Universidade Federal de Uberlndia Minas Gerais, Brasil.

Instituto de Cincias Agrrias ICIAG Bacharelado em Agronomia

Produo de Antibiticos

Integrantes: Erickson Oliveira, Guilherme Alem, Johnatan , Rodolfo Lemos; Samara Garcia; Vitor Veloso, Orientadora: Dra. Fabiana Batista. Disciplina: Tecnologia Produtos Agropecurios.

Principais Caractersticas
So substncias com toxidade seletiva;
Possui ao danosa aos microrganismos, sem afetar as clulas do hospedeiro;

Usado no tratamento de doenas infecciosas; So conhecidas cerca de 100.000 substncias, porm somente 800 so utilizadas;

Histria
Paul Ehrlich (1854 - 1915) desenvolveu a bala mgica atravs de experimentos com corantes e tcnicas de colorao de microrganismos; 1904 Foi utilizado o vermelho tripan no tratamento do tripanossoma, causador da doena africana do sono; Ehrlich & Hata (1910) uso da arsfenamida no tratamento de sfilis (Salvarsan);

Histria
G. Domagk (1935) - Vermelho Prontosil (camundongos), e o Prontosil quando clivado no organismo originava a sulfanilamida (droga eficaz); H. Florey & E. Chain (1939) Aps 43 anos da descoberta da penicilina por E. Duchesne, conseguiram a purificao da penicilina e testes em cobaias;

Histria
S. Waksman (1944) descobrimento da estreptomicina (Streptomyces griseus); 1953 Isolamento de microrganismos produtores: Cloranfenicol, Neomicina, Terramicina e tetraciclina; A partir de 1953 a indstria investiu milhares de dlares na busca de novas drogas antimicrobianas.

Processo de Investigao de Novas Drogas

Desacelerao na taxa de realizao de novas pesquisas;
Altos Custos (10 - U$20 milhes) 2,6 % das novas drogas usadas para fins teraputicos (1965). Atualmente apenas 1%. 8-10 anos de pesquisa;

Importncia de Novas Pesquisas

Aprimoramento dos antibiticos naturais
Maior atividade; Menor toxicidade; Menores efeitos colaterais Maior espectro de ao; Melhores propriedades farmacolgicas.

Fig: Recente surto de E. coli, na Alemanha, cepas resistentes antibiticos.

Importncia de Novas Pesquisas

Aumento na Resistncia Mltipla e Cruzada:
Desenvolver resistncia simultnea a mais de um antibitico, que possuam o mesmo modo de ao.

Fonte: Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003.

Princpios de um Agente Antimicrobiano

Ser ativo frente ao patgeno in vivo; No deve produzir reaes indesejveis, ou seja, deve ser relativamente atxico para fagcitos, clulas, tecidos e rgos do corpo;

Princpios de um Antibitico
No deve precipitar as protenas do soro; Ser solvel em gua ou soro fisiolgico; Ser relativamente estvel; No deve hemolisar o sangue.
Fig.: Dano causado s hemceas durante a hemlise.

Princpios de um Antibitico
A potncia varia com a massa; Nvel srico varia com a via de absoro;
O antibitico deve ser ingerido periodicamente de modo a manter a concentrao mnima letal ao patgeno.

Fonte: Uerj.

Aplicaes
Agentes teraputicos; Antitumorais (citostticos); Contra doenas das plantas:
Tratamento de sementes Cultura do arroz.

Conservantes de alimentos (ex: nisina contra os clostrdios). Estimulantes do crescimento animal; Ferramentas na bioqumica e biologia molecular.

Fig: Validamicina (validacin, Produto comercial.

Antibiticos Contra Doenas em Plantas Antibiticos e seu Microrganismo Usos

grupo qumico Blasticidina S (nucleosdeo) Polioxina (nucleosdeo) Prumicina (nucelosdeo) Streptomyces griseochromogenes Streptomyces cacaoi Streptomyces kagawaensis Streptomyces griseus Fungicida do arroz contra Piricularia oryzae Fungicida de uso mltiplo Fungicida contra espcies de Botrytis e Sclerotinia Fungicida para folhas, txico para animais de sangue quente e tem uso na colheita. Fungicida para arroz contra Piricularia oryzae Fungicida contra Rhizoctonia

Cicloheximida (aminocido)

Kasugamicina (aminoglicosdeo) Validamicina (aminoglicosdeo)

Streptomyces kasugaensis Streptomyces hygroscopicus

Grupos Microbianos Produtores de Antibiticos

Grupo Taxonmico Actinomicetas Fungos Outras Bactrias

N de Antibiticos
4200 1600

950

Fonte: Biotecnologia Industrial, V3, 2001.

