min. se protegida da luz.
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Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS A1p = A padro A2-A1 = A amostra [P]= Concentrao do Padro A padro x valor da concentrao do padro = mg/dL de HDL-c A amostra Com Fator: Fator de calibrao = [P] A padro
Concentrao de HDL em mg/dL = A amostra x Fator Calibrao Exemplo: A2 = 0,280 A1= 0,142 A2p= 0,167 A1p= 0,056 [P] = 35 mg/dL A amostra= 0,280-0,142=0,138 A padro= 0,167-0,056=0,111 Fator = 35 = 315,3 0,111 Colesterol HDL (mg/dL) = 0,138 x 315,3 = 43,5 mg/dL. 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mmol/L Colesterol = mg/dL colesterol x 0,026 Valores de referncia Desejvel Colesterol LDL Colesterol Total Col. HDL Homens Col. HDL - Mulheres < 130 < 200 > 55 > 65 Risco moderado 130 159 200 239 35 55 45 65 Alto risco 160 240 < 35 < 45
Estes valores so unicamente orientativos, sendo recomendvel que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia. Pelas ltimas Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Preveno da Aterosclerose, os valores de referncia para HDL Colesterol podem ser consultados por faixa etria, como mostrado na tabela abaixo: Faixa Etria At 10 anos De 10 a 19 anos 20 anos ou acima Diabticos 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 180 mg/dL Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias cido Ascrbico (at 50 mg/dL), Hemoglobina (at 500 mg/dL), Bilirrubina (at 40 mg/dL) e lipdios (at 5 g/dL) no interferem. Valor (mg/dL) Maior que 40 Maior que 35 Menor que 40 Maior que 60 Maior que 45 Interpretao Desejvel Desejvel Baixo Alto Desejvel
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14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Gordon T et al.: High density lipoprotein as a protective factor against coronary heart disease. The Framingham Study, Am J. Med., 62,707 (1977). Sachiko Izawa et al.: A new direct method for measuring HDL Cholesterol which does not produce any biased values. J.Med. And Pharm.Sci., 1385-1388, 37 (1997) HDL Colesterol Direto Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 241. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 67-68
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HDL COLESTEROL
Mtodo Precipitante cido Fosfotngstico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao dos riscos de doenas coronarianas e renais causadas por aterosclerose. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Vrios estudos sugerem existir uma forte correlao inversa entre os nveis de C-HDL e o risco de aterosclerose. Isso se deve ao fato da HDL-lipoprotena estar envolvida no chamado transporte reverso do colesterol para ser metabolizado no fgado (stio de maior excreo do colesterol). Valores de CHDL so dependentes de sexo e idade, tendendo a decrescer temporariamente aps infarto agudo do miocrdio. Em doenas da tireide, seus valores no devem ser usados como estimativa de risco de aterosclerose, visto que o hipotireoidismo aumenta e o hipertireoidismo diminui seus nveis. Valores de HDL colesterol so aproximadamente 1/5 do colesterol total. Fatores que contribuem para o decrscimo do colesterol HDL: Fatores genticos: hipoalfalipoproteinemia. Fumo. Obesidade. Hipertrigliceridemia. Sedentarismo. Esterides,andrognios, progestgenos, anablicos, tiazdicos. Bloqueadores beta adrenrgicos. Neomicina. Anti-hipertensivo 3. PRINCPIO DO MTODO Os quilomicrons e as lipoprotenas de baixssima densidade (VLDL) e de baixa densidade (LDL) presentes na amostra, precipitam em presena de fosfotungstato e ons magnsio. O sobrenadante da centrifugao contm as lipoprotenas de elevada densidade (HDL), cujo colesterol quantifica-se espectrofotometricamente mediante as reaes acopladas descritas abaixo. Colesterol esterificado + H2O -------------> Colesterol + Ac. graxo Colesterol + O2 + H2O --------------> Colestenona + H2O2 2H2O2 + 4-Aminoantipirina +DCFS ------------->Quinonaimina+4H2O 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar com peso e dieta estveis por trs semanas e em jejum de 12 a 14 horas (O jejum no imprescindvel para a dosagem de colesterol total, mas o para a determinao dos triglicrides e fraes do colesterol). A abstinncia alcolica desejvel nas 72 horas que antecedem o teste. Evitar garroteamento por perodo superior a 2 minutos e colher em posio sentada com o paciente em repouso por 5 minutos. Amostras Soro no hemolisado, plasma (heparina ou EDTA). Armazenamento e estabilidade das amostras: O Colesterol estvel na amostra 3 dias 2-8 C. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise intensa. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT HDL COLESTEROL (PRECIPITANTE) Cdigos: BT 10.005 1 fr com 50mL. + 1 fr Padro 2,0 mL Registro M.S.: 80027310054
peroxidase col. oxidase col. esterase
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BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: cido Fosfotngstco 16 mmol/L, cloreto de magnsio 3,5 mmol/L.. Padro: Soluo padro de Colesterol (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 e 8 C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 600 nm, com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente.
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Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada.. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual Precipitao 1. Pipetar em tubo de centrfuga Amostra Reagente precipitante 2. 3. 4. 5. 6. 250 L 250 L
Agitar e deixar durante 10 minutos temperatura ambiente. Centrifugar durante 10 minutos a um mnimo de 4.000 rpm. Recolher com cuidado o sobrenadante. Deixar o Reagente durante alguns minutos temperatura ambiente ou em um banho de gua. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 100 L 1,0 mL Padro 100 L 1,0 mL Amostra 100 L 1,0 mL
gua destilada Padro de colesterol HDL Sobrenadante Reagente do Colesterol
7. Agitar bem e incubar nos tubos durante 30 minutos temperatura ambiente ou durante 10 minutos a 37C 8. Ler a absorbncia (A) do Padro e da Amostra frente ao Branco 500 nm. A cor estvel durante pelo menos 30 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Manter sempre a relao Amostra/Preciptante igual a 1:1. Aps a centrifugao, remover o sobrenadante lmpido dentro de 15 minutos, para evitar resultados falsamente elevados. Amostras lipmicas e ocasionalmente amostras no lipmicas podem apresentar o sobrenadante turvo. Neste caso diluir a amostra 1:2 com NaCI 150 mmol/l e repetir a precipitao. Multiplicar o resultado final por 2. Caso o sobrenadante permanea ainda turvo a amostra no pode ser utilizada para determinar o colesterol HDL. 11. CLCULOS Aa= Absorbncia da amostra Ap= Absorbncia do padro ( ) [P]= Concentrao do Padro = 40 mg/dL * ( ) * 40 equivale ao valor do padro (20 mg/dL) corrigido de acordo com o fator de diluio (1:2) usado na precipitao.
( ) Abs. Amostra X 40 * = mg/dL Colesterol HDL Abs. Padro
Com Fator:
Fc (Fator de calibrao)= 40 Ap Concentrao de HDL em mg/dL= Aa x Fc. Fc = 40 = 131,1
Exemplo: AA = 0,244
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Ap= 0,305 0,305
Concentrao de HDL(mg/dL)= 0,244 x 131,1= 31,99 mg/dL 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mmol/L Colesterol = mg/dL colesterol x 0,026 Valores de referncia Desejvel Colesterol LDL Colesterol Total Col. HDL Homens Col. HDL - Mulheres < 130 < 200 > 55 > 65 Risco moderado 130 159 200 239 35 55 45 65 Alto risco 160 240 < 35 < 45
Estes valores so unicamente orientativos, sendo recomendvel que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia. Pelas ltimas Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Preveno da Aterosclerose, os valores de referncia para HDL Colesterol podem ser consultados por faixa etria, como mostrado na tabela abaixo: Faixa Etria At 10 anos De 10 a 19 anos 20 anos ou acima Diabticos 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 150 mg/dL. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias cido ascrbico >0,3 mmol/L, a hemoglobina >3 g/L e a bilirrubina >0,25 mmol/L interferem. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Warnick, R.G. et al. Clin Chem. 2:217,1985. Burstein M, Scholnick HR, Morfin R. J Lipid Res 1970; 11: 583. Virella, M.F.L. et al. Clin Chem. 23:882,1977. Grove TH. Clin Chem 1979; 25:560. Friedwald W.T. et al. Clin. Chem. 18:707,1977. Kostner, G.M., et al. Clin Chem 25(6):939,1979. nd Bergmeyer, H.U. (Ed.) Methods of Enzymatic Analysis, Academic Press 2 ed., p.148,1985. HDL Colesterol (Precipitante) Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 241. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 67-68 Valor (mg/dL) Maior que 40 Maior que 35 Menor que 40 Maior que 60 Maior que 45 Interpretao Desejvel Desejvel Baixo Alto Desejvel
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CREATININA
Mtodo Cintico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao da funo renal. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO CREATININA SRICA Trata-se de um produto metablico formado pela descarboxilao da creatina-fosfato no msculo, tendo, portanto, uma relao direta com a massa muscular.Homens e atletas produzem maiores quantidades de creatinina que crianas, idosos e mulheres em geral. O decrscimo da massa muscular no idoso deve ser considerado na interpretao dos resultados. A creatinina no afetada normalmente pela dieta, porm, se quantidades excessivas de carnes forem consumidas, os nveis sricos podero sofrer aumento por um perodo de 48 horas. Com a reduo do fluxo sanguineo renal, a creatinina eleva-se mais lentamente que a uria. A concentrao de creatinina somente torna-se anormal quando aproximadamente metade ou mais de nfrons tenham sido comprometidos. Nveis Aumentados Nveis Diminudos Diminuio do fluxo sanguneo renal: Baixa estatura insuficincia cardaca congestiva, choque, desidratao Insuficincia renal por decrscimo da Desnutrio filtrao glomerular Obstruo do trato urinrio Diminuio da massa muscular Intoxicao por metanol Doena heptica severa Terapia com metildopa, trimetoprim, Gravidez hidantona, cefalosporinas e cido ascrbico CREATININA URINRIA filtrada livremente pelos glomrulos somente sendo reabsorvida em certas condies clnicas, como: diabetes melittus, insuficincia cardaca congestiva etc. A secreo tubular da creatinina pode ser inibida por drogas como: cimetidina, trimetoprim e probenecide. Exerccios severos e ingesto de altas quantidades de carne podem causar aumentos significativos na excreo de creatinina, enquanto a diminuio da massa muscular nos idosos provoca diminuio. A determinao da creatinina urinria em mg/kg de peso um parmetro indicativo do volume correto da urina colhida no perodo de 24 horas. Nveis Aumentados Nveis Diminudos Adenoma hipofisrio Distrofia muscular Diabetes mellitos Doena muscular inflamatria Doenas infecciosas Doenas com diminuio da massa muscular Encefalite Doena renal avanada Hipotireoidismo Hipertireoidismo Anemia Leucemia Paralisia 3. PRINCPIO DO MTODO A creatinina presente na amostra reage com o picrato em meio alcalino originando um complexo de cor vermelhoamarelada. Mede-se a velocidade de formao desse complexo utilizando uma cintica de 2 pontos durante os perodos iniciais da reao, a reao do picrato com outros cromognios presentes na amostra lenta, ocorrendo nos perodos finais da reao, o que no interfere na dosagem da creatinina. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras: Soro, plasma ou urina. Armazenamento e estabilidade das amostras: A creatinina em soro ou plasma estvel 24 horas a 2-8C. Os anticoagulantes como a heparina, EDTA, oxalato ou fluoreto, no interferem.
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Urina: amostra de urina de 24 horas deve ser conservada em geladeira durante o perodo de coleta e at o momento da dosagem. Estvel 4 dias a 2-8oC. Diluir a urina fresca 1/100 com gua destilada. Multiplicar o resultado obtido por 100. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise ou intensa turvao. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT CREATININA Cdigos: Registro M.S.: 80027310025 BT 10.007 1 fr. 50mL RA + 1 fr. 50mL RB + 1 fr. Padro 2,0 mL BT 10.007 1 fr. 250mL RA + 1 fr. 250mL RB + 1 fr. Padro 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: cido pcrico 18 mmol/L. Reagente B: Hidrxido sdico 1,8 mmol/L, Tetraborato sdico 20 mmol/L. Padro: Soluo de Creatinina (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 15-30oC 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes a temperatura ambiente. Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura a 500 nm (490-510), com cubeta termostatizvel. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade.
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9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. O Reativo B caustico. Evitar contato com a pele. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reagentes: Reagente de Trabalho: Misturar volumes iguais de Reativo A e Reativo B. Homogeneizar. Estvel por 10 dias a temperatura ambiente. Procedimento manual 1. Pr-aquecer o Reagente de Trabalho e a amostra ou padro a 37C durante alguns minutos. 2. Ajustar o espectrofotmetro em zero frente a gua destilada. 3. Pipetar em uma cubeta pr-aquecida a 37C: Reagente de Trabalho 4. 5. Inserir em porta-cubetas termostatizado a 37C. Quando a temperatura no interior da cubeta alcanar 37C pipetar : Padro ou Amostra 6. 7. 100 L 1,0 mL
Misturar e acionar imediatamente o cronmetro. Ler a absorbncia 500 nm aos 30 segundos (A1) e aos 90 segundos (A2).
Dosagem em urina: 1. Medir o volume urinrio de 24 horas. 2. Centrifugar uma alquota de 10 mL, por 10 minutos a 3000 rpm. 3. Fazer uma diluio do sobrenadante na proporo de 1:50 com gua destilada ou deionizada. 4. Proceder a dosagem conforme o procedimento descrito acima, para o soro. 5. Multiplicar o resultado obtido por 50. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas de segurana estabelecidas. Fazer referncia ao Manual ou POP de Segurana. As amostras muito leitosas, o procedimento corretivo com desproteinizao no eficiente e, nestes casos, no possvel dosar a creatinina com exatido.
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11. CLCULOS (A2 - A1) amostra x valor padro = mg/dL creatinina (A2 - A1) padro COM FATOR: Fc = Valor do padro (A2 - A1) padro
Creatinina (mg/dl) = (A2 - A1) amostra x Fc Exemplo: A1 p = 0,222 A2 - p = 0,409 A1 - A = 0,137 A2 _ A = 0,222 Valor do Padro: 2 mg/dl Clculo na Urina Fc = Valor Padro . (A2 A1) Padro Creatinina em mg/dl = (A2 A1) amostra x Fc Creatinina Urina (mg/24 horas) = Creatinina mg/dL x Volume urinrio 24hs (mL) 100 Creatinina em mg/kg peso/24 horas: Urina mg/kg peso /24 horas = Creatinina urina mg/ 24 horas Peso (kg) Depurao Da Creatinina Endgena (Clearence): Depurao (mL/minuto) = U x VM S Onde: U = creatinina na urina (mg/dL) S = creatinina no soro (mg/dL) VM = volume minuto (Vol. Urinrio de 24 h, em mL, dividido por 1440 minutos) Ateno: A depurao dever ser corrigida para a superfcie corporal do paciente. Clculo da Superfcie Corporal sem utilizao do Nomograma: SC = P0,425 x A0,725 x 0,007184 Onde: 2 SC = superfcie corporal em m P = peso em Kg A = altura em cm Determinao do Clearence: 2 Clearence (mL/min/1,73 m ) = Depurao(mL/min) x 1,73 Superfcie corporal Exemplo: Creatinina na urina (mg/dl) = 120 Creatinina no soro (mg/dl) = 0,91 Volume de 24 horas = 1800 mL Volume/minuto = 1800/1440 = 1,25 Peso = 70 kg Altura = 170 cm Superfcie corporal = 1,81 m2 Depurao (mL/min) = 120 x 1,25 = 164,83 mL/min. 0,91 Depurao (mL/min/1,73 m2) = 164,83 x 1,73 = 157,5 mL/min 1,81 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL Fc = = 2 0,409-0,222 2 0,187 = 10,7
Creatinina (mg/dl)=(0,222 0,137) x 10,7= 0,91 mg/dl
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UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL creatinina x 88,4 = mol/L creatinina Valores de referncia Soro ou Plasma Homens: 0,6 - 1,2 mg/dL = 53 - 97 mol/L Mulheres: 0,5 - 1,0 mg/dL = 44-80 mol/L Urina (mg/24 horas) Adultos: Homem: 1000 a 2000 mg/24 horas Mulher: 800 a 1800 mg/24 horas. Creatinina na Urina (mg/kg/24 horas) Crianas 2 - 3 anos: 6 a 22 mg/Kg/24 horas. Crianas maiores de 3 anos: 12 a 30 mg/Kg peso/24 horas. Adultos: Mulheres: 16 a 22 mg/Kg peso/24 horas Homens: 21 a 26 mg/Kg peso/24 horas Clearence 2 Criana: 70 a 140 mL/minuto/1,73 m Adultos: Homem: 98 a 160 mL/minuto/1,73 m2 2 Mulher: 95 a 150 mL/minuto/1,73 m Obs: mg/Kg = mg/24 horas dividido pelo peso corporal do paciente. Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 12 mg/dL = 1768 mol/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias A hemoglobina (0,1 g/L), a bilirrubina (10 mg/dL), a protena e compostos cetnicos no interferem. A determinao pode ser afetada por concentraes elevadas de substncias redutoras. Falsos Valores elevados: A creatinina urinria aumenta com dietas hiperproticas, cefalosporinas, cido ascrbico e levodopa. Falsos Valores baixos: Urinas muito acidificadas podem apresentar forte interferncia negativa. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Bartels H, Bohmer M. Clin Chem Acta 1971; 32: 81. Fabiny DL, Ertinghausen G. Clin Chem 1971; 17: 696 Creatinina Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 143. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 70-71
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CREATINO QUINASE (CK-NAC)
