En el desarrollo del proyecto Caracterizacin Qumica de Metabolitos Secundarios Producidos en la Fermentacin de Dos Cepas Nativas del Salado de Consot

se trabajar una cepa mesfila halfila (USBA 355) y una cepa termfila (USBA xxx). La metodologa general se muestra a continuacin, mientras que algunos detalles importantes se explican posteriormente.

Fermentaci

Filtracin Biomasa Extraccin de metabolitos del caldo de

ter de

Acetato de

Butanol

Secado

Concentracin al

Fraccionamiento

La fermentacin se llevara a cabo bajo las condiciones ambientales y nutricionales requeridas por cada microorganismo, siendo la cepa USBA 355 un microorganismo mesfilo halfilo, y la cepa _______ un microorganismo termfilo. La cepa USBA 355, perteneciente a la familia Rhodospirilaceae, ser fermentada a una temperatura de 37C durante 5 das a 120 rpm en el medio

______, cuya composicin incluye: NH4Cl (1 g/L), K2HPO4 (0.3 g/L), KH2PO4 (0.3 g/L), NaCl (23 g/L), CaCl2 (0.1 g/L), KCl (0.1 g/L), Extracto de levadura (1 g/L), NaHCO3 (5 g/L), glucosa (20 mM), KNO3 (10 mM) y solucin de micronutrientes de Balch (10 mL/L). La cepa ________ Posterior a la fermentacin, se realizar una filtracin por membrana de poro de 0.45 m, donde se descarta la biomasa producida y se recupera el caldo de fermentacin, a partir del cual se realizar la extraccin de metabolitos secundarios producidos por el microorganismo mediante extracciones. L/L con el uso de solventes de diferente polaridad, ter de petrleo, acetato de etilo y butanol Los extractos obtenidos sern concentrados a presin reducida en un rotaevaporador , hasta sequedad. Los extractos obtenidos se fraccionarn usando diferentes tcnicas cromatogrficas, cromatografa en columna y capa fina preparativa, y en algunos casos extracciones slido-lquido, lquido-lquido y cristalizaciones fraccionadas. Las fracciones sern repurificadas por estos mismos mtodos y , cuando sea del caso, recristalizadas para posterior identificacin de los compuestos aislados. Para la identificacin de los compuestos aislados y purificados se emplearn diversas tcnicas de espectroscpicas, espectrometra de masas, espectroscopia infrarroja, ultravioleta, IR y Resonancia Magntica Nuclear (RMN) unidimensional y bidimensional de ser necesario.