UFMS/CCBS - Departamento de Morfofisiologia AULA PRTICA Amilase Salivar

Prof Dr Fabiana Fonseca Zanoelo Procedimento experimental 1. Especificidade enzimtica - Amilase Salivar a. Lavar a boca com gua vrias vezes, colocar sob a lngua um algodo embebido em ter ou mastigar um pedao de parafilme. Em seguida coletar aproximadamente 5ml de saliva. b. Diluir a saliva com soluo salina (Na 0,9%), na proporo de 1:10. c. Colocar respectivamente em 2 tubos de ensaio:

1 - 1mL de saliva (amilase salivar) + 1 mL de sacarose a 1%.

2 - 1mL de saliva (amilase salivar) + 1 mL de amido a 1%. d. Deixar temperatura ambiente por aproximadamente 10 minutos. e. Adicionar, em seguida cada um dos tubos de ensaio, 1mL de reagente de Benedict. Aquec-los em banho-maria at a ebulio. f. Observar os resultados, interpretando-os. 2. Termolabilidade a. Colocar respectivamente, em dois tubos de ensaio numerados: 1 - 1mL de saliva (amilase salivar) + 1mL de gua destilada ferver e esfriar. 2 - 1mL de saliva (amilase salivar) + 1mL de gua destilada. a. b. c. d. e. Adicionar a ambos os tubos, 1mL de amido. Incubar os dois tubos, em banho-maria a 37C por 10 minutos. Adicionar aos dois tubos, 1ml de reagente de Benedict. Aquec-los at mudana de cor. Observar os resultados, notando em que tubo houve maior atividade enzimtica (reduo do cobre). Anotar e explicar os resultados obtidos.

3. Influncia do pH 3 Preparar uma srie de tubos: Tubos 1 2 3 Amostra gua Saliva 1:10 Saliva 1:10 Volume - mL 3,0 1,0 1,0 HCl 2N - gotas 5 5 Amido 1% - mL 2,0 2,0

a. Homogeneizar. b. Colocar em banho-maria 37o C, por 10 minutos. c. Reao de Benedict: retirar 1,0 mL de cada tubo e transferir para 4 tubos de ensaio limpo, adicionar 1,0 mL do reagente de Benedict e aquecer em banho de gua fervente. d. Anote e interprete os resultados.

4. Influncia da concentrao de enzima a. Preparar uma srie de tubos: Tubos Saliva mL 1 0,1 2 0,4 3 1,0 4 5 1,0 b. c. d. e. gua mL 0,9 0,6 1,0 1,0 Amido 1% mL 1,0 1,0 1,0 1,0 -

Incubar os tubos em banho-maria 37 C por 10 minutos Adicionar aos tubos 1ml do reagente de Benedict Observar as diferenas na atividade enzimtica Anote e interprete os resultados.