Mtodo Cintico - UV 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada nos casos de infarto do miocrdio e miopatias (distrofia muscular progressiva, dermatomiosites, trauma muscular etc). 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A Creatino Quinase (CK) tambm denominada ATP-Creatino-N-fosfotransferase, existe sob a forma de um dmero, e uma importante enzima reguladora da produo e utilizao de fosfatos de alta energia nos tecidos contrteis. A CK total encontrada em concentraes muito altas na musculatura esqueltica e cardaca. Quantidades apreciveis so encontradas no crebro, estando presente tambm no intestino e nos pulmes. A CK no encontrada no fgado. A CK total possui alta sensibilidade clnica para o diagnstico do IAM (>90%), porm os resultados no so especficos para leso miocrdica. Vrias condies no relacionadas ao miocrdio provocam elevao da CK total. A CK um dmero, isto , compe-se de duas cadeias diferentes, chamadas M (muscle) e B (brain). Estas duas cadeias podem combinar-se de trs formas, formando as chamadas isoenzimas da CK: CK-MM, CK-MB, e CK-BB. A CK-MM encontrada em grande quantidade principalmente na musculatura estriada. A CK-BB a isoenzima encontrada no crebro, sendo predominante tambm no clon, leo, estmago e bexiga. A CK-MB est presente no miocrdio, onde representa cerca de 20% da CK contra 80% de CK-MM. A CK-MB encontrada tambm no msculo estriado esqueltico em pequena proporo (entre 1% e 4%, sendo o restante CK-MM). Nveis Aumentados Infarto do miocrdio Leses da musculatura cardaca ou esqueltica Miopatias congnitas e adquiridas Acidente vascular cerebral Fisioterapia Injees intramusculares Hipotireoidismo Doenas infecciosas Embolia pulmonar Hipertermia maligna Convulses generalizadas Neoplasias de prstata, vescula e trato gastrintestinal 3. PRINCPIO DO MTODO A creatino quinase (CK) catalisa a fosforizao do ADP pelo fosfato de creatino, obtendo-se creatino e ATP. A concentrao cataltica determinada, empregando-se as reaes acopladas da hexoquinase e glicose-6-fosfato desidrogenase, a partir da velocidade de formao do NADPH, medido 340 nm. Fosfato de creatino + ADP ------------> Creatino + ATP ATP + Glicose ------------> ADP + Glicose-6-fosfato Glicose-6-fosfato + NADP+------------->Gluconato-6-fosfato + NADPH + H+ 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Evitar exerccios fsicos antes da colheita do material. Amostras Usar soro ou plasma colhido em EDTA. No utilizar amostras hemolizadas. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro. A atividade enzimtica estvel por 24 horas entre 15 25 C e 7 dias entre 2 8 C. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise.
G6P-DH HK CK
Nveis Diminudos Diminuio da massa muscular Doenas do tecido conjuntivo Doena alcolica do fgado Terapia com esterides
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Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT CREATINO QUINASE (CK-NAC) Cdigos: BT 11002 - 1 fr. com 20 mL + 1 fr. com 5 mL Registro M.S.: 80027310034
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: Imidazol 100 mmol/L, pH 6,7, EDTA 2 mmol/L, acetato de magnsio 10 mmol/L, D-glicose 20 mmol/L. Reagente B: Fosfato de creatina 30 mmol/L, N-acetil-cistena 20 mmol, ADP 2 mmol, AMP 5 mmol, di (adenosina-5) pentafosfato 10 mol/L, NADP 2 mmol/L, hexoquinase > 3000 U/L, glicose 6 - fosfato desidrogenase > 2500 U/L, EDTA 2 mmol/L. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8oC. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO
o Conservar o KIT a 2-8 C. Evitar exposio luz intensa. Os reativos so estveis at a data de validade indicada no rtulo, sempre que conservados bem fechados e se evitada a contaminao durante o uso. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas.
7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro com cubeta termostatizada para leituras a 340 nm. Pipetas automticas e ponteiras Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados.
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O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos.Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reagentes Reativo de Trabalho: Misturar na proporo de 04 partes de Reativo A + 01 parte de Reativo B. o Estvel 20 dias a 2-8 C. Aps a preparao do Reativo de Trabalho, mant-lo protegido da luz. Procedimento manual 1. Pr-aquecer o Reativo de Trabalho a temperatura desejada durante alguns minutos. 2. Pipetar: Amostra Reativo de trabalho 3. 4. 5. 20 L 1,0 mL
Misturar e transferir de imediato a uma cubeta. Inserir nas porta-cubetas termostatizado. Acionar o cronmetro. Aos 3 minutos, anotar a absorbncia inicial (A0) e efetuar novas leituras aps 1, 2 e 3.minutos (A1, A2 e A3, respectivamente) Comprovar que as diferenas entre absorbncias sejam sensivelmente iguais. Calcular o incremento mdio de absorbncia por minuto (A/min).
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. 11. CLCULOS Usando as leituras das absorbncias encontradas, calcular a mdia da variao de absorbncia por minuto (A/min). Calcular a mdia das absorbncias por minuto: A/min = (A1 A0) + (A2 A1) + (A 3 A2) 3 Multiplicar o valor abaixo pelo valor do A/min: 340 nm - 8095 `a 37C
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12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: U/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): kat/L = U/L x 0,0167 Valores de referncia 37C Mulheres < 170 U/L Homens < 195 U/L Estes valores so unicamente orientativos; recomendvel que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at A/min = 0,250 340nm (2023 U/L). Para valores superiores repetir a reao com amostra diluda em soluo fisiolgica, multiplicando o resultado final pelo fator de diluio. Temperatura de incubao: A determinao tambm pode efetuar-se a 30 C (mtodo IFCC). Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: Concentraes de hemoglobina acima de 200 mg/dL interferem no teste. A hemlise interfere. Falsos Valores elevados: Injees intramusculares, traumas, cirurgias, intoxicao por barbitricos, anfotericna B, ampicilina, carbenicilina, clofibrato, clorpromazine. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS International federation of Clinical Chemistry Clinica Chimica Acta. 105:147F (1980) Deutschen gesellschaft fur Klinische Chemie Z. Klin. Chem. 10:281 (1972). Scandinavian Society for Clinical Chemistry: Scand. J. Cin. Lab Invest. 33:291 (1974). CK-NAC Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 142. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 71.
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CREATINO QUINASE MB (CK-MB)
Mtodo Cintico - UV 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada principalmente na avaliao da extenso da leso causada nos casos de infarto do miocrdio e em paciente com doenas ou traumas na musculatura esqueltica. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A CK um dmero composto por duas subunidades: B (crebro) e M (msculo) no qual encontra-se 3 isoenzimas distintas: CK-BB, CK-MB e CK-MM. A CK-MB encontra-se basicamente no msculo estriado e miocrdio. Assim qualquer dano ou leso nestes tecidos provoca uma elevao dos nveis de CK-MB em soro, o que se utiliza quase que unicamente para diagnstico do infarto do miocrdio. No infarto agudo do miocrdio importante a proporo do CK-MB em, relao ao CK total, no havendo quantidade de CK-MB absoluta. A isoenzima CK-MB tm sido considerada o marcador bioqumico de referncia para o diagnstico de leso miocrdica e, por isso, tm sido a base para comparao com outros marcadores. Apesar da CK-MB ser, em termos de diagnstico, especfica para leso do miocrdio, o msculo esqueltico possui maior atividade de CK total por grama de tecido, e pode ter at 4% de CK-MB. Isto pode diminuir a especificidade especialmente em paciente com leses concomitantes na musculatura esqueltica e cardaca. A elevao e a queda caractersticas da CK-MB, em uma dosagem seriada so quase patognomnicas para o diagnstico de infarto do miocrdio. A elevao inicial dos nveis de CK-MB ocorre entre 4 e 6 horas aps o incio dos sintomas atingindo o seu pico aps 24 horas e retornando ao normal entre 48 e 72 horas. Para um diagnstico com alta sensibilidade e especificidade, recomenda-se a dosagem seriada ao longo de um perodo de 8 a 12 horas. 3. PRINCPIO DO MTODO O mtodo baseia-se na determinao da atividade da CK na presena de um anticorpo contra o monmero M. Este anticorpo inibe totalmente a isoenzima CK-MM e a metade da atividade da forma CK-MB, sem afetar o monmero B das isoenzimas CK-MB e CK-BB. Como normalmente a isoenzima CK-BB no encontra-se no sangue, a determinao da quantidade do monmero B praticamente especfica para a forma CK-MB. A concentrao cataltica de CK-B, correspondente metade da atividade CK-MB determinada, empregando-se as reaes acopladas da hexoquinase (HK) e Glicose-6-fosfato desidrogenase (G6P-DH), a partir da velocidade de formao do NADPH, medido 340 nm. Creatina Fosfato + ADP ------------> Creatino + ATP ATP + Glicose ------------> ADP + Glicose-6-fosfato
+ + Glicose-6-fosfato + NADP ------------->Gluconato-6-fosfato + NADPH + H G6P-DH HK CK-B
4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Evitar exerccios fsicos antes da coleta do material. Amostras: Usar soro ou plasma colhido em EDTA ou heparina. No utilizar amostras hemolizadas Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro ou plasma Diluir as amostras que possuam uma atividade de CK total superior ou igual a 1000 U/L com soluo salina (NaCl 0,9%). Multiplicar o resultado pelo fator de diluio. A CK-MB em soro estvel pelo menos por 7 dias a 2-8 C. Evitar exposio luz solar intensa. A atividade enzimtica estvel por 8 horas entre 15 25C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT CREATINO QUINASE MB (CK-MB) Cdigos: BT 11003 1 fr. com 20 mL + 1 fr. com 5 mL Registro M.S.: 80027310036
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BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: Tampo Imidazol 100 mmol/L, pH 6,7, Acetato de Magnsio 10 mmol/L, D-glicose 20 mmol/L, Reagente B: Creatino-fosfato 30 mmol/L, ADP 2 mmol, AMP 5 mmol, di (adenosina-5) pentafosfato 10 mol/L, NADP 2 mmol/L, hexoquinase 2500 U/L, glicose 6 - fosfato desidrogenase 2000 U/L, Anticorpo anti-CK-MM policlonal >2000U/L.. Controle: Soro controle de CK-MB. Verifique valores na etiqueta do frasco. NO UTILIZAR COMO CALIBRADOR. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 - 8C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Conservar o KIT a 2-8oC. Evitar exposio luz intensa. Os reativos so estveis at a data de validade indicada no rtulo, sempre que conservados bem fechados e se evitada a contaminao durante o uso. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro com cubeta termostatizada para leituras a 340 nm. Pipetas automticas e ponteiras Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente.
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Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos.Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reagentes Reativo de Trabalho: Misturar na proporo de 04 partes de Reativo A + 01 parte de Reativo B. o Estvel por 10 dias a 2-8 C. Aps a preparao do Reativo de Trabalho, mant-lo protegido da luz. Procedimento manual 6. Pr-aquecer o Reativo de Trabalho a temperatura desejada durante alguns minutos. 7. Pipetar: Amostra Reativo de trabalho 20 L 1,0 mL
8. Misturar e transferir de imediato a uma cubeta. Inserir nas porta-cubetas termostatizadas. Acionar o cronmetro. 9. Aos 5 minutos, anotar a absorbncia inicial (A10) e aos 10 minutos anotar novamente(A15). 10. Calcular a diferena das absorbncias A10 - A5 (A). Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS Determine a diferena de absorbncia: A10 A5= Abs. CK-MB (U/L) = Abs. x 1350 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: U/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): U/L x 16,67 = nkat/L Valores de referncia: Temperatura 37C U/L <25 A atividade de CK-MB representa de 6 a 20% da atividade de CK total. Estes valores so unicamente orientativos. recomendvel que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at 1000 U/L. Diluir as amostras que possuam uma atividade de CK Total superior a 1000 U/L, com uma soluo de cloreto de sdio 9 g/L 1:1. Neste caso multiplicar o resultado obtido por 2. A diluio realizada para que a atividade de CK total fique menor que 1000 U/L. O reativo, uma vez preparado, possui um anticorpo anti CK-M humano, em quantidade suficiente para inibir at 1500 U/L de CK-MM.
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Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: Hemoglobina acima de 200 mg/dL interfere nos resultados. A hemlise interfere. Concentraes de CK-MM superiores a 1500 U/L no so inibidas pelo anticorpo e interferir na determinao. Falsos Valores positivos: Pode ocorrer em algumas doenas neurolgicas. Falsos Valores baixos: Podem ser obtidos se o exame for realizado muito precocemente, antes de 2 horas ou aps 48 horas do IM. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS S.Stein Med. Weit 36: 572(1985). Wu, A.H.B., Bowers, C.N.: Clin. Chem. 28,2017 (1982) S. STEIN, W.: Med. Weit 36,572 (1985). International Federation of Clinical Chemistry Clinica Chimica Acta. 105:147F (1980) nd Tietz, N.W. Fundamentais of Clinical Chemis,2 Ed.; W.B. Saunders, Philadelphia, PA (1976). CK-MB Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 116. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 72.
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FERRO Ferrozine
Mtodo Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada principalmente na avaliao de anemias, anemias hemolticas, neoplasias da medula ssea e hepatopatias. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO O ferro um on importante para a formao da hemoglobina, mioglobina e outras substncias como os citocromos, a citocromo oxidase, a peroxidase e a catalase. Portanto, essencial se conhecer os meios pelos quais o ferro utilizado no corpo. A quantidade total de ferro no corpo em mdia de cerca de 4 g, dos quais cerca de 65% esto presentes na forma de hemoglobina. Cerca de 4% esto presentes sob forma de mioglobina, 0,1% sob forma dos diversos compostos hmicos que promovem a oxidao celular, 0.1% combinado protena transferrina no plasma sangneo e 15 a 30% armazenados, principalmente no fgado sob forma de ferritina. Haver um aumento de ferro srico no tratamento de anemias com ferro, neoplasia da medula ssea, drogas mielossupressoras, anemia hemoltica e perniciosa, hepatopatias virais e crnicas. Esse aumento ocorre pelo fato da liberao do ferro da sua forma de armazenamento no fgado (nas leses hepatocelulares), diminuio da sua utilizao na formao da hemoglobina principalmente nas neoplasias da medula ssea e na hemlise aumentada nas doenas hemolticas, onde teremos uma elevao na destruio da hemoglobina liberada e conseqentemente liberao de ferro. A diminuio srica ocorrer na gravidez, crianas alimentadas unicamente com leite, nos casos de grandes hemorragias e menstruao abundante. 3. PRINCPIO DO MTODO O on frrico presente na amostra e unido a transferrina liberado por ao do guanidinio e reduzido a ferroso pela hidroxilamina. O on ferroso forma um complexo colorido com a ferrozina que se pode quantificar atravs de leitura espectrofotomtrica. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Para controle teraputico, aconselhvel colher a amostra sempre no mesmo horrio, devido a variaes diurnas do ferro srico. Amostras: Usar soro. Armazenamento e estabilidade da amostra O analito estvel 4 dias entre 2 8 C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise e lipemia excessiva. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT FERRO (Ferrozine) Cdigos: Registro M.S.: 80027310026 BT 12005 1 fr; com 50 mL + 1 fr com 1,25 mL + 1 fr de padro com 2 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reativo A: Tampo acetato 100 mmol pH 4,9, cloridrato de guanidina 4,5 mmol/L, hidroxilamina 0,1 mmol/L. Reativo B: Ferrozine 40 mmol/L. Padro de Ferro: Soluo de Ferro (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) ATENO: OS REAGENTES SO NOCIVOS E IRRITANTES. NO PIPETAR COM A BOCA E EVITAR O CONTATO COM OS OLHOS E A PELE. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8 C.
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6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 560 nm (546-570), com cubetas Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras Cronmetro Tubos de ensaio de acrlico ou plstico, descartveis. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos.
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10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativos prontos pra uso Procedimento manual Dois tubo/amostra 1. Pipetar: Branco Reativo ---------1,0 mL ---Branco Padro 250L ------1,0 mL ---Padro ------250L 1,0 mL 25L Branco Amostra ---250L ---1,0 mL ---Amostra ---250L ---1,0 mL 25L
gua destilada Amostra Padro de Ferro Reativo A - Tampo Reativo B - Ferrozine 2. 3.
Homogeneizar suavemente. Incubar 10 minutos Temperatura ambiente. Ler as absorbncias:P1 do branco do padro, P2 do padro, A1 do branco da amostra, A2 da amostra, zerando o parelho com o branco do reativo. Ler as absorbncias a 560 nm.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Limpeza do material: todo material a ser utilizado na tcnica deve estar livre de ons ferro. Deve-se deixar o mesmo submerso em uma soluo de cido Ntrico ou Clordrico 10-15%, por 6 horas e, aps, eliminar a acidez com numerosas lavagens com gua deionizada (livre de ferro), condutividade menor que 0,01 Siemens. Secar o material a no mximo 80C em estantes de ao inox ou revestidos de plstico. Todo material utilizado nos procedimentos deve ser de plstico ou acrlico. ATENO: OS REAGENTES SO NOCIVOS E IRRITANTES. NO PIPETAR COM A BOCA E EVITAR O CONTATO COM OS OLHOS E A PELE. 11. CLCULOS Ferro(g/dL)= A2 A1 P2 - P1 x [P] onde,
A2 = Absorbncia da amostra A1 = absorbncia do Branco da amostra P2 = absorbncia do padro P1 = absorbncia do Branco do Padro [P] = valor do padro Com Fator : Fator Calibrao = [P] . (P2 P1) Ferro(g/dL)= 0,156-0,042 x 100 0,108-0,006 Ferro (g/dL) = 0,114 0,102 x 100
Exemplo: A2 = 0,156 A1 = 0,042 P2 = 0,108P1 = 0,006 [P] = 100 mg/dL
Ferro (g/dL) = 111,8 mg/dl 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada : g/dL UNIDADES Sistema Internacional (SI) : g/dL ferro x 0,179 = mol/L ferro
Valores de Referncia: Para amostras de Soro e Plasma: Homens: 70-155 g/dL = 12,5 - 27,7 mol/L
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Mulheres: 55-140 g/dL = 9,84 - 25,1 mol/L Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade
Reao linear at 500 g/dL = 89.5 mol/L

Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias No devem ser usados soros lipmicos, ictricos ou hemolisados. Falsos Valores elevados: Falsos Valores baixos: 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Stookey LL. Anal Chem 1970; 42:779-81. Itano M. Am J Clin Pathol 1978; 70:516-22. Artiss JD, Vinogradov S, Zak B. Clin Biochem 1981; 14:311-15 Ferro Ferrozine Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 200. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 74
FERRO CRX
Mtodo Cromazurol B 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada principalmente na avaliao de anemias, anemias hemolticas, neoplasias da medula ssea e hepatopatias. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO
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O ferro um on importante para a formao da hemoglobina, mioglobina e outras substncias como os citocromos, a citocromo oxidase, a peroxidase e a catalase, por isso essencial conhecer os meios pelos quais o ferro utilizado no corpo. A quantidade total de ferro no corpo em mdia de cerca de 4g, dos quais cerca de 65% esto presentes na forma de hemoglobina. Cerca de 4% esto presentes sob forma de mioglobina, 1% sob forma dos diversos compostos hmicos que promovem a oxidao celular, 0.1% combinado protena transferrina no plasma sangneo e 15 30% armazenados, principalmente no fgado sob forma de ferritina. Haver um aumento de ferro srico no tratamento de anemias com ferro, neoplasia da medula ssea, drogas mielossupressoras, anemia hemoltica e perniciosa, hepatopatias virais e crnicas. Esse aumento ocorre pelo fato da liberao do ferro da sua forma de armazenamento no fgado (nas leses hepatocelulares), diminuio da sua utilizao na formao da hemoglobina principalmente nas neoplasias da medula ssea e na hemlise aumentada nas doenas hemolticas, onde teremos uma elevao na destruio da hemoglobina liberada e conseqentemente liberao de ferro. A diminuio srica ocorrer na gravidez, crianas alimentadas unicamente com leite, nos casos de grandes hemorragias e menstruao abundante. 3. PRINCPIO DO MTODO O ferro srico reage com o cromazurol B do CTMA-Br para formar um complexo colorido azul. A intensidade de cor do complexo proporcional a concentrao de ferro presente na amostra. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Para controle teraputico, aconselhvel colher a amostra sempre no mesmo horrio, devido a variaes diurnas do ferro srico. Amostras: Usar soro. No utilizar amostra hemolisada. Armazenamento e estabilidade da amostra O analito estvel 4 dias entre 2 8 C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise e lipemia excessiva. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT FERRO CRX Cdigos: Registro M.S.: 80027310053 BT 12004 2 fr. com 50 mL + 01 fr. de padro 2 mL.
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Cromazurol B 0.13 mM, brometo de CTMA 0.82 mM, tampo acetato pH 4.75. Padro de Ferro: Soluo de Ferro (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) ATENO: OS REAGENTES SO NOCIVOS E IRRITANTES. NO PIPETAR COM A BOCA E EVITAR O CONTATO COM OS OLHOS E A PELE. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar em temperatura ambiente. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes em temperatura ambiente. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 630 nm (620-640), com cubetas.
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Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio de acrlico ou plstico, descartveis. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Branco Reativo ---Padro ---Amostra 40L
Amostra
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Padro de Ferro Reativo 2. 3. ---1,0 mL 40L 1,0 mL ---1,0 mL
Agitar bem e deixar reagir durante 5 minutos a temperatura ambiente. Ler a absorbncia (Ap) do Padro e (Aa) da amostra contra o Branco de Reagente a 630 nm (620-640). A cor estvel por 2 horas ao abrigo da luz.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Limpeza do material: todo material a ser utilizado na tcnica deve estar livre de ons ferro. Deve-se deixar o mesmo submerso em uma soluo de cido Ntrico ou Clordrico 10-15%, por 6 horas e, aps, eliminar a acidez com numerosas lavagens com gua deionizada (livre de ferro), condutividade menor que 0,01 Siemens. Secar o material a no mximo 80C em estantes de ao inox ou revestidos de plstico. Todo material utilizado nos procedimentos deve ser de plstico ou acrlico. ATENO: OS REAGENTES SO NOCIVOS E IRRITANTES. NO PIPETAR COM A BOCA E EVITAR O CONTATO COM OS OLHOS E A PELE. 11. CLCULOS Aa Ap [P] Absorbncia da Amostra Absorbncia do Padro Concentrao do Padro
Ferro (g/dL) = Aa X [P] Ap COM FATOR: Fator = [P] Ap Ferro (g/dL) = Aa x fator Exemplo: Aa=0,120 Ap=0,117 [P]=100 g/dL = 854,7 F= 100 0,117 Ferro (g/dL) = 0,12 X 854,7 = 102,6 g/dL
12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada : g/dL UNIDADES Sistema Internacional : g/dL ferro x 0,179 = mol/L ferro Valores de Referncia Homens: 59 - 158 g/dL = 10,6 - 28,3 mol/L Mulheres: 37 - 145 g/dL = 6,62 25,9 mol/L Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 500 g/dL = 89.5 mol/L Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias No devem ser utilizados soros hemolisados. Recomenda-se utilizar um branco da amostra com gua destilada se a amostra for fortemente ictrica (Bilirrubina Total > 3 mg/dL). Soros lipmicos ou hemolisados no so apropriados para esta Tcnica. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Garcic A Clin Chim Acta 1979; 94 : 115-119. Paris M.Ann Biol Clin 1986; 44 : 511-516. Guyton, Fisiologia humana e Mecanismos das doenas 1993, 5 edio.
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Ferro CRX Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 200. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 74
FOSFATASE ALCALINA
Mtodo Cintico Colorimtrico
(DGKC DEA)
1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de afeces sseas e hepatobiliares. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO
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A fosfatase alcalina uma enzima com atividade tima in vitro em pH prximo de 10, presente em muitos tecidos, particularmente no epitlio intestinal, tbulo renal, osteoblastos, fgado e placenta. A forma presente no soro de adultos normais origina-se principalmente do fgado e esqueleto e so acentuadamente dependentes da idade., Sua funo precisa no metabolismo ainda no est de todo compreendida e parece estar associada ao transporte lipdico no intestino e processos de calcificao ssea. Sua dosagem de interesse na investigao de doenas hepatobiliares e sseas associadas com hiperatividade osteoblstica. Os nveis mais altos de fosfatase alcalina so encontrados na doena de Paget. Mulheres no terceiro trimestre de gravidez podem apresentar aumentos em torno de duas a trs vezes do intervalo normal, devido a adicional frao placentria. Em osteomalcia, podem ser encontrados aumentados moderados, que diminuem lentamente em resposta terapia por vitamina D. Visto elevar-se em metstases do fgado e sseas, esta enzima pode funcionar como marcador tumoral. A resposta de suas fraes, quando expostas a altas temperaturas, pode ser mais um auxlio na identificao de suas isoenzimas. Nveis Aumentados Nveis Diminudos Doenas hepticas e do trato biliar Hipotireoidismo Metstases para fgado e osso Uso de estrognio, simples ou combinado com andrognio Acromegalia Doena de Paget Hipertireoidismo Raquitismo Mononucleose infecciosa Hiperparatireoidismo Crescimento sseo fisiolgico 3. PRINCPIO DO MTODO A determinao de fosfatase alcalina feita atravs de mtodo cintico com emprego do 4-nitrofenilfosfato de sdio. Neste mtodo, baseado na DGKC, o 4-nitrofenilfosfato de sdio hidrolisado especificamente pela fosfatase alcalina do soro em pH9,8, liberando o 4-nitrofenol, cuja velocidade de formao, medida a 405 nm, proporcional atividade da enzima presente. 4-Nitrofenilfosfato + H2O ---------------> 4-Nitrofenol + fosfato 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro e plasma. Armazenamento e estabilidade das amostras: A fosfatase alcalina em soro ou plasma estvel at 7 dias a 2-8C A heparina no interfere como anticoagulante. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT FOSFATASE ALCALINA Cdigos: Registro M.S.: 80027310018 BT 11005 1 fr. com 40 mL + 1 fr. com 10 mL
FAL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: Dietanolamina pH 9,08 1,0 mmol/L, cloreto de magnsio 0,5 mmol/L. Reagente B:: 4-nitrofenilfosfato 10 mmol/L. Reagente pronto para uso.
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Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 405 nm, com cubetas termostatizadas. Pipetas automticas e ponteiras. Centrfuga. Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase.
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A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos Reativo de Trabalho: Misturar 04 partes de Reativo A + 01 parte de Reativo B. Agitar suavemente. Estvel 30 dias a 2-8C. Procedimento manual 1. Pr-aquecer o Reagente de Trabalho a temperatura desejada durante uns minutos. 2. Pipetar em uma cubeta: Reagente de Trabalho Amostra 3. 4. 5. 1,0 mL 20L
Misturar e inserir no porta-cubetas termostatizado a 37C. Aos 60 segundos, anotar a absorbncia inicial e efetuar novas leituras cada minuto durante 3 minutos. (A1, A2 e A3 respectivamente). Comprovar que as diferenas entre absorbncias sejam sensivelmente iguais.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. 11. CLCULOS Usando as leituras das absorbncias, calcular a mdia da variao da absorbncia por minuto (A/min): A/min = (A1 A0) + (A2 A1) + (A3-A2) 3 A atividade da fosfatase alcalina na amostra calculada pela multiplicao do A/min pelo seguinte fator: A/min x 2757 = U/L Exemplo: A0 = 1,179 A1 = 1,225 A2 = 1,266 A3 = 1,312 A/min = (1,225 1,179) + (1,266-1,225)+ (1,312-1,266) 3 A/min = 0,044 Fosfatase alcalina (U/L) = 0,044 x 2757 = 121,3 U/L 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: U/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): U/L x 0,01667 = kat/L Valores de Referncia Adultos Crianas 37C 100 - 290 U/L 180 - 1200 U/L
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Estes valores so unicamente orientativos. recomendvel que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at A/min: 0,250 = 700U/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio.
Interferncias: cido ascrbico (vitamina C) maior que 400 mg/L Glicose maior que 500 mg/dL Triglicrides maior que 1200 mg/dL Os anticoagulantes fluoreto, oxalato, citrato e EDTA interferem. A hemlise interfere devido a fosfatase alcalina eritrocitria. A presena de Mg2+ e Zn2+, produz um aumento nos resultados.
14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Z. Klin. Chem Klin. Biochem. 8 (1970) 658; 10 (1972) 182. Kubler W; Symp. D. Deutsch Ges fur Lab. Med. 8 (21973). J. Clin Chem Clin Biochem 1983; 21: 731 748 Fosfatase Alcalina Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 205. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 76
FSFORO - UV
Mtodo Molibdato 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao da insuficincia renal, funo da paratireide, fraturas sseas e em leses musculares extensas.
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2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO O fsforo um importante elemento, amplamente distribudo pelo organismo na forma de fosfato orgnico ou inorgnico. Em torno de 85% dos 600g deste elemento (medido como fsforo inorgnico) em adultos est presente no esqueleto. O restante principalmente combinado com lipdios, protenas, carboidratos e incorporados a outras substncias orgnicas como fosfolipdios, cidos nuclicos, fosfoproteinas e compostos de alta energia envolvidos na integridade celular (estocagem e troca de energia). Trs rgos so majoritariamente comprometidos com a homeostasia do fsforo: intestino delgado (absoro), rins (filtrao e reabsoro) e esqueleto (estocagem). Em torno de 2/3 do fosfato ingerido absorvido (absoro ativa) principalmente no jejuno e o restante excretado pelas fezes. A absoro aumentada no decrscimo da ingesto de clcio, na acidez do contedo intestinal e tambm pela ao da vitamina D e hormnio de crescimento (GH). A ao do hormnio da paratireide (PTH) na sua absoro provavelmente um efeito indireto do metabolismo da vitamina D. Cerca de 90% do fsforo plasmtico filtrado pelos glomrulos e quase totalmente reabsorvido pelos tbulos. Os nveis sricos de fsforo so inversamente proporcionais aos do clcio srico. O aumento do fsforo srico ocorre por diminuio da filtrao glomerular, aumento da reabsoro tubular renal e aporte exgeno ou endgeno. A diminuio ocorre por desordens tubulares e aumento das perdas. O PTH inibe a sua reabsoro tubular renal. recomendada a coleta pela manh devido a relatos de variaes diurnas. Nveis Aumentados Insuficincia renal Hipoparatireoidismo Pseudo-hipoparatireoidismo Hipervitaminose D Osteoporose Acromegalia Mieloma mltiplo Leucemia mielide crnica Metstase ssea Hipocalcemia Diabetes mellitus descompensada Desidratao e hipovolemia Exerccios Nveis diminudos Defeitos tubulares de reabsoro (sndrome de Fanconi) Hiperparatireoidismo primrio Hiperparatireoidismo secundrio Hipotireoidismo Esteatorrias Osteomalcia Hipovitaminose D Raquitismo Hemodilise Doena heptica Alimentao parenteral prolongada Anticidos Diurticos Alcolismo Tratamento da cetoacidose diabtica
Fsforo Urinrio Fosfato urinrio varia com idade, massa muscular, funo renal, hormnio da paratireide, hora do dia e dieta. Este parmetro mais informativo quando efetuado em urina de 24 horas, devido a sua variao diria. Nveis Aumentados Hiperpareatireoidismo primrio Hipervitaminose D Acidose tubular renal Uso de diurtico Doena de Paget Defeitos tubulares de reabsoro (sndrome de Fancini) 3. PRINCPIO DO MTODO O fsforo inorgnico presente na amostra reage com o molibdato de amnio, em meio cido, originando o complexo fosfomolibdato, que quantifica-se por espectrofotometria 340 nm. A absorbncia proporcional a quantidade de fsforo inorgnico presente na amostra. 7H3PO4 + 12(Mo7O24)-6 7H3PO4(MoO3)12 + 36 O-2 Nveis Diminuidos Hipoparatireoidismo Pseudo-hipoparatireoidismo Osteomalcia
4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas.
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Amostras Soro, plasma ou urina. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro ou plasma: utilizar soro no hemolisado, plasma (heparina ou EDTA). Na utilizar fluoreto de sdio como anticoagulante, pode-se obter valores falsamente baixos. A amostra pode ser conservada por 7 dias 4oC. Urina: Coletar a urina de 24 horas e acidificar com 15 mL de HCl 37% (concentrado). A amostra de urina no acidificada e que esteve refrigerada, deve ser acidificada e/ou aquecida at 56 C durante 15 minutos at completa redissoluo do precipitado. A amostra de urina deve ser diluda 1:20 com gua deionizada ou destilada antes da anlise. Multiplicar o resultado obtido por 20. Importante: a amostra de urina acidificada no deve ser utilizada para dosagem de creatinina. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT FSFORO UV Registro M.S.: 80027310033 Cdigos: BT 12006 1 fr. com 50 mL + 1 fr. Padro 2,0 mL BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Soluo de Molibdato de Amnio 0,5 mmoL, cido sulfrico 220 mmol/L; Triton X 0,1%. Padro: Soluo de fsforo inorgnico (Vide valor da concentrao do padro na etiqueta do frasco) O reagente de fsforo custico e pode produzir queimaduras. No caso de contato com os olhos, deve-se lavar imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. Deve-se utilizar os equipamentos de proteo adequados para manipular reagentes custicos. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 8oC. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 340 nm (335-366), com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos.
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Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada.. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do reagente: Reagente pronto para uso. Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 1000 L Padro 10 L 1000 L Amostra 10 L 1000 L
Padro de fsforo Amostra Reagente
o 2. Homogeneizar, incubar 37 C por 5 minutos. 3. Ler a absorbncia do Padro e da Amostra, zerando o aparelho com o Branco 340 nm. A cor estvel por 1 hora. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais O uso de detergente inico para limpar o material outra fonte de contaminao com ons de fsforo.
11. CLCULOS Abs. Teste x Valor padro mg/dL = mg/dL Fsforo Abs. Padro
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Onde: Abs. Teste Absorbncia do teste Abs. Padro Absorbncia do Padro Valor padro mg/dL valor da concentrao do Padro (vide etiqueta do frasco)
