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Alfredo De Ioannes Inmunologa Bsica Facultad de Ingeniera Universidad de C hile Septiembre 2007
Puentes de hidrgeno Fuerzas electrostticas (enlaces inicos) Fuerzas de van der Waals Enlaces hidrfobicos
AFINIDAD Y AVIDEZ
Avidez
Fuerza con la que un anticuerpo multivalente se une a un Antgeno multivalente. Su valor es mucho mayor que la suma de las afinidades.
Cintica de la Reaccin
k
Hapteno + Ac k Ka = k k =
Antisuero
Anlisis de los Ac. unidos a: Hapteno libre Hapteno en otra Protena Hapteno al mismo carrier
Tcnicas Inmunoanalticas
- Reaccin de precipitacin En medio lquido
Floculacin Nefelometra Precipitacin de complejos Inmunes Inmunodifusin doble Inmunodifusin radial Inmunoelectroforesis Rocket electroforesis Contrainmunoelectroforesis Inmunoelectroforesis cruzda bidimensional de Laurel
En gel
- Reaccin de aglutinacin
Aglutinacin pasiva Aglutinacin directa
Equivalencia
Ex ce Ag so
Inmunodifusin Doble
(o de Ouchterloni)
Suero humano
HIg
HSA
Suero humano
Ensayo Immunoturbidimtrico
Suero + Ag complejos insolubles Aumenta turbidez de la solucin y puede ser medida pticamente Turbidez proporcional a la cantidad de protenas en la muestra
Sensibilidad de mtodo se puede incrementar con los anticuerpos Unidos a ltex: mayores agregados
Inmunodifusin Radial
Ag
Reacciones de Aglutinacin
Se considera aglutinacin cuando el antgeno es particulado y tiene como tamao mnimo el bacteriano
Aglutinacin Directa: Las partculas o clulas tienen un antgeno intrnseco. Aglutinacin Pasiva: partculas o clulas a las cuales se le agrega el antgeno
ELISA
Deteccin de anticuerpos
Deteccin de Antgeno
Densidad ptica
[ Ag ]
Densidad ptica
[ Ag ]
Caso de Haptenos
Caso de Protenas
Western blot
Precipitado producto enzimtico
Quimioluminiscencia
Sustrato Anti-anticuerpo-Enzima Anticuerpo especfico
Inmunofluorescencia indirecta
Anticuerpo anti-Acrosina
Cromatografa de Afinidad
Ej: Purificacin de un anticuerpo uniendo el antgeno a una resina (sp). Sin embrago, tambin se puede hacer lo contrario.
Anticuerpo
Anticuerpo no unido
Buffer de elusin
Elucin de Anticuerpo