UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA MANUAL DE BIOSEGURIDAD, LABORATORIO DE VIROLOGA

INTRODUCCIN En el laboratorio de virologa se realizan procedimientos que requieren un especial y cuidadoso manejo ya que hay riesgos de contaminacin para el personal que los efecta y para cultivos estriles y otros medios de cultivo. La seguridad en el desarrollo de estas actividades, por lo tanto juega un papel primordial para evitar la infeccin del personal y proteger el material de posibles contaminaciones que pueden invalidar el trabajo El manual de bioseguridad tiene normas bsicas que facilitarn un correcto manejo de fluidos biolgicos, permitir una adecuada manipulacin de los medios de cultivo y dems reactivos y elementos de trabajo; lo que favorece una buena calidad de los procedimientos. Este documento contiene adems algunos aspectos tcnicos usados en procedimientos diagnsticos y experimentales de uso frecuente en el laboratorio; adicionalmente proporciona informacin necesaria para el conocimiento y empleo adecuado del equipo utilizado en el laboratorio. Es un manual enfocado hacia la prctica, que pretende crear conciencia y promover la formacin del personal en seguridad y bioseguridad garantizando as la realizacin apropiada de las tcnicas, el empleo adecuado de los equipos y por lo tanto la optimizacin de los resultados.

JUSTIFICACIN El manual de seguridad y bioseguridad es un elemento prioritario en todo laboratorio, ya que promueve la realizacin inocua de tcnicas que generan cierto riesgo de contaminacin y el adecuado manejo de los equipos; contribuye por lo tanto a disminuir los riesgos generados por la manipulacin inadecuada de material biolgico y de reactivos. Ningn elemento protector: guantes, mascarilla, cmara de bioseguridad, garantizan por si solos la inocuidad del procedimiento, se requiere que los usuarios posean- cierto conocimiento sobre la manipulacin, los diferentes equipos y las metodologas que se emplearn. Este manual es de gran utilidad para el laboratorio de virologa, proporcionndoles un protocolo propio para el desarrollo adecuado de los procedimientos y para la prevencin de las exposiciones en el laboratorio.

OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Elaborar un manual de seguridad y bioseguridad para un laboratorio de virologa que proporcione la informacin bsica necesaria para el desarrollo adecuado e inocuo de los procedimientos realizados en l.

OBJETIVOS ESPECIFICOS Reunir los principios de bioseguridad adaptados por la OMS, que tienen aplicacin en el laboratorio de virologa. Realizar un protocolo a seguir para el manejo de los equipos utilizados en el laboratorio y durante cada uno de los procedimientos ms frecuentemente realizados en l. Crear en los usuarios del laboratorio una conciencia de bioseguridad que permita el ptimo desarrollo de las tcnicas y la proteccin de la salud, adems de garantizar la validez de los resultados y la realizacin de procesos libres de contaminacin.

NORMAS GENERALES Todos los procedimientos tcnicos en los cuales se realice manipulacin de fluidos biolgicos, de cualquier tejido, clula, o cultivo celular humano, debern ser realizados bajo condiciones de bioseguridad adecuadas. Al personal que ingrese al laboratorio se le deben practicar los siguientes exmenes mdicos y de laboratorio: Examen mdico general pre-ocupacional, examen oftalmolgico, odontolgico y de otorrino, clasificacin sangunea, VDRL y citoqumico de orina. Adems debern tener certificado de vacunacin para Ttanos, difteria, fiebre amarilla y esquema completo contra la hepatitis B. Tenga en cuenta las siguientes consideraciones: Todo el personal del laboratorio poseer la informacin necesaria para prevenir y manejar adecuadamente las exposiciones de laboratorio. Usar bata de laboratorio, guantes y mascarilla cuando sea necesario, al salir de la sala de laboratorio, qutese la bata, guantes y dems elementos de proteccin personal, evite deambular con estos por otras reas. Abstngase de comer, fumar, en la zona de laboratorio y no ingrese morrales, bolsos, ni otros objetos personales al laboratorio. Mantenga el rea de trabajo limpia, aseada y en orden. Evite manipular sustancias qumicas y/o equipos si no ha sido capacitado para hacerlo. Marcar todo el material en forma legible y adecuada incluyendo iniciales del responsable, fecha y tipo de sustancia. Nunca huela o pruebe sustancias, consulte la etiqueta o pregunte a personas que ya la hayan usado o la conozcan. No se coloque lpices u objetos en la boca mantngalos en los bolsillos de su bata y en lo posible solo retrelos de all en el momento de utilizarlos. Habr una sealizacin adecuada y visible y debe manejarse como rea de circulacin restringida y las puertas deben permanecer cerradas.

Lave siempre las manos antes, durante y despus de manipular material infeccioso y al realizar cualquier procedimiento tcnico. Descontamine las superficies de trabajo al iniciar y terminar los procedimientos tcnicos. En caso de derrame de sustancias qumicas, se procede de acuerdo con el tipo de sustancia. No se permite pipetear con la boca ninguna sustancia. automticos. Para este fin utilize pipeteadores

Los procedimientos que generan aerosoles, salpicaduras, etc, se realizarn con extremo cuidado tratando de que se reduzca la produccin de ellos y en lo posible se realizan protegiendo los ojos y cara con mscaras o caretas. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales de material infeccioso se notificarn inmediatamente al coordinador de bioseguridad del laboratorio. Se llevar un protocolo escrito de tales accidentes. Si se derrama material infectado o presunto, use durante todo el proceso guantes de caucho y evite el contacto directo, utilice suficiente papel absorbente de modo que cubra totalmente el derrame, vierta Hipoclorito de sodio a 5000 partes por milln y deje actuar durante 30 minutos. La mezcla de desinfectante y material derramado se recoge con otro papel absorbente y se deposita en un recipiente lavable marcado Desechos Contaminados. Limpie de nuevo la superficie con desinfectante. En caso de ruptura de material de vidrio que contenga muestras, stos deben recogerse con escoba y recogedor, nunca con las manos. En caso de trauma corto punzante con agujas, vidrio u otros objetos o exposicin de mucosas o de piel no intacta con lquidos orgnicos, debe inmediatamente lavarse la zona expuesta con abundante agua y jabn desinfectante, tipo yodforo, si el rea corporal lo tolera; se debe permitir temporalmente el sangrado y aplicar una solucin desinfectante una vez concluido el lavado. Descontamine todos los materiales, muestras y cultivos contaminados antes de descartarlos, eliminarlos o limpiarlos para su reutilizacin. El material biolgico se desecha en bolsas plsticas rojas y rotlelo como Contaminado .