Devido a tima reprodutibilidade, que pode ser obtida com a metodologia, pode-se utilizar o mtodo do fator: Fator de calibrao = Conc. do Padro . Absorbncia do Padro Concentrao do Padro Vide etiqueta do frasco.
Fsforo (mg/dL) = Absorbncia do Teste x Fator 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL fsforo x 0,323 = mmol/L fsforo Valores de referncia Soro, plasma: Adultos: 3,0 4,5 mg/dL Crianas: 4,0 6,5 mg/dL Urina : 300 - 1000 mg/24 horas Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade Reao linear at 15 mg/dL = 4,84 mmol/L . Para amostra hiperlipmicas ou com contedo elevado de Bilirrubina prefervel fazer um branco da amostra adicionando 100 L de amostra + 3 mL de gua destilada. Obtendo-se o valor da absorbncia da amostra (Aamostra). Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias Valores do branco elevados indicam contaminao, se os valores forem superiores a 0,600 A, desprezar o reativo. Plasmas citratados, oxalados, fluoretados ou com EDTA produzem resultados falsamente diminudos. Anticoncepcionais, acetazolamida, salbutamol, alendronato, azatioprina, isoniazida, ltio e prometazina podem interferir nos resultados. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Yee, H.Y. Clin. Chem. 14, 898 (1968). Fsforo UV Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 208-209. Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 77-78
FRUTOSAMINA
Mtodo Cintico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA
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Esta dosagem utilizada na avaliao da basicamente das glicoprotenas do soro. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A glicose presente no plasma humano reage com diversas protenas formando glicoprotenas estveis sendo a principal delas a albumina. Esta reao se d atravs da ligao covalente da glicose com resduos de lisina das protenas sanguneas dando origem a bases de Schiff, as quais, num segundo momento, se transformam irreversivelmente em cetoaminas estveis (frutosaminas). Logo, a determinao de frutosamina trata-se basicamente da medio destas glicoprotenas no soro. Desta forma, os nveis de Frutosamina no sangue so um reflexo direto dos nveis de glicose sanguneo tendo sua determinao grande utilidade no controle glicmico de pacientes diabticos ou de pacientes hipoglicmicos. A concentrao de Frutosamina reflete o ndice de variao de glicose durantes as ltimas duas a trs semanas prvias coleta da amostra. 3. PRINCPIO DO MTODO Em meio alcalino as frutosaminas (protenas sricas glicadas) presentes na amostra reduzem o reagente azul de nitrotetrazol formando cor roxo-azulada. A intensidade desta colorao proporcional a concentrao de frutosamina presente na amostra e ento determinada em espectrofotmetro a 520 nm. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro. Armazenamento e estabilidade da amostra: Estvel 7 dias de 2 a 8 C. No usar amostras hemolisadas e separar o soro o mais rapidamente o possvel. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT FRUTOSAMINA Registro M.S.: 80027310069 Cdigos: BT 10017 1 fr. com 50 mL + 1 fr. Calibrador 3,0 mL 2 fr. com 50 mL + 1 fr. Calibrador 3,0 mL BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Tampo Carbonato 200 mmol/L pH 10,3; Azul de Nitrotetrazol 0,25 mmol/L. Calibrador: Soro liofilizado contendo albumina glicada (Valor da concentrao: vide rtulo do frasco de calibrador). Potencialmente Infectante. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 - 8 oC. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual
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Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura em 520 nm (500-550) com cubeta termostatizada. Banho de gua a 37 C. Pipetas de vidro e/ou automticas. Relgio ou Cronmetro. Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais devem ser observados. As amostras a serem analisadas devem ser tratadas como material potencialmente infectante. Utilizar os EPIs de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio Clnico. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio Clnico em local prprio para materiais potencialmente infectantes. Em caso de vazamento acidental, contato com os olhos, pele ou mucosa, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. As informaes de Descarte, Segurana e Primeiros Socorros esto descritas na Ficha Individual de Segurana de Produtos Qumicos (FISPQ) deste produto. No misturar diferentes lotes de reagentes. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle, padro/calibrador e reagente. No trocar as tampas dos frascos dos reagentes, a fim de evitar contaminao cruzada. No usar o reagente quando este mostrar-se com sinais de contaminao.
10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do reagente: Reagente pronto para uso. Procedimento manual 4. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 1000 L Padro 50 L 1000 L Amostra 50 L 1000 L
Calibrador de Frutosamina Amostra Reagente
4. Homogeneizar e inserir no porta-cubetas termostatizado. 5. Medir a absorbncia a 520 nm (500-550) aos 10 minutos (A1) e aos 15 minutos (A2). Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo).
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11. CLCULOS (A2 - A1) amostra x valor Calibrador = mmol/L Frutosamina (A2 - A1) Calibrador COM FATOR: Fc = Valor do Calibrador (A2 - A1) Calibrador
Frutosamina (mmol/L) = (A2 - A1) amostra x Fc Exemplo: A1C = 0,588 Fc = 2,37 = 2,37 = 16,23 A2C = 0,734 0,734-0,588 0,146 A1A = 0,630 Frutosamina (mmol/L) = (0,802 - 0,630) x 16,23 A2 A = 0,802 = 2,79 mmol/L Valor do Calibrador: 2,37 mmol/L 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mmol/L Valores de referncia Soro: 1,9 a 2,9 mmol/L 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade A reao linear de 0,2 a 8,5 mmol/L. Para valores superiores a 8,5 mmol/L, diluir a amostra com NaCl 150 mM (0,9%), realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Baker J R et al., Clin. Chem. 31/9: 1550-1554, 1985. Hurst, P. Clin. Chem. 33/10: 1947, 1987. Ambruster D A, Clin. Chem.. 33/12: 2153, 1987. Westgard J. O., Barry P. L., Hunt M.R., Groth T. A multi-rule Shewhart chart quality control in clinical chemistry. Clin. Chem., 27:493-501,1981.
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- GLUTAMILTRANSFERASE (GAMA - GT)
Mtodo Cintico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao das colestases hepticas, doenas obstrutivas da rvore biliar e no monitoramento da administrao de algumas drogas. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Esta enzima est presente em numerosos tecidos, mas a concentrao mais elevada est nos rins, pncreas e fgado. usada na avaliao das colestases heptica, doena obstrutiva da rvore biliar, no uso prolongado de drogas que induzem o sistema microssomal heptico, como exemplo, fenitona, fenobarbital, carbamazepina, cido valprico e contraceptivos, e no acompanhamento do tratamento de alclatras, nas neoplasias do fgado valores elevados podem ocorrer. Diminuio dos valores podem ocorrer no uso de azatioprina, clofibrato, estrgenos e metrovidazol. 3. PRINCPIO DO MTODO A gama-glutamiltransferase (GT) catalisa a transferncia do grupo glutamilo da glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida a glicilglicina, liberando 5-amido-2-nitrobenzoato. A concentrao cataltica determinada a partir da velocidade de formao do 5-amido-2-nitrobenzoato. Lglutamil-3-carboxi-4-nitroanilida + glicilglicina L-glutamil- glicilglicina + 5-amido-2-nitrobenzoato 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Amostras: Soro ou plasma. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro no hemolisado, Plasma (EDTA ou heparina). Anticoagulantes contendo citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade da GGT. A y-Glutamiltransferase em soro estvel pelo menos por 7 dias a 2-8 C Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Evitar amostras com hemlise. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT - GLUTAMILTRANSFERASE ( - GT) Registro M.S.: 80027310012 Cdigos: BT 11006 1 fr. com 40 mL + 1 fr. com 10 mL BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A:Tampo TRIS 100 mmol/L - pH 8,25,Glicilglicina 100 mmol/L. Reagente B: L-y-Glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida 4mmol/L. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. No utilizar reativos com a data de validade vencida. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas.
-GT
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7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 405 ou 410 nm, com cubetas termostatizadas Pipetas automticas e ponteiras. Centrfuga. Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos.
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10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos Reativo de Trabalho: Misturar 04 partes de Reativo A + 01 parte de Reativo B. Estvel 6 semanas a 2-8C. Procedimento manual 1. Pr-aquecer o Reagente de Trabalho a temperatura desejada durante alguns minutos. 2. Pipetar: Reativo de Trabalho Amostras 1,0 mL 100 L
3. Inserir no porta-cubeta termostatizado a 37 C. Pr-incubar o reativo por 5 minutos. 4. Aos 60 segundos, anotar a absorbncia inicial e efetuar novas leituras cada minuto durante 3 minutos. (A1, A2 e A3 respectivamente). 5. Comprovar que as diferenas entre absorbncias sejam sensivelmente iguais. Calcular o incremento mdio de absorbncia por minuto (A/min). Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. 11. CLCULOS Usando as leituras das absorbncias, calcular a mdia da variao da absorbncia por minuto (A/min). A/min = (A1 - A0) + (A2 A1) + (A3 A2) 3 A atividade de -GT na amostra calculada pela multiplicao do A/min, utilizando se o seguinte fator Fator (F) = 1158 -GT = A/min X F Exemplo: A0 = 1,16 A1 = 1,18 A2 = 1,22 A3 = 1,25. A/min = (1,18-1,16)+(1,22 -1,18)+(1,25-1,22) 3 A/min = 0,03 -GT (U/L)= 0,03 x 1158 = 34,7 U/L 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: U/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): U/L x 16,67 = kat/L Valores de referncia Homens Mulheres 37C 10 47 7 30
Fator de correlao: 37C / 30C 124 37C / 25C 168 Estes valores so unicamente orientativos. recomendvel que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at 1000 U/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio.
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Interferncias: O etanol e vrios frmacos induzem a sntese heptica da y-glutamiltransferase. Anticoagulantes contendo citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade da GGT. Valores de Bilirrubina at 38 mg/dL, Hemoglobina at 180 mg/dL e Triglicrides at 1800 mg/dL no produzem interferncias significativas. Falsos Valores elevados: Valores de Triglicrides entre 1800 e 3500 mg/dL produzem resultados falsamente elevados. O uso de fenitona, fenobarbital, carbamazepina, cido valprico e contraceptivos, tambm podem aumentar o valor da GGT. Falsos Valores baixos: O uso de azatioprina, clofibrato, estrogenose metronidazol, podem causar resultados diminudos. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Commitee of the Scand. Soc. for Clin. Chem. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 366, 119 (1976). Szasz G. Clin Chem. 22, 2051 (1976). - glutamiltransferase (Gama GT) Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 215 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 78
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GLICOSE
Mtodo Enzimtico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao do controle de produo, consumo e armazenamento da glicose no organismo. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO til no estabelecimento do diagnstico e monitorao teraputica do diabetes mellitus, na avaliao de distrbios do metabolismo de carboidratos, no diagnstico diferencial das acidoses metablicas, desidrataes, hipoglicemias e na avaliao da secreo inapropriada de insulina. A reformulao dos critrios diagnsticos do diabetes mellitus pela American Diabetes Association (ADA) visou sua precocidade diagnstica, com o objetivo de desacelerar a progresso da doena e o aparecimento de suas complicaes tardias. A avaliao laboratorial deve ser considerada em todos os indivduos acima de 45 anos de idade. Esta faixa etria e freqncia de investigao devem ser reconsideradas nos obesos (ndice de massa corprea > 27 Kg/m2), em parentes em 1 grau de pacientes diabticos, em etnias de alto risco, em mes de bebs macrossmicos ou que desenvolveram Diabetes Mellitus Gestacional (DMG), pacientes hipertensos e naqueles com nveis baixos de HDL-Colesterol (<35 mg/dL) e /ou elevados de triglicerdeos (250 mg/dL). Nveis Elevados Diabetes Hipertireoidismo Feocromocitoma Pancreatite aguda Extresse Vrias drogas * Nveis Diminudos Insulinomas Tumores extrapancreticos (fibromas, sarcomas, hepatomas, mesoteliomas) Insuficincia adrenal (doena de Addison) Hipotireoidismo Hipopituitarismo Hiperinsulinismo Pancreatite crnica Desnutrio sndrome de mabsoro Alcoolismo Dano heptico (insuficincia cardaca severa, necrose heptica fulminante) Vrias drogas**
* cido Acetilsaliclico, atropina, cido ascrbico, anticonvulsivantes, diurticos (tiazdicos, clortalidona, cido etacrnico, furosemida), adrenalina, corticide, dopamina, indometacina, rifampicina, estrognios, carbonato de ltio, contraceptivos orais, tiabendazol, etc. ** Bloqueadores pela adrenrgicos, esterides anablicos, anti-histamnicos, etanol, inibidora da MAO, acetaminofen, levodopa, etc. Glicose, Lquor Nveis Aumentados Hiperglicemia diabtica Encefalite epidmica Glicose srica aumentada
Nveis Diminudos Hemorragias subaracnides Meningoencefalites no bacterianas Meningite piognica aguda Meningite tuberculsica Meningite criptoccica Sfilis neurolgica Sarcoidose Tumor primrio ou metasttico das meninges
3. PRINCPIO DO MTODO A enzima glicose oxidase catalisa a oxidao da glicose existente na amostra, em presena de oxignio, produzindo perxido de hidrognio. A enzima peroxidase catalisa a oxidao do fenol pelo perxido de hidrognio formado, em presena de 4-amino-antipirina, produzindo um composto rseo-avermelhado (quinonimina), que apresenta um mximo de absoro em 500 nm. A intensidade de cor proporcional concentrao de glicose na amostra. Glicose + O2 + H2O --------------------> cido Glucnico + H2O2
peroxidase glicose oxidase
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2H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol --------------> Quinonimina + 4 H2O 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Glicemia de jejum: recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Amostras Soro. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro lmpido, obtido no mximo duas horas aps a coleta, por centrifugao, para evitar a gliclise (falso baixo) ou plasma obtido com anticoagulante fluoretado. Observaes para todas as amostras: a separao da parte fluida dos elementos figurados (hemcias, leuccitos e outras clulas) deve ser feita de forma imediata, para que no haja consumo do analto. Outra forma de se evitar este problema a coleta de uma frao do lquido em fluoreto. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de cogulo. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT GLICOSE Cdigos: Registro M.S.: 80027310031 BT 10008 1 fr com 250 mL + 1 fr. Padro com 2,0 mL BT 10008 4 fr. com 250 mL + 1 fr. Padro com 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Tampo fosfato 182,42 mmol/L - pH 7,0; 4-Aminoantipirina 0,3 mmol/L; GOD-Glicose oxidase > 15000 U/L; POD-Peroxidase > 1200 U/L; Fenol 10 mmol/L. Padro: Soluo de Glicose (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 - 8C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 505 nm (490-510), com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE
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Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso. Procedimento manual 1. Deixar o Reagente durante alguns minutos temperatura ambiente ou em banho de gua. 2. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Padro de glicose Amostra Reagente
3. Agitar bem e incubar os tubos durante 10 minutos a 37C ou durante 15 minutos a temperatura ambiente 25C. 4. Ler a absorbncia (AP) do Padro e (AA) da Amostra frente ao Branco a 505 nm. A cor estvel durante pelo menos 1 hora. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo).
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11. CLCULOS Abs. Teste x Valor padro mg/dL = mg/dL Glicose Abs. Padro Onde: Abs. Teste Absorbncia do teste Abs. Padro Absorbncia do Padro Valor padro mg/dL valor da concentrao do Padro (vide etiqueta do frasco)
Devido a tima reprodutibilidade, que pode ser obtida com a metodologia, pode-se utilizar o mtodo do fator: Fator de calibrao = Conc. do Padro . Absorbncia do Padro Concentrao do Padro Vide etiqueta do frasco.
Glicose (mg/dL) = Absorbncia do Teste x Fator 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL
UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL glicose x 0,0555 = mmol/L glicose

