Diapositivas Tecnicas Diagnósticas en Alergología (Texto)

Técnicas diagnósticas en alergología
Dr. José Mª Negro Alvarez

Servicio de Alergología. H. U. Virgen de la Arrixaca
Profesor Asociado de Alergología. Universidad de Murcia (España)
Abril 2006 www.rincondealergia.org
Métodos de diagnóstico inmunológico in

vivo e in vitro de enfermedades alérgicas
Métodos in vivo
 PRUEBAS CUTÁNEAS:
• Hipersensibilidad inmediata y tardía
 PROVOCACIONES
Métodos in vitro
 CUANTIFICACIÓN DE IgE ( Técnicas
ISOTÓPICAS, ELISA, FLUORESCENCIA,
QUIMIOLUMINISCENCIA,...)
 TEST DE LIBERACIÓN DE HISTAMINA
 DEGRANULACIÓN ÓPTICA DE BASÓFILOS
Dr Negro Alvarez
Abril 2006 www.rincondealergia.org 2
Diagnóstico inmunológico in vivo
HIPERSENSIBILIDAD INMEDIATA:
 PUNCIÓN. PRICK-TEST
 CUTIRREACCIÓN
 INTRADERMORREACCIÓN
HIPERSENSIBILIDAD TARDÍA:
 PATCH-TEST
PRUEBAS DE PROVOCACIÓN
Dr Negro Alvarez
Pruebas cutáneas inmediatas.

Prick-test
PREVIA LIMPIEZA DE LA PIEL CON UN
ANTISÉPTICO INCOLORO, MARCAR
LOS PUNTOS DE LA PRUEBA CON
ROTULADOR O CINTA ADHESIVA
Dr Negro Alvarez
COLOCAR UNA GOTA DE CADA
EXTRATO ALERGÉNICO GLICERINADO,
Y DE LOS CONTROLES POSITIVO
(HISTAMINA BASE 1/100) Y NEGATIVO
(SALINO 0,9%) SOBRE LA PIEL.
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PASAR UNA LANCETA VERTICALMENTE EN

RELACIÓN A LA SUPERFICIE CUTÁNEA A
TRAVÉS DE LA GOTA DEL EXTRACTO
HASTA EL INTERIOR DE LAS CAPAS DE LA
PIEL, SIN SANGRAR, RETIRÁNDOLA AL
CABO DE UN SEGUNDO (NORMAS DE LA
EAACI).
PARA EVITAR SANGRADO, SE UTILIZAN
LANCETAS DE 1 mm.
Dr Negro Alvarez
Dr Negro Alvarez
EN LA PUNCIÓN MODIFICADA LA LANZETA

SE PASA TAMBIÉN A TRAVÉS DE LA GOTA
DEL EXTRACTO Y SE INSERTA EN ÁNGULO
DE 45º DENTRO DE LA PIEL. SEGÚN SE
RETIRA, SE LEVANTA LIGERAMENTE LA
PIEL, CON LO QUE SE PRODUCE UNA
LIGERA LESIÓN CUTÁNEA, QUE DEBERÁ
SER LO SUFI-CIENTEMENTE SUPERFICIAL
COMO PARA NO PRODUCIR HEMORRAGIA.
Dr Negro Alvarez
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TRAS ESPERAR 15 MINUTOS,

MARCAR EL CONTORNO DE LA
PÁPULA CON UN ROTULADOR DE
PUNTA FINA.
Dr Negro Alvarez
APLICAR CINTA ADHESIVA CON EL FIN DE QUE EL
DIBUJO SE ADHIERA A ÉSTA Y RETIRARLA.
PEGARLA EN LA HOJA DE PRUEBAS CUTÁNEAS,
COMO DOCUMENTO PARA ARCHIVAR EN LA
HISTORIA CLÍNICA DEL PACIENTE
Dr Negro Alvarez
Pruebas cutáneas. Cutirreacción

LIMPIAR LA PIEL CON UN ANTISÉPTICO
INCOLORO.
DEJAR SECAR.
MARCAR LA ZONA CON UN ROTULADOR
DE PUNTA FINA.
REALIZAR UNA ESCARIFICACIÓN DE 2-4
mm DE LONGITUD EN LAS CAPAS
SUPERFICIALES DE LA PIEL CON UNA
LANCETA O AGUJA FINA, SIN PRODUCIR
HEMORRAGIA.
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COLOCAR UNA GOTA DE CADA EXTRACTO
A TESTIFICAR (SIN CONTAMINAR EL
DOSIFICADOR DEL VIAL), O EL ALIMENTO
FRESCO, Y UNA GOTA DE LOS CONTROLES
POSITIVO (HISTAMINA BASE 1/100 Y
NEGATIVO (SALINO 0,9%).
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LEER A LOS 15 MINUTOS.