NIVEL DE SEGURIDAD DEL LABORATORIO Existen varios niveles de bioseguridad para los laboratorios segn los microorganismos que se manejen, los equipos de los cuales se disponga y de la infraestructura como tal del laboratorio:

Nivel I : Se manipulan microorganismos con pocas probabilidades de provocar enfermedades humanas o animales, se dispone de cmaras de bioseguridad tipo I.

Nivel II : Se manipulan microorganismos que pueden causar enfermedades humanas y animales, la exposicin puede entraar riesgos pero si se dispone de las medidas adecuadas, stos sern pocos o nulos. Nivel III : Maneja agentes patgenos que provocan enfermedades humanas y animales graves, pero que de ordinario no se propagan de un individuo a otro. Nivel IV : Est concebido para trabajar con materiales infecciosos o en experimentos microbiolgicos que generen un riesgo elevado tanto para el personal de laboratorio como para la comunidad. Estos laboratorios deben ser sometidos al control de las autoridades de salud nacionales.

El Laboratorio de Virologa de la Universidad de Antioqua de acuerdo con la disposicin de equipos, el tipo de muestras que se manipulan (microorganismos riesgo I y II) se clasifica en un nivel de bioseguridad II ; en l se manipulan agentes potencialmente patgenos pero si se disponen de medidas eficaces de prevencin, el riesgo de propagacin es limitado.

RIESGOS DE EXPOSICION OCUPACIONAL La toma de muestras, el transporte interno del material y la recepcin de estas, son procedimientos que suponen exposicin a agentes infecciosos o contaminacin del personal de laboratorio, por lo tanto, deben ser realizados con precaucin y en forma adecuada, por lo tanto le recomendamos seguir las siguientes recomendaciones: RECOLECCION DE MUESTRAS Los recipientes para la toma de muestras pueden ser de vidrio o plstico, deben ser fuertes y no permitir fugas cuando la tapa est correctamente puesta; adems, deben estar bien rotulados y en el exterior no debe quedar ningn resto de material. TRANSPORTE En caso de enviar muestras por fuera del laboratorio, empaque el tubo en otro recipiente que sea resistente de tal manera que en caso de quebrarse el tubo con la muestra, no haya riesgos de contaminacin para la persona que lo transporta. Los recipientes que contienen las muestras deben ser susceptibles de tratamiento en autoclave o resistentes a la accin de los desinfectantes qumicos. RECEPCIN Debe verificarse que las muestras estn rotuladas y que posean las condiciones mnimas requeridas para la realizacin del procedimiento. (cantidad, empaque). EMPLEO DE PIPETAS Y PIPETEADORES Todas las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la contaminacin de los dispositivos o pipeteadores. El aspirado en los dispositivos se har lentamente para evitar el paso de sustancias a su interior. No se deben expulsar con fuerza los lquidos de una pipeta para no generar aerosoles.

Las pipetas contaminadas deben sumergirse completamente en un desinfectante contenido en un recipiente irrompible. All permanecern de 18 a 24 horas antes de lavarlas. Las pipetas deben retirarse parcialmente de su contenedor (o empaque de papel) de modo que puedan ser colocadas en el pipeteador sin ser contaminadas con las manos; una vez en el pipeteador se retira el resto del protector de la pipeta. Para retirar las puntas de las micro pipetas, debe retirarse la tapa de la caja que las contenga y debe apretarse la pipeta contra la punta antes de extraerla. Nunca debe sacarse la punta con la mano para colocarla despus en el extremo de la pipeta, esto aumenta el riesgo de contaminacin. EMPLEO DE CAMARAS DE BIOSEGURIDAD Las cmaras de bioseguridad biolgica actan como barreras primarias para evitar el riesgo de infecciones transmitidas por el aire, impidiendo la salida de esos aerosoles ala atmsfera y por consiguiente su inhalacin por el personal. Su eficacia depende del sistema de ventilacin, la integridad de los filtros (HEPA) de aire y de la ubicacin con relacin a las corrientes y al movimiento del aire. El Laboratorio de Virologa clase II cuenta generalmente con 2 tipos de cmaras. CLASE I : Cmara de manipulacin abierta, ventilada y provista de un sistema de proteccin para el material. El aire fluye desde el frontal abierto sobre el material y sale por la parte delantera de la cabina, posee un sistema de flujo horizontal, protegiendo as toda la zona de manipulacin. CLASE II : El aire entra atravesando el techo de la cabina, desciende sobre el material y recorre la zona inferior del rea de trabajo. Adems, entra aire desde la mitad del frontal pasando el operario y desciende a travs de la rejilla situada delante de la zona de trabajo. Protege as al manipulador, el material y el medio ambiente, esta dotado de un sistema de flujo vertical. En ste tipo de cmaras se maneja el material infeccioso.

NORMAS DE MANEJO GENERAL DE LAS CMARAS Explicar a todos los usuarios el modo de empleo y las limitaciones de estas cmaras. En particular ha de quedar claro que la cmara no protege las manos del tcnico contra salpicaduras, rupturas o tcnicas incorrectas. Los aparatos y materiales introducidos en la cmara deben reducirse al mnimo y deben ser manipulados en el fondo de la cmara. No debe utilizarse dentro de la cmara un mechero Bunsen, ya que el calor que produce podra desviar el flujo de aire y daar los filtros. Al iniciar y concluir el trabajo la cmara se limpiar con alcohol antisptico u otro desinfectante adecuado en esos momentos adems se colocar la luz ultravioleta para esterilizar la cmara. No bebe haber circulacin de personas alrededor de las cmaras, pues esto genera corrientes de aire que pueden contaminar el material que se esta procesando.