Valores de referncia Soro ou plasma: 70 a 110 mg/dL Lquor: 40 a 75 mg/dL, (2/3 da glicemia) Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: At 400 mg/dL = 22 mmol/L Para valores superiores, diluir a amostra 1:2 ou 1:4 com NaCl 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado pelo fator de diluio. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: O cido ascrbico (5 mg/dL), a hemoglobina (0,2 g/dL) e a bilirrubina (40 mg/dL) no interferem. A lipemia moderada no afeta os resultados. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Trinder R. - Ann Clin Biochem 1969; 6:24. Henry, R. J. Cannon, D.C. Winkelman, J. Clinical Chemistry Principles and Techniques, 2 ed. Harper and Row Publishers Inc. N.Y.; p. 1288 (1974). Glicose Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 231-233 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 81-82
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MAGNSIO MONO
Mtodo colorimtrico MAGON SULFONADO 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada como auxlio na deteco de hipoparatireoidismo, hiperaldosteronismo e hipertireoidismo. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Magnsio Srico o quarto mais abundante ction no organismo humano. Atua como um c-fator essencial para enzimas ligadas respirao celular, gliclise e transporte (atravs da membrana) de outros ctions (clcio e sdio). O magnsio essencial para a preservao da estrutura molecular de DNA, RNA e ribossomas. Um tero do magnsio srico ligado protena, principalmente albumina; os outros 2/3 existem predominantemente como on livre e um pequeno percentual como complexo de nions. O magnsio ingerido absorvido no intestino delgado e excretado na urina. O processo de absoro parece ser de controle deficiente, sendo afetado por sndromes de m-absoro, com sua homeostase exercida basicamente pela excreo renal (a qual regulada pela reabsoro tubular). Diminuies do magnsio so mais significativas e frequentes que o excesso, e sintomas dessa depleo no ocorrem em nveis sricos at 1,0 mEq/L. Severas diminuies esto ligadas funo neuromuscular como tetania, convulso, fraqueza, irritabilidade e delrio. Nveis baixos de magnsio, aps um infarto do miocrdio, podem indicar um mau prognstico.
Nveis aumentados Uso de sais de magnsio Anticidos e laxantes Doena de Addison Desidratao grave Insuficincia renal Acidose diabtica Hipertireoidismo Hipercalcemia Nveis diminudos Associados com hipocalemia e hipocalcemia Alcoolismo crnico Pancreatite aguda M-absoro Lactao excessiva Dilise Diarria grave Diabetes mellitus Terapia diurtica Dietas pobres em magnsio Hiperaldosteronismo primrio M-nutrio Nefropatias tubulares Hiperparatireoidismo Hiperaldosteronismo
Magnsio Urinrio A excreo do magnsio est intimamente ligada dieta. Sua anlise tem sido utilizada antes e aps administrao teraputica de magnsio.
Nveis Aumentados lcool Diurticos Sndrome de Bartter Glomerulonefrite crnica Aldosteronismo 85