B C

A Aspergillus sp; B Bacilos sp.; C Penicillium sp

Classificao
Os antibiticos podem ser classificados de acordo com:
Espectro antimicrobiano; Mecanismo de ao; Cepa produtora; Forma de biossntese; Estrutura qumica.

Classificao de acordo com o Espectro de Ao

Fonte: (Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003)

Classificao de acordo com o Mecanismo de Ao

Inibidores da sntese da parede celular;
Penicilinas e celafosporinas.

Inibidores da sntese de DNA e RNA;

Actiomicinas.

Inibidores da sntese de protenas;

Aminoglicosdeos.

Alteradores de permeabilidade da M. citoplasmtica;

Polimixinas.

Classificao de acordo com a Estrutura Qumica

Biotecnologia Industrial, 2005.

Grupo dos -Lactmicos

Lbeis em meio cido; Inativados pela hidrlise do anel -lactmico com penicilinase; Baixa toxicidade;
S 0,5 -2% dos pacientes desenvolve alergia;

Inibidores da transpepitidase;
bloqueio da sntese de parede celular bacteriana (peptidoglicano).
Fig.: -Lactmicos com anis em destaque.

Mecanismo de Ao Lactmicos

Fonte: (Adaptado de Atlas, R.M., Principles of Microbiology, 1997)

Efeitos de Antibiticos Lactmicos

B

Escherichia coli: [A] morfologia normal [B] morfologia aps 30 min contato com ceftazidima (celafosporinas)

Classificao de acordo com a Estrutura Qumica

Penicilina
Penicillium chrysogenum;
Interfere na sntese da parede de peptdeoglicano e leva Lise celular; Amplo espectro de ao;
DSTs, infeces trato intestinal e meningite.
B

Penicilina G e V.
Fig. A Estrutura da penicilina; B Produto comercial base de penicilina.

Classificao de acordo com a Estrutura Qumica

Cefalosporinas
Cephalosporium acremonium; Antibitico bactericida;
A

Possui Anel Beta-lactamico;

Controle de Gram(+) e Gram(-)
Cocos e Escherichia coli, respectivamente.

Interrompem a sntese de Peptdeoglicano

Causa diarria e nuseas.

Fig.: A Antibitico base de cefalosporina; B Staphylococus aureus

Penicilinas

Penicilinas Semi-sintticas
Mais estveis;

>Resistncia -lactamase;
>Atividade antimicrobiana; Hidrolisao da Penicilina Natural 6-APA; Adio de precursores
cidos da cadeia lateral;

Penicilina V, adio c. Fenoxiactico.

Penicilina G, adio c. Fenilactico.

Biossntese e Regulao
L-cistena L-valina; c. -aminoadpico (-AAA) Condensao num tripptido A (L-- aminoadipil) cisteinilvalina

Produo da Benzipenicilina a partir c. Fenilactico reagindo com c. aminoadpico

O tripptido ciclizado e forma-se a isopenicilina N Primeiro composto com atividade microbiana

Biossntese e Regulao
Inibidores da sntese de penicilina
Lisina, retroinibio da homocitratosintase*
*enzima envolvida na sntese de -AAA.

Concentrao de Fosfato; Glicose, represso catablica

Prefere-se a lactose para o processo de fermentao.

Desenvolvimento de Cepa Fatores Interferentes

Qualidade da Cepa;
Screening; Tcnicas recombinao do DNA.

pH;
Em torno 6,5.

Temperatura;
25 27C.

Oxignio
Aerbios; Aerbios facultativos.

Fig: Fermentador utilizado para produo de antibiticos.