6. EMPLEO DE CENTRFUGAS Un laboratorio puede tener varios tipos de centrfugas: refrigerada, microcentrfuga y centrfugas corrientes, estas deben ser utilizadas con cuidado. Lo ms importante es calibrar adecuadamente los tubos y portatubos y evitar el uso de tubos defectuosos o rajados.

6.1 MANEJO GENERAL DE CENTRIFUGAS 1. Encender la centrfuga 2. Calibrar lo que se va a centrifugar 3. Graduar el tiempo 4. Graduar revoluciones (en forma lenta si es manual) 5. Tapar la centrfuga Las centrfugas deben colocarse aun nivel tal que puedan visualizar la cubeta para colocar correctamente los soportes y cestillos. Los tubos deben estar bien tapados. No use tapones de algodn. Al terminar se sacan los recipientes, se secan y se deja apagada y en "cero ".

7. CONSERVACION Y EMPLEO DE REFRIGERADORES Y CONGELADORES Los refrigeradores, congeladores se deben deshelar y limpiar peridicamente. Todos los recipientes almacenados en refrigeradores, deben llevar etiquetas bien claras con el nombre del responsable, la fecha de almacenamiento y el nombre del producto.

MANEJO DE TANQUES DE NITROGENO Antes de iniciar cualquier trabajo que suponga el contacto con nitrgeno lquido, imprescindible consultar a una persona con experiencia o al funcionario de seguridad la forma de introducir o retirar criotubos de los tanques, en forma segura. El nitrgeno lquido produce quemaduras debido a su temperatura extremadamente baja. Manipule el nitrgeno lquido con gran cuidado y utilice un sistema de proteccin para los ojos y guantes fuertes. Registre todos los productos que vaya a congelar o a descongelar de estos tanques.

8. PRIMEROS AUXILIOS EN CASO DE ACCIDENTE DE TRABAJO CON RIESGO BIOLGICO

I. EN EXPOSICIN DE PIEL: Lavar con abundante agua y jabn. No refregar con esponja para no causar laceraciones. 2. EN EXPOSICIN DE OJOS: Regar abundantemente con solucin salina estril (suero fisiolgico) o agua limpia. 3. EN EXPOSICIN DE BOCA: Escupir, hacer buches con agua limpia. 4. EN PINCHAZO O HERIDA: Promover el libre sangrado (no hacer presin para drenar la sangre). Luego lavar con agua y jabn desinfectante. 5. NOTIFICACAR EL ACCIDENTE AL JEFE INMEDIATO O A LA PERSONA RESPONSABLE.

8.1 NOTIFICACIN DEL ACCIDENTE: A. El jefe inmediato o un responsable de la empresa debe llenar el reporte oficial del accidente de trabajo. El funcionario acude a su IPS, ojala dentro de las primeras 24 horas despus de ocurrido el accidente, si es posible con el formato del accidente de trabajo ya diligenciado. El rea de salud ocupacional de la empresa debe registrar el presunto accidente de trabajo (AT). La empresa notifica a la ARP mediante el reporte del AT.

B.

C.

D.

9. MANEJO DE REACTIVOS QUMICOS En el laboratorio se emplean frecuentemente reactivos y sustancias qumicas potencialmente peligrosas. Con el conocimiento apropiado del reactivo y las precauciones a tener en cuenta en su manipulacin, estos materiales se pueden utilizar con poco o ningn riesgo. Existen en la actualidad ms de 60000 sustancias consideradas altamente peligrosas. Los criterios de peligrosidad de las sustancias qumicas son muy variados, pero podemos considerar los siguientes factores:

EXPLOSIVIDAD : es la capacidad de una sustancia para expander sus molculas en forma brusca y destructiva.

INFLAMABILIDAD : es la capacidad de una sustancia para producir combustin de s misma, con desprendimiento de calor.

TOXICIDAD : es la capacidad de una sustancia para producir daos a la salud de las personas que estn en contacto con ella.

REACTIVIDAD : es la capacidad de una sustancia para combinarse con otras y producir un compuesto de alto riesgo, ya sean inflamable, explosivo, txico o corrosivo.

CORROSIVIDAD : sustancia con propiedades cidas o alcalinas. Los factores que determinan la toxicidad de una sustancia son: su naturaleza fisicoqumica, el tiempo de exposicin, la frecuencia, dosis, va de entrada, vehculo, velocidad de absorcin, tiempo de concentracin plasmtica (sangunea), biotransformacin ( cambios que sufre en su composicin dentro del organismo ), rgano blanco, caractersticas genticas, factores individuales y factores ambientales. 9.1 GRADO DE TOXICIDAD Y DOSIS LETAL GRADO I Inocuos II Ligeramente Txicos III Medianamente Txicos IV Muy Txicos V Extremadamente Txicos VI Super -Txicos

DOSIS LETAL 15 g/Kg 5 - 15 g/Kg 0.5 - 5 g/kg 50 - 500 mg/Kg 5 - 50 mg/Kg Menos de 5 mg

Recuerde leer las especificaciones de la sustancia y las precauciones de manejo. 9.2 MANEJO GENERAL Trate todos los reactivos y sustancias como si fueran potencialmente peligrosas. No inhale vapores o intente definir el compuesto probndolo con la boca. Todos los materiales qumicos deben ser apropiadamente marcados, an si se van a almacenar en alcuotas. Todo material qumico con potencial de emisin de vapores debe ser manejado en cmara extractora de gases. Nunca agregue agua a los cidos. Se debe agregar el cido al agua. Los cidos concentrados tienden a emitir vapores txicos. Algunos compuestos inorgnicos (Benceno, Azida de sodio) generan gases que pueden ser explosivos. Verifique siempre la compatibilidad de las mezclas a realizar, antes de hacerlo.

Evite emplear en sus experimentos sustancias peligrosas, de no ser posible, maneje un plan claro sobre la manipulacin, las precauciones a seguir. La adecuada ventilacin del rea de trabajo es fundamental para prevenir la acumulacin de gases txicos y potencialmente explosivos.