Terapia com drogas (ciclosporina, diurticos tiazdicos, corticosterides) Nveis Diminudos Dieta pobre M-absoro Hipoparatireoidismo Decrscimo da funo renal
3. PRINCPIO DO MTODO O magnsio presente na amostra reage com azul de xilidina II (Magon Sulfonado) em meio alcalino formando um complexo intensamente corado com mximo de absoro em 510 nm. O desenvolvimento de um monoreagente lquido estvel, sem solventes orgnicos volteis, torna o mtodo especialmente adaptvel a analisadores automticos. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro, plasma e urina. Armazenamento e estabilidade das amostras: o Soro ou plasma obtido com heparina. Sob refrigerao o magnsio estvel por 15 dias entre 2-8 C. Urina e lquido cfalo-raquidiano. Dosagem na urina: efetuar a homogeneizao prvia de todo o material, tomar uma amostra de cerca de 5 mL e adicionar 1 gota de HCl concentrado. Tal procedimento transforma todos os sais de magnsio presentes na urina em sais solveis. Diluir a urina 1:5 (1,0 mL de urina + 4,0 mL de gua destilada ou deionizada). Proceder a seguir como descrito para o soro. Multiplicar o resultado obtido por 5. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise, mesmo discreta. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT MAGNSIO Cdigos: Registro M.S.: 80027310015 BT 12007 1 fr com 50 mL. + 1 fr Padro 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Carbonato de potssio 120 mM, EGTA 40 mM, Magon sulfonado (xilidil blue) 0,1 mM e azida sdica 18,5 mM. Padro: Soluo aquosa de ons Magnsio (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco). Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 15 e 30 C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 15 e 30 C. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 510 nm, com cubetas. Banho de gua a 37 C.
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Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos.Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. O reagente contm azida sdica que txica, portanto, tomar cuidado para evitar a ingesto e no caso de contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. No descarte do reagente, usar bastante gua, pois a azida pode formar compostos explosivos com tubulaes de cobre e chumbo. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos: Reativo pronto para uso. Procedimento manual 1. Os reagentes devem estar a temperatura ambiente. 2. Pipetar em tubos de ensaio:
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Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Padro Amostra Reagente 3. 4.
Agitar bem e deixar os tubos durante 2 minutos temperatura ambiente. Ler a absorbncia (Ap) do Padro e da Amostra(Aa) frente ao Branco a 510 nm.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais O uso de detergente inico para limpar o material outra fonte de contaminao com ons magnsio. 11. CLCULOS Aa x Valor padro = mg/dL Magnsio Ap Onde Aa Absorbncia da Amostra Ap Absorbncia do Padro Padro Valor da Concentrao do Padro Urina (mg/24horas) = Magnsio Urina (mg/dL) x volume de 24 h em mL 100 Com Fator: F = Valor padro Ap Magnsio (mg/dL) = Aa x F Exemplo: Aa = 0,175 Ap = 0,191 Valor Padro = 2,0 mg/dL 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL magnsio x 0,41 = mmol/L magnsio Valores de referncia Para amostras de Soro e Plasma: 1,9 2,5 mg/dL Para amostras de Urina/24 h: 48 152 mg/24h Liquido Cfalo Raquidiano: 2,5 3,5 mg/dL Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade A reao linear at 4,5 mmol/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias Hiperlipemia, cido ascrbico, mesmo em elevadas concentraes (acima de 26 mg/dL) e bilirrubina (at 20 mg/dL) no interferem. Devido ao alto contedo intracelular de megnsio, hemlises mesmo discretas interferem significativamente. No utilizar amostras hemolisadas. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Chauman UPS, Ray Sarkar BC. Anal Biochem 1969; 32:70. Gindler EM, Heth DA. Clin Chem 1971; 17:662. Maxwell et al. Clin Chem. 31/3, 520-522 (1982) F= 2 = 10,5 0,191
Magnsio(mg/dL) = 0,175 x 10,5 = 1,8 mg/dL
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Magnsio - Magon Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 324-325 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 87
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PROTENA TOTAL
Mtodo Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de enfermidades hepticas e renais. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A dosagem isolada da protena total tem pouco valor clnico, porque a alterao em uma das fraes pode ser compensada por alterao oposta de outra frao, como ocorre nas doenas crnicas, em que h diminuio de albumina com aumento de gamaglobulina. O nvel de protenas sricas basicamente um reflexo de snteses hepticas ou de perda de protenas devido a enfermidade renal, desnutrio severa, queimaduras graves e hemodiluio. A eliminao excessiva de protenas pelos rins ou a diminuio da sntese heptica provoca uma diminuio na presso coloidosmtica do plasma, que aumenta a reabsoro de sdio e gua levando a edema. Valores Aumentados A concentrao de protena total do soro est comumente aumentada em pacientes com desidratao, mieloma mltiplo, macroglobulinemia, crioglobulinemia, lupus eritematoso, artrite reumatide, sarcoidose, infeces crnicas, linfogranuloma e endocardite bacteriana sub-aguda. Valores Diminudos A concentrao de protena total do soro est diminuda na hiperhidratao, desnutrio grave, insuficincia renal, nefrose, queimaduras graves, sndrome de m absoro, deficincia de clcio e vitamina D. 3. PRINCPIO DO MTODO A protena presente na amostra reage com os ons cobre (II) em meio alcalino, originando um complexo de cor violcea, cuja absorbncia em 550 nm proporcional concentrao protica da amostra. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro e plasma. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro e plasma heparinizado. Estvel 8 dias 2-8 C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT PROTENAS TOTAIS Cdigos: Registro M.S.: 80027310030 BT 10.009 - 1 fr de 250 mL + 1 fr de Padro - 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Sulfato de cobre 10 mM, tartarato de sdio e potssio 15 mM, iodeto de potssio 15 mM, hidrxido de sdio 140 mM. Padro: Soluo de Albumina bovina (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco). Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 15-30 C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes a temperatura ambiente.
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Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 545 nm (535-555), com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos.
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10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 10 L 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
gua destilada Padro Protena Amostra Reagente 2. 3.
Agitar bem e deixar os tubos durante 10 minutos temperatura ambiente. Ler a absorbncia (AP) do Padro e (AA) da Amostra frente ao Branco 545 nm. A cor estvel durante pelo menos 2 horas.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS A Amostra X Valor da concentrao do padro = g/dL protena A Calibrador onde, A amostra = Absorbncia da amostra, A padro = Absorbncia do padro. Com fator Fator de calibrao (FC) = concentrao do padro A do padro Exemplo: A amostra = 0,352 A padro = 0,25 Concentrao do padro = 5 g/dL Protena (g/dL) = 0,352 x 20 FC= 5,0 = 20 0,25 Protena (g/dL) = 7,04 g/dL Globulina = Protena Total - Albumina 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: g/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): g/L = g/dL x 10 Valores de referncia Valores Normais Soro : 6,5 8,0 g/dL Plasma: 6,8 8,3 g/dL Estes valores so unicamente orientativos. Recomendamos que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade A reao linear at 12 g/dL. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias Interferncias: a hemoglobina (0,2 g/L) e a bilirrubina (15 mg/dL) interferem. O soro deve ser obtido o mais breve possvel. As amostras de soro hemolisado ou contendo expansores plasmticos (Dextram, Hemacel ou PVP), fornecem valores elevados.
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Soros fortemente lipmicos podem causar turvao. Vrios ons de amnio interferem no teste pela formao de complexo cprico amnio. A concentrao de protena total aumenta com o passar do dia. No inverno, em geral, a concentrao de protena total maior que no vero. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Gornall AG, Bardawill CS, David MM. J Biol Chem 1949; 177:751. Henry, R.: Sobel, C. & Berkman, S Anal Chem 29/10: 1491 (1957). Doumas, B. T: Watson, WA & Biggs. H.G Clin. Chim. Acta 31/1:87 (1971). Protena Total Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 398-400 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 90-91
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PROTENA URINRIA
Mtodo Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao renais. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A proteinria um marcador de doena renal e constitui um fator de risco independente para a sua progresso. Aumentos ou decrscimos no valor de proteinria so importantes marcadores do prognstico renal do paciente. Dessa forma, em pacientes com doena renal a pesquisa de proteinria constitui um elemento importante no diagnstico e no acompanhamento. A sua presena e a determinao do seu grau podem, em associao a outros achados, ajudar a estabelecer o diagnstico de certas sndromes ou entidades patolgicas cujos achados renais so conhecidos. A urina de pessoas saudveis no contm protenas ou contm somente em pequenas quantidades; normalmente o glomrulo evita a passagem das mesmas do sangue para o filtrado glomerular. Alteraes glomerulares causam o aumento da permeabilidade das protenas plasmticas o que ocasiona a proteinria. A presena persistente de protena na urina indica enfermidade renal. Concentraes elevadas de protenas no lquido cefalorraquidiano (Lquor) podem ser devidas a infeces ou presso intracraniana elevada. O diagnstico clnico deve ser realizado levando-se em conta todos os dados clnicos e de laboratrio. 3. PRINCPIO DO MTODO A protena presente na amostra reage com o vermelho de pirogalol e o molibdato, em meio cido, formando um complexo colorido. A intensidade da cor formada proporcional concentrao protica da amostra. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Amostras Urina e Lquor. Armazenamento e estabilidade das amostras: Urina - Utilizar amostra colhida no perodo de 24 horas, no havendo necessidade de adicionar conservantes. - Homogeneizar a urina, medir o volume e separar uma amostra de cerca de 20 mL. - Centrifugar por 10 minutos a 3000 rpm. - Utilizar o sobrenadante para proceder o ensaio. Lquor: Utilizar amostra centrifugada. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT PROTENAS URINRIA Cdigos: Registro M.S.: 80027310128 BT 10.009 - 1 fr de 250 mL + 1 fr de Padro - 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente: Vermelho de pirogalol 0,04 mmol/L, Molibdato de sdio 0,13 mmol/L, cido succnico 0,05 Mol/L, pH 2,5. Oxalato de sdio 1 mmol/L, Benzoato de sdio 0,35 mmol/L, SDS 0,1mmol/L. Padro: Soluo de Albumina (valor de padro: vide rtulo do frasco). Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 - 8 C.
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6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes 2 a 8 C. Manter ao abrigo da luz. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura em 598 nm com cubetas termostatizada. Pipetas de vidro e/ou automticas. Relgio ou Cronmetro. Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos devem ser observados. As amostras a serem analisadas (urina ou lquor) devem ser tratadas como material potencialmente infectante. Utilizar os EPIs de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio Clnico. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio Clnico em local prprio para materiais potencialmente infectantes. Em caso de vazamento acidental, contato com os olhos, pele ou mucosa, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. As informaes de Descarte, Segurana e Primeiros Socorros esto descritas na Ficha Individual de Segurana de Produtos Qumicos (FISPQ) deste produto. No misturar diferentes lotes de reagentes. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle, padro/calibrador e reagente. No trocar as tampas dos frascos dos reagentes, a fim de evitar contaminao cruzada. No usar o reagente quando este mostrar-se com sinais de contaminao.
10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso
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Procedimento manual 1. Pipetar em tubos de ensaio: BRANCO PADRO Padro --20 L Amostra ----Reagente 1,0 mL 1,0 mL AMOSTRA --20 L 1,0 mL
2. Homogeneizar manter os tubos durante 5 a 37 C. 3. Medir a absorbncia do Padro (Ap) e da Amostra (Aa) frente ao Branco a 600 nm. A cor estvel durante 30 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS Urina de 24horas: A Amostra X concentrao do padro X vol.(L) urina 24h = mg protenas/24h A Padro Lquor (LCR): A Amostra X concentrao do padro = mg/L protenas A Padro onde, A amostra = Absorbncia da amostra, A padro = Absorbncia do padro. Com fator Fator de calibrao (FC) = concentrao do padro A Padro Exemplo: A amostra = 0,025 A padro = 0,133 Concentrao do padro = 1000 mg/L Volume urinrio 24h = 1,2L FC = 1000 = 7519 0,133 Protena (mg/24h) = 0,025 x 1,2 x 7519
Protena Urinria = 226 mg/24 h
12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: g/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): g/L = Proteinria (mg/L) x 0,001 Valores Normais CRIANAS 300 - 1000 mg/L ADULTOS 150 - 450 mg/L GESTANTES < 150 mg/24h
Lquor
Urina
ADULTOS E CRIANAS < 100 mg/24h
Estes valores so unicamente orientativos. Recomendamos que cada laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia.
13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade A linearidade da reao de 3000 mg/L. Para valores superiores, diluir a amostra com gua deionizada ou destilada, realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio.
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Interferncias Interferncias: hemlise (LCR). A presena de detergentes (surfactantes) na amostra ou seus resduos em materiais e/ou equipamentos de laboratrio interferem com a reao. A presena de Lauril sulfato de sdio (0,1%) e Triton X100 (1%) tambm interferem na reao. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Watanabe, N. Kamei, S., Ohkubo, A., Yamanaka, M., Oshawa, S., Clin. Chem. 32: 1551 (1986). Orsonneau JL et al. An Improved Pyrogallol Red-Molybdate Method for Determing Total Urinary Protein. Clin Chem 1989; 35:2233-22236. Koller A. Total serum protein. Kaplan A et. Al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 13161324 and 418. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC Press, 2001. Burtis A et al. Tietz Testbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory tests, 3rd ed. AACC 1995. Westgard J. O., Barry P. L., Hunt M. R., Groth T. A multi-rule Shewhart chart quality control in clinical chemistry. Clin. Chem., 27: 493-501, 1981.
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TGO / AST
Mtodo Cintico - UV 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de hepatites agudas e um bom indicador no diagnstico de infarto agudo do miocrdio. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A Transaminase Oxalactica TGO (sinonmia, Aspartato Aminotransferase (AST)), uma enzima encontrada no miocrdio, fgado, musculatura esqueltica, rim e crebro. Nveis elevados dessa enzima auxiliam no diagnstico de doenas cardacas, hepticas e musculares. A atividade dessa enzima no infarto do miocrdio eleva-se dentro das primeiras 12 horas, atingindo um pico em 24 horas e retornando ao normal por volta do quinto dia. Pequenas elevaes so observadas durante a gravidez. Nveis aumentados tambm so encontrados em necrose heptica, anemias hemolticas, pancreatite aguda, cirrose heptica, hepatites, ictercia obstrutiva, mononucleose, hipotireoidismo, trauma e necrose cerebral, dermatomiosites, queimaduras severas, distrofias musculares, leses da musculatura esqueltica, cateterizao e angioplastia cardaca. Inmeras drogas comumente usadas podem elevar os nveis de AST (isoniazida, eritromicina, progesterona, esterides anablicos etc.), sendo usada na monitorao de terapias que utilizam drogas hepatotxicas. 3. PRINCPIO DO MTODO O Aspartato aminotransferase (AST ou GOT) catalisa a transferncia do grupo amino do aspartato a 2-oxo-glutarato, formando oxalacetato e glutamato. A concentrao cataltica se determina, empregando a reao acoplada de malato desidrogenase (MDH), a partir da velocidade de desaparecimento do NADH, medido 340 nm.
AST
L-Aspartato + 2-Oxoglutarato -----------> Oxaloacetato + L-Glutamato Oxalacetato + NADH + H+ ------------> Malato + NAD+
LDH
MDH
Piruvato endgeno + NADH ------------> L- Lactato + NAD 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Amostra Soro ou plasma. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro no hemolisado, plasma (EDTA ou heparina). A atividade enzimtica estvel por 4 dias entre 2 8C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise ou sinais de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT TGO / AST Cdigos: Registro M.S.: 80027310017 BT 11007 1 fr com 40 mL R-A + 1 fr. com 10 mL R-B BT 11007 1 fr. com 200 mL R-A + 1 fr. com 50 mL R-B
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: Tampo Tris 80 mmol - pH 7,8., L-aspartato 240 mmol, MDH - malato desidrogenase > 600 U/L, LDH - lactato desidrogenase > 1200 U/L, Reagente B: Malato desidrogenase 0,18 mmol, 2-Oxoglutarato: 12mmol. Reagente pronto para uso.
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Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. No utilizar reativos com a data de validade vencida. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 340 nm, com cubetas termostatizadas Pipetas automticas e ponteiras. Centrfuga. Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase.
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A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos Reativo de Trabalho: Misturar 04 partes de Reativo A + 01 parte de Reativo B. Estvel 2 semanas a 2-8C. Proteger o reativo de trabalho da luz. Descartar o reativo de trabalho quando a leitura da absorbncia contra gua for < 0,800 a 340 nm. Procedimento manual 1. Pr-aquecer o Reagente de Trabalho durante 5 minutos, 37C. 2. Pipetar em uma cubeta: Reagente de Trabalho Amostra 3. 4. 5. 37oC 1000 L 100 L
Misturar e inserir nas porta-cubetas termostatizadas. Acionar o cronmetro. Aos 60 segundos, anotar a absorbncia inicial e efetuar novas leituras cada minuto durante 3 minutos. (A1, A2 e A3 respectivamente). Comprovar que as diferenas entre absorbncias sejam sensivelmente iguais. Calcular o incremento mdio de absorbncia por minuto (A/min).
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. 11. CLCULOS Usando as leituras das absorbncias, calcular a mdia da variao da absorbncia por minuto (A/min.). (A/min.) = (A0 A1) + (A1 A2) + (A2 A3) 3 A atividade da TGO na amostra calculada pela multiplicao do A/minuto pelo seguinte fator: Fator (37C) Exemplo: Temperatura = 37C A0= 1,268 A1= 1,228 A2= 1,189 A3= 1,152 A/min.= (1,268 1,228) + (1,228 1,189) + (1,189 1,152) 3 A/min.= 0,039 TGO (U/L) = 0,039 x 1746 = 67,5 U/L 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: U/L UNIDADES: Sistema Internacional (SI): U/L x 16,67 x 109 Kat/L = kat/L Valores Normais: 1746
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37C at 37 U/L at 31 U/L
HOMENS MULHERES
Estes valores so unicamente orientativos sendo recomendvel que laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at: A/min de 0,250 = 440 U/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: Falsos valores elevados: Acetaminofem, Anfotericina B, Alopurinol, Anticoncepcionais orais, Metildopa, Fenotiazinas, Colchicina, Narcticos, Corticoesterides, Barbiturados. Falsos valores baixos: Salicilatos (aspirina) 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Karmen A. et al. J. Clin. Invest. 34, 126 (1955) Young D.S. el al. Clin. Chem. 21, 5 (1975) TGO Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 455 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 93
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TGP / ALT
Mtodo Cintico - UV 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de pacientes com leses hepticas virais, txicas e cirrose. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A Transaminase Pirvica TGP (sinonmia: Alanina Aminotransferase (ALT), uma enzima intracelular presente em grandes quantidades no fgado e rim, e pequenas quantidades na musculatura esqueltica e corao. Como teste de funo heptica, a ALT mais sensvel para deteco de danos do hepatcito do que para obstruo biliar, sendo considerada um excelente marcador hepatocelular. Nveis elevados so encontrados na hepatite infecciosa e txica, doena pancretica, cirrose, ictercia obstrutiva e carcinoma metasttico. Em pacientes com infarto do miocrdio a ALT geralmente est normal ou ligeiramente elevada. Entretanto, insuficincia cardaca ou choque com necrose heptica concomitante pode levar a elevaes de seus nveis. 3. PRINCPIO DO MTODO A Alanina Aminotransferase (ALT ou GPT) catalisa a transferncia do grupo amino da alanina a 2-oxoglutarato, formando piruvato e glutamato. A concentrao cataltica se determina, empregando a reao acoplada de lactato desidrogenase (LDH), a partir da velocidade de desaparecimento do NADH, medido 340 nm.
LDH
Piruvato endgeno + NADH -----------> L-Lactato + NAD

