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centrifugação

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Disciplina ± Física Aplicada Prof. Luiz Carlos M. Neves Assunto: Centrifugação 1. Introdução.

A centrifugação é uma operação unitária amplamente utilizada nas áreas industriais e em bioquímica, biotecnologia, biologia celular, molecular, com a principal finalidade de separação de frações ou a concentração das moléculas de interesse. Pode ser realizada com o objetivo de separar sólidos de líquidos ou mesmo uma mistura de líquidos. Uma partícula em movimento linear continuará em velocidade constante e uniforme se não for influenciada por forças externas. Quando uma partícula é submetida a uma força centrífuga (g) para isolar partículas suspensas em seu meio, seja da forma em lotes ou fluxo contínuo, esta sedimentação é forçada. As aplicações de centrifugação são muitas e incluem testes de análises clínicas, testes bioquímicos, a sedimentação de células e vírus, a separação de massa celular, isolamento de DNA, RNA, proteínas ou lipídios ou até mesmo para secar a roupa ou a salada em casa (Figura 1).

2. Aumento no efeito da gravidade: a centrífuga. Se uma suspensão for deixada em repouso, as partículas dispersas irão se assentar por meio do fenômeno de decantação ou sedimentação, por ação da gravidade (g = 9,8 cm/s2). Primeiro serão sedimentadas as partículas maiores e depois as menores em valores de tempo variáveis, o que dificulta determinar o término da operação. Através da centrifugação este tempo é acelerado, pois pequenas partículas podem ser separadas com a aplicação da força centrífuga. Se compararmos com a filtração, a centrifugação é mais cara, porém a principal desvantagem da filtração é a possibilidade rápida de entupimento dos filtros, dependendo do tipo de material utilizado. Quando uma suspensão de partículas é centrifugada a sedimentação das partículas é proporcional à força aplicada. As propriedades da solução também irão interferir na taxa de sedimentação.

quanto maior o raio da circunferência. maior será a força centrífuga aplicada na partícula e. = velocidade angular do movimento de rotação e. podendo ser combinada com outras técnicas. um RCF de 500g indica que a força centrífuga aplicada é 500 vezes maior que a força gravitacional da Terra. Quando uma suspensão é submetida a uma velocidade ou a um número de revoluções por minuto (RPM). a operação unitária de centrifugação é bastante utilizada. a cromatografia por solubilidade. r = raio de rotação Quanto maior for o número de rotações por segundo. o centro da trajetória circular que a partícula descreve. O que é a força centrífuga? Qualquer corpo ou partícula que apresente um movimento circular uniforme está submetido a uma força centrífuga. A força centrífuga relativa (FCR) pode ser calculada por: Onde: R = raio de centrifugação. enquanto que a eletroforese separa as partículas baseadas na carga elétrica. A força aplicada nas partículas é chamada de Força Centrífuga Relativa (RCF). dimensão. dependendo da necessidade do produto. maior a força centrífuga. Por exemplo. carga elétrica e a partição pela solubilidade do produto de interesse. Quando se pretende separar componentes biológicos ou realizar a purificação de proteínas de interesse industrial. a força centrífuga faz com que as partículas se afastem radialmente do eixo da rotação.3. N = velocidade de centrifugação em rotações por minuto (rpm). A centrifugação separa partículas por diferencial de tamanho ou densidade. . que tem como referência. em m ou cm. e pode ser representada pela relação: onde: m = massa do corpo.

resistentes a solventes químicos e com boa vedação. Mais eficiente do que a centrifugação vertical. é bastante utilizada em laboratórios de biotecnologia para separação de bactérias e leveduras. sendo que cada tipo tem potências e limitações de acordo com o tipo de separação (Figura 3). os tubos são posicionados em um ângulo definido. . Tipos de rotores para centrífugas Os rotores de centrífugas podem ser classificados como rotores móveis (1). Fatores para seleção de material de tubos para centrífuga: em escala laboratorial. Este tipo de centrifugação em geral utiliza menor tempo e é eficiente para a separação de sólidos floculentos ou finamente divididos. Em rotores de ângulo fixo. Como principal desvantagem em relação à centrifugação vertical é não conseguir realizar a análise de volume de sedimento. dependendo da rotação que é aplicada. o material se reorienta no interior do tubo. compatibilidade química e boa recuperação da amostra. pois a partícula tem que atravessar toda a ³coluna´ de líquido para chegar ao fundo do tubo. Ao girar. Os rotores verticais são adequados para separações isopícnicas (de densidade). Ao iniciar a operação. conforme a força centrífuga que é aplicada. os tubos devem ser transparentes. pois o caminho percorrido pela partícula é menor. como por exemplo para isolamento de DNA. A principal desvantagem deste tipo de rotor é a ocorrência de sedimentação incompleta. se posiciona horizontalmente. Utilizam-se tubos graduados e é bastante utilizado para a determinação de volume de sedimentos. Os tubos de amostra quando inseridos em rotores móveis (1) são mantidos na vertical enquanto o equipamento está em repouso. de ângulo fixo (2) e vertical (3). Para corrigir eventuais erros.4. RNA e lipoproteínas. utiliza-se uma rotação maior.

4. Em casos de clarificação de material biológico. (a) Centrífuga tubular. promovendo agregação dos componentes que podem estes baratos e efetivos. sendo o fluxo contínuo de alimentação de 200 m3/h. a somatória pode romper tubos. Esta centrífuga opera geralmente na vertical. O material a ser centrifugado é alimentado pela parte inferior. A câmara possui uma série de discos paralelos que proporcionam uma grande área de sedimentação. Atualmente. Para aumentar o tamanho da partícula. enquanto os líquidos são retirados pela parte superior. Tipos de Centrífuga. A quantidade de sólidos na mistura limita o uso desta centrífuga.000 a 15. sendo retirada ao final do processo. Na indústria farmacêutica é amplamente utilizada para a recuperação de bactérias e frações de células.Todo material fluido tende a expansão. adicionam-se pequenas quantidades de materiais de alto peso molecular. O tamanho da partícula pode auxiliar a centrifugação. Para coagulação. Trabalha com a força centrífuga variando de 13. Esta força (P) será somada à força centrífuga e.000g. e passa por toda a tubulação para ser separado ou clarificado. A parte sólida vai depositando-se nas laterais. O material é removido através de válvulas. pode-se trabalhar com a força centrífuga variando de 5. gerando uma pressão sobre os tubos. utiliza-se o fenômeno de coagulação ou floculação. Para floculação. Na indústria de alimentos é utilizada para a separação e clarificação de extratos animais e vegetais e óleo de peixe. realizase a mudança de pH da suspensão. . (b) Centrífuga de múltiplos discos. carregadas com carga oposta ao do material. removendo as cargas eletrostáticas da partícula e então elas aproximam-se umas às outras.000 a 20.000 g. com o rotor tubular provendo um longo caminho para a separação da mistura. máquinas modernas possuem sistemas de proteção. assim como a formação de bolhas que também dificulta a centrifugação.

a ação é apenas da força centrífuga. assemelhando-se ao tambor de uma máquina de lavar. No caso de sólidos cristalinos. proteínas.porém. Para favorecer a coagulação são adicionados sais de alumínio. cálcio e ferro. utiliza-se o cesto sem filtros e no caso de partículas deformáveis. O parafuso roda em velocidade diferente da câmara (d) Centrífuga de Cestos A centrífuga de cestos pode ser classificada como perfurada e não perfurada. por exemplo. centrífugas providas de aquecimento que alteram a viscosidade e a solubilidade do material. No caso de cestos não perfurados. sem afetar o produto de interesse. o uso de refrigeração no caso de tratamento de material biológico. A centrífuga perfurada associa as operações de centrifugação e filtração em conjunto. As partículas sólidas tendem a se acumular nas paredes da centrífuga e. A) Centrifugação diferencial . Tipos de separação centrífuga. 5. como por exemplo. neste caso especifico. Então. retirando-o do líquido. Outras características também devem ser consideradas como. com o passar do tempo estas começam a ser liberadas junto com o filtrado. O liquido sai pelo outro lado da câmara. por exemplo. pode-se considerar a centrifugação como uma operação de pré-secagem. além de polieletrólitos sintéticos que reduzem a repulsão entre as partículas e formam pontes entre elas. (c) Centrífuga contínua opera horizontalmente A hélice roda e distribui os sólidos ao longo da superfície do recipiente.

de uma extremidade à outra do tubo. A fração celular a ser separada é colocada sobre a camada e centrifugada. e em geral elas estão contaminadas com outras partículas. Exemplo: quando uma suspensão de material biológico é deixado em repouso. submetendo a suspensão de partículas a uma força centrífuga constante. servindo como etapa preliminar para posterior purificação usando outros tipos de separação centrífuga. B. obtendo-se frações de moléculas. Uma suspensão contendo diferentes moléculas é centrifugada e as partículas maiores sedimentam com mais rapidez do que as partículas menores. Para tanto. embora possuam densidades diferentes. As partículas com densidades diferentes. as células intactas se depositam. Algumas destas organelas em sedimentação podem ser obtidas em pureza parcial. O sobrenadante é então centrifugado a 15. faz-se uso da centrifugação por gradiente. Empregam-se substâncias como a sacarose. se deslocam até alcançar o local de igual densidade. em meio de densidade /peso gradualmente variável. os núcleos densos sedimentam para o fundo do tubo. A separação .A separação é baseada no tamanho das partículas. Se centrifugados a 600g por 10 minutos.000g por 5 minutos para separar mitocôndrias e assim sucessivamente. Centrifugação por gradiente A centrifugação diferencial não permite separar diferentes moléculas que se depositem em uma mesma etapa de centrifugação.

por gradiente pode ser classificada em duas categorias: por índice regional (tamanho) e Separação isopícnica (densidade). a densidade da partícula da amostra deve estar dentro dos limites das densidades de gradiente. Uma utilização para este tipo de centrifugação é a separação de proteínas e anticorpos. a extensão do gradiente devem ser suficiente para ocorrer a separação e o tempo deve ser bem dimensionado. que possuem densidades similares. devido à elevada rotação aplicada (até 500. . Ultracentrifugação Processo de centrifugação sob pressão. o tempo total de centrifugação não irá alterar a migração da partícula. As frações isoladas podem. Para que a centrifugação por tamanho seja bem sucedida. vamos considerar uma partícula que possui uma determinada densidade e. o tempo de execução deve ser suficiente para que as partículas se unam em seu ponto isopícnico. que será submetida ao processo de centrifugação. qualquer extensão de gradiente é aceitável. a separação com base na massa separará as diferentes classes. Para que a centrifugação seja bem sucedida. para se identificar a composição química. Assim. utilizando-se de refrigeração e vácuo de forma a minimizar o atrito com o ar.Separação gradiente de tamanho. pois se for muito extenso. Após o processo. Esta separação baseia-se no tamanho e massa da partícula para sedimentação. a partícula irá ³estacionar´ em uma posição onde a densidade da solução em que se encontra é próxima à densidade da partícula. bem como as capacidades metabólicas. Uma aplicação bastante utilizada para este método é a separação de ácidos nucléicos em um gradiente de cloreto de césio (CsCl). permitindo a separação de partículas de modo eficiente. . C. ser submetidas a uma gama diversificada de análises bioquímicas. . a densidade da solução de amostra deve ser inferior à menor densidade do gradiente. a atividade enzimática.Separação isopícnica. as partículas podem ser acumular no fundo do tubo. posteriormente. Neste caso.000g). Uma vez estabelecida a sua posição. porém massas diferentes.

2005. Conversão de unidades de centrifugação. Esta seleção realizada para humanos é utilizada em gado. p. http://www. KILIKIAN.lsbu. a centrifugação. deve-se recalcular o g. é utilizada no processo de enriquecimento de urânio. R = diâmetro do rotor (cm) S = velocidade da centrífuga (rpm) M = massa da amostra No caso do cálculo da Força centrífuga relativa. para a geração de uma criança não portadora do vírus.uk/biology/enztech/centrifugation. existem estudos que avaliam a possibilidade de separação de espermatozóides que não contenham o vírus da AIDS. 30 a 36. rebanho. V.com/techinfo/techinfo. ou a sua densidade. com o objetivo de criar as melhores cabeças de gado. Muitas centrífugas expressam a velocidade em termos de revoluções por minuto (rpm). É também bastante aplicada em casos de tratamentos de fertilidade e.ac. A. Além da inseminação. Editora Manole.. http://www. 7.coleparmer. tornando o negócio mais lucrativo.asp?htmlfile= basiccentrifugation. Aplicações da centrifugação A centrifugação pode ser utilizada além de apenas uma operação unitária na indústria. esta não considera a massa da amostra.html REVISTA VEJA. 8. Quando se troca a centrífuga. FCR = força centrífuga relativa. B.6. Cole-Parmer site. A rotação de uma centrífuga pode ser especificada em termos de Força Centrífuga Relativa (RCF) expressa em unidades de gravidade (g). A NASA também utiliza uma espécie de centrífuga onde seus astronautas são submetidos a forças de até 20 g. Purificação de Produtos Biotecnológicos .htm&ID=30 . A conversão entre g (a força centrífuga) e rpm é dada pela relação: onde: Fc = força centrífuga. 22 de setembro de 2004. Referências PESSOA JR.

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