ALMACENAMIENTO Los materiales qumicos de alta peligrosidad como las bases y los cidos deben colocarse en una bandeja de plstico y deben almacenarse en la parte baja de los gabinetes o alacenas. En general los materiales deben ser almacenados en lugares secos. No se deben almacenar compuestos potencialmente explosivos en las cmaras flujo. Compuestos voltiles y ter deben ser almacenados en reas relativamente fras. de

Nunca almacene compuestos inflamables o voltiles cerca de un toma corriente o de un sitio que pueda producir chispas. Los carcingenos (Bromuro de etidio, mercaptoetanol) deben ser almacenados apropiadamente y se evitar la exposicin prolongada y directa al producto. Cuando vaya a utilizar un reactivo bsquelo por su inicial en el cuaderno de reactivos; cada sustancia est identificada con una letra (inicial del nombre) y un nmero que facilitar su ubicacin en los gabinetes; tiene adems un color que indica la clasificacin de la sustancia segn los riesgos que presente para la salud y/o las consideraciones a las tener en cuenta al almacenarlo o transportarlo. Antes de almacenar cualquier sustancia asegrese de: Tenerla perfectamente identificada. Conozca sus incompatibilidades, los factores que alteran la estabilidad del producto. Evalu las condiciones en que almacena la sustancia: color, estado del reactivo, olor.

9.3.1 Normas Generales Sobre Almacenamiento: Los estantes para el almacenamiento se llenan de abajo hacia arriba. Las sustancias ms peligrosas deben estar en la parte inferior . Las sustancias voltiles e inflamables deben almacenarse lejos de la entrada y contra la pared. Los cidos perclrico, ntrico y sulfrico deben almacenarse por separado. Almacene frascos pequeos adelante, frascos grandes atrs. Mantenga en los estantes slo las cantidades de un consumo prudencial.

Cdigo de colores:

AZUL : Riesgo de salud. Almacene lejos de sustancias txicas. AMARILLO: Reactivo. Almacene lejos de sustancias comburentes e inflamables. ROJO: Inflamable. NARANJA: General (Inocuos ) BLANCO: Corrosivos VERDE: Colorantes Desechos qumicos Para el manejo de desechos qumicos existen instituciones especializadas en estos procesos.

9.4 MANEJO DE ACCIDENTES CON SUSTANCIAS QUMICAS En caso de contacto directo con productos peligrosos, debe remitirse al afectado a atencin mdica profesional, anexando la mayor informacin posible sobre l o los productos involucrados, sin embargo, las siguientes acciones deben ser realizadas inmediatamente ocurra el accidente. 9.4.1 Acciones generales Lave el rea afectada con abundante agua y jabn no abrasivo, mnimo durante 15 minutos. Notifique el accidente inmediatamente ocurra. Contacte con la atencin mdica de ser necesario y lo preste los primeros auxilios.

CONTACTO CON PIEL Acidos ( carboxlicos, Sulfricos, Halogenados, Aminocidos, Tiocidos) y lcalis (Hidrxido de Sodio) Cortar y retirar la ropa afectada. Lavar con abundante agua por 15-20 minutos la parte del cuerpo en contacto con el cido. No se deben utilizar soluciones dbilmente cidas o bsicas dado que el calor de la neutralizacin puede producir quemaduras trmica y aumentar las lesiones tisulares. Para quemaduras gstricas puede utilizarse anticidos.

Organofosrados Lavar piel con agua y jabn. El paciente debe ser retirado del lugar

Si fue ingerido: Lavado gstrico y carbn activado

Otros qumicos Lavar con abundante agua y jabn por 10-20 mintos

CONTACTO CON LOS OJOS cidos (Carboxlico, Sulfrico, Halogenados, Tiocidos) Y Halgenos (Flor, Cloro, Bromo, Yodo ) Lavar abundantemente con agua ordinaria o solucin salina los por 10-15 minutos, quemaduras severas con lcalis por 1530 minutos inicialmente y repetidamente por varias horas

INGESTION DE SUSTANCIAS QUMICAS La ingestin de una sustancia desconocida que provoque riesgo de intoxicacin : Suministrar de uno a dos vasos de agua o un lquido azucarado. El vomito nunca debe ser inducido en personas con condiciones generales afectadas (como circulacin, respiracin, estado de conciencia), o si hay riesgo de convulsiones, o lo que se ingiri fueron sustancias corrosivas o destilados de petrleo ( principalmente tipo Kerosene) Retire al paciente del contacto con la sustancia. En muchos casos se puede administrar carbn activado por va oral. Transportarlo a un servio de urgencias donde le administren el antdotos especficos.

cidos y lcalis Dilucin rpida con agua o leche. Nunca suministre otros cidos o bases para contrarrestar la accin de las bases o cidos ingeridos. No provoque vmito. No suministrar nada por va oral, hasta que se realice una endoscopia digestiva. Transporte rapiadamente a un servio de urgencias.

Formaldeido Dar al paciente papillas espesas de leche en polvo Ingerir abundante lquido Transportar a un servicio de urgencias donde le suministren carbn activado

INHALACION En caso de inhalacin de vapores o gases qumicos, observar las siguientes normas generales: Tener va area permeable antes de atender al afectado. Llevar a la vctima aun sitio fresco y ventilado. Descansar en posicin semisentado y no realizar actividad fsica. Obtener atencin mdica inmediata.

MANEJO DE SUSTANCIAS RADIOACTIVAS

PRINCIPIOS El fenmeno de la radioactividad

GENERALES

La radioactividad es una transformacin espontnea de los ncleos inestables alterando su estructura y composicin interna, dando origen a la emisin de partculas subatmicas y fotones. La desintegracin nuclear y el tipo de radiacin emitida dependen del elemento qumico, caracterizado por el nmero de protones y neutrones y por el nivel energtico de los nucleones en particular. Las sustancias radioactivas son emisoras de energa predecibles y continuas, la energa puede ser en forma de partculas alfa (a) o beta (3 ), o en forma de fotones (rayos gama). La interaccin de estas radiaciones con la materia puede dar lugar a la emisin de rayos X y neutrones. La radiacin es una forma de transmisin de la energa que no necesita soporte material, siendo el origen de la misma los elementos constitutivos de la materia, es decir, las molculas y los tomos. Las radiaciones se pueden clasificar atendiendo a su origen (atmicas o moleculares) o bien a su capacidad de ionizar (ionizantes o no ionizantes). Una radiacin se entiende como ionizante cuando su nivel de energa es suficiente para arrancar electrones de la corteza de los tomos, produciendo la ionizacin de los mismos. El poder de ionizacin es proporcional al nivel de energa y la capacidad de penetracin es inversamente proporcional al tamao de las partculas. Tipos de radiacin Radiacin alfa Esta radiacin corresponde a ncleos de helio cargados positivamente, de origen nuclear. Presentan un alto poder de ionizacin y baja capacidad de penetracin. Despus de sucesivas colisiones una partcula alfa pierde toda su energa y deja de moverse, esto ocurrir