ALT
L - alanina + 2-Oxoglutarato -----------> Piruvato + L-Glutamato Piruvato + NADH ------------> D - Lactato + NAD+
LDH
4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Amostra: Soro ou plasma. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro no hemolisado, plasma (EDTA ou heparina). A atividade enzimtica estvel por 4 dias entre 2 8C e 2 semanas. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Presena de hemlise ou sinais de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT TGP / ALT Cdigos: Registro M.S.: 80027310019 BT 11008 1 fr com 40 mL R-A + 1 fr. com 10 mL R-B BT 11008 1 fr. com 200 mL R-A + 1 fr. com 50 mL R-B
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: Tampo Tris 100 mmol - pH 7,5, L-alanina 500 mmol, MDH - malato desidrogenase > 600 U/L, LDH - lactato desidrogenase > 1200 U/L, Reagente B: Malato desidrogenase 0,18 mM, 2-Oxoglutarato: 15mM. Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit.
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Conservar entre 2-8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C. NO CONGELAR. No utilizar reativos com a data de validade vencida. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras a 340 nm, com cubetas termostatizadas Pipetas automticas e ponteiras. Centrfuga. Cronmetro. Tubos de ensaio Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. Evitar contaminaes com ons metlicos. No misturar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana do reagente e no utilizar reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. No dispensar o reagente em tubulao contendo ferro galvanizado. No contaminar a vidraria ou o reagente com saliva ou suor, devido aos seus altos contedos de -amilase. No soprar a pipeta utilizada. No conversar nas proximidades do frasco destampado, pois o reagente pode se contaminar irreversivelmente. O aparecimento de cor amarelada no reagente sinal de contaminao por -amilase. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente
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A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao dos reativos Reativo de Trabalho: Misturar 04 partes de Reativo A + 01 parte de Reativo B. Estvel 2 semanas a 2-8C. Proteger o reativo de trabalho da luz. Descartar o reativo de trabalho quando a leitura da absorbncia contra gua for < 0,800 a 340 nm. Procedimento manual 6. Pr-aquecer o Reagente de Trabalho durante 5 minutos, `37C. 7. Pipetar em uma cubeta: Reagente de Trabalho Amostra 8. 9. 37 C 1000 L 100 L
o
Misturar e inserir nas porta-cubetas termostatizadas. Acionar o cronmetro. Aos 60 segundos, anotar a absorbncia inicial e efetuar novas leituras cada minuto durante 3 minutos. (A1, A2 e A3 respectivamente). 10. Comprovar que as diferenas entre absorbncias sejam sensivelmente iguais. Calcular o incremento mdio de absorbncia por minuto (A/min).
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. 11. CLCULOS Usando as leituras das absorbncias, calcular a mdia da variao da absorbncia por minuto (A/min.): (A/min.) = (A0 A1) + (A1 A2) + (A2 A3) 3 A atividade da TGP na amostra calculada pela multiplicao do A/minuto pelo seguinte fator: Fator (37C) 1746 Exemplo: Temperatura: 37C A0 = 1,297 A1 = 1,278 A2 = 1,263 A3 = 1,245 A/min.= (1,297 1,278) + (1,278 1,263) + (1,263 1,245) 3 A/min = 0,017 TGO (U/L) = 0,017 x 1746 = 29,6 U/L 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: U/L Sistema Internacional - SI 1 U/L = 16,67 x 10-9 Kat/L = 16,67 x 10 Kat/L 1 kat/L = 60 U/L Valores Normais
-3
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HOMENS MULHERES 37C at 42 U/L at 32 U/L
Estes valores so unicamente orientativos sendo recomendvel que laboratrio estabelea seus prprios intervalos de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at: A/min de 0,200 = 350 U/L. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: Falsos valores elevados: hemlise 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Wroblewski F., LaDue JS.- Proc. Sec. Exp. Biol. And med. 1956; 34:381 Henry R.J. et al. Am. Jnl. Clin. Path. 1960. Deustchen Gesellschaft fur Klinische Chemie (DGKC) Z. Klin. Chem. 10: 281 (1972). Scandinavian Society for Clinical Chemistry (SSCC) Scand. J. Clin. Lab. Invest. 33: 291 (1974). International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) Clinica Chimica Acta 105: 147 (1980). TGP Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 455 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 93
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TRIGLICRIDES
Mtodo Enzimtico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada como parmetro na avaliao dos riscos de doenas cardiovasculares. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO Os triglicerdeos so steres de glicerol. Os triglicerdeos provenientes da dieta sofrem digesto no duodeno e leo proximal. Atravs da ao de lpases e cidos biliares, so hidrolisados a glicerol e cidos graxos. Aps absoro so ressintetisados nas clulas epiteliais intestinais e combinados com colesterol e apolipoprotenas para formar quilomcrons, que so transportados via ducto torcico para a circulao. O aumento de triglicerdeos no plasma indicativo de distrbios metablicos. Esta dosagem serve como parmetro na avaliao dos riscos de doenas cardiovasculares, no diabetes, no hipotireoidismo, na pancreatite aguda, na uremia, na obesidade e nos hbitos alimentares errneos. O aumento dos triglicerdeos no diabetes est relacionado ao aumento da mobilizao das reas de armazenamento de lipdeos (triglicerdeos) em decorrncia da diminuio da insulina, produzindo seu metabolismo anormal e depsito de lipdeos nas paredes vasculares levando arteriosclerose. 3. PRINCPIO DO MTODO A enzima lpase lipoprotica hidrolisa os triglicerdeos existentes na amostra, produzindo glicerol livre. A enzima glicerol quinase fosforila o glicerol livre formado cujo produto, em presena de oxignio e sob a ao cataltica da enzima glicerol-Poxidase, produz perxido de hidrognio. A enzima peroxidase catalisa a oxidao do reagente fenlico (p-clorofenol) pelo perxido de hidrognio formado, em presena da 4-amino-antipirina, produzindo um composto rseo-avermelhado (quinonimina), que apresenta um mximo de absoro em 500 nm. Triglicrides Glicerol + cidos graxos Glicerol + ATP L-Glicerolfosfato + ADP L-Glicerolfosfato + O2 Dihidroxiacetona-P + H2O2 2H2O2 + Clorofenol + 4-AF p-benzoquinona monomio fenazona + 4 H2O 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas e jejum alcolico de 24 horas. Amostra Soro ou plasma Armazenamento e estabilidade das amostras: O analito estvel por 3 dias a 2-8 C. Volumes mnimos e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT TRIGLICRIDES Cdigos: Registro M.S.: 80027310014 BT 10010 1 fr. com 250 mL + 1 fr. Padro com 2,0 mL BT 10010 2 fr. com 250 mL + 1 fr. Padro com 2,0 mL
peroxidase L-Glicerolfosfato-oxidase glicerol quinase lipase
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br
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Reagente de Trabalho: GK glicerolquinase > 1000 U/L; POD Peroxidase > 1000 U/L; LPL Lipoprotena lpase > 2000 U/L; GPO Glicerol-3-fosfato oxidase > 5000 U/L; 4 clorofenol 2,7 mM; 4-aminoantipirina 0,3 mM; ATP - adenosina trifosfato 2,0 mM; tampo Tris 50,0 mM pH 7,2. Padro: Soluo de Glicerol equivalente concentrao de Triglicrides (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8 C. 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 500 nm (490-510), com cubetas. Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos.
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No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo pronto pra uso. Procedimento manual 1. Deixar ambientar o Reagente durante alguns minutos temperatura ambiente ou em banho de gua. 2. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Padro triglicrides Amostra Reagente 3.
Agitar bem e incubar os tubos durante 15 minutos temperatura ambiente (16-25 C) ou durante 10 minutos a 37 C. 4. Ler a absorbncia (AP) do Padro e (AA) da Amostra frente ao Branco a 500 nm. A cor estvel durante pelo menos 1 hora. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). Cuidados especiais Cuidado com a limpeza do material utilizado para os testes. Lavar no mnimo 3 vezes com gua deionizada para eliminar qualquer vestgio de Glicerol que um forte contaminante nas reaes do triglicrides. 11. CLCULOS Com calibrador ou padro: A Amostra X valor do padro = mg/dL Triglicrides A Padro onde: A amostra = absorbncia da amostra A padro = absorbncia do padro Com fator: c = valor do padro Apadro Triglicrides (mg/dL) = Aamostra X c Exemplo: Aamostra = 0,276 Apadro = 0,248 Valor do padro: 200 mg/dL F= 200 0,248 = 806,5
Triglicrides= 0,276 x 806,5= 222,6 mg/dL
12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): mg/dL Triglicerides x 0,0113 = mmol/L Trigliceridese Valores de referncia 30 - 170 mg/dl = 0.70 - 1.70 mmol/L Esses valores so unicamente orientativos. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia.
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13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at 1000 mg/dL Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias O cido ascrbico (0,3 mmol/L), a hemoglobina (3 g/L) e a bilirrubina (0,25 mmol/L) interferem. A lipemia no afeta os resultados. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Schettler G., And Nussel E., Arb. Med. Prav. Med., 10 (1975) 25. Jacobs, N.J., Van Denmark, P.J. Aarch. Biochem. Biophys. 88 (1960), 250-255. Kodischek, L.K., Umbreit, W.W. Bacteriol. 98 (1969) 1063-1068. Trinder P. - Ann Clin Biochem 6 (1969); 24-27. Triglicrides Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 460-461 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 94
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URIA ENZIMTICA
Mtodo Enzimtico Colorimtrico 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de enfermidades renais e hepticas. 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A uria o metablito quantitativamente mais importante do catabolismo das protenas. Produzida no fgado, ela passa para a circulao sangnea, onde degradada em nvel intersticial e eliminada pelo suor, trato gastrintestinal e rim. livremente filtrada pelos glomrulos dependendo do estado de hidratao e 40% a 80% da uria filtrada so passivamente reabsorvidas nos tbulos proximais. Sua concentrao varia em indivduos sadios e influenciada por diversos fatores como: grau de hidratao, dieta protica e funo renal. utilizada na avaliao do estado do funcionamento renal. A uremia observada na dieta rica em protenas, insuficincia cardaca congestiva, nefrite, insuficincia renal aguda e carcinomas no trato urinrio. A diminuio da uria est relacionada a insuficincia heptica grave, aumento da diurese e reduo do catabolismo protico. A leso renal provoca uma reteno de substncias txicas como a uria atravs de distrbios da filtrao, reabsoro, secreo e excreo. Na leso heptica, haver uma diminuio da converso de amnia em uria, causando uma hiperamoniemia. Nveis aumentados A - Pr-renal Condies em que a circulao atravs dos rins menos eficiente que o normal Desidratao (diarria persistente) Choque Diminuio do volume sangneo (hemorragias digestivas) Catabolismo protico aumentado (febre, estresse, queimaduras etc.) Insuficincia cardaca B - Renal Diminuio da filtrao glomerular como conseqncia de uma doena renal aguda ou crnica Nefropatias Tratamento com glicocorticides (efeito antianablico) C - Ps Renal Resultado de uma obstruo do trato urinrio. Obstruo do trato urinrio (clculo, obstruo prosttica etc.) Nveis diminudos Caquexia, gravidez, doena celaca, hemodiluio, na infncia, insuficincia heptica aguda e ingesto protica diminuda. 3. PRINCPIO DO MTODO A uria hidrolisada na presena da enzima urease e gua, com produo de NH3 e CO2. A amnia formada reage com salicilato e hipoclorito de sdio em meio alcalino, originando uma colorao verde (reao de Berthelot modificada). O aumento da absorbncia em 580 nm proporcional a concentrao de uria na amostra. 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro, plasma (heparina) e urina. Armazenamento e estabilidade das amostras: A uria no soro estvel por 7 dias a 2 8 C. No usar anticoagulantes fluoretados e nem contendo sais de amnio. A urina de 24 horas deve ser colhida em frasco contendo 2mL de HCl a 50% (v/v). Centrifugar antes de processar. Diluir a urina 1/50 com gua destilada. Multiplicar o resultado obtido por 50. Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material.
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5. COMPONENTES DO KIT URIA ENZIMTICA Registro M.S.: 80027310068 Cdigos: BT 10013 1 fr com 50 mL R-A + 1 fr com 50 mL R-B + 1fr com 2,0 mL R-C fr + Padro com 2,0 mL BT 10013 1 fr com 250 mL R-A + 1 fr com 250 mL R-B + 1fr com 10,0 mL R-C fr + Padro com 2,0 mL BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A: Tampo fosfato pH 6,70 50 mmol/L, EDTA 2 mmol/L, Salicilato sdico 60 mmol/L, Nitroprussiato de sdio 3,2 mmol/L. Reagente B: Hipoclorito de sdio 140 mmol/L e hidrxido de sdio 150 mmol/L. Reagente C: Urease 30.000 U/L. Padro: Soluo de Uria (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2 e 8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 580 nm, com cubetas Banho de gua a 37 C. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade. 9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados.
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O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo A de Trabalho: Misturar na proporo de 25,0 mL de Reativo A-1 + 1,0 mL de Reativo A-2 Estabilidade do Reativo A de Trabalho: 15 dias, se refrigerado. Reativo B: pronto para uso. Procedimento manual 1. Deixar ambientar os Reagentes durante alguns minutos temperatura ambiente ou em um banho de gua. 2. Pipetar em tubos de ensaio: Branco 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL
Padro de uria Amostra Reagente A de trabalho 3. 4.
Agitar bem e incubar os tubos durante 5 minutos a 37 C. Pipetar: Reagente B 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