Agitao;

Desenvolvimento de Cepas
Objetivos:
Aumento rendimento
Eficincia na recuperao do produto;

P. Notatum (Flaming); 1943- P. chrysogenum NRRL 1951. Por mutagnese estirpe WisQ176.
Fig.: Cepas de P. crysogenum

Agentes Mutagnicos
Screening de mutante;
At anos 60;
Raio x; Radiaes curto;

Atualmente
Nitritos; Agentes Alquilantes; Nitrosoguanidina.

Outros meios de desenvolvimento de Cepas

Fuso de protoplastos;
Aumento de rendimento de 8%; Superior obtido por mutao ou seleo.

Tecnologia de DNA recombinante;

No muito usada em P. chrysogenum.

Mtodos de Produo
Processo submerso de fermentao;
Fermentadores de 40-200mil litros.

Processo aerbico;
Absoro volumtrica de Oxignio de 0,40,8mM/L-min;
Velocidade de aerao requerida entre 0,51,0 vv;

Faixa de temperatura tima de 25-27C.

Fluxograma de Produo

Mtodos de Produo
O inoculo se inicia utilizando esporos liofilizados*; *Manuteno cuidadosa das cepas; Formao de agregados (Pellets) e concentrao de esporos; Etapas de crescimento.

Mtodos de Produo
Fermentao tpica de penicilina
Tempo de crescimento de 40 horas Tempo de duplicao de 6 horas

Baixa aerao do cultivo em crescimento critica;

Alimentando o meio com diferentes componentes a produo se estende por at 120 160 horas.

Mtodos de Produo
Componentes de um meio de cultura:
Nitrognio ( gua de milho ou farinha de soja); Carbono (lactose); Vrios tampes;
pH mantido constante a 6,5.

Adio do precursor;
cido fenilactico;
Produo Penicilina G.

Biomassa g.L-1, carboidratos, amnio e penicilina (g.L-1 x 10)

Mtodos de Produo
Fermentao contnua;
Dificultado pela instabilidade das cepas de produo.

Adoo do sistema enche e retira;

Retira-se 20-40% da fermentao; Alimenta-se com soluo fresca de nutrientes; Repete-se esse procedimento por at 10 vezes, sem reduo do rendimento.

Mtodos de Produo
Teor de penicilina excretada de menos de 1%;
Se encontra unida ao miclio

Separa-se por filtrao;

Recuperao do produto por meio:
Extrao continua em contracorrente do caldo de fermentao Rendimento de 90%

Cefalospori

Biossntese e Regulao
Precursores:
-(-aminoadipil)-l; Cisteinil-d-valina; Isopenicilna-n.

Transformao de cadeia lateral;

Formao de penicilina N;

Enzima racemase.

Hidroxilaao controlada por uma dioxigenase deacetilcefalosporina C;

Biossntese e Regulao
O ponto final da via biosinttica em fungos dada pela acetilaao da cefalosporina C; A produo de cefalosporina regulada pelo fosfato, pelo nitrognio e regulao catablica do carboidrato; A adio de lisina a baixas concentraes favorece a produo de cefalosporina.

Desenvolvimento de cepas
Realizado com a cepa original de Brotzu, C. acremonium, utilizando mutao, seleo e tcnicas parassexuais;

Mutantes reguladores resistentes a enxofre tem uma produo superior de cefalosporina; Recombinao parassexual em C. acremonium de difcil acontecimento.

Desenvolvimento de cepas
Fuso de protoplastos de diferentes cepas tem um aumento de 40% na produo de cefalosporina, melhor crescimento e esporulao;

Processo de Produo
A fermentao da cefalosporina similar a da penicilina; Utiliza-se meios como macerado de milho, extrato de carne, sacarose, glicose e acetato de amnio; Processo descontinuo alimentado usado nas fermentaes, condio semicontinua de nutrientes.

Processo de Produo
pH de 6 a 7; Temperaturas entre 24 e 28 C; Na fase de crescimento necessrio alta velocidade de aerao; A sntese qumica de cefalosporina pode ser feita por expanso do anel da penicilina;

Bibliografia
BORZANI, W.; LIMA, A,U.; AQUARONE, E.; SCHMIDELL,W.; Biotecnologia industrial, vol. 3, p. 101-120. So Paulo, 2001. http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/anti bioticos/antibioticos.html. Acessado em 08/11/2011, s 01:31.