dentro de unos pocos centmetros en el aire, en el espesor de un trozo de papel o tela y en la capa exterior de la piel de una persona. En consecuencia los radionclidos que emiten partculas alfa no constituyen un riesgo externo. Esto significa que un emisor alfa no puede causar dao si est fuera del cuerpo. No obstante, si han sido ingeridos o inhalados representan un grave peligro interno. Radiacin beta Este tipo de radiacin corresponde a partculas cargadas que tienen su origen en la corteza del tomo. Tienen un poder de ionizacin algo inferior ala radiacin alfa y un mayor poder de penetracin. Segn sea su energa, las partculas beta pueden propagarse como mximo unas pocos metros en el aire y unos pocas centmetros en otras sustancias como tejidos y plstico. A medida que pierde energa la partcula beta se hace considerablemente ms lenta y es absorbida por el medio. Los radioistopos emisores beta representan un mayor riesgo debida a contaminacin interna, sin embargo cuando la energa de la partcula es alta se presenta tambin un riesgo por irradiacin externa. Radiacin gama y Rayos X No tienen masa, son radiaciones electromagnticas. Presentan un poder de ionizacin relativamente bajo y una gran capacidad de penetracin. Magnitudes y unidades Actividad del radionclido Se define como el nmero de desintegraciones producidas en el radionclido por unidad de tiempo. La unidad de medida en el sistema internacional (SI) es el Becquerel (Bq); anteriormente se utilizaba el Curio (Ci). 1 Bq (SI)= 2,7x10
-11

Ci

La actividad es una magnitud vlida en el instante de la medicin ya que va decreciendo con el tiempo en funcin de la constante de semidesintegracin del radionclido, al cabo del cual se ha reducido a la mitad (vida media). Dosis Se define como la cantidad de energa absorbida en un punto del individuo o del medio por unidad de masa. La unidad de medida es el Gray (Gy). Gray (Gy)= 1 julio/kg 1 Gy (SI)= 100 rads

Dosis equivalente Se define como la dosis absorbida por el individuo considerando el dao o efecto biolgico producido. La dosis equivalente (D equiv-Ht) es la dosis absorbida (D abs) multiplicada por un factor QF segn el tipo de radiacin:

La unidad de medida es el Siever (Sv) D equiv = D abs x QF 1 Sv (SI)= 100 rems

Los factores QF de las radiaciones ms corrientes son: Gama/Rayos X Beta , Beta , e Alfa
++ + -

QF=1 QF=1 QF=1 0

Interaccin con el organismo y efectos biolgicos Las radiaciones ionizantes al interactuar con el organismo provocan diferentes alteraciones debido ala ionizacin provocada en los elementos constitutivos de sus clulas y tejidos. Se puede hablar de dos tipos de riesgo: Irradiacin y contaminacin radiactiva. Se entiende que existe riesgo de irradiacin cuando la persona est expuesta a una fuente de radiacin no dispersa, externa a la misma y no y contacto directo con la fuente. Puede ser total si afecta a todo el organismo o parcial si afecta slo a una parte del mismo" El riesgo de irradiacin es importante para radiaciones muy penetrantes como los rayos X o la radiacin gama. Existe riesgo de contaminacin radioactiva cuando el organismo entra en contacto directo con la fuente, la cual puede estar dispersa en el ambiente (gases, vapores o aerosoles) o bien depositada en una superficie. Se habla de contaminacin interna si la fuente penetra en el interior del organismo, y de contaminacin externa si solo afecta la superficie. Las radiaciones alfa, que son poco penetrantes y muy energticas, tienen gran importancia en contaminacin radiactiva interna, siendo muy -peligrosas por ingestin. Los efectos producidos par las radiaciones pueden ser clasificados como gen ticos si afectan a las clulas germinales del individuo y se manifiestan solamente en su progenie, y efectos somticos si slo se manifiestan en el individuo que recibi la dosis. Estos ltimos dependen de varios factores tales como: Tiempo de aparicin de los signos desde el momento de la exposicin, que pueden dividirse en efectos tempranos -horas a das-y efectos tardos -meses a aos -. La posicin de la fuente de irradiacin con respecto al rgano comprometido, conduce a una distincin entre exposicin externa {como los rayos X) y contaminacin interna (istopos radioactivos).

Lmite de dosis La proteccin radiologa tiene como finalidad la defensa de los individuos, sus descendientes y el medio ambiente en general, contra los riesgos que se derivan de la actividad con materiales radiactivos. La proteccin prevista se basa en los principios establecidos por la Comisin Internacional de Proteccin Radiolgica que corresponden a: Justificacin de la prctica: No debe adoptarse ninguna prctica que entrae exposicin a las radiaciones a menos que produzca un beneficio mayor que los daos que cause o pueda causar. Optimizacin de la Proteccin: Las dosis y riesgos de radiacin deben reducirse al nivel ms bajo que pueda razonablemente alcanzarse. Lmites de dosis: La exposicin de los individuos no debe exceder de los lmites de dosis recomendados; de superarse tales lmites se considerar que las dosis o el riesgo es inaceptable. Los lmites de dosis no son aplicables a la exposicin originada por problemas mdicos. Los tres principios mencionados se aplican a la proteccin de los trabajadores y del pblico. En la siguiente tabla aparecen los lmites primarios recomendados por la Comisin Internacional de Proteccin Radiolgica (CIPR). Aplicacin Dosis efectiva Ocupacional 20 mSv por ao promedio sobre 5 aos 1 mSv/ao (*) Estudiantes entre 16 y 18 aos 15mSv/a 150 mSv/a 500 mSv/a 500 mSv/a 500 mSv/a Pblico 1 mSv/ao (**)

Cristalino del ojo Piel Extremidades tros organos o tejidos Casos especiales Mujeres en condiciones procrear Mujeres gestantes

15mSv/a 50mSv/a 50mSv/a 50mSv/a

de 13 mSv/trimestre (abdomen) 10 mSv/embarazo (feto)

(*) Con la condicin adicional de no sobrepasar 50 mSv en un solo ao (**) En condiciones especiales una dosis efectiva de 5 mSv en un solo ao, siempre que la dosis media en 5 aos consecutivos no sea superior a 1 mSv por ao.

NORMAS PARA EL MANEJO DE LA RADIOACTIVIDAD El manejo de la radioactividad en el grupo virolgia ser exclusivo del personal entrenado adecuadamente para el manejo de sustancias radioactivas. Clasificacin del laboratorio: Nivel de bioseguridad tipo II

Limite de Dosis El lmite de dosis establecida para el personal encargado de la manipulacin de los istopos radioactivos en el grupo virologa es de ??? MSv/ao. Este limite obedece a la naturaleza propia de los istopos que all se manipulan, a la intensidad de trabajo por ao ya las recomendaciones hechas por la Unidad de Asuntos Nucleares de INGEOMINAS.

Procedimientos especficos de proteccin Radiolgica en el manejo y almacenamiento del material radioactivo El laboratorio dispondr de una lista de los materiales radioactivos que cada investigador puede emplear y la cantidad que puede utilizar por experimento. El entrenamiento del personal de laboratorio estar a cargo del investigador principal, el cual certificar ala divisin de Bioseguridad que la persona ya puede emplear sustancias radioactivas. Esta evaluacin se har con base a los conocimientos que se tengan acerca de sustancias radioactivas, su manejo y desecho apropiado.

Conocimiento de la sustancia radioactiva: Propiedades: vida media, tipo de emisin, monitorizacin en lquido en el aire para contaminacin, monitoreo biolgico, alcance de la radioactividad en el aire y lquidos, tipo de proteccin que se debe asegurar.

Disposicin de las sustancias radioactivas: Disposicin de los desechos radioactivos y otras consideraciones especiales: todos los desechos radioactivos deben ser dispuestos en sitios especiales, que se han organizado en el laboratorio y en la facultad. Nunca arrojar desechos radioactivos de la poceta o a la basura comn. Si se va a emplear un compuesto radioactivo que no es de rutina, se debe consultar primero con las personas a cargo de la Bioseguridad para establecer el sistema de manejo y disposicin. Desechos slidos: dependiendo del tipo de sustancia radioactiva, este debe hacerse en doble bolsa de plstico y se debe sellar con cinta tipo radioactivo y adicionalmente, poner un adhesivo que especifique quien es responsable, la fecha y el tipo de sustancia radioactiva y la cantidad desechada. Desechos lquidos: minimice la generacin de desechos slidos y especialmente lquidos. Sobre estos desechos igualmente deber consignarse toda la informacin en una hoja. No olvide determinar el espacio para disponer los desechos lquidos apropiadamente.

NORMAS BSICAS PARA EL MANEJO DE SUSTANCIAS RADIOACTIVAS Siempre que se manejen compuestos radioactivos usar doble guante, bata de manga larga y proteccin para los ojos. En el lugar de trabajo se debe colocar un protector adecuado que sirva para contener un derrame, un contador de radioactividad para el control constante de las emisiones y se deben organizar la disposicin de los desechos slidos y lquidos adecuadamente.

Finalmente una vez termine el experimento se debe inspeccionar el rea para detectar presencia de contaminacin. Planear con tiempo el experimento de manera que minimice el tiempo de exposicin. Confinar el uso de material radioactivo a las reas especificadas. Minimizar la generacin de desechos radioactivos. Mantener siempre a disposicin el equipo de descontaminacin radioactiva. Revisar el rea de trabajo antes y despus de cada experimento, los guantes y la bata de laboratorio, los instrumentos de trabajo y si es necesario el piso. Nunca centrifugue material radioactivo amenos que pueda verificar la centrfuga antes y despus de su uso. No deseche material ni liquido contaminado con radioistopos por las pocetas. Utilizar siempre el monitor de exposicin a la radioactividad. Evitar en lo posible el uso de radioactividad. Existen tcnicas alternativas que generan resultados de calidad comparables a los obtenidos con radioactividad.

El uso de los diferentes compuestos radioactivos tiene sus consideraciones especiales. A continuacin se da una lista de los compuestos ms empleados de rutina en el laboratorio. La informacin complementaria debe ser suministrada por la casa productora y la hoja de seguridad del material le suministrar informacin adicional. Mantenga un rcord de sus experimentos y el tipo de material que utiliz, as como su fecha de vencimiento y los resultados de la inspeccin. Un descuido o un accidente que no sea reportado podra significar la suspensin de la utilizacin de material radioactivo. Use viales de centelleo o el contador Geiger de acuerdo con las necesidades. Consigne en sus experimentos los valores obtenidos en la revisin de las reas de trabajo. Es su nica garanta en caso de contaminacin.

GESTIN

MANEJO

DE

LOS

RESIDUOS

RADIOACTIVOS

Cada investigador tiene la obligacin de marcar adecuadamente sus residuos con el tipo de istopo, cantidad utilizada, fecha y usuario. Adems debe hacer una separacin fsica de los desechos lquidos y slidos. En la cabina donde se realizan las manipulaciones se debe disponer de recipientes en lmina de acrlico para el almacenamiento temporal (mientras se realiza el experimento) del material contaminado. Una vez concluido el experimento, los desechos debidamente marcados y 32 empacados se ubican en un recipiente de acrlico con un espesor de 10 mm. Los desechos de P 33 y P se almacenan temporalmente en este cubo (durante 10 veces la vida media) y luego sern 3 descartados como residuo corriente. Los desechos contaminados con H - T se mantendrn en el cubo, pero la acumulacin de los mismos representa para nosotros un problema que todava no tenemos resuelto.