5. Agitar bem e incubar os tubos durante 10 minutos temperatura ambiente (15-30 C) ou durante 5 minutos a 37 C. 6. Ler a absorbncia (AP) do Padro e (AA) da Amostra frente ao Branco a 580 nm. A cor estvel por 30 minutos.. Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS A Amostra x Valor Padro = mg/dL uria, A Calibrador Onde, Aamostra = Absorbncia da amostra Apadro = Absorbncia do padro Com fator: F = Valor do Padro Apadro Uria = Aamostra x F
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Exemplo: Aamostra = 0,109 Apadro = 0,237 Valor padro = 70mg/dL F= 70 = 295,4 0,237
Uria(mg/dL) = 0,109 x 295,4 = 32,2mg/dL Dosagem na urina (mg/24 hs): mg/24 hs = Uria urinria (mg/dL) X Volume urinrio de 24 horas (mL) 100 Uria urina (g/24 h) = Uria urina (mg/24 h) 1000 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): Soro / plasma: Urina: mg/dL uria x 0,166 = mmol/L uria mg/24h 1000 = g/24h uria.
Valores de referncia Soro e plasma: 15 45 mg/dL (2,49 7,49 mmol/L) Urina: 20 35 g / 24 horas Estes valores so unicamente orientativos sendo recomendvel que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de referncia. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear at 200 mg/dL. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: O cido ascrbico, mesmo em concentraes elevadas (acima de 20 mg/dL), hemoglobina at 400 mg/dL, hiperlipemia e bilirrubina at 20 mg/dL, no interferem nos resultados. No devem utilizar-se sais de amnia como anticoagulantes, j que interferem na reao. 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Chaney AL, Marbach CP. Clin Chem 1962; 8:130. Searcy RL, Reardon JE, Foreman JA. Amer J Med Technol 1967; 33:15. Tobacco A, et al. Clin Chem 1979; 25:336. Bergmeyer, H.U. (Ed.) Methods of Enzymatic Analysis, Academic Press, p.449, 1985. Fawcet, J.K. & Scott, J.E. Brit, J. Clin Path. : 13:156,1980. Uria Enzimtica Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 467 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 94
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URIA UV
Mtodo Cintico Enzimtico - UV 1. INDICAO MDICA Esta dosagem utilizada na avaliao de enfermidades renais e hepticas 2. SIGNIFICADO CLNICO E FISIOPATOLGICO A uria o metablito quantitativamente mais importante do catabolismo das protenas. Produzida no fgado, ela passa para a circulao sangnea, onde degradada em nvel intersticial e eliminada pelo suor, trato gastrintestinal e rim. livremente filtrada pelos glomrulos dependendo do estado de hidratao e 40% a 80% da uria filtrada so passivamente reabsorvidas nos tbulos proximais. Sua concentrao varia em indivduos sadios e influenciada por diversos fatores como: grau de hidratao, dieta protica e funo renal. utilizada na avaliao do estado do funcionamento renal. A uremia observada na dieta rica em protenas, insuficincia cardaca congestiva, nefrite, insuficincia renal aguda e carcinomas no trato urinrio. A diminuio da uria est relacionada a insuficincia heptica grave, aumento da diurese e reduo do catabolismo protico. A leso renal provoca a reteno de substncias txicas como a uria devido aos distrbios da filtrao, reabsoro, secreo e excreo. Na leso heptica, haver uma diminuio da converso de amnia em uria, causando uma hiperamoniemia. Nveis aumentados A - Pr-renal Condies em que a circulao atravs dos rins menos eficiente que o normal Desidratao (diarria persistente) Choque Diminuio do volume sangneo (hemorragias digestivas) Catabolismo protico aumentado (febre, estresse, queimaduras etc.) Insuficincia cardaca B - Renal Diminuio da filtrao glomerular como conseqncia de uma doena renal aguda ou crnica Nefropatias Tratamento com glicocorticides (efeito antianablico) C - Ps Renal Resultado de uma obstruo do trato urinrio (clculo, obstruo prosttica etc.) Nveis diminudos Caquexia, gravidez, doena celaca, hemodiluio, na infncia, insuficincia heptica aguda e ingesto protica diminuda. 3. PRINCPIO DO MTODO A uria da amostra hidrolisada pela enzima urease com produo de gs carbnico e ons amnio. Estes so captados por uma segunda enzima, a glutamato desidrogenase, a qual em presena de outros substratos como o NADH2 e cetoglutarato, produz NAD e glutamato. A diminuio da concentrao de NADH2 no meio pode ser medida espectrofotometricamente em 340 nm, sendo proporcional concentrao de uria na amostra. Uria + H2O ---------------> 2 NH4+ + CO2 NH4+ + NADH + H+ + 2-Oxoglutarato ------------------------>Glutamato + NAD+ 4. PREPARAO DA AMOSTRA Preparo do paciente O paciente deve estar em jejum de, pelo menos, 08 horas. Amostras Soro, plasma ou urina. Armazenamento e estabilidade das amostras: Soro e plasma (heparina ou EDTA): Estveis por 7 dias a 2-8C. Urina de 24 horas: Centrifugar antes de processar. Diluir a amostra 1/50 com gua destilada (0,1 mL de urina + 4,9 mL de H2O destilada ou deionizada). Multiplicar o resultado obtido por 50.
glutamato desidrogenase Urease
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Volumes mnimo e ideal A serem definidos pelo prprio laboratrio. Critrios para a rejeio de amostras Fazer referncia ao Manual ou POP de coleta, separao e distribuio do material 5. COMPONENTES DO KIT URIA UV Cdigos: Registro M.S.: 80027310045 BT 10012 1 fr com 40,0 mL R-A + 1 fr com 10,0 mL R-B + 1 fr com Padro 2,0 mL BT 10012 1 fr com 200,0 mL R-A + 1 fr com 10,0 mL R-B fr + + 1 fr com Padro 2,0 mL
BioTcnica Indstria e Comrcio Ltda Rua Igncio Alvarenga n 96, Vila Vernica - Varginha - M.G. - Brasil. Tel/Fax: 0 (XX) 35 - 3214.4646 Site: www.biotecnicaltda.com.br / e-mail: sac@biotecnicaltda.com.br Reagente A : Tampo TRIS 115mmol/L pH 7,6; -cetoglutarato 7,5 mmol/L. Reagente B: Enzimtico: NADH 0,25 mmol/L; Urease 8 KU/L, glutamato desidrogenase > 800 U/L, ADP 1,2 mmol/L. Padro: Soluo de Uria (valor da concentrao do padro vide etiqueta do frasco) Reagente pronto para uso. Estabilidade: Estvel at a data de validade do kit. Conservar entre 2-8 C 6. CONDIES DE ARMAZENAMENTO Manter todos os componentes entre 2 e 8 C Evitar deixar em Temperatura Ambiente por perodos prolongados, evitando assim a deteriorao das enzimas. O reativo estvel at a data de validade do Kit. A data de validade aparece no rtulo da embalagem. No utilizar reativos que estejam com as datas de validade expiradas. 7. MATERIAL ADICIONAL NO FORNECIDO Procedimento tcnico manual Espectrofotmetro ou fotmetro para leitura de 340 nm (330-350) com cubeta termostatizada. Pipetas automticas e ponteiras. Cronmetro Tubos de ensaio. Procedimento automatizado Indicar nome, modelo e local onde se encontra o equipamento analtico, fazendo referencia ao Manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para a medio do ensaio. Enumerar as diferenas separadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. 8. CONTROLE DE QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, cdigo), instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever os procedimentos para os limites de tolerncia, o sistema adotado para a utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante dos valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controle e/ou reagente Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e/ou reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle de qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao Manual ou POP da garantia da qualidade.
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9. CUIDADOS E PRECAUES O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. Seguir com rigor a metodologia proposta, para a obteno de resultados exatos. Os procedimentos higinicos normais para o manuseio de materiais bioqumicos e biolgicos devem ser observados. O reagente, uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Descartar as sobras das reaes de acordo com as Boas Prticas de Laboratrio, em lugar apropriado para material potencialmente infectante. O reagente e o padro no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio que contm as reaes. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. No necessrio nenhum tipo de proteo respiratria, mas recomenda-se o uso de culos de segurana e de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto procurar atendimento mdico. Fazer referncia ao Manual ou POP de segurana. No misturar ou trocar diferentes lotes de reativos. No utilizar o reativo quando este mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. A limpeza da vidraria deve ser feita com detergente neutro. O enxge deve ser exaustivo, sendo o ltimo, com gua destilada ou deionizada. Fazer referncia ao manual ou POP de Controle de Qualidade de gua ou gua Reagente A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao Manual ou POP de limpeza e validao da qualidade da limpeza dos materiais. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle (se utilizado) e reagente. No trocar as tampas dos frascos de reagentes. Isso evitar contaminao cruzada, o que poderia causar resultados errneos. O reagente contm azida sdica que txica, portanto, tomar cuidado para evitar a ingesto e no caso de contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. No descarte do reagente, usar bastante gua, pois a azida pode formar compostos explosivos com tubulaes de cobre e chumbo. 10. PROCEDIMENTO TCNICO Preparao do reativo: Reativo de Trabalho: Misturar na proporo de 50,0 mL de Reativo A + 0,5 mL de Reativo B + 0,5 mL de Reativo C. Estabilidade do Reativo A de Trabalho: 15 dias, se refrigerado. Descartar o reativo de trabalho se sua absorbncia em 340 nm, medida frente a gua, for inferior a 1,00. Procedimento manual Reagente de Trabalho: Misturar 4 (quatro) partes do Ragente A com 1 (uma) parte do Reagente B. Ex: Adicionar 4,0 mL de Reagente A Tampo a 1,0 mL de Reagente B Enzimtico. O reagente de trabalho estvel por 4 semanas se mantido ao abrigo da luz, refrigerado de 2 a 8C e fora de refrigerao somente o tempo necessrio para as dosagens. Desprezar o Reagente de Trabalho se sua absorbncia em 340 nm, medida frente a gua, for inferior a 0,900.
B) Procedimento 1. 2. Pr-aquecer o reagente de trabalho e a amostra a 37C durante 2 minutos. Pipetar em uma cubeta pr-aquecida a 37C. Reagente de Trabalho Padro ou amostra 3. 4. 1,0 mL 10 L
Misturar e acionar o cronmetro simultaneamente Anotar a absorbncia aos 30 segundos (A1) e aos 120 segundos (A2) da amostra e do padro, a 340 nm.
Procedimento automatizado Fazer referncia ao Manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico (Programao ou Protocolo). 11. CLCULOS (A2 - A1) amostra x Valor padro = mg/dL Uria. (A2 - A1) padro
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Fator de calibrao = Valor do padro / (A2 - A1) padro Uria (mg/dL) = Ateste x Fator Exemplo: A1- amostra = 0,023 A2- amostra = 0,054 A1-padro = 0,052 A2- padro = 0,145 Valor do padro = 70 mg/dL = 70 = 752,7 F= 70 (0,145 0,052) 0,093 Uria (mg/dL) = (0,054-0,023) x 752,7 Uria (mg/dL) = 23,34 mg/dL
Dosagem na Urina (mg/24 horas) mg/24 horas = Uria urinria (mg/dL) x Volume urinrio de 24 h/mL 100 12. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Unidade utilizada: mg/dL UNIDADES: Sistema Internacional (SI): Soro / plasma: Urina: mg/dL uria x 0,166 = mmol/L uria mg/24h 1000 = g/24h uria.
Valores de referncia Soro e plasma: 15-45 mg/dL Urina: 20-35 g/24 horas Estes valores so unicamente a ttulo orientativo; recomendvel que cada laboratrio estabelea seu prprio intervalo de normalidade. 13. CARACTERSTICAS DO MTODO Linearidade: A reao linear entre 6 e 250 mg/dL. Para valores acima de 250 mg/dL, diluir a amostra com gua destilada. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Caso sejam encontrados valores superiores linearidade, diluir a amostra de modo que o valor encontrado fique dentro dos valores de linearidade. Indicar o procedimento de diluio adotado pelo laboratrio. Interferncias: No devem ser utilizados sais de amnia como anticoagulantes, pois os mesmos interferem na reao. cido Ascrbico e Hemoglobina: cido Ascrbico apenas em concentraes elevadas (acima de 20 mg/dL) e hemoglobina (acima de 200 mg/dL) induzem a resultados falsamente elevados. Bilirrubina: A bilirrubina at 15 mg/dL no interfere. Falsos Valores elevados: Hidroclorotiazida, cido Etacrnico, furosemida, tianterene, bacitracina, cefalosporida, gentamicina, kanamicina, cloranfenicol, meticilina, mitramicina, neomicina, vancomicina, metildopa, guanetimidina, morfina, ltio, salicilato, propanolol, sulfonamidas. Falsos Valores Diminudos: fenotiazinas, timol. Sensibilidade: 6 mg/dL 14. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS Talke H, Schubert GE. Klin Wschr 1965; 43:174. Bergmeyer HU. (Ed.) Methods of Enzymatic Analysis, Academic Press. p. 444, 1985.. Hallet C.J. & Cook, J.G.M. Clin. Chim. Acta 35:37,1971. Kassirer, J.P. New Engl. J. Med. 285: 385, 1971. Uria UV Bula do Kit BioTcnica Ind e Com. Ltda Reviso Maio/2005. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark ed., Rio de Janeiro, 1997. Manual de exames Laboratrio Fleury 1999 467 Manual de exames Laboratrio H. Pardini 2002 94
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LABORATRIO: ______________________________________________________________ PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO ALFA-AMILASE

Pg. 1/117 POP - 003/01- B

PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica

PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica CIDO RICO

Alantona + CO2 + H2O2

2H2O2 + 4-aminoantipirina + TOOS 4. PREPARAO DA AMOSTRA

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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica ALBUMINA

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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Bioqumica ALFA-AMILASE

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Misturar e inserir no porta-cubetas termostatizado.

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Clculo do Clcio Ionizvel:

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Padro Amostra Reagente

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gua destilada Calibrador Amostra Reativo A 2. 3.

gua destilada Calibrador Amostra Reativo A

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gua destilada Padro de colesterol HDL Sobrenadante Reagente do Colesterol

Fc (Fator de calibrao)= 40 Ap Concentrao de HDL em mg/dL= Aa x Fc. Fc = 40 = 131,1

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Creatinina (mg/dl)=(0,222 0,137) x 10,7= 0,91 mg/dl

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