DIBUJAR LA PÁPULA Y EL ERITEMA.
TRANSFERIR A CINTA ADHESIVA.
PEGAR LA CINTA ADHESIVA A LA HOJA DE
PRUEBAS CUTÁNEAS.
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Pruebas cutáneas. Intradermo
ESTIRAR LA PIEL DEL
ANTEBRAZO CON UNA
MANO Y CON LA OTRA
SE COLOCA LA
JERINGA EN ÁNGULO
DE 45 GRADOS EN
RELACIÓN CON LA
SUPERFICIE DE LA
PIEL, EL BISEL DE LA
AGUJA DEBERÁ
ESTAR DIRIGIDO
HACIA LA PIEL.
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INSERTAR CUIDADOSAMENTE LA AGUJA,

MOVIENDOLA HACIA DELANTE Y HACIA ARRIBA
COMO SI SE QUISIERA LEVANTAR LA PIEL CON LA
PUNTA DE LA AGUJA.
DESCENDER EL CUERPO DE LA JERINGA, PARA
ELIMINAR EL ÁNGULO FORMADO PREVIAMENTE
CON LA SUPERFICIE CUTÁNEA.
INTRODUCIR EL ANTÍGENO OBSERVANDO LA
FORMACIÓN DE UNA PÁPULA QUE DEBERÁ
ALCANZAR UNOS 3 mm DE DIÁMETRO, AL
INYECTAR 0.02 ML DEL ALERGENO.
COMO CONTROL POSITIVO SE UTILIZA HISTAMINA
BASE AL 1/10.000).
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Dr Negro Alvarez
Diagnóstico inmunológico in vivo.

Pruebas cutáneas.
Hipersensibilidad tardía
Patch-test
Dr Negro Alvarez
Pruebas cutáneas. Patch test
ABRIR EL SOBRE Y SACAR EL PAR-

CHE.
RETIRAR LA LÁMINA PROTECTORA
DEL PARCHE. EVITAR TODO CONTAC-
TO CON LOS ALERGENOS.
Dr Negro Alvarez
COLOCAR EL PARCHE EN LA PARTE

SUPERIOR DE LA ESPALDA DEL PACIENTE
(APROXIMADAMENTE A 5 cm DEL CENTRO)
DE FORMA QUE EL ALERGENO Nº 1 ESTÉ
SITUADO EN LA PARTE SUPERIOR
IZQUIERDA DEL PANEL.
ALISAR EL PARCHE DESDE EL CENTRO
HACIA FUERA ASEGURANDO QUE CADA
UNO DE LOS ALERGENOS ESTÉ EN
CONTACTO CON LA PIEL.
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LOS PARCHES DEBEN SER

RETIRADOS AL CABO DE 48 HORAS.
LA REACCIÓN DEBE DE SER LEÍDA
ENTRE 72 Y 96 HORAS DESPUÉS DE
LA APLICACIÓN DEL TEST.
SI SE HACE UNA LECTURA A LAS 48
HORAS, ÉSTA DEBE SER
COMPLETADA CON UNA LECTURA A
LAS 72-96 HORAS.
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INTERPRETACIÓN
? REACCIÓN DUDOSA, LIGERO ERITEMA.
- NEGATIVA.
+ POSITIVO DÉBIL (ERITEMA, INFILTRA-
CIÓN, POSIBLES PÁPULAS).
++ POSITIVA (ERITEMA, INFILTRACIÓN,
POSIBLES PÁPULAS, VESÍCULAS).
+++ MUY POSITIVA (REACCIÓN BULBOSA).
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Provocaciones
NASALES
BRONQUIALES
CONJUNTIVALES
ORALES
PARENTERALES
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Diagnóstico inmunológico in vivo
Provocaciones nasales
Cámara de provocación de Viena
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Unidad de Exposición ambiental
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Provocaciones Nasales
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Provocaciones Nasales
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Provocaciones bronquiales
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Provocación oral
MEDICAMENTOS (I)
 Salvo excepciones, las pruebas cutáneas
tienen reducido valor en el diagnóstico de
este problema.
 El único medio de llegar a un diagnóstico
o de descartar una alergia medicamentosa
es la provocación por vía oral y/o
parenteral, con dosis crecientes hasta
llegar a dosis terapéuticas.
Dr Negro Alvarez
MEDICAMENTOS (II)
 Para confirmar casos (aunque la historia
sea probable) de reacciones no severas
por drogas (exantema fijo medicamentoso,
fiebre medicamentosa no complicada, etc.)
 Cuando el diagnóstico de sensibilidad es
improbable y el fármaco sospechoso es
necesario (anestésicos locales)
 Cuando el diagnóstico es probable y la
reacción fue amenazante de la vida,
raramente está justificada la provocación.
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Diagnóstico inmunológico in vitro

CUANTIFICACIÓN DE IgE:
 ISOTÓPICAS
 ELISA
 FLUORESCENCIA
 QUIMIOLUMINISCENCIA
TEST DE LIBERACIÓN DE HISTAMINA
DEGRANULACIÓN ÓPTICA DE BASÓFILOS
Dr Negro Alvarez
Diagnóstico inmunológico in vitro.
Cuantificación de IgE
RIA (Radioinmunoanálisis)
 Marcador es isótopo radiactivo (RAST)
EIA (Enzimoinmunoanálisis)
 Marcador es enzima unida
covalentemente al Ag o al Ac. Se
mide la Actividad enzimática
• Colorimétricos: se mide intensidad color
• Fluorométricos (FEIA): fluorescencia al ser
expuesta a lux UV
• Luminiscentes: de reacción química o BQ
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50 µl suero
Incubar 30±5 Lavado

min a 18-32ºC
50 µl Conjugado
(Enzima+Anti-IgE)
Incubar 150±10 Lavado

min a 18-32ºC
50 µl
400 µl
solución de
solución de Medir la
desarrollo fluorescencia.
Stop
Comparar con la
curva estándar de
controles. Calcular la
Incubar 10±1 Lectura IgE específica en kU/l.
min a 18-32ºC
Dr Negro Alvarez

Evaluación como clases de IgE Específica
Clase IgE kU/l Nivel de Ac
0 < 0,35 Ausente o no
detectable
1 0,35 ≤ x < 0,7 Bajo
2 0,7 ≤ x < 3,5 Moderado
3 3,5 ≤ x < 17,5 Alto
4 17,5 ≤ x < 50 Muy alto
5 50 ≤ x < 100 Muy alto
6 ≥ 100 Muy alto
Dr Negro Alvarez
En piel normal existen de 5.000 a

12.000 mastocitos/mm3 distribuidos
sobre todo alrededor de los vasos
Existen de 5.000 a 500.000 moléculas de
IgE pegadas a cada mastocito, y
pueden persistir entre 6 y 12 semanas
La vida media de la IgE específica en
sangre es de 2,5 días.
PC >>> Sensibilidad que IgE específica
Dr Negro Alvarez
Inconvenientes UniCAP
Al ser la IgE extraordinariamente citofílica,
sus resultados serán inferiores a los de las
PC  Es un error conceptual pedir UniCAP
porque la PC haya sido negativa.
Los fármacos suelen actuar como haptenos
PC negativa o dudosa, difícilmente de
encontrará IgE específica en suero
Bastante caro (sólo se deben realizar para un
número limitado de alergenos)
Dr Negro Alvarez
Para completar conocimientos

consultar “Técnicas diagnñosticas” en:
www.rincondealergia.org
www.alergomurcia.com
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Métodos de diagnóstico inmunológico in

Pruebas cutáneas inmediatas.

PASAR UNA LANCETA VERTICALMENTE EN

EN LA PUNCIÓN MODIFICADA LA LANZETA

TRAS ESPERAR 15 MINUTOS,

Pruebas cutáneas. Cutirreacción

LEER A LOS 15 MINUTOS.

INSERTAR CUIDADOSAMENTE LA AGUJA,

Diagnóstico inmunológico in vivo.

ABRIR EL SOBRE Y SACAR EL PAR-

COLOCAR EL PARCHE EN LA PARTE

LOS PARCHES DEBEN SER

Diagnóstico inmunológico in vivo.

Unidad de Exposición ambiental

Diagnóstico inmunológico in vivo.

Diagnóstico inmunológico in vivo.

Diagnóstico inmunológico in vitro

TEST DE LIBERACIÓN DE HISTAMINA

DEGRANULACIÓN ÓPTICA DE BASÓFILOS

Incubar 30±5 Lavado

Incubar 150±10 Lavado

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En piel normal existen de 5.000 a

Para completar conocimientos

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