Transporte de material radioactivo En las actividades experimentales realizadas por el grupo IDP no se utilizan fuentes porttiles de radiacin por lo tanto no se requiere planificar los procedimientos de transporte. Adems la casa comercial que distribuye los radioistopos se responsabiliza de la entrega en el laboratorio, cumpliendo con todas las normas exigidas para el transporte de estas sustancias.

Accesorios de Seguridad Almacenamiento: Cajas de acrlico Dimensiones: 50 cm X 50cm X 50cm / 10 mm de espesor 13 cm X 4cm X 6cm / 5 mm de espesor 13 cm X 8cm X 6cm / 5 mm de espesor Prendas protectoras: Guantes, mscaras, batas de laboratorio, delantal plomado Proteccin: Pantalla de acrlico 50cm X 60cm / 10 mm de espesor Equipo de manipulacin: Pinzas, esptulas, pipetas, puntas, tubos 0.2 -1.5 ml

ACCIONES DE EMERGENCIA PLANES DE EMERGENCIA

En caso de derrame o accidente radioactivo Primeras medidas mdicas en caso de contaminacin Los planes de accin en caso de exposiciones accidentales implican tambin la aplicacin de un conjunto de medidas medicas de asistencia y distribucin de responsabilidades de intervencin. El mdico que realiza o supervisa la asistencia forma parte de un equipo de radioproteccin. Inmediatamente se reconozca una exposicin accidental, se realizaran investigaciones tendientes a establecer la secuencia de eventos que la originaron, as como estimar la dosis a la cual estuvo expuesto el personal. El diagnstico inmediato es el de la naturaleza e intensidad de la lesin convencional (hemorragia, quemadura, fractura). La descontaminacin es una accin secundaria. Sin embargo, cuando se sospeche una contaminacin se debe realizar rpidamente la mejor evaluacin posible de la situacin accidental y considerar, simultneamente, la posibilidad de aplicar un tratamiento en forma precoz. La eficacia del tratamiento descontaminante es tanto mayor cuanto ms rpido se administre. La asistencia de la contaminacin es siempre posterior al tratamiento de las lesiones convencionales y de la contaminacin interna, excepto en aquellos casos en los cuales su magnitud sea elevada. Las medidas de descontaminacin deben ser aplicadas secuencialmente, de acuerdo a las siguientes circunstancias: 1) En el mismo lugar del accidente: a. Tratar las lesiones convencionales de acuerdo al manual de primeros auxilios elaborado por el mdico responsable de la instalacin.

b. Prevenir la contaminacin interna (uso de mascaras individuales). 2) El centro de evacuacin: a. Clasificar el personal segn los distintos tipos de accidentes radiolgicos, para tratar las contaminaciones externas e internas, registrando todas las medidas aplicadas desde la ocurrencia del accidente y durante su seguimiento. b. Realizar los procedimientos adecuados de descontaminacin externa de piel intacta, cara, cabellos, ojos, odos, nariz, boca, garganta y de herida contaminada, de acuerdo a procedimientos definidos en un manual preparado por el equipo de radioproteccin. En caso de contaminacin interna, aplicar inmediatamente las primeras medidas de descontaminacin de acuerdo al tipo de radionclido. Antes que el personal sea conducido a un centro medico de asistencia especializada, se debe estimar el nivel de incorporacin y de acuerdo al radionclido y al modo de contaminacin, elegir la va de administracin del tratamiento descontaminante. 3) Un centro de asistencia mdica especializada: Todo trabajador que haya padecido una contaminacin de pronstico dudoso o segn el grado de radiotoxicidad del nclido contaminante y el estado de salud, deber ser trasladado a un centro de asistencia mdica especializada para su tratamiento y continua vigilancia. Aparte de los riesgos qumicos deben conocerse todos los dems peligros a los cuales esta expuesto el laboratorio y su personal.

OTRAS EMERGENCIAS Emisin De Aerosoles Posiblemente Peligrosos (Fuera de cmara de bioseguridad) Todas las personas debern evacuar inmediatamente la zona afectada. Se informar una vez ocurra, al director del laboratorio y al encargado de bioseguridad. Nadie podr entrar al lugar durante una hora por lo menos, para que los aerosoles puedan salir y se depositen las partculas ms pesadas. Se colocarn seales indicando que queda prohibida la entrada. Al cabo de una hora podr efectuarse la descontaminacin bajo la supervisin del funcionario de bioseguridad; para ello habr que utilizar ropa protectora y proteccin respiratoria. Ruptura O Derrame De Recipientes De Cultivo Los recipientes rotos deben recubrirse con un trozo de tela o una toalla de papel. Despus se verter un desinfectante y se dejar por lo menos 30 minutos. El trozo de tela y el material roto se evacuara utilizando un recogedor y pinzas para los pedazos de vidrio. El material recogido se esterilizar en autoclave o se mantendr durante 24 horas sumergido en un desinfectante. Ruptura De Tubos Con Contenido Posiblemente Peligroso En Centrfugas Si se sabe o se sospecha que se ha roto un tubo mientras est funcionando el aparato, habr que parar el motor y dejar cerrado el aparato durante 30 minutos. En caso de descubrir el accidente

una vez abierto el aparato se volver a tapar y se dejar cerrada durante 30 minutos. Pasado este tiempo se recogern los restos de material (vidrio) con guantes y pinzas y sern colocados en desinfectante por 24 horas, luego se esterilizarn en autoclave. La tasa de la centrfuga se limpiar con una torunda empapada en desinfectante, al da siguiente se repite la misma operacin y despus se lavar con agua y se secar. Incendios Todo el personal del laboratorio, orientado por el coordinador de bioseguridad estar debidamente informado sobre la prevencin, medidas en caso de incendio y el empleo del equipo de lucha contra incendios. Se tendrn en cuenta adems las posibles causas de incendio, para disponer de mtodos y procedimientos apropiados de uso y mantenimiento que aminoren este riesgo. Entre algunas posibles causas de incendio en el laboratorio tenemos: Sobrecarga elctrica Mal mantenimiento de instalaciones elctricas Equipo que se deja conectado sin necesidad Falta de cuidado al manipular materiales inflamables Sustancias qumicas explosivas e inflamables almacenadas en frigorficos corrientes

En el laboratorio se debe disponer de extintores de diferente uso, los cuales deben estar colocados en lugares visibles y estratgicos, y deben ser el primer implemento buscado al presentarse el incendio . Todas las instalaciones y el equipo elctrico sern inspeccionados y probados con regularidad, mantenidos por electricistas calificados, con el fin de prevenir choques elctricos, los cuales pueden ocasionar incendios.

SERVICIOS DE EMERGENCIA Al lado de todos los telfonos debe colocarse en forma bien visible la s direcciones y los nmeros telefnicos siguientes: Persona encargado de bioseguridad : Carmen Beatriz Zuluaga Bomberos : 125, 119 Servicios de ambulancia : 2 30 71 19 Polica : 123, 112 Policia Metropolitana: 251 17 00 Emergencia: 2 30 71 39

Toxicologa: 2 35 02 64

EQUIPO DE EMERGENCIA Maletn de primeros auxilios Caretas respiratorias Desinfectantes Cuerdas, escaleras, mangueras Material para delimitar y sealar zonas peligrosas Ducha para lavado de personas en caso de accidentes

MATERIAL DE LABORATORIO Todo el material del laboratorio ser almacenado en condiciones de limpieza, debidamente esterilizado, empacado en papel si su uso as lo requiere o con su parte superior tapada solamente. Una vez termine el uso de ste ser desinfectado antes de realizar el lavado y su posterior esterilizacin. Desinfeccin La mayora de los productos desinfectantes tienen algunos efectos txicos, corrosivos o irritantes por esta razn debe utilizarse guantes, delantal y proteccin ocular al diluir desinfectantes para su uso. El desinfectante usado en el laboratorio de virologa es el hipoclorito de sodio al 5 %; ste es un agente oxidante, corrosivo para los metales. Para la desinfeccin de manos antes y despus de manipular material se utilizar alcohol antisptico. Esterilizacin Los mtodos empleados para dicho fin en el laboratorio son: la presin con vapor de agua y el calor en seco. El material y los objetos que se han de esterilizar deben ajustarse totalmente. Este procedimiento debe realizarse el recipiente de modo que el vapor pueda circular sin dificultad. Precauciones para el uso de autoclaves: Todo el material debe colocarse en pequeas bandejas para facilitar la evacuacin del aire y permitir una buena penetracin del calor. El autoclave no debe sobrecargarse para que el calor penetre en forma uniforme.

Se realizar peridicamente el mantenimiento e inspeccin del autoclave por tcnicos calificados. La autoclave debe mantenerse limpia y se debe cambiar el agua con frecuencia.

Incineracin Esta ltima es til para eliminar el desecho de laboratorio con o sin tratamiento previo en autoclave. El material a incinerar se colocar en bolsas plsticas. La ceniza de los incineradores puede tratarse igual que las basuras domsticas. A este tratamiento sern sometidos todos los materiales contaminados y el material desechado en bolsas rojas.

Eliminacin de material y residuos Enfre sus residuos, no arroje nada que tenga una temperatura superior a 20C. Neutralice los residuos cidos y bsicos. Solventes Orgnicos: colocar solventes por separado, no usar envases de aluminio, no mezclar cloroformo con acetona. Eliminacin de sustancias qumicas segn su clase: todas las sustancias deben estar identificadas y clasificadas antes de su eliminacin, se deben establecer recipientes especficos para cada grupo qumico. una vez desactivados y clasificados en su respectivo recipiente, los residuos pueden ser eliminados por incineracin o entierro (en material inerte y perfectamente sellado.

Riesgos relacionados con el material

Material y operaciones que pueden crear riesgos, a continuacin se enuncian y se sugiere el modo de eliminarlos o reducirlos. Material Aguja hipodrmica Riesgo Inoculacin accidental, aerosol o derrame. Como Eliminar O Reducir El Riesgo No reencapuchar ni sujetar las agujas. Evitar el empleo de jeringas para mezclar lquidos infecciosos Utilizar cestillos de cierre hermtico. Limpiar y desinfectar peridicamente. Transportar el material en vasijas irrompibles y fciles de cargar. Trabajar en cmara de bioseguridad y

Centrfuga

Aerosoles, salpicaduras y ruptura de tubos Baos Mara Proliferacin de microorganismos Transporte De Material Accidente cortopunzante, derrames Dispositivo Para Agitar aerosoles, salpicaduras o

derrames

utilizar frascos de cultivo tapados adecuadamente.

REGLAS DE SEGURIDAD DEL PERSONAL DE LIMPIEZA

Utilizar siempre la ropa de proteccin facilitada, siguiendo las instrucciones del director del laboratorio. Lavarse las manos con frecuencia y siempre que se salga del laboratorio. No comer, beber, fumar o maquillarse en el laboratorio. En caso de cualquier tipo de accidente o de ruptura de cualquier frasco, recipiente o material avisar inmediatamente al coordinador de bioseguridad. No tratar de reparar las consecuencias de un accidente sin autorizacin. No recoger los vidrios rotos con los dedos; utilizar un recogedor y una escoba. Antes de desechar cualquier material cuya naturaleza no se conozca infrmese de su contenido, de la forma indicada para desecharlo.

BIBLIOGRAFA GOMEZ, Mara V. Normatividad y Factores de Riesgo. Memorias Congreso Nacional de Bacterilogos, 1996, 217-230 p. LA DOU Joseph. Medicina Laboral. Mxico, Manual Moderno, 1993. LETAYF Jorge. Seguridad, higiene y control ambiental. Mxico 1996.Mc Graw Hill, Captulo II. MERCK. El ABC de la Bioseguridad. 1996. MORGAN Sara, Cultivo de Clulas Animales, Segunda edicin, Espaa, Editorial Acribia,1995. OMS. Manual de Bioseguridad en el laboratorio, Espaa, Segunda edicin,1994. VELASQUEZ, Gloria. Medidas de Bioseguridad en SiDlA. Medelln 1994. CRDOBA, Dario P. Toxicologa, editorial L.Vieco e Hijas